İş M.F. Japon Hükümeti MEXT KAKENHI (24592560, 15 H 04991 ve 15 K 15624) tarafından ve Takeda Bilim Vakfı'na M.F. ve Jikei Üniversitesi stratejik öncelik araştırma fonu H.J.O. için hibe tarafından desteklenmektedir

Tüm deneysel yordamları Jikei Üniversitesi, Tokyo Japonya yapıldı. Hayvan işleme ve deneysel prosedürler onaylı kurumsal hayvan bakım ve kullanmak Komitesi Jikei üniversite tarafından (onay yok: 26-060) ve laboratuvar hayvanlarının Jikei de kullanımı için kurumsal yönergelere uygun olarak gerçekleştirilen Üniversitesi, kurallarına uygun davranış, hayvan deneyleri için Japonya bilim Konseyi (2006) tarafından kabul ediyorum. Hayvan bakım kılavuzu öneriler bakım ve laboratuvar hayvanları kullanım (Enstitüsü ile laboratuvar hayvan kaynakları, 1996) uygun olarak yapılmıştır.
1. ameliyat öncesi muayene
<ol><li>Kranial Bilgisayarlı Tomografi (CT) tarama (genel marmosets) hayvanların en az bir ay bireysel anatomik yapıları tanımlaması kolaylaştırmak için ameliyattan önce al.</li>
	<li>Odyometrik bir test en az bir ay önce ameliyat yerine getirir. Not: Burada, biz ABR işitme durumu değerlendirmek için kullanılır. Kısaca, bir pozitif elektrot subkutan izdüşümü ve başvuru negatif elektrot uyarılmış kulak dorsal üssünde yerleştirildi. Zemin elektrot subkutan boyun sırt kısmında yerleştirildi. 17 , 18 ABR'ler sesi patlama ile uyarılmış (1.0 ms sesi patlama süresi 0.1 ms artış ile ve zaman düşmek). Ses seviyesi o zaman onun en büyük genlik üzerinden 10 dB adımda düşürüldü. Her ses düzeyinde 512 yanıt (dönüşümlü olarak uyarıcı kutuplu) ortalama. ABR eşik herhangi bir dalga tespit edilemedi en düşük fiyat ses basınç seviyesi (SPL) tanımlanmıştır.</li>
</ol>2. anestezi
<ol><li>Ameliyat genel anestezi altında önceki gece hızlı insandan.</li>
	<li>%4 isoflurane ve 5-6 mL/dk ortam havası maske yüze havalandırma ile ya bir indüksiyon odası yavaş indüksiyon (şekil 1A) için yönetmek. Hayvan ayak tutam gibi ağrılı uyaranlara yanıt vermez onaylayın.</li>
	<li>Anesthestize medetomidine (0,04 mg/kg), midazolam (0.4 mg/kg) ve butorphanol (0.4 mg/kg) (içine femur kas) kas içi enjeksiyon ile ortak marmosets.</li>
	<li>Subkutan Ampisilin (0,08 mg/g) enjekte 30 dakika veya daha önce bir ameliyat öncesi antibiyotik olarak cilt kesi.</li>
	<li>Kafasının üst doğru ile sırtüstü pozisyonda marmoset yerleştirin ve baş ve boyun uzatmak. Üst çene tabloya bir naylon iplik ile düzeltmek ve iyi bir görünüm elde etmek için dilini veya gırtlak kapağını ve gırtlak girişi alternatif olarak görselleştirmek için laringoskop kullanın (şekil 1B).</li>
	<li>Gırtlak kapağını gırtlak yüzeyi boyunca bir endotrakeal tüp takın. Not: 16 lik intravenöz kateter kullanmak mümkündür veya 6-Fransızca besleme borusu, endotrakeal tüp (şekil 1 c) ölçer.</li>
	<li>Endotrakeal tüp EtCO2 bu düzgün nefes borusu yerleştirildi onaylamak için kontrol edin. Tüp konumlandırılmış ve solunum gaz hareketi kontrol edildikten sonra endotrakeal tüp marmoset'ın yüzüne bant ile düzeltmek.</li>
	<li>Anestezi işlemi sırasında % 1-3 Isoflurane arasında korumak.</li>
	<li>SpO2, EtCO2, vücut ısısı ve rektal ısı işlemleri sırasında izleyin. Vücut ısısı bir azalma önlemek için Isıtma mat tüm yordamları gerçekleştirin.</li>
</ol>3. Preoperatif hazırlık
<ol><li>Sırtüstü pozisyonda marmoset hazırlamak ve non-operatif yan (şekil 2A) için bir 30-45 derecelik açı için baş eğilmek.</li>
	<li>Operatif yan sonrası kulak çevresi bölge traş.</li>
	<li>Cerrahi alan alkol ve povidone iyot, hem de sonrası kulak çevresi bölge ve dış işitme kanal ile dezenfekte.</li>
	<li>Marmoset (şekil 2B) üzerine yuvarlak bir delik ile cerrahi örtüsü levha yerleştirin.</li>
</ol>4. cerrahi işlemler
<ol><li>Lidokain hidroklorür % 1'i enjekte (ile 1:100,000 epinefrin, 0,1-0,2 mL) Cilt kesi siteye subkutan. Bir kesik postauricular deride No.15 yuvarlak şekilli bir bıçakla olun.</li>
	<li>Hemostazın için seyreltilmiş 1:5,000 epinefrin batırılmış bir gazlı bez kullanarak kanayan bölgeye basınç uygulayın. İki kutuplu Koterizasyon da etkili (şekil 2C).</li>
	<li>Sonrası kulak çevresi bölge yumuşak doku kadar çok o kulak çevresi kıkırdak (c) açın ve sonrası kulak çevresi kas (m) kabul edilebilir. Derin kıkırdak (şekil 3A) görünür olması gereken dış işitme kanal kemik maruz.</li>
	<li>Kulak zarı derinliği onaylamak için cilt ve kemik arka kulak kanalı en derin kısmında yapışma olarak tanınan tympanic RIM kemik parçası ortaya çıkarmak. Not: Bu adımı ne kadar derin orta kulak boşluğu yan tarafında (şekil 3A) tanımak için bize izin verir.</li>
	<li>Temporal kemikten ayrılmış ve Kaudal yönü doğru sonrası kulak çevresi kasları (boyun kas, semispinalis capitis kas ve digastric kas arka göbek) soy. Temporal kemik (yıldız şekil 3Biçinde) yanal yüzeyinin sunarsınız.</li>
	<li>Yaklaşık 5 mm dış işitme Kanal 1.0 mm elmas bur. (şekil 3 c) ile arkasında bir delik açın. Bir matkap hızı 1000-8000 rpm Delme siteye bağlı olarak kullanın. Not: A yavaş hız semisirküler kanal veya yüz sinir yanında hassas işleme için yeterlidir. Site düzgün önlemek termal hasar için sondaj salin damla.</li>
	<li>Delik delme tarafından büyütmek ve yatay semisirküler mastoid boşluğu (şekil 3D) doğru çıkıntı kanal (HSC), konumunu onaylayın.</li>
	<li>Yüz, dikey bölümü HSC anterior çalışır sinir konumunu doğrulayın. Matkap ve tüm kemik septa, yüz sinir ve chorda tympani arasında üçgen alanının merkezinde yer alır yüz ara açık bir görünümünü elde etmek için varsa kaldırın.</li>
	<li>Yüz sinir ve tympanic dikey parçası arasında Delme tarafından küçük bir delik açmak RIM (yıldız şekil 4Aiçinde) 0.6 mm çap elmas bur 1000 RPM ile.</li>
	<li>Bur inceltilmiş kemik pembe bir çizgi olarak görülebilir yüz sinir hasarı önlemek için arka kanal duvara paralel hareket. Hemen sinir bir beyaz çizgi yapı (şekil 4B) olarak maruz önce sondaj durdurmak.</li>
	<li>Yuvarlak pencere niş delikten (şekil 4 c) görüntülenir emin olun. Sonra uyuşturucu niş içine 25'lik veya daha ince bir iğne ile yönetmek. Uyuşturucu yuvarlak pencere niş içinde korumak için niş (şekil 4 d) viskoz bir çözüm yerleştirin.</li>
	<li>O hemostaz olduğu güvenli bir şekilde teyit sonra kontrollü, katmanları (epidermal katman ve dermal tabaka) 6-0 emici iş parçacığı kullanarak basit kesintiye uğramış dikiş ile kapatın.</li>
	<li>Gazlı bez cerrahi yara tamir ve bir bandaj yapıştırmayın.</li>
</ol>5. ameliyat sonrası bakım
<ol><li>Atipamezole hidroklorid (0.15 mg/kg) İntramüsküler medetomidine kışkırtmak için femur kasına yönetmek.</li>
	<li>Kendiliğinden başlar nefes endotrakeal tüp kaldırdığınızda.</li>
	<li>%30 O2, uyarılma tamamlamak için anestezi etkisi kadar 29 ℃ bir yoğun bakım ünitesinde ortak marmoset korumak.</li>
	<li>Nistagmus gibi Vestibüler disfonksiyon düşündüren bulgular yok olduğundan emin olun ve hayvan ıslahı kafese dönün.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Liberman, M. C., Kujawa, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cochlear+synaptopathy+in+acquired+sensorineural+hearing+loss:+Manifestations+and+mechanisms.">Cochlear synaptopathy in acquired sensorineural hearing loss: Manifestations and mechanisms.</a> Hear Res. 349, 138-147 (2017).</li><li>World Health Organization. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Deafness and hearing loss (Fact sheet N8300). , (2015).</li><li>Thompson, D. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Universal+newborn+hearing+screening:+summary+of+evidence.">Universal newborn hearing screening: summary of evidence.</a> JAMA. 286 (16), 2000-2010 (2001).</li><li>Wang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+coding+strategies+in+auditory+cortex.">Neural coding strategies in auditory cortex.</a> Hear Res. 229 (1-2), 81-93 (2007).</li><li>Wang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=On+cortical+coding+of+vocal+communication+sounds+in+primates.">On cortical coding of vocal communication sounds in primates.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 97 (22), 11843-11849 (2000).</li><li>Bendor, D., Wang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+neuronal+representation+of+pitch+in+primate+auditory+cortex.">The neuronal representation of pitch in primate auditory cortex.</a> Nature. 436 (7054), 1161-1165 (2005).</li><li>Bendor, D., Wang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+coding+of+periodicity+in+marmoset+auditory+cortex.">Neural coding of periodicity in marmoset auditory cortex.</a> J Neurophysiol. 103 (4), 1809-1822 (2010).</li><li>Eliades, S. J., Wang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensory-motor+interaction+in+the+primate+auditory+cortex+during+self-initiated+vocalizations.">Sensory-motor interaction in the primate auditory cortex during self-initiated vocalizations.</a> J Neurophysiol. 89 (4), 2194-2207 (2003).</li><li>Eliades, S. J., Wang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamics+of+auditory-vocal+interaction+in+monkey+auditory+cortex.">Dynamics of auditory-vocal interaction in monkey auditory cortex.</a> Cereb Cortex. 15 (10), 1510-1523 (2005).</li><li>Eliades, S. J., Wang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+substrates+of+vocalization+feedback+monitoring+in+primate+auditory+cortex.">Neural substrates of vocalization feedback monitoring in primate auditory cortex.</a> Nature. 453 (7198), 1102-1106 (2008).</li><li>Hosoya, M., Fujioka, M., Ogawa, K., Okano, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+Expression+Patterns+Of+Causative+Genes+Responsible+For+Hereditary+Progressive+Hearing+Loss+In+Non-Human+Primate+Cochlea.">Distinct Expression Patterns Of Causative Genes Responsible For Hereditary Progressive Hearing Loss In Non-Human Primate Cochlea.</a> Sci Rep. 6, 22250 (2016).</li><li>Hosoya, M., Fujioka, M., Kobayashi, R., Okano, H., Ogawa, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Overlapping+expression+of+anion+exchangers+in+the+cochlea+of+a+non-human+primate+suggests+functional+compensation.">Overlapping expression of anion exchangers in the cochlea of a non-human primate suggests functional compensation.</a> Neurosci Res. 110, 1-10 (2016).</li><li>Sasaki, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+transgenic+non-human+primates+with+germline+transmission.">Generation of transgenic non-human primates with germline transmission.</a> Nature. 459 (7246), 523-527 (2009).</li><li>Sato, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+a+Nonhuman+Primate+Model+of+Severe+Combined+Immunodeficiency+Using+Highly+Efficient+Genome+Editing.">Generation of a Nonhuman Primate Model of Severe Combined Immunodeficiency Using Highly Efficient Genome Editing.</a> Cell Stem Cell. 19 (1), 127-138 (2016).</li><li>Sasaki, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+novel+embryonic+stem+cell+lines+derived+from+the+common+marmoset+(Callithrix+jacchus).">Establishment of novel embryonic stem cell lines derived from the common marmoset (Callithrix jacchus).</a> Stem Cells. 23 (9), 1304-1313 (2005).</li><li>Tomioka, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generating+induced+pluripotent+stem+cells+from+common+marmoset+(Callithrix+jacchus)+fetal+liver+cells+using+defined+factors,+including+Lin28.">Generating induced pluripotent stem cells from common marmoset (Callithrix jacchus) fetal liver cells using defined factors, including Lin28.</a> Genes Cells. 15 (9), 959-969 (2010).</li><li>Harada, T., Tokuriki, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+click+intensity+and+frequency+on+the+brain-stem+auditory+evoked+potentials+in+the+common+marmoset+(Callithrix+jacchus).">Effects of click intensity and frequency on the brain-stem auditory evoked potentials in the common marmoset (Callithrix jacchus).</a> J Vet Med Sci. 59 (7), 561-567 (1997).</li><li>Harada, T., Tokuriki, M., Tanioka, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Age-related+changes+in+the+brainstem+auditory+evoked+potentials+of+the+marmoset.">Age-related changes in the brainstem auditory evoked potentials of the marmoset.</a> Hear Res. 128 (1-2), 119-124 (1999).</li><li>Juhn, S. K., Hunter, B. A., Odland, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blood-labyrinth+barrier+and+fluid+dynamics+of+the+inner+ear.">Blood-labyrinth barrier and fluid dynamics of the inner ear.</a> Int Tinnitus J. 7 (2), 72-83 (2001).</li><li>Nakashima, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Disorders+of+cochlear+blood+flow.">Disorders of cochlear blood flow.</a> Brain Res Brain Res Rev. 43 (1), 17-28 (2003).</li><li>Akil, O., Rouse, S. L., Chan, D. K., Lustig, L. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surgical+method+for+virally+mediated+gene+delivery+to+the+mouse+inner+ear+through+the+round+window+membrane.">Surgical method for virally mediated gene delivery to the mouse inner ear through the round window membrane.</a> J Vis Exp. (97), (2015).</li><li>Jero, J., Tseng, C. J., Mhatre, A. N., Lalwani, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+surgical+approach+appropriate+for+targeted+cochlear+gene+therapy+in+the+mouse.">A surgical approach appropriate for targeted cochlear gene therapy in the mouse.</a> Hear Res. 151 (1-2), 106-114 (2001).</li><li>Iizuka, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noninvasive+in+vivo+delivery+of+transgene+via+adeno-associated+virus+into+supporting+cells+of+the+neonatal+mouse+cochlea.">Noninvasive in vivo delivery of transgene via adeno-associated virus into supporting cells of the neonatal mouse cochlea.</a> Hum Gene Ther. 19 (4), 384-390 (2008).</li><li>Kilpatrick, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adeno-associated+virus-mediated+gene+delivery+into+the+scala+media+of+the+normal+and+deafened+adult+mouse+ear.">Adeno-associated virus-mediated gene delivery into the scala media of the normal and deafened adult mouse ear.</a> Gene Ther. 18 (6), 569-578 (2011).</li><li>Yamasoba, T., Yagi, M., Roessler, B. J., Miller, J. M., Raphael, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inner+ear+transgene+expression+after+adenoviral+vector+inoculation+in+the+endolymphatic+sac.">Inner ear transgene expression after adenoviral vector inoculation in the endolymphatic sac.</a> Hum Gene Ther. 10 (5), 769-774 (1999).</li><li>Kawamoto, K., Oh, S. H., Kanzaki, S., Brown, N., Raphael, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+functional+and+structural+outcome+of+inner+ear+gene+transfer+via+the+vestibular+and+cochlear+fluids+in+mice.">The functional and structural outcome of inner ear gene transfer via the vestibular and cochlear fluids in mice.</a> Mol Ther. 4 (6), 575-585 (2001).</li><li>Praetorius, M., Baker, K., Weich, C. M., Plinkert, P. K., Staecker, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hearing+preservation+after+inner+ear+gene+therapy:+the+effect+of+vector+and+surgical+approach.">Hearing preservation after inner ear gene therapy: the effect of vector and surgical approach.</a> ORL J Otorhinolaryngol Relat Spec. 65 (4), 211-214 (2003).</li><li>Nakagawa, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Topical+insulin-like+growth+factor+1+treatment+using+gelatin+hydrogels+for+glucocorticoid-resistant+sudden+sensorineural+hearing+loss:+a+prospective+clinical+trial.">Topical insulin-like growth factor 1 treatment using gelatin hydrogels for glucocorticoid-resistant sudden sensorineural hearing loss: a prospective clinical trial.</a> BMC Med. 8, 76 (2010).</li><li>Piu, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=OTO-104:+a+sustained-release+dexamethasone+hydrogel+for+the+treatment+of+otic+disorders.">OTO-104: a sustained-release dexamethasone hydrogel for the treatment of otic disorders.</a> Otol Neurotol. 32 (1), 171-179 (2011).</li><li>Plontke, S. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=double+blind,+placebo+controlled+trial+on+the+safety+and+efficacy+of+continuous+intratympanic+dexamethasone+delivered+via+a+round+window+catheter+for+severe+to+profound+sudden+idiopathic+sensorineural+hearing+loss+after+failure+of+systemic+therapy.">double blind, placebo controlled trial on the safety and efficacy of continuous intratympanic dexamethasone delivered via a round window catheter for severe to profound sudden idiopathic sensorineural hearing loss after failure of systemic therapy.</a> Laryngoscope. 119 (2), 359-369 (2009).</li><li>Wenzel, G. I., Warnecke, A., Stover, T., Lenarz, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+extracochlear+gacyclidine+perfusion+on+tinnitus+in+humans:+a+case+series.">Effects of extracochlear gacyclidine perfusion on tinnitus in humans: a case series.</a> Eur Arch Otorhinolaryngol. 267 (5), 691-699 (2010).</li></ol>

Yazarlar ifşa gerek yok.

Koklear kan akımı hacmi 1/1.000.000 insanlarda, toplam kardiyak çıkış sırasına göre olduğu tahmin son derece küçük, ve iç kulak genel dolaşımdan19 ayıran kan-koklea bariyer varlığı ile sınırlı erişim ,20. Bu nedenlerden dolayı uyuşturucu ya da viral vektör yönetim iç kulak içine olumlu, sistemik yönetimin ziyade doğrudan yönetim yoluyla değil. Fare ve eskiden şiling şimdi domuz deneyler, çeşitli yaklaşımlar, trans sonrası kulak çevresi yaklaşım ile pencere yuvarlak veya ventral yaklaşım, cochleostomy, endolymphatic kesesi teslim ve semisirküler kanal yaklaşım21, gibi bildirilmiştir 22,23,24,25,26.
Bu da çalışmanın, biz arka tympanotomy ve yuvarlak pencere yönetim translasyonel araştırma için potansiyel bir yöntemi olarak kullanılır. Posterior tympanotomy klinik bir cerrahi prosedür için köklü bir yaklaşımdır ve kulak boşluğuna anatomik karakter insanların, benzer çünkü onun yol mastoid çoğunlukla bir büyük oluşur, ancak ortak marmosets için uygundur Tek boşluğu çok ince kemik septa ile. Nitekim, posterior tympanotomy yordam herhangi bir komplikasyon veya işitme kaybı olmadan tümünün ortak marmoset gerçekleştirilen. Posterior tympanotomy gerçekleştirilirse, ilaç idaresi semisirküler kanallar, yüz sinir, üzengi gibi önemli doku etrafında net görünümü altında gerçekleştirilen ve pencere niş yuvarlak. Not, eriyik koklea, HSC, posterior semisirküler kanal ve yuvarlak pencere niş tek bu yaklaşım ile Bazal dönüş yolu ile yönetebilirsiniz. Yuvarlak pencere yönetim, fareler, daha az invazif kullanarak araştırma göre ve koklea perilymph cochleostomy27daha bir daha düzgün çözüm genişleme sağlar. Ayrıca adenovirus semisirküler kanal gen transferi yoluyla direkt enjeksiyon iletim genlerin ağırlıklı olarak Vestibüler organ26yılında gösterdi bildirilmiştir. Endolymphatic kesesi teslim endlymphatic alanı için direkt enjeksiyon sağlar ve Vestibüler end organ ve koklea25ulaşmış viral vektör bildirilir. Ancak verimliliği hakkında bilgi yetersiz görünüyor.
Güvenli bir işlemi gerçekleştirmek için anatomik bilgi çok önemlidir. Temel anatomik orta kulak kulak boşluğuna ve iç kulak insanlar ve ortak marmosets arasında karşılaştırıldığında benzer karakteridir. Orta kulak boşluğu ve mastoid kavite, kemikçiklerdeki konumunu ve yüz sinir ve chorda tympani konumunu arasındaki kavşak gibi işlemi gerçekleştirmek için önemli anatomik parçaları için insan tamamen benzerdir. Ancak, bazı farklar vardır. İnsan mastoid kavite birçok hava hücreleri oluşur ve iç kulak yaklaşım bu hücreler delmem gerekiyor. Bu "mastoidectomy" klinik cerrahi prosedürde denir ve zaman alır ve özgün morfolojisi yok eder. Öte yandan, ortak marmoset mastoid boşluğu ile çok ince kemik septa neredeyse tek bir boşluk ve semisirküler kanallar daha büyük ve kemer dışarı insan anatomisi karşılaştırıldığında mastoid kavite içine. Bu farklılıklar iç kulak ilaç idaresi için avantajlı olan. Uyuşturucu endolymph için doğrudan yönetirken, daha önce bildirilen diğer türler26HSC, küçük bir pencere yapılarak semisirküler kanal yaklaşım mümkündür. Her ne kadar bu yaklaşım bu deneyde gerçekleştirilmedi, büyüklüğü ve kolay algılama nedeniyle ortak marmoset HSC kolayca gerçekleştirilebilir. Ancak, yaklaşım önce evlat edinmek, işitme bozukluğu tetikleyebilir, lymphorrhea riski dikkate alınmalıdır. Semisirküler kanal yaklaşım da bir işlemden sonra işitme düzeylerini değerlendirmek ideal bir deneysel sistemi değildir tahmin ediyoruz. Genel olarak, lymphorrhea önlemek için yağ dokusu ve fibrin yapıştırıcı penceresiyle ambalaj etkilidir.
Bu durumda, biz daha az invaziv bir işlem vurgu ve yuvarlak pencere membran delik olmadan çözüm yerleştirilir. Ancak, tek yönetim etkili bir ilaç ya da viral vektör yeterli bir doz perilymph için teslim için görünmüyor. Bu sorun için basit bir çözüm yolu yuvarlak pencere membran açın ve çözüm doğrudan enjekte etmektir. Yukarıda açıklandığı gibi Ancak, bir delik iç kulak hale getirilmesi lymphorrhea, bu bir klinik ayarı uygulamak zor olacak bu yüzden muhtemelen işitme kaybı ve insan olgularda Vestibüler disfonksiyon neden olabilir neden olur. Ayrıca, kemirgenler, aksine marmosets aslında ağaçlarda yaşamış ve Vestibüler disfonksiyon da kritik bir komplikasyon olabilir stereoscopically bir üreme kafese getirin. Bu nedenle, gelecekte, yuvarlak pencere membran piercing olmadan uyuşturucu Difüzyon verimliliğini artırmak önemli olacaktır. Bir olasılık bir ozmotik pompa ve sürekli hazırlık kullanıyor. Ozmotik bir pompa olan ucu yuvarlak pencere membran üzerinde yerleşmiş bir kateter üzerinden sürekli yönetim sağlar. Şu anda, ploxamer407 ve jelatin hydrogels yuvarlak pencere membran ilaç dağıtım sürekli hazırlıkları olarak kullanılabilir. Bu aygıtlar ve taşıyıcıları klinik çalışmalarda28,29,30,31' zaten kullanılmakta olan.
Kısacası, bu cerrahi yöntem iç kulak işitme kaybı olmadan için ilaçların güvenli ve doğru yönetim kavramının translasyonel araştırma için önceden klinik kanıtı elde büyük önem taşıyor bir primat gerçekleştirmek için bize izin verir.

Sensorinöral işitme kaybı (SNHL) ağırlıklı olarak hasar veya eksikliği koklea içinde doğar. Ortak SNHL nedenler yaşlanma (örneğin presbycusis), genetik kusurların, gürültü, enfeksiyon ve ototoksik ilaçlar1maruz. Dünya Sağlık Örgütü (WHO) üzerinde 360 milyon kişi, dünya nüfusunun % 5.3 temsil eden kaybı2işitme muzdarip olduğu tahmin. Bu da 1 içinde 900 1 2.500 yenidoğan için var orta, ağır ve derin Konjenital kalıcı işitme kaybı ve civarında bir üç yetişkin 65 yaşından büyük ölçüde işitme kaybı3var tahmin edilmektedir. Ancak, bu hastalar için hiçbir etkili klinik tedavi-işitme kaybı vardır.
Duruşma araştırma uzun kemirgen veya eskiden şiling şimdi domuz modelleri kullanılarak yapılmıştır ve gen terapisi ve rejeneratif terapisi, gibi pek çok yaklaşım işitme kaybı için yeni bir tedavi olarak önerilmiştir. Ancak, insanlar ve kemirgenler işitme sisteminin açısından arasında büyük bir fark yoktur ve hayvan modelleri insan uygulamalara çevirmek çok zordur. Ortak marmoset (C. jacchus), Amazon dan kaynaklanan bir yeni dünya maymun çeşitli nedenlerden dolayı çeşitli temel araştırma çalışmaları için bir çekici insan dışı primat modeli haline geldi. İlk olarak, onun anatomi ve fizyolojisi daha bu kemirgenler yerine insanlara benzer. İkinci olarak, bu tür hastalıkları, sinir ağları, davranış ve soykırım, dahil, ilgili temel biyolojik bilgileri de karakterizedir. İşitsel ve vokal işleme, periyodik olarak, adım gösterimi ve ortak marmosets vokal işitsel etkileşimlerin kortikal kodlama-si olmak da be bildirilen4,5,6,7 , 8 , 9 , 10. son histolojik çalışmalarda araştırmacılar farklı ifade desenleri 20 sağırlık genler ve anyon değiştiriciler ortak marmoset koklea içinde tanımlanan ve beş bulduğu ilerici sağırlık ve üç etken gen anyon değiştiriciler, bu kemirgenler11,12farklı ifade desenleri vardı. Bu profiller ortak marmoset işitme araştırma için güçlü bir araç olduğuna inanıyorum için bize yol.
Deneysel hayvan olarak ortak marmoset en belirgin özellikleri aşağıdaki gibidir:
<ul><li>Kolay kullanım küçük vücut büyüklüğü ile karşılaştırıldığında bazı türler için eski Dünya maymunları: Yetişkin marmosets 300-400 g ağırlığında ve yaklaşık 60 cm yükseklik, fareler için benzer.</li>
	<li>Yüksek üreme primat: Marmosets 18 ay bir yaşta cinsel olgunluğa ulaşmak ve yılda iki kez ayı ve her yıl 4-6 yavrular üretmek mümkün.</li>
	<li>Genetik değişiklikler mevcuttur: transgenik13 ve knock-out14 genetik değişiklikler nörolojik bozukluklar (örn., Parkinson'ın karıştığı tarafından marmosets kullanarak primatlar yaratmada başarılı Sasaki E vd. hastalıkları ve Alzheimer hastalığı).</li>
	<li>(ES) embriyonik kök hücreler ve İndüklenmiş pluripotent kök (IPS) hücre kurulan15,16olmuştur. Kemirgenler karşılaştırıldığında marmosets aynı sayıda tutmak oldukça zor olsa da, kök hücre veya IP'leri hücreleri içinde vivo deneyleri gerekli sayısını azaltacak vitro deneyleri sağlar.</li>
</ul>Sağırlık ve onun potansiyel terapisi alanında daha iyi translasyonel araştırma kolaylaştırmak için BT ve MRI, genel anestezi ve işitsel beyin sapı yanıt (ABR) kullanarak işitme testleri bir görüntüleme çalışma iletişim kuralı'nı kurdu. Bu deneysel sistemleri bize kemirgen çalışmaları ve klinik denemeler arasındaki boşluklar bridging için gerekli olan kavram çalışmaları önceden klinik kanıtı elde etmek için daha iyi fırsatlar sağlayabilir. Burada, yuvarlak pencere membran aracılığıyla ortak marmoset iç kulak ilaçlara yönetmek için cerrahi bir yöntem raporu. İletim tipi işitme kaybına neden olabilir kulak zarı manipüle olmadan yuvarlak pencere etrafında açık bir görünüm elde etmek için bu yaklaşım mastoid boşluğundan yararlıdır. Klinik olarak, bu yaklaşımı kabul edilir "posterior tympanotomy" iyi kurulmuş ve genellikle koklear implantasyon ve cholesteatoma ameliyat için kullanılan gibi. Bizce bu posterior tympanotomy ilaçların doğru yönetim işitme kaybı inducing olmadan gerçekleştirmek için bize izin verir.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:675px;" width="674">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">common marmoset</td>
			<td style="width:92px;">CLEA Japan</td>
			<td style="width:160px;">EDM:C.Marmoset(Jic)</td>
			<td style="width:207px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">isoflurane</td>
			<td style="width:92px;">Phizer</td>
			<td style="width:160px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">medetomidine</td>
			<td style="width:92px;">ZENOAQ</td>
			<td style="width:160px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">midazolam</td>
			<td style="width:92px;">astellas</td>
			<td style="width:160px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">butorphanol</td>
			<td style="width:92px;">Meiji Seika</td>
			<td style="width:160px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:216px;">ampicillin</td>
			<td style="width:92px;">Meiji Seika</td>
			<td style="width:160px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">lidocaine hydrochloride</td>
			<td style="width:92px;">AstraZeneca</td>
			<td style="width:160px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">&#160;6-0 absorbent thread</td>
			<td style="width:92px;">ETHICON</td>
			<td style="width:160px;">RD-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">atipamezole hydrochloride</td>
			<td style="width:92px;">ZENOAQ</td>
			<td style="width:160px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">phosphate buffered saline</td>
			<td style="width:92px;">Wako</td>
			<td style="width:160px;">045-29795</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Surge Wave</td>
			<td style="width:92px;">Morita</td>
			<td style="width:160px;">TR-900-OR</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Diamond Bar 006</td>
			<td style="width:92px;">Morita</td>
			<td style="width:160px;">14070057</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Diamond Bar 010</td>
			<td style="width:92px;">Morita</td>
			<td style="width:160px;">14070081</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">intensive care unit</td>
			<td style="width:92px;">Menix</td>
			<td style="width:160px;">P-100</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a surgical procedure for the administration of drugs to the inner ear in a non-human primate common marmoset (callithrix jacchus)

Her ne kadar bazı hastalıklarda, insan belirtiler recapitulated araştırma işitme uzun kemirgen modelleri tarafından kolaylaştırdı. Ortak marmoset (Callithrix jacchus) benzer bir orta kulak kemikçikzincir zincirleri ve insanlar, iç kulağa daha kemirgenler ile karşılaştırıldığında da dahil olmak üzere temporal kemik anatomisi sahip küçük, ele kolay yeni dünya maymun var. Burada, ilaç dağıtım için ortak marmoset iç kulak koklear yuvarlak pencere niş bir tekrarlanabilir, güvenli ve akılcı cerrahi yaklaşım raporu. Arka tympanotomy, klinik olarak insan, iletim tipi işitme kaybına neden olabilir kulak zarı manipülasyonu önlemek için kullanılan bir yordam evlat edindik. Bu cerrahi işlem herhangi bir önemli işitme kaybına yol açmadı. Lateral semisirküler kanal ve yüz sinir dikey bölümü dikkatle incelenmesi gereken rağmen bu yaklaşım ortak marmoset büyük bulla yapısı sayesinde mümkün oldu. Bu cerrahi yöntem önceden klinik translasyonel araştırma için kavram kanıtı elde büyük önem işitme kaybı olmadan ilaçların güvenli ve doğru yönetim gerçekleştirmek için bize izin verir.

Posterior tympanotomy cerrahi sitesi enfeksiyonu, vasküler yaralanma veya bazen orta kulak manipülasyon ile oluşur Vestibüler disfonksiyon ile kanama gibi herhangi bir komplikasyon olmadan gerçekleştirildi. Posterior tympanotomy 7 yaşındaki ortak marmoset sağ kulak üzerinde gerçekleştirilen ve fosfat tamponlu tuz 1 µL yuvarlak pencere niş ile yönetilir. Abr önce ve iki ay sonra ameliyat (şekil 5A-B) ölçüldü. Dalga biçimleri ve eşikleri ABR'ler, bir önceki çalışma17,18için karşılaştırılabilir ve değişiklik yok bu parametrelerine önce ve sonra cerrahi (şekil 5C). Böylece, biz o posterior tympanotomy ortak marmoset yuvarlak pencere niş ilaçlara Yönetim için güvenli ve kullanışlı bir yordam sonucuna.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56574/56574fig1.jpg"> Resim 1 : Trakeal entübasyon. (A) % 4 isoflurane ve 5-6 mL/dk maske yüze havalandırma, ortam havası ile ortak marmoset anestezi. Alternatif olarak, ortak marmoset bir indüksiyon odasına koyun. (B) ortak marmoset kafasının üst doğru ile sırtüstü pozisyonda yerleştirin ve baş ve boyun uzatmak. Naylon iplik tablo ile üst çene tamir ve gırtlak kapağını (ok) ve gırtlak girişi görselleştirmek için dilini çekin. (C) gırtlak kapağını gırtlak yüzeyi boyunca bir endotrakeal tüp takın. 16 lik intravenöz kateter veya besleme borusu 6-Fransızca ölçer bir endotrakeal tüp kullanılabilir. <a href="//cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56574/56574fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56574/56574fig2.jpg"> Resim 2 : Cilt kesi. (A) yerleştirin ortak marmoset sırtüstü pozisyonda ve non-operatif Side'ye 30-45 derecelik açıyla için baş eğilmek. İşlem yan sonrası kulak çevresi bölge tıraş ve povidone iyot ile dezenfekte. CR, kafatası yan, Ca, Kaudal, L, R, sol tarafta sağ yan. (B) cilt kesi serisi siyah çizgi gösterir. Önce cilt kesi, %1 lidokain hidroklorür enjekte (ile 1:100,000 epinefrin, 0,1-0,2 mL) subkutan. (C) kesik kulak çevresi kıkırdak (c) yükseltilmiş kadar subkutan doku açın. <a href="//cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56574/56574fig2large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56574/56574fig3.jpg"> Şekil 3 : Mastoid boşluğuna sondaj. (A) yumuşak doku çıkarıldıktan sonra sonrası kulak çevresi kas görünür hale gelir. m, sonrası kulak çevresi kas, c, kulak çevresi kıkırdak. (B) sonrası kulak çevresi kas Kaudal yönü doğru kemikten soyulmuş zaman Temporal kemik yüzeyine (yıldız işareti) yararlanılır. Pneumatized yapısı temporal kemik kolayca tanınabilir. (C) A delik 1.0 mm elmas bur yaklaşık 5 mm dış işitme kanal kemik arkasında ile sondaj tarafından yapılmıştır. (D) ortak marmoset mastoid boşluğuna çoğunlukla tek bir boşluk oluşur. Açılmış delik büyütme tarafından mastoid boşluğuna doğru yatay semisirküler kanal (HSC ve noktalı çizgi) çıkıntı kolayca tanınabilir. <a href="//cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56574/56574fig3large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56574/56574fig4.jpg"> Şekil 4 : Arka tympanotomy. (A) yüz sinir (FN) yüz kanal denilen kemik geçitten geçer ve posterior duvar dış işitme kanal kemik (PAC) ve yatay semisirküler kanal (HSC) arasında çalışır. Anterior sinir yüz ara (yıldız işareti) bölgesidir. (B) 0.6 mm çaplı elmas bar ile yüz teneffüs Delme tarafından bir delik açın. (C) delik büyütme tarafından yuvarlak pencere niş (RWN) görülür duruma geçer. (D) yüz teneffüs delik o çözüm RWN (ok) 25'lik veya daha ince bir iğne ile yönetmek de mümkündür. <a href="//cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56574/56574fig4large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56574/56574fig5.jpg"> Şekil 5 : İşitsel beyin sapı yanıt (ABR) değerlendirme. Arka tympanotomy bir 7 yaşındaki ortak marmoset gerçekleştirilmiş ve fosfat tamponlu tuz 1 µL yuvarlak pencere niş ile yönetiliyordu. Abr öncesi ve ameliyat sonrası ölçüldü ve onların temsilcisi dalga biçimleri (A) ve (B) sırasıyla gösterilir. Dalga biçimleri ve eşikleri altı frekansları, patlama sesi ile uyarılmış ABR'ler, bir önceki çalışma17,18için karşılaştırılabilir. (C) ameliyat sonrası hiçbir ABR eşik gelen değişim önce vardı. <a href="//cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56574/56574fig5large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>

Watch this Scientific Journal Video about A Surgical Procedure for the Administration of Drugs to the Inner Ear in a Non-Human Primate Common Marmoset Callithrix jacchus at JoVE.com

A Surgical Procedure for the Administration of Drugs to the Inner Ear in a Non-Human Primate Common Marmoset Callithrix jacchus

Yuvarlak pencere membran ile cerrahi bir yöntem bir insan dışı primat, ortak marmoset (Callithrix jacchus), iç kulak ilaçlara yönetmek için rapor.

Bir insan olmayan primatların ortak Marmoset (Callithrix jacchus) iç kulak ilaçlara Yönetim için bir cerrahi prosedür

Hearing research has long been facilitated by rodent models, although in some diseases, human symptoms cannot be recapitulated. The common marmoset ...

a-surgical-procedure-for-administration-drugs-to-inner-ear-non-human

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Medicine

A Surgical Procedure for the Administration of Drugs to the Inner Ear in a Non-Human Primate Common Marmoset (Callithrix jacchus)

8.5K Görüntüleme.  Jikei University School of Medicine. Yuvarlak pencere membran ile cerrahi bir yöntem bir insan dışı primat, ortak marmoset (Callithrix jacchus), iç kulak ilaçlara yönetmek için rapor.

Video: A Surgical Procedure for the Administration of Drugs to the Inner Ear in a Non-Human Primate Common Marmoset Callithrix jacchus

A Strategy to Identify de Novo Mutations in Common Disorders such as Autism and Schizophrenia

There are several lines of evidence supporting the role of de novo mutations as a mechanism for common disorders, such as autism and schizophrenia. First, the de novo mutation rate in humans is relatively high, so new mutations are generated at a high frequency in the population. However, de novo mutations have not been reported in most common diseases. Mutations in genes leading to severe diseases where there is a strong negative selection against the phenotype, such as lethality in embryonic stages or reduced reproductive fitness, will not be transmitted to multiple family members, and therefore will not be detected by linkage gene mapping or association studies. The observation of very high concordance in monozygotic twins and very low concordance in dizygotic twins also strongly supports the hypothesis that a significant fraction of cases may result from new mutations. Such is the case for diseases such as autism and schizophrenia. Second, despite reduced reproductive fitness1 and extremely variable environmental factors, the incidence of some diseases is maintained worldwide at a relatively high and constant rate. This is the case for autism and schizophrenia, with an incidence of approximately 1% worldwide. Mutational load can be thought of as a balance between selection for or against a deleterious mutation and its production by de novo mutation. Lower rates of reproduction constitute a negative selection factor that should reduce the number of mutant alleles in the population, ultimately leading to decreased disease prevalence. These selective pressures tend to be of different intensity in different environments. Nonetheless, these severe mental disorders have been maintained at a constant relatively high prevalence in the worldwide population across a wide range of cultures and countries despite a strong negative selection against them2. This is not what one would predict in diseases with reduced reproductive fitness, unless there was a high new mutation rate. Finally, the effects of paternal age: there is a significantly increased risk of the disease with increasing paternal age, which could result from the age related increase in paternal de novo mutations. This is the case for autism and schizophrenia3. The male-to-female ratio of mutation rate is estimated at about 4&#x2013;6:1, presumably due to a higher number of germ-cell divisions with age in males. Therefore, one would predict that de novo mutations would more frequently come from males, particularly older males4. A high rate of new mutations may in part explain why genetic studies have so far failed to identify many genes predisposing to complexes diseases genes, such as autism and schizophrenia, and why diseases have been identified for a mere 3% of genes in the human genome. Identification for de novo mutations as a cause of a disease requires a targeted molecular approach, which includes studying parents and affected subjects. The process for determining if the genetic basis of a disease may result in part from de novo mutations and the molecular approach to establish this link will be illustrated, using autism and schizophrenia as examples.

Molecular genetic strategy for finding de novo mutations causing common disorders such as autism and schizophrenia.

Ortak Bozuklukları de Novo Mutasyonlar, otizm ve şizofreni gibi tanımlayın Bir Strateji

There are several lines of evidence supporting the role of de novo mutations as a mechanism for common disorders, such as autism and schizophrenia. First, ...

Tıp

A Novel Surgical Approach for Intratracheal Administration of Bioactive Agents in a Fetal Mouse Model

Prenatal pulmonary delivery of cells, genes or pharmacologic agents could provide the basis for new therapeutic strategies for a variety of genetic and acquired diseases. Apart from congenital or inherited abnormalities with the requirement for long-term expression of the delivered gene, several non-inherited perinatal conditions, where short-term gene expression or pharmacological intervention is sufficient to achieve therapeutic effects, are considered as potential future indications for this kind of approach. Candidate diseases for the application of short-term prenatal therapy could be the transient neonatal deficiency of surfactant protein B causing neonatal respiratory distress syndrome1,2 or hyperoxic injuries of the neonatal lung3. Candidate diseases for permanent therapeutic correction are Cystic Fibrosis (CF)4, genetic variants of surfactant deficiencies5 and &alpha;1-antitrypsin deficiency6.
Generally, an important advantage of prenatal gene therapy is the ability to start therapeutic intervention early in development, at or even prior to clinical manifestations in the patient, thus preventing irreparable damage to the individual. In addition, fetal organs have an increased cell proliferation rate as compared to adult organs, which could allow a more efficient gene or stem cell transfer into the fetus. Furthermore, in utero gene delivery is performed when the individual's immune system is not completely mature. Therefore, transplantation of heterologous cells or supplementation of a non-functional or absent protein with a correct version should not cause immune sensitization to the cell, vector or transgene product, which has recently been proven to be the case with both cellular and genetic therapies7.
In the present study, we investigated the potential to directly target the fetal trachea in a mouse model. This procedure is in use in larger animal models such as rabbits and sheep8, and even in a clinical setting9, but has to date not been performed before in a mouse model. When studying the potential of fetal gene therapy for genetic diseases such as CF, the mouse model is very useful as a first proof-of-concept because of the wide availability of different transgenic mouse strains, the well documented embryogenesis and fetal development, less stringent ethical regulations, short gestation and the large litter size.
Different access routes have been described to target the fetal rodent lung, including intra-amniotic injection10-12, (ultrasound-guided) intrapulmonary injection13,14 and intravenous administration into the yolk sac vessels15,16 or umbilical vein17. Our novel surgical procedure enables researchers to inject the agent of choice directly into the fetal mouse trachea which allows for a more efficient delivery to the airways than existing techniques18.

We developed a novel surgical approach for intratracheal administration of bioactive agents into the mouse fetus. The delivery route is more efficient in targeting the fetal mouse lungs than the commonly used intra-amniotic injection. This procedure has to date not been described in a mouse model.

Bir Fetal Fare Modelinde Biyoaktif Ajan intratrakeal Yönetimi İçin Yeni Bir Cerrahi Yaklaşım

Prenatal pulmonary delivery of cells, genes or pharmacologic agents could provide the basis for new therapeutic strategies for a variety of genetic and ...

Surgical Technique for Spinal Cord Delivery of Therapies: Demonstration of Procedure in Gottingen Minipigs

This is a compact visual description of a combination of surgical technique and device for the delivery of (gene and cell) therapies into the spinal cord. While the technique is demonstrated in the animal, the procedure is FDA-approved and currently being used for stem cell transplantation into the spinal cords of patients with ALS. While the FDA has recognized proof-of-principle data on therapeutic efficacy in highly characterized rodent models, the use of large animals is considered critical for validating the combination of a surgical procedure, a device, and the safety of a final therapy for human use. The size, anatomy, and general vulnerability of the spine and spinal cord of the swine are recognized to better model the human. Moreover, the surgical process of exposing and manipulating the spinal cord as well as closing the wound in the pig is virtually indistinguishable from the human. We believe that the healthy pig model represents a critical first step in the study of procedural safety.

Short visual description of the surgical technique and device used for the delivery of (gene and cell) therapies into the spinal cord. The technique is demonstrated in the animal but is entirely translatable and currently being used for human application.

Terapiler Omurilik Teslimat için Cerrahi Tekniği: Göttingen Minipigs Prosedürü gösterilmesi

This is a  compact visual description of a combination of surgical technique and device  for the  delivery of (gene and cell) therapies into the spinal ...

Development of an Audio-based Virtual Gaming Environment to Assist with Navigation Skills in the Blind

Audio-based Environment Simulator (AbES) is virtual environment software designed to improve real world navigation skills in the blind. Using only audio based cues and set within the context of a video game metaphor, users gather relevant spatial information regarding a building's layout. This allows the user to develop an accurate spatial cognitive map of a large-scale three-dimensional space that can be manipulated for the purposes of a real indoor navigation task. After game play, participants are then assessed on their ability to navigate within the target physical building represented in the game. Preliminary results suggest that early blind users were able to acquire relevant information regarding the spatial layout of a previously unfamiliar building as indexed by their performance on a series of navigation tasks. These tasks included path finding through the virtual and physical building, as well as a series of drop off tasks. We find that the immersive and highly interactive nature of the AbES software appears to greatly engage the blind user to actively explore the virtual environment. Applications of this approach may extend to larger populations of visually impaired individuals.

Audio-based Environment Simulator (AbES) is virtual environment software designed to improve real world navigation skills in the blind.

Ses tabanlı Sanal Oyun Ortamı Geliştirilmesi Kör Navigasyon Becerileri ile Yrd etmek

Audio-based Environment Simulator (AbES) is virtual environment software designed to improve real world navigation skills in the blind. Using only audio ...

Heterotopic Mucosal Engrafting Procedure for Direct Drug Delivery to the Brain in Mice

Delivery of therapeutics into the brain is impeded by the presence of the blood-brain barrier (BBB) which restricts the passage of polar and high molecular weight compounds from the bloodstream and into brain tissue. Some direct delivery success in humans has been achieved via implantation of transcranial catheters; however this method is highly invasive and associated with numerous complications. A less invasive alternative would be to dose the brain through a surgically implanted, semipermeable membrane such as the nasal mucosa that is used to repair skull base defects following endoscopic transnasal tumor removal surgery in humans. Drug transfer though this membrane would effectively bypass the BBB and diffuse directly into the brain and cerebrospinal fluid. Inspired by this approach, a surgical approach in mice was developed that uses a donor septal mucosal membrane engrafted over an extracranial surgical BBB defect. This model has been shown to effectively allow the passage of high molecular weight compounds into the brain. Since numerous drug candidates are incapable of crossing the BBB, this model is valuable for performing preclinical testing of novel therapies for neurological and psychiatric diseases.

A mouse model of human endoscopic skull base reconstruction has been developed that creates a semipermeable interface between the brain and nose using nasal mucosal grafts. This method allows researchers to study delivery to the central nervous system of high molecular weight therapeutics which are otherwise excluded by the blood-brain barrier when administered systemically.

Farelerde Beyin Doğrudan İlaç Teslim heterotopik mukozal aşılanması Prosedürü

Delivery of therapeutics into the brain is impeded by the presence of the blood-brain barrier (BBB) which restricts the passage of polar and high ...

A Surgical Procedure for Resecting the Mouse Rib: A Model for Large-Scale Long Bone Repair

This protocol introduces researchers to a new model for large-scale bone repair utilizing the mouse rib. The procedure details the following: preparation of the animal for surgery, opening the thoracic body wall, exposing the desired rib from the surrounding intercostal muscles, excising the desired section of rib without inducing a pneumothorax, and closing the incisions. Compared to the bones of the appendicular skeleton, the ribs are highly accessible. In addition, no internal or external fixator is necessary since the adjacent ribs provide a natural fixation. The surgery uses commercially available supplies, is straightforward to learn, and well-tolerated by the animal. The procedure can be carried out with or without removing the surrounding periosteum, and therefore the contribution of the periosteum to repair can be assessed. Results indicate that if the periosteum is retained, robust repair occurs in 1 - 2 months. We expect that use of this protocol will stimulate research into rib repair and that the findings will facilitate the development of new ways to stimulate bone repair in other locations around the body.

The overall goal of this procedure is to successfully resect a portion of bone from the rib of a mouse. The procedure was developed as a model to study large-scale long bone repair.

Fare kaburga Rezeksiyonu için Cerrahi Prosedür: Büyük Ölçekli Uzun Kemik Onarım İçin Bir Model

This protocol introduces researchers to a new model for large-scale bone repair utilizing the mouse rib. The procedure details the following: preparation ...

Quantification of the Immunosuppressant Tacrolimus on Dried Blood Spots Using LC-MS/MS

The calcineurin inhibitor tacrolimus is the cornerstone of most immunosuppressive treatment protocols after solid organ transplantation in the United States. Tacrolimus is a narrow therapeutic index drug and as such requires therapeutic drug monitoring and dose adjustment based on its whole blood trough concentrations. To facilitate home therapeutic drug and adherence monitoring, the collection of dried blood spots is an attractive concept. After a finger stick, the patient collects a blood drop on filter paper at home. After the blood is dried, it is mailed to the analytical laboratory where tacrolimus is quantified using high-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry (HPLC-MS/MS) in combination with a simple manual protein precipitation step and online column extraction.
For tacrolimus analysis, a 6-mm disc is punched from the saturated center of the blood spot. The blood spot is homogenized using a bullet blender and then proteins are precipitated with methanol/0.2 M ZnSO4 containing the internal standard D2,13C-tacrolimus. After vortexing and centrifugation, 100 &#181;l of supernatant is injected into an online extraction column and washed with 5 ml/min of 0.1 formic acid/acetonitrile (7:3, v:v) for 1 min. Hereafter, the switching valve is activated and the analytes are back-flushed onto the analytical column (and separated using a 0.1% formic acid/acetonitrile gradient). Tacrolimus is quantified in the positive multi reaction mode (MRM) using a tandem mass spectrometer.
The assay is linear from 1 to 50 ng/ml. Inter-assay variability (3.6%-6.1%) and accuracy (91.7%-101.6%) as assessed over 20 days meet acceptance criteria. Average extraction recovery is 95.5%. There are no relevant carry-over, matrix interferences and matrix effects. Tacrolimus is stable in dried blood spots at RT and at +4 &#176;C for 1 week. Extracted samples in the autosampler are stable at +4 &#176;C for at least 72 hr.

Here we describe a high-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry (HPLC-MS/MS) assay to quantify the immunosuppressant tacrolimus in dried blood spots using a simple manual protein precipitation step and online column extraction.

LC-MS / MS kullanarak Kurutulmuş Kan Spotlar Immünosupresan Tacrolimus Niceleme

The calcineurin inhibitor tacrolimus is the cornerstone of most immunosuppressive treatment protocols after solid organ transplantation in the United ...

Performing Permanent Distal Middle Cerebral with Common Carotid Artery Occlusion in Aged Rats to Study Cortical Ischemia with Sustained Disability

Stroke typically occurs in elderly people with a range of comorbidities including carotid (or other arterial) atherosclerosis, high blood pressure, obesity and diabetes. Accordingly, when evaluating therapies for stroke in animals, it is important to select a model with excellent face validity. Ischemic stroke accounts for 80% of all strokes, and the majority of these occur in the territory of the middle cerebral artery (MCA), often inducing infarcts that affect the sensorimotor cortex, causing persistent plegia or paresis on the contralateral side of the body. We demonstrate in this video a method for producing ischemic stroke in elderly rats, which causes sustained sensorimotor disability and substantial cortical infarcts. Specifically, we induce permanent distal middle cerebral artery occlusion (MCAO) in elderly female rats by using diathermy forceps to occlude a short segment of this artery. The carotid artery on the ipsilateral side to the lesion was then permanently occluded and the contralateral carotid artery was transiently occluded for 60 min. We measure the infarct size using structural T2-weighted magnetic resonance imaging (MRI) at 24 hr and 8 weeks after stroke. In this study, the mean infarct volume was 4.5% &#177; 2.0% (standard deviation) of the ipsilateral hemisphere at 24 hr (corrected for brain swelling using Gerriet&#8217;s equation, n = 5). This model is feasible and clinically relevant as it permits the induction of sustained sensorimotor deficits, which is important for the elucidation of pathophysiological mechanisms and novel treatments.

Here we present a protocol to produce permanent distal middle cerebral artery occlusion in elderly female rats with simultaneous occlusion of the carotid arteries to generate large cortical infarcts and sustained deficits. We show confirmation of the lesion size using structural MRI at 24 hr and 8 weeks after stroke.

Yaşlı Sıçanlarda Ortak Karotis Arter Tıkanıklığı ile Kalıcı Distal Orta Serebral Sahne Kortikal İskemi Sürekli Engelli Eğitim için

Stroke typically occurs in elderly people with a range of comorbidities including carotid (or other arterial) atherosclerosis, high blood pressure, ...

A Novel Murine Model of Arteriovenous Fistula Failure: The Surgical Procedure in Detail

The arteriovenous fistula (AVF) still suffers from a high number of failures caused by insufficient remodeling and intimal hyperplasia from which the exact pathophysiology remains unknown. In order to unravel the pathophysiology a murine model of AVF-failure was developed in which the configuration of the anastomosis resembles the preferred situation in the clinical setting. A model was described in which an AVF is created by connecting the venous end of the branch of the external jugular vein to the side of the common carotid artery using interrupted sutures. At a histological level, we observed progressive stenotic intimal lesions in the venous outflow tract that is also seen in failed human AVFs. Although this procedure can be technically challenging due to the small dimensions of the animal, we were able to achieve a surgical success rate of 97% after sufficient training. The key advantage of a murine model is the availability of transgenic animals. In view of the different proposed mechanisms that are responsible for AVF failure, disabling genes that might play a role in vascular remodeling can help us to unravel the complex pathophysiology of AVF failure.

Here we present a murine model of arteriovenous fistula (AVF) failure in which a clinically relevant anastomotic configuration is incorporated. This model can be used to study the pathophysiology and to test possible therapeutic interventions.

Arteriovenöz Fistül Yetersizliğinin A Novel Fare Modeli: Detay Cerrahi Prosedür

The arteriovenous fistula (AVF) still suffers from a high number of failures caused by insufficient remodeling and intimal hyperplasia from which the ...

Using Saccadometry with Deep Brain Stimulation to Study Normal and Pathological Brain Function

The oculomotor system involves a large number of brain areas including parts of the basal ganglia, and various neurodegenerative diseases including Parkinson's and Huntington's can disrupt it. People with Parkinson's disease, for example, tend to have increased saccadic latencies. Consequently, the quantitative measurement of saccadic eye movements has received considerable attention as a potential biomarker for neurodegenerative conditions. A lot more can be learned about the brain in both health and disease by observing what happens to eye movements when the function of specific brain areas is perturbed. Deep brain stimulation is a surgical intervention used for the management of a range of neurological conditions including Parkinson's disease, in which stimulating electrodes are placed in specific brain areas including several sites in the basal ganglia. Eye movement measurements can then be made with the stimulator systems both off and on and the results compared. With suitable experimental design, this approach can be used to study the pathophysiology of the disease being treated, the mechanism by which DBS exerts it beneficial effects, and even aspects of normal neurophysiology.

This paper describes the use of quantitative measurement of eye movements in conjunction with stimulation of focal areas of the deep brain in order to study physiology, pathophysiology, and the mechanisms of deep brain stimulation.

Derin Beyin Uyarım ile Saccadometry kullanarak normal ve patolojik beyin fonksiyonlarını incelemek için

The oculomotor system involves a large number of brain areas including parts of the basal ganglia, and various neurodegenerative diseases including ...