Bu çalışmada Kore Enstitüsü bilim ve teknoloji intramural araştırma bursu (2E27513) ve yüksek katma değer gıda teknolojisi geliştirme programı (Tarım Bakanlığı, gıda ve köy İşleri Bakanlığı (315067 / 03) tarafından finanse edilen IPET) tarafından desteklenmiştir.

Not: tüm deney 20 ° c düşük toz ve solucan ve bakteriyel işleme sırasında kontaminasyon indirilmesi ile tutulan bir temiz izole laboratuvar gerçekleştirilmelidir. Bu amaçla, deneyler bir alkol lamba ya da temiz bir Bank kullanarak alevi altında gerçekleştirilmelidir.
 1. C. elegans ve yumurta hazırlık kimyasal testi için bakım <ol><li>koru C. elegans N2 (var. Bristol) ile beslenen bir NGM agar plaka üzerinde yaşamak E. coli OP50 20 ° C'de 12 , 13.</li>
	Kullanarak <li>hazırla yaş senkronize yumurtalar çamaşır suyu çözüm tedavi 5 veya zaman yumurta döşeme yöntemi 6 , 14 , 15. 
	Not: yumurta öncesi hazırlık, etoposide içeren NGM plakalı ısı inaktive olur-E. coli OP50 aşağıda açıklandığı gibi kat. Isı-inaktive Koli basili OP50 E. coli 6 , 16 metabolik aktivite en aza indirmek için kullanılır.</li>
</ol> 2. Isı inaktive E. coli hazırlanması OP50 beslemek için C. elegans sırasında belgili tanımlık toksisite sınav <ol><li>500 mL Çift Kişilik Maya tryptone (DYT) orta tablo 1'de açıklandığı şekilde hazırlayın ve E. coli OP50 olarak kültürlü bir koloni aşılamak Luria-Bertani (LB) agar plaka 5.</li>
	<li>E. coli OP50 titreyen bir kuluçka 14 h 37 ° C'de ve 150 rpm için kuluçkaya.</li>
	<li>Aralıklarla 3,220 x g ve 20 ° C de 30 dk sonra tüm süpernatant DYT orta kaldırın ve S-tampon, 250 µL 1 M MgSO 4 ve 5 mg/mL kolesterol (etanol içinde çözünmüş) 25 µL 25 mL öncesi karışımı ekleyin. Bu çözümler steril.</li>
	<li>Bakteri resuspend ve bir 50 mL tek kullanımlık plastik tüp için transfer.</li>
	<li>Isı-inactivation için resuspended kuluçkaya E. coli OP50 65 30 min için bir su banyosunda ° C.</li>
	<li>Serin aşağı oda sıcaklığına ve mağaza kullanımı kadar 4 ° C'de. Bu bir ay boyunca saklanabilir.</li>
</ol> 3. NGM plakaları ya içeren % 1 DMSO veya 750 µM hazırlanması Etoposide <ol><li>hazırla iki temiz 200 mL cam şişe. NaCl, 0.6 g pepton, agar ve 195 mL distile su ve bir manyetik karıştırıcı 3.4 g 0.5 g için bir şişe ekleyin. Manyetik karıştırıcı diğer boş şişe ekleyin.</li>
	<li>İçin 121 ° C ve bir su banyosu şişelerde soğumasını 55 30 dk, 15 dk otoklav bu iki şişe ° C.</li>
	<li>0.2 mL 1 M CaCl 2, 5 mg/mL kolesterol 0.2 mL, 0.2 mL 1 M MgSO 4 ve 5 mL (Bu çözümler, steril) 1 M KPO 4 de ekleyin ve sonra onları tarafından 55 sıcak tabakta manyetik karıştırma karıştırın ° C.</li>
	<li>İle aynı birim (100 mL her) iki şişe karışık NGM orta bölün. Ardından, DMSO 1 mL için bir şişe ekleyin, manyetik karıştırma kullanarak yeniden karıştırın. Diğer şişe su banyosu 55 ° C, sonraki adım kadar saklayın. Her 35 x 10 mm 2 Petri kabına DMSO içeren orta aliquot 3 mL. Yaklaşık 33 DMSO içeren NGM plakaları bu adıma yapılmış olabilir.</li>
	<li>Manyetik karıştırma kullanarak diğer şişe karıştırmak, 75 mM etoposide (hisse senedi DMSO içinde çözünmüş) 1 mL ekleyin, tekrar karıştırın ve aliquot (Adım 3.4) yordamı yineleyin. Yaklaşık 33 etoposide (750 µM)-NGM plakaları içeren bu adıma yapılabilir. 
	Not: ilişkili önceki kağıt 6 ' da, 0, 250, 500 ve 1000 µM etoposide test ettik. Bu verilere dayalı, biz bu yazıda etoposide doz 750 µM seçti.</li>
	<li>Serin aşağı oda sıcaklığına kimyasal içeren NGM plakaları, oda sıcaklığında yaklaşık 3 h için bırakarak ve onları kullanmak kadar 4 ° C'de saklamak. 
	Not: ışığa duyarlı kimyasal maddeler söz konusu olduğunda, ışık ışık kaynaklı ayrışma en aza indirmek için blok. 
	Not: İsteğe bağlı olarak, aşağıda açıklandığı gibi iki farklı kimyasal tedavi koşulları kullanarak gerkçekleştirilen tahlil döşeme yumurta için kimyasallar olmadan normal bir NGM plaka olun.</li>
	<li>Ekle 100 µL, ısı inaktive-E. coli OP50 (anlatıldığı Bölüm 2 olarak) ve her NGM plaka üzerine yayıldı. C. elegans kuluçka 20 ° C'de kuru gece kimyasal test için izin</li>
</ol> 4. Ölçüm C. elegans büyüme <ol><li>yaş senkronize C. elegans yumurta transferi %1 DMSO veya 750 µM etoposide ile desteklenmiş NGM plaka.</li>
	<li>Incubate C. elegans 20 ° C'de bir kuluçka 4 gün için. Stereo mikroskop kullanarak solucanlar gözlemlemek ve her gün mikroskobik fotoğraf çekmek. Genellikle 20 X büyütme (1 X objektif lens, 2 X yakınlaştırma büyütme ve 10 X mercek mercek) C. elegans büyüme gözlem için uygundur. Ayrıca mikroskop sahne mikrometre solucan boyutu kalibrasyonunun mikroskobik bir görüntüsünü alır. 
	Not: Açlık toksisite test etkiler. Bu nedenle, yeterli bakteri ile besleme veya transfer edilen C. elegans ayarla yumurta sayıları başında. Açlık olasılığını dışlamak için 3 gün öncesine kadar dikkat.</li>
	<li>C. elegans DMSO veya etoposide ImageJ yazılımını kullanarak her zaman noktasında tedavi vücut uzunluğu ölçmek. 
	Not: her örnek ölçümlerinde istatistiksel analiz için yeterli 50 kurt vardır.
	<ol><li>İçinde ImageJ, açık mikroskop sahne mikrometre görüntü (&#39; dosya &#39; &#8594; &#39; aç &#39;). 
		Not: Mikrometre görüntü ve solucan görüntüleri (Adım 4.2) aynı büyütme olmalıdır.</li>
		<li>1000 µm bir çizgi sürükleyin Mikrometre Kalibrasyonu görüntü kullanarak &#39; düz çizgi &#39; aracı.</li>
		<li>Tıklama &#39; analiz &#39; &#8594; &#39; ölçeği ayarla &#39; ve giriş 1000 ve µm içine &#39; mesafe bilinen &#39; kutusu ve &#39; uzunluk birimi &#39; kutu, anılan sıraya göre. Kontrol &#39; Global &#39; ve'ı tıklatın &#39; tamam &#39;.</li>
		<li>Solucan görüntüleri açın (&#39; dosya &#39; &#8594; &#39; açık &#39;). Bir hat boyunca her solucan'ın özelliğini kullanarak çizdiğiniz &#39; serbest çizim &#39; aracı. Vücut uzunluğu veri tıklayarak elde &#39; analiz &#39; &#8594; &#39; ölçü &#39;.</li>
		<li>50 solucanlar için bu adımları yineleyin.</li>
	</ol></li></ol> 5. C. elegans yumurta atarken tahlil <ol><li>Incubate yaş senkronize yumurtalar NGM üzerinde plaka içeren DMSO veya etoposide 64 h için (ilk doğumdan önce) 20 genç yetişkin aşamada kadar ° C. 
	Not: Solucanlar büyüme ölçüm deneyler üzerinden kullanmak isteğe bağlıdır. Büyüme ölçüm yapmak ve döşeme tahlil birlikte yumurta uygundur.</li>
	<li>Transfer 5 Yetişkin solucanlar için yeni NGM plakaları olmadan kimyasallar (koşul 1, genç yetişkin sahne için yumurtadan zaman belirli bir süre içinde kimyasal arıtma) ya da aynı kimyasal Önarıtma (koşul 2, sürekli maruz kalma içeren yeni NGM plaka kimyasallar genel olarak deneysel dönem boyunca) ve sonra onları 24 h için kuluçkaya 
	Not: Her tedavi için 3-5 NGM plakaları kullanarak çoğaltır yapmak önerilir; Bu çoğaltır istatistiksel analizi için kullanılabilir.</li>
	<li>Yukarıda açıklandığı gibi yeni NGM plakasına aktarmak ve yumurta her gün sayma. Kapalı sürünerek, öldü ve dahili olarak kapağı vardı solucanları saymakEd.</li>
	<li>Solucanlar hiçbir daha fazla, genellikle 5 gün içinde yumurta kadar bu adımları yineleyin.</li>
	<li>Solucan her plaka başına koydu yumurta sayısını hesaplamak ve her gün yumurta koydu toplam sayısını belirlemek 5 gün boyunca bu değerlerin toplamını. 
	Not: Gezilen solucanlar sayısını kapalı ve dahili olarak hesaplamadan yumurtadan dışlamak.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Blomme, E. A., Will, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toxicology+strategies+for+drug+discovery:+present+and+future.">Toxicology strategies for drug discovery: present and future.</a> Chem. Res. Toxicol. 29 (4), 473-504 (2016).</li><li>Lilienblum, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alternative+methods+to+safety+studies+in+experimental+animals:+role+in+the+risk+assessment+of+chemicals+under+the+new+European+Chemicals+Legislation+(REACH).">Alternative methods to safety studies in experimental animals: role in the risk assessment of chemicals under the new European Chemicals Legislation (REACH).</a> Arch. Toxicol. 82 (4), 211-236 (2008).</li><li>Honnen, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Caenorhabditis+elegans+as+a+powerful+alternative+model+organism+to+promote+research+in+genetic+toxicology+and+biomedicine.">Caenorhabditis elegans as a powerful alternative model organism to promote research in genetic toxicology and biomedicine.</a> Arch. Toxicol. , (2017).</li><li>Hunt, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+C.+elegans+model+in+toxicity+testing.">The C. elegans model in toxicity testing.</a> J. Appl. Toxicol. 37 (1), 50-59 (2017).</li><li>Porta-de-la-Riva, M., Fontrodona, L., Villanueva, A., Ceron, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Basic+Caenorhabditis+elegans+methods:+synchronization+and+observation.">Basic Caenorhabditis elegans methods: synchronization and observation.</a> J. Vis. Exp. (64), e4019 (2012).</li><li>Lee, S. Y., Kim, J. Y., Jung, Y. J., Kang, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toxicological+evaluation+of+the+topoisomerase+inhibitor,+etoposide,+in+the+model+animal+Caenorhabditis+elegans+and+3T3-L1+normal+murine+cells.">Toxicological evaluation of the topoisomerase inhibitor, etoposide, in the model animal Caenorhabditis elegans and 3T3-L1 normal murine cells.</a> Environ. Toxicol. 32 (6), 1836-1843 (2017).</li><li>Imanikia, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+application+of+the+comet+assay+to+assess+the+genotoxicity+of+environmental+pollutants+in+the+nematode+Caenorhabditis+elegans.">The application of the comet assay to assess the genotoxicity of environmental pollutants in the nematode Caenorhabditis elegans.</a> Environ. Toxicol. Pharmacol. 45, 356-361 (2016).</li><li>Guo, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perfluorooctane+sulfonate+exposure+causes+gonadal+developmental+toxicity+in+Caenorhabditis+elegans+through+ROS-induced+DNA+damage.">Perfluorooctane sulfonate exposure causes gonadal developmental toxicity in Caenorhabditis elegans through ROS-induced DNA damage.</a> Chemosphere. 155, 115-126 (2016).</li><li>Allard, P., Kleinstreuer, N. C., Knudsen, T. B., Colaiacovo, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+C.+elegans+screening+platform+for+the+rapid+assessment+of+chemical+disruption+of+germline+function.">A C. elegans screening platform for the rapid assessment of chemical disruption of germline function.</a> Environ. Health Perspect. 121 (6), 717-724 (2013).</li><li>Singh, S., Sharma, B., Kanwar, S. S., Kumar, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lead+phytochemicals+for+anticancer+drug+development.">Lead phytochemicals for anticancer drug development.</a> Front. Plant Sci. 7, 1667 (2016).</li><li>Kang, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+topoisomerase+inhibitor,+daurinol,+suppresses+growth+of+HCT116+cells+with+low+hematological+toxicity+compared+to+etoposide.">A novel topoisomerase inhibitor, daurinol, suppresses growth of HCT116 cells with low hematological toxicity compared to etoposide.</a> Neoplasia. 13 (11), 1043-1057 (2011).</li><li>Chaudhuri, J., Parihar, M., Pires-daSilva, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+introduction+to+worm+lab:+from+culturing+worms+to+mutagenesis.">An introduction to worm lab: from culturing worms to mutagenesis.</a> J. Vis. Exp. (47), e2293 (2011).</li><li>Zarse, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impaired+insulin/IGF1+signaling+extends+life+span+by+promoting+mitochondrial+L-proline+catabolism+to+induce+a+transient+ROS+signal.">Impaired insulin/IGF1 signaling extends life span by promoting mitochondrial L-proline catabolism to induce a transient ROS signal.</a> Cell Metab. 15 (4), 451-465 (2012).</li><li>Sutphin, G. L., Kaeberlein, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measuring+Caenorhabditis+elegans+life+span+on+solid+media.">Measuring Caenorhabditis elegans life span on solid media.</a> J. Vis. Exp. (27), e1152 (2009).</li><li>Weimer, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=D-Glucosamine+supplementation+extends+life+span+of+nematodes+and+of+ageing+mice.">D-Glucosamine supplementation extends life span of nematodes and of ageing mice.</a> Nat. Commun. 5, 3563 (2014).</li><li>Schmeisser, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuronal+ROS+signaling+rather+than+AMPK/sirtuin-mediated+energy+sensing+links+dietary+restriction+to+lifespan+extension.">Neuronal ROS signaling rather than AMPK/sirtuin-mediated energy sensing links dietary restriction to lifespan extension.</a> Mol. Metab. 2 (2), 92-102 (2013).</li><li>Parodi, D. A., Damoiseaux, R., Allard, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comprehensive+assessment+of+germline+chemical+toxicity+using+the+nematode+Caenorhabditis+elegans.">Comprehensive assessment of germline chemical toxicity using the nematode Caenorhabditis elegans.</a> J. Vis. Exp. (96), e52445 (2015).</li><li>Hahm, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=C.+elegans+maximum+velocity+correlates+with+healthspan+and+is+maintained+in+worms+with+an+insulin+receptor+mutation.">C. elegans maximum velocity correlates with healthspan and is maintained in worms with an insulin receptor mutation.</a> Nat. Commun. 6, 8919 (2015).</li><li>Nussbaum-Krammer, C. I., Neto, M. F., Brielmann, R. M., Pedersen, J. S., Morimoto, R. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Investigating+the+spreading+and+toxicity+of+prion-like+proteins+using+the+metazoan+model+organism+C.+elegans.">Investigating the spreading and toxicity of prion-like proteins using the metazoan model organism C. elegans.</a> J. Vis. Exp. (95), e52321 (2015).</li><li>Schmidt, B. Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+acute+and+developmental+neurotoxicity+screening:+an+overview+of+cellular+platforms+and+high-throughput+technical+possibilities.">In vitro acute and developmental neurotoxicity screening: an overview of cellular platforms and high-throughput technical possibilities.</a> Arch. Toxicol. 91 (1), 1-33 (2017).</li><li>Fey, S. J., Wrzesinski, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+drug+toxicity+using+3D+spheroids+constructed+from+an+immortal+human+hepatocyte+cell+line.">Determination of drug toxicity using 3D spheroids constructed from an immortal human hepatocyte cell line.</a> Toxicol. Sci. 127 (2), 403-411 (2012).</li></ol>

Yazarlar ifşa gerek yok.

Bu makalede, etoposide yaydıkları bir örnek olarak kullanarak C. elegans, toprak Yuvarlak solucanlar, kimyasal maddelerin toksisite değerlendirilmesi açıklar. Bu amaçla, biz iki deneysel koşullar kullanılır. İlk seti, C. elegans genç yetişkin sahneye yumurtadan plakaları içeren etoposide üzerinde yetiştirilen ve o zaman solucanlar kimyasallar olmadan normal NGM Tabaklarda yumurtalarını bırakmak için izin verildi. İkinci deneysel sette C. elegans sürekli ile tedavi etoposide bütün deneysel süresi boyunca. Buna karşılık iki deneysel koşullar arasında yumurta numaralarını, biz test bileşiklerin üreme toksisitesi tersine çevrilebilir veya geri dönüşü olmayan karar verebilirsiniz. Etoposide deneysel koşulların her ikisi de (şekil 3) altında koydu yumurta toplam sayısı önemli ölçüde azalmıştır. Bu veriler etoposide Önarıtma erken büyüme aşamasında üreme organları hasar ikna etmek yeterli, dahil erbezi mikrop6hücreler ima; Bu verilere dayanarak, etoposide tedavi geri dönüşümsüz C. elegansüreme toksisitesi indüklenen spekülasyon.
Ömrü tahlil14,15, erbezi germ hücreleri6,17mikroskobik gözlem gibi bu yöntem makalede açıklanan C. elegans deneyler yanı sıra, diğer toksisite testleri, faringeal Pompa hızı ve hareket analizi18,19 ölçüm C. eleganskimyasal toksisitesi değerlendirme için de kullanılabilir. Vitro kültürlü insan hücre hatları, Primer hücre, kök hücre ve 3D küresel kültür C. elegans deneyleri1sınırlandırılması artırmak için çeşitli kimyasal toksisitesi değerlendirmek için olası diğer seçenekler vardır, 6,20,21.
C. eleganstemel genlerin evrimsel koruma rağmen memeli organizma insan protein sequences açısından farklıdır, sindirim ve bağırsak sistemlerinde, metabolizma, yanı sıra çok sayıda gen yoksun. Bu nedenle, memeli hayvan deneyleri ve klinik kimyasal toksisitesi tam değerlendirme için ihtiyaç vardır. Ancak, kolaylık ve hayvan etik sorunlar avantajları göz önüne alındığında, platform test bir C. elegans toksisite çeşitli kimyasallar toksikolojik değerlendirilmesi için yararlı ve pratik bir çözüm olacaktır.

Toksikolojik değerlendirme için ilaç, nutraceuticals ve kozmetik geliştirilmesi, aynı zamanda çeşitli çevresel toksinler risk değerlendirilmesi esastır. Kemirgen modelidir bu toksikoloji çalışma için en popüler in vivo deneysel sistemlerinden biri; Alternatif olarak, C. elegans gibi memeli organizmalar da yaygın olarak kullanılmaktadır. Sigara-memeli toksikolojik değerlendirme modelleri sadece hayvan etik sorunlar, aynı zamanda onların kolaylık ve maliyet-etkililik, teknikleri, hız ve tekrarlanabilirlik1,2 göz önünde bulundurarak kullanışlılığı nedeniyle yararlıdır ,3,4.
C. elegans, bir toprak solucan, çeşitli temel ve uygulamalı Biyoloji ve kimya araştırma modeli hayvan olarak istismar. Bu bir 1 mm Uzunluk, sadece içinde katı veya sıvı Yuvarlak solucanlar büyüme medya (bakteriyel gerilme Escherichia coli OP50 ile beslenen NGM) korunur şeffaf Yuvarlak solucanlar var. C. elegans kısa bir ömrü vardır ve vahşi-türü N2 C. elegans yaklaşık 300 yumurta bırakır. Bu nedenle, kolayca deneysel malzeme3,4,5olarak kullanılmak üzere yayılır. C. elegans da birçok uyuşturucu ve çevresel kirleticiler6,7,8,9toksikolojik çalışmalarda yaygın olarak kullanılmıştır.
Çünkü birçok antikanser ilaç hızla bölünme kanserli hücrelerin hedef, ayrıca hızla kemik iliği, bağırsak epitel ve saç kökü hücreleri gibi normal hücre bölünmesi zarar verebilir. Örneğin, topoizomeraz inhibitör antikanser ilaçlar kanser hücrelerinin DNA çoğaltma işleminin hedef; Bu nedenle, onlar da hızla normal hücre bölünmesi inhibe. Her canlı organizma topoizomeraz ve bu topoizomeraz inhibitörleri en olası etkisi çevre ekosistemler6,10,11vardır. Böylece, bir ilaç toksikolojik değerlendirme platformu modeli hayvan kullanarak her iki ilaç ve çevresel risk değerlendirmesi için geliştirme değerlidir.
Bu makalede, bir klinik antikanser Ajan etoposide toksisite bu hedefleri topoizomeraz II, C. elegansbir modeli toksik kimyasal olarak test etmek için ayrıntılı iletişim kurallarını açıklar. Bu amaçla, vücut büyüklüğü ve etoposide ile tedavi C. elegans atılmıştır yumurta toplam sayısı ölçüm yöntemi anlatacağız.

<table><tbody><tr><td>Agar</td><td>Affymetrix, USA</td><td>10906</td><td></td></tr><tr><td>&lt;em&gt;Caenorhabditis elegans&lt;/em&gt; N2</td><td>Caenorhabditis Genetics Center (CGC)</td><td></td><td>Wild type</td></tr><tr><td>Cholesterol</td><td>Sigma, USA</td><td>C3045</td><td></td></tr><tr><td>Dimethyl sulfoxide</td><td>Sigma, USA</td><td>D2650</td><td></td></tr><tr><td>&lt;em&gt;Escherichia coli &lt;/em&gt;OP50</td><td>Caenorhabditis Genetics Center (CGC)</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Etoposide</td><td>Sigma, USA</td><td>E1383</td><td></td></tr><tr><td>Image J software (ver 1.4)</td><td>Natinoal Institute of Health, USA</td><td></td><td>https://imagej.nih.gov/ij/</td></tr><tr><td>Microscope camera</td><td>Jenopitk, Progress Gryphax, Germany</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Peptone</td><td>Merck, USA</td><td>107213</td><td></td></tr><tr><td>35 &amp;times; 10 mm Petri dish</td><td>SPL Life Sciences, South Korea</td><td>10035</td><td></td></tr><tr><td>90 &amp;times; 15 mm Petri dish</td><td>SPL Life Sciences, South Korea</td><td>10090</td><td></td></tr><tr><td>Stereo microscope</td><td>Nikon, Japan</td><td>SMZ800N</td><td></td></tr><tr><td>Yeast extract</td><td>Becton Dickinson, USA</td><td>212750</td><td></td></tr></tbody></table>

measuring the effect of chemicals on the growth and reproduction of caenorhabditis elegans

Toksikolojik değerlendirme canlıların temel ve uygulamalı biyolojik bilim alanlarındaki kimyasallar etkilerini anlamak için önemlidir. Bir sigara memeli toprak yuvarlak solucan Caenorhabditis elegans, kolaylık ve memeli hayvan sistemleri ile karşılaştırıldığında hayvan etik sorunları eksikliği nedeniyle toksikoloji Etütler değerli model organizma olduğunu. Bu protokol için toksikolojik değerlendirme C. elegans kimyasalların detaylı bir yordam açıklanır. Bir klinik antikanser ilaç, hangi insan topoizomeraz II hedefler ve insan kanser hücrelerinin DNA ikileşmesi engeller, etoposide kimyasal test bir model olarak seçildi. Yaş-senkronize C. elegans yumurta maruz Dimetil sülfoksit (DMSO) veya etoposide ve sonra C. elegans büyüme stereo mikroskop gözlem tarafından 4 gün boyunca her gün takip. C. elegans DMSO ile tedavi dan yumurta toplam sayısı koydu veya etoposide de stereo mikroskop kullanarak sayılır. Etoposide tedavi önemli ölçüde büyüme ve üreme C. elegansetkilenen. Buna karşılık solucanlar kimyasallar farklı tedavi dönemlerle koydu yumurta toplam sayısı, bu üreme toksisitesi kimyasal C. elegans üreme üzerinde ters çevrilebilir veya geri dönüşü olmayan karar verilebilir. Bu iletişim kuralları her iki, çeşitli ilaçlar ve diğer çevresel toxicants risk değerlendirmesi için yararlı olabilir.

Etoposide (24-96 h) tedavisinde önemli ölçüde C. elegansbüyüme geri zekalı. Araç tedavi solucanlar 1,04 mm (şekil 1) büyüdü iken, kuluçka 96 h sonra etoposide tedavi solucanlar 0,86 mm gövde uzunluğu, büyüdü. Büyüme geriliği de görünüşe göre (Şekil 2) stereo mikroskop gözlem altında gözlendi. Yumurta, kuluçka 72 h araç tedavi solucanlar görmeye başladık. Öte yandan, yumurta etoposide tedavi 96 h sonra tespit edildi. Bu verilerden etoposide tedavi C. elegansilk doğum zaman Gecikmeli ileri sürüldü.
Döşeme yumurta gecikme ek olarak, etoposide tedavi solucan (şekil 3) koydu yumurta toplam sayısı önemli ölçüde azalmıştır. Genç Yetişkin solucanlar (şekil 3B) olup (şekil 3A) sürekli etoposide tedavi kültürlü yaşındayken üreme toksisitesi, etoposide tedavi, toplam yumurta numarasıyla azalma gözlendi. Her iki deneysel koşullar altında denetimi değerlendirilmesi solucanlar arasında hiçbir önemli farklılıklar vardı. Solucanlar (yumurtadan genç yetişkin sahne) belirli bir süre tedavi yumurtadan toplam sayısı sürekli etoposide ile tedavi solucanlar önemli ölçüde farklı değildi. Bu karşılaştırma için istatistiksel analiz tek yönlü Tukey'nın birden fazla karşılaştırma testi ile takip Varyans analizi (ANOVA) tarafından gerçekleştirildi.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56437/56437fig1.jpg"> 
Resim 1: Ölçüm C. elegans büyüme tedavi ile etoposide. C. elegans yaş senkronize yumurta büyüdü DMSO (%1, araç kontrol) ile desteklenmiş NGM plakaları veya etoposide (750 µM) 24-96 h. Photomicrographs ( Şekil 2' de gösterilen) için her gün alınmıştır ve gövde uzunluğu kullanılarak ölçüldü ImageJ yazılım. Verileri ortalama ± standart sapma (SD) ifade edilir (n = 50, grup başına 50 solucanlar). p &#60;, her zaman bir noktada araç kontrol ve etoposide tedavi arasında önemli farklılıklar için 0,01. İstatistiksel analiz gerçekleştirilen öğrencinin tkullanımı-test. <a href="//ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56437/56437fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56437/56437fig2.jpg"> 
Resim 2: C. elegans görüntülerini Stereo mikroskop tedavi ile etoposide. C. elegans tedavi şekil 1 ' de açıklandığı gibi (ölçek çubuğu = 1 mm). <a href="//ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56437/56437fig2large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56437/56437fig3.jpg"> 
Şekil 3: Toplam sayısı yumurta koydu etoposide ile tedavi C. elegans üzerinden. C. elegans yaş senkronize yumurtalar DMSO (%1, araç kontrol) içeren NGM Tabaklarda inkübe veya etoposide (750 µM) 64 h için. Daha sonra yumurta koydu toplam sayısı devamsızlık(a)veya (B) varlığı 5 gün boyunca sürekli kimyasal arıtma gözlendi. Solucanlar her gün normal NGM plaka(a)veya aynı kimyasallar ile desteklenmiş NGM plaka transfer: %1 DMSO veya etoposide (750 µM) (B). Yumurta koydu sayısı sayılır ve solucan koydu yumurta sayısını hesaplamak için her gün solucanlar toplam numarasına göre bölünmüş. Yumurta solucan başına tüm sayıları 5 gün için özetlenebilir. Veri quadruplicate deneyler üzerinden ortalama ± SD olarak ifade edilir. p &#60; 0,01, araç kontrol ve etoposide tedavi arasında önemli farklılıklar için. İstatistiksel analiz gerçekleştirilen öğrencinin tkullanımı-test. <a href="//ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56437/56437fig3large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Normal NGM agar medya-bakım ve sürekli kimyasal tedavi olmadan tahlil döşeme yumurta için 1000 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1. cam şişe içine pepton 2.5 g, 3 g, NaCl, agar 17 g ve 975 mL distile su ekleyin.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2. otoklav 121 ° C'de 15 dakika</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3. 55 ° C'de 30 min için bir su banyosunda serin aşağı ve 1 mL 1 M CaCl2, 5 mg/mL kolesterol (etanol içinde çözünmüş) 1 mL, 1 mL 1 M MgSO4, KPO425 mL ekleyin.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4. içine Petri yemekler (90 x 15 mm yemekleri bakım; 35 x 10 mm2 yemekleri için tahlil döşeme yumurta) ile manyetik karıştırma ve sonra aliquot karıştırın.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5. 4 ° C'de NGM tabaklar kullanmak kadar saklamak.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>E. coli OP50 – 500 mL ekimi için DYT medya</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1. 2.5 gram NaCl, 5 g maya ekstresi, pepton, 8 g ve 485 mL distile su bir Erlenmeyer şişesi ekleyin.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2. otoklav 121 ° C'de 15 dakika</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3. sakinleş ve oda sıcaklığında kullanmak kadar saklamak.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>S-tampon-1000 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1. cam şişe içine NaCl 5.85 g, KH2PO46 g, 1 g K2HPO4ve 987 mL distile su ekleyin.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2. pH çözüm 6.0 için ayarlayın.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3. otoklav 121 ° C'de 15 dakika</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4. sakinleş ve oda sıcaklığında kullanmak kadar saklamak.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
Tablo 1: Tarifleri kültür büyüme medya ve arabellekleri.

Watch this Scientific Journal Video about Measuring the Effect of Chemicals on the Growth and Reproduction of Caenorhabditis elegans at JoVE.com

Measuring the Effect of Chemicals on the Growth and Reproduction of Caenorhabditis elegans

Bir modeli hayvan, Caenorhabditis elegans, kimyasal toksisitesi değerlendirmek için temel bir protokol açıklanmıştır. Uygun ve risk değerlendirmesi çeşitli çevresel kirleticilerin gelince de eczacılık gelişimi için yararlı yöntemdir.

Büyüme ve üreme Caenorhabditis elegans kimyasallar etkisi ölçme

Toxicological evaluation is crucial for understanding the effects of chemicals on living organisms in basic and applied biological science fields. A ...

measuring-effect-chemicals-on-growth-reproduction-caenorhabditis

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Medicine

Measuring the Effect of Chemicals on the Growth and Reproduction of Caenorhabditis elegans

16.9K Görüntüleme.  Korea Institute of Science and Technology. Bir modeli hayvan, Caenorhabditis elegans, kimyasal toksisitesi değerlendirmek için temel bir protokol açıklanmıştır. Uygun ve risk değerlendirmesi çeşitli çevresel kirleticilerin gelince de eczacılık gelişimi için yararlı yöntemdir.

Video: Measuring the Effect of Chemicals on the Growth and Reproduction of Caenorhabditis elegans

Comprehensive Assessment of Germline Chemical Toxicity Using the Nematode Caenorhabditis elegans

Identifying the reproductive toxicity of the thousands of chemicals present in our environment has been one of the most tantalizing challenges in the field of environmental health. This is due in part to the paucity of model systems that can (1) accurately recapitulate keys features of reproductive processes and (2) do so in a medium- to high-throughput fashion, without the need for a high number of vertebrate animals.
We describe here an assay in the nematode C. elegans that allows the rapid identification of germline toxicants by monitoring the induction of aneuploid embryos. By making use of a GFP reporter line, errors in chromosome segregation resulting from germline disruption are easily visualized and quantified by automated fluorescence microscopy. Thus the screening of a particular set of compounds for its toxicity can be performed in a 96- to 384-well plate format in a matter of days. Secondary analysis of positive hits can be performed to determine whether the chromosome abnormalities originated from meiotic disruption or from early embryonic chromosome segregation errors. Altogether, this assay represents a fast first-pass strategy for the rapid assessment of germline dysfunction following chemical exposure.

Comprehensive Assessment of Germline Chemical Toxicity Using the Nematode Caenorhabditis elegans

We describe the detailed steps of a high-throughput chemical assay in the nematode Caenorhabditis elegans used to assess germline toxicity. In this assay, disruption of germline function following chemical exposure is monitored using a fluorescent reporter specific to aneuploid embryos.

Nematod kullanma Germline Kimyasal zehirlilik Kapsamlı Değerlendirme<em&gt; Caenorhabditis elegans</em

Identifying the reproductive toxicity of the thousands of chemicals present in our environment has been one of the most tantalizing challenges in the ...

Gelişim Biyolojisi

A Simple Method for High Throughput Chemical Screening in Caenorhabditis Elegans

Caenorhabditis elegans is a useful organism for testing chemical effects on physiology. Whole organism small molecule screens offer significant advantages for identifying biologically active chemical structures that can modify complex phenotypes such as lifespan. Described here is a simple protocol for producing hundreds of 96-well culture plates with fairly consistent numbers of C. elegans in each well. Next, we specified how to use these cultures to screen thousands of chemicals for effects on the lifespan of the nematode C. elegans. This protocol makes use of temperature sensitive sterile strains, agar plate conditions, and simple animal handling to facilitate the rapid and high throughput production of synchronized animal cultures for screening.

A Simple Method for High Throughput Chemical Screening in Caenorhabditis Elegans

Here we describe a simple protocol for rapidly producing hundreds of nematode growth media agar, 96-well culture plates with consistent numbers of Caenorhhabditis elegans per well. These cultures are useful for the phenotypic screening of whole organisms. We focus here on using these cultures to screen chemicals for pro-longevity effects.

Yüksek işlem hacmi Caenorhabditis Elegans kimyasal tarama için basit bir yöntem

Caenorhabditis elegans is a useful organism for testing chemical effects on physiology. Whole organism small molecule screens offer significant advantages ...

Biyokimya

A High-throughput Assay for the Prediction of Chemical Toxicity by Automated Phenotypic Profiling of Caenorhabditis elegans

Applying toxicity testing of chemicals in higher order organisms, such as mice or rats, is time-consuming and expensive, due to their long lifespan and maintenance issues. On the contrary, the nematode Caenorhabditis elegans (C. elegans) has advantages to make it an ideal choice for toxicity testing: a short lifespan, easy cultivation, and efficient reproduction. Here, we describe a protocol for the automatic phenotypic profiling of C. elegans in a 384-well plate. The nematode worms are cultured in a 384-well plate with liquid medium and chemical treatment, and videos are taken of each well to quantify the chemical influence on 33 worm features. Experimental results demonstrate that the quantified phenotype features can classify and predict the acute toxicity for different chemical compounds and establish a priority list for further traditional chemical toxicity assessment tests in a rodent model.

A High-throughput Assay for the Prediction of Chemical Toxicity by Automated Phenotypic Profiling of Caenorhabditis elegans

A quantitative method has been developed to identify and predict the acute toxicity of chemicals by automatically analyzing the phenotypic profiling of Caenorhabditis elegans. This protocol describes how to treat worms with chemicals in a 384-well plate, capture videos, and quantify toxicological related phenotypes.

Bir yüksek-den geçerek tahlil tarafından otomatik fenotipik profil oluşturma Caenorhabditis elegans ve kimyasal toksisitesi tahmin için

Applying toxicity testing of chemicals in higher order organisms, such as mice or rats, is time-consuming and expensive, due to their long lifespan and ...

Çevre

Using Caenorhabditis elegans for Studying Trans- and Multi-Generational Effects of Toxicants

Information about toxicities of chemicals are essential in their application and waste management. For chemicals at low concentrations, the long-term effects are very important in judging their consequences in the environment and on human health. In demonstrating long-term influences, effects of chemicals over generations in recent studies provide new insight. Here, we describe protocols for studying effects of chemicals over multiple generations using free-living nematode Caenorhabditis elegans. Two aspects are presented: (1) trans-generational (TG) and (2) multi-generational effect studies, the latter of which is separated to multi-generational exposure (MGE) and multi-generational residual (MGR) effect studies. The TG effect study is robust with a simple purpose to determine whether chemical exposure to parents can result in any residual consequences on offspring. After the effects are measured on parents, sodium hypochlorite solutions are used to kill the parents and keep the offspring so as to facilitate effect measurement on the offspring. The TG effect study is used to determine whether the offspring are affected when their parent is exposed to the pollutants. The MGE and MGR effect study is systematical used to determine whether continuous generational exposure can result in adaptive responses in offspring over generations. Careful pick-up and transfer are used to distinguish generations to facilitate effect measurement on each generation. We also combined protocols to measure locomotion behavior, reproduction, lifespan, biochemical and gene expression changes. Some example experiments are also presented to illustrate the trans- and multi-generational effect studies.

Using Caenorhabditis elegans for Studying Trans- and Multi-Generational Effects of Toxicants

Trans- and multi-generational effects of persistent chemicals are essential in judging their long-term consequences in the environment and on the human health. We provide novel detailed methods for studying trans- and multi-generational effects using free-living nematode Caenorhabditis elegans.

Toxicants Trans ve çok jenerasyonel etkileri okumak için Caenorhabditis elegans kullanma

Information about toxicities of chemicals are essential in their application and waste management. For chemicals at low concentrations, the long-term ...

Caenorhabditis elegans gıda alımını ve ömrünü ölçmek için yüksek verimli test

Quantifying Food Intake in Caenorhabditis elegans by Measuring Bacterial Clearance

Feeding is an essential biological process for an organism&#39;s growth, reproduction, and survival. This assay aims to measure the food intake of Caenorhabditis elegans&#160;(C. elegans), an important parameter when studying the genetics of aging or metabolism. In most species, feeding is determined by measuring the difference between the amount of food provided and the amount left after a given time interval. The method presented here uses the same strategy to determine the feeding of C. elegans. It measures the amount of bacteria, the food source of C. elegans, cleared within 72 h. This method uses 96-well microtiter plates and has allowed the screening of hundreds of drugs for their ability to modulate food intake at a speed and depth not possible in other animal models. The strength of this assay is that it allows to measure feeding and lifespan simultaneously and directly measures the disappearance of food and, thus, is based on the same principles used for other organisms, facilitating species-to-species comparison.

Yazar Spotlight: Lipotoksisite ve HFpEF Arasındaki İlişkiyi Keşfetmek 

This protocol describes an assay to quantify Caenorhabditis elegans feeding rate based on measuring the clearance of bacteria in liquid culture.

Bakteriyel Klerensi Ölçerek Caenorhabditis elegans'ta Gıda Alımının Ölçülmesi

Feeding is an essential biological process for an organism&#39;s growth, reproduction, and survival. This assay aims to measure the food intake of ...

Davranış

An Assay for Measuring the Effects of Ethanol on the Locomotion Speed of Caenorhabditis elegans

Alcohol use disorders are a significant public health concern, for which there are few effective treatment strategies. One difficulty that has delayed the development of more effective treatments is the relative lack of understanding of the molecular underpinnings of the effects of ethanol on behavior. The nematode, Caenorhabditis elegans (C.&#160;elegans), provides a useful model in which to generate and test hypotheses about the molecular effects of ethanol. Here, we describe an assay that has been developed and used to examine the roles of particular genes and environmental factors in behavioral responses to ethanol, in which locomotion is the behavioral output. Ethanol dose-dependently causes an acute depression of crawling on an agar surface. The effects are dynamic; animals exposed to a high concentration demonstrate an initial strong depression of crawling, referred to here as initial sensitivity, and then partially recover locomotion speed despite the continued presence of the drug. This ethanol-induced behavioral plasticity is referred to here as the development of acute functional tolerance. This assay has been used to demonstrate that these two phenotypes are distinct and genetically separable. The straightforward locomotion assay described here is suitable for examining the effects of both genetic and environmental manipulations on these acute behavioral responses to ethanol in C.&#160;elegans.

An Assay for Measuring the Effects of Ethanol on the Locomotion Speed of Caenorhabditis elegans

C. elegans is a useful model for studying the effects of ethanol on behavior. We present a behavioral assay that quantifies the effects of ethanol on the locomotion speed of crawling worms; both initial sensitivity and the development of acute functional tolerance to ethanol can be measured with this assay.

Locomotion Speed ​​Etanol Etkilerinin Ölçülmesi için bir Testi<em&gt; Caenorhabditis elegans</em

Alcohol use disorders are a significant public health concern, for which there are few effective treatment strategies. One difficulty that has delayed the ...

Nörobilim

Measuring Caenorhabditis elegans Life Span in 96 Well Microtiter Plates

Lifespan is a biological process regulated by several genetic pathways. One strategy to investigate the biology of aging is to study animals that harbor mutations in components of age-regulatory pathways. If these mutations perturb the function of the age-regulatory pathway and therefore alter the lifespan of the entire organism, they provide important mechanistic insights1-3.
Another strategy to investigate the regulation of lifespan is to use small molecules to perturb age-regulatory pathways. To date, a number of molecules are known to extend lifespan in various model organisms and are used as tools to study the biology of aging4-16. The number of molecules identified thus far is small compared to the genetic "toolset" that is available to study the biology of aging.
Caenorhabditis elegans is one of the principle models used to study aging because of its excellent genetics and short lifespan of three weeks. More recently, C.elegans has emerged as a model organism for phenotype based drug screens5,7,16-20 because of its small size and its ability to grow in microtiter plates.
Here we present an assay to measure C.elegans lifespan in 96 well microtiter plates. The assay was developed and successfully used to screen large libraries for molecules that extend C.elegans lifespan7. The reliability of the assay was evaluated in multiple tests: first, by measuring the lifespan of wild type animals grown at different temperatures; second, by measuring the lifespan of mutants with altered lifespans; third, by measuring changes in lifespan in response to different concentrations of the antidepressant Mirtazepine. Mirtazepine has previously been shown to extend lifespan in C.elegans7. The results of these tests show that the assay is able to replicate previous findings from other assays and is quantitative. The microtiter format also makes this lifespan assay compatible with automated liquid handling systems and allows integration into automated platforms.

Measuring Caenorhabditis elegans Life Span in 96 Well Microtiter Plates

In this protocol we present a method to measure Caenorhabditis elegans lifespan in 96 well microtiter plates.

Ölçme Caenorhabditis elegans 96 Şey microtiter Tabaklar Ömrü

Lifespan is a biological process regulated by several genetic pathways. One strategy to investigate the biology of aging is to study animals that harbor ...

Biyoloji

Measuring the Effects of Bacteria on C. Elegans Behavior Using an Egg Retention Assay

C. elegans egg-laying behavior is affected by environmental cues such as osmolarity1 and vibration2. In the total absence of food C. elegans also cease egg-laying and retain fertilized eggs in their uterus3. However, the effect of different sources of food, especially pathogenic bacteria and particularly Enterococcus faecalis, on egg-laying
	behavior is not well characterized. The egg-in-worm (EIW) assay is a useful tool to quantify the effects of different types of bacteria, in this case E. faecalis, on egg- laying behavior.
	
	EIW assays involve counting the number of eggs retained in the uterus of C. elegans4. The EIW assay involves bleaching staged, gravid adult C. elegans to remove the cuticle and separate the retained eggs from the animal. Prior to bleaching, worms are exposed to bacteria (or any type of environmental cue) for a fixed period of time. After bleaching, one is very easily able to count the number of eggs retained inside the uterus of the worms. In this assay, a quantifiable increase in egg retention after E. faecalis exposure can be easily measured. The EIW assay is a behavioral assay that may be used to screen for potentially pathogenic bacteria or the presence of environmental toxins. In addition, the EIW assay may be a tool to screen for drugs that affect neurotransmitter signaling since egg-laying behavior is modulated by neurotransmitters such as serotonin and acetylcholine5-9.

Measuring the Effects of Bacteria on C. Elegans Behavior Using an Egg Retention Assay

An egg-in-worm (EIW) assay is a useful method to quantify egg-laying behavior. Alterations in egg laying can be a behavioral response of the model organism Caenorhabditis elegans to potentially harmful environmental substances such as those produced by pathogenic bacteria.

Üzerinde Bakterilerin Etkilerinin Ölçme<em&gt; C. Elegans</emBir Yumurta Tutma Testi Kullanma&gt; Davranış

C. elegans egg-laying behavior is  affected by environmental cues such as osmolarity1 and  vibration2. In the total absence of food C. elegans also cease ...

Büyüme ve üreme Caenorhabditis elegans kimyasallar etkisi ölçme

Özet

Daha Fazla Video Keşfet

Bu videodaki bölümler

Nematod kullanma Germline Kimyasal zehirlilik Kapsamlı Değerlendirme

Yüksek işlem hacmi Caenorhabditis Elegans kimyasal tarama için basit bir yöntem

Bir yüksek-den geçerek tahlil tarafından otomatik fenotipik profil oluşturma Caenorhabditis elegans ve kimyasal toksisitesi tahmin için

Toxicants Trans ve çok jenerasyonel etkileri okumak için Caenorhabditis elegans kullanma

Bakteriyel Klerensi Ölçerek Caenorhabditis elegans'ta Gıda Alımının Ölçülmesi

Bakteriyel Klerensi Ölçerek Caenorhabditis elegans'ta Gıda Alımının Ölçülmesi

Bakteriyel Klerensi Ölçerek Caenorhabditis elegans'ta Gıda Alımının Ölçülmesi

Locomotion Speed Etanol Etkilerinin Ölçülmesi için bir Testi

Ölçme Caenorhabditis elegans 96 Şey microtiter Tabaklar Ömrü

Üzerinde Bakterilerin Etkilerinin Ölçme

Büyüme ve üreme Caenorhabditis elegans kimyasallar etkisi ölçme

Özet

Daha Fazla Video Keşfet

Bu videodaki bölümler

Nematod kullanma Germline Kimyasal zehirlilik Kapsamlı Değerlendirme

Yüksek işlem hacmi Caenorhabditis Elegans kimyasal tarama için basit bir yöntem

Bir yüksek-den geçerek tahlil tarafından otomatik fenotipik profil oluşturma Caenorhabditis elegans ve kimyasal toksisitesi tahmin için

Toxicants Trans ve çok jenerasyonel etkileri okumak için Caenorhabditis elegans kullanma

Bakteriyel Klerensi Ölçerek Caenorhabditis elegans'ta Gıda Alımının Ölçülmesi

Bakteriyel Klerensi Ölçerek Caenorhabditis elegans'ta Gıda Alımının Ölçülmesi

Bakteriyel Klerensi Ölçerek Caenorhabditis elegans'ta Gıda Alımının Ölçülmesi

Locomotion Speed ​​Etanol Etkilerinin Ölçülmesi için bir Testi

Ölçme Caenorhabditis elegans 96 Şey microtiter Tabaklar Ömrü

Üzerinde Bakterilerin Etkilerinin Ölçme

Locomotion Speed Etanol Etkilerinin Ölçülmesi için bir Testi