Name: determination of biofilm initiation on virus-infected cells by bacteria and fungi
Uploaded: 2016-07-06T14:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 33 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Determination of Biofilm Initiation on Virus-infected Cells by Bacteria and Fungi at JoVE.com

This project was supported by Midwestern University, IL Office of Research and Sponsored Programs (ORSP) and Midwestern University College of Dental Medicine-Illinois (CDMI).

1. HSV Suşlar ve Taşıma Not: Rekombinan olmayan yayılan HSV-1 (KOS) gL86 ve HSV-2 (KOS) 333gJ - V. Twiari 36,37 tarafından sağlanan kullanılan beta-galaktosidaz raportör etkinliği ile. <ol><li> 1 -80 ° C de, tek bir parça ve deposundan virüs kullanabilir: Dulbecco&#39;nun değiştirilmiş Eagle ortamı,% 20 fetal sığır serumu (FBS) ile (DMEM) 1 oranında ve kullanılana kadar yağsız süt. Viral çok depolama önce, O-nitrofenil-β-D-galactopyranoside (ONPG) ve 5-bromo-4-kloro-3-indolil-β-D-galactopyranoside (X-Gal) deneyi virüs konsantrasyonunu belirlemek. </li><li> Daha önce (Şekil 1) 14 tarif edildiği gibi, raportör virüs giriş deneyi kullanılarak her bir deney tahlili çalıştırmak için X-Gal boyaması ile virüs canlılığı ve enfeksiyon (MOI) bir çokluğunu belirlemek. </li><li> İstenen İçişleri Bakanlığı virüs (Opt-MEM) seyreltin. tek tabakalar (paraformaldehit; 0.5 ml / oyuk) saptamak lekelenme. Ayrı bir microti virüs canlılığı kontrolleri yerleştirinpolimikrobiyal tahlil plakaları paralel olarak ter plakası. </li></ol> 2. HeLa 299 Hücre İşleme <ol><li> 4.5 g / L glikoz,% 10 ısı ile inaktive edilmiş fetal büyükbaş hayvan serumu (FBS), gentamisin (50 ug / ml) ve L-glutamin ile DMEM içinde 37 ° C,% 5 CO2 de büyür. Tripsin çözeltisi ile% 80 izdiham Geçiş hücreleri (% 0.05 tripsin, etilendiamintetraasetik asit, 0.53 M EDTA, 5 ml / şişe). </li></ol> 3. C. albicans Taşıma Not: C Klinik laboratuar bir kaynaktan elde edilen albicans orta 2x yağsız süt REMMEL -80 ° C&#39;de saklanır. <ol><li> Kültür Sabouraud Dekstroz Orta (37 ° C) üzerine stok donmuş. 24 saat altkültür C sonra Fungisel ortamı üzerine albicans (37 ° C, 48 saat) kullanım için. </li><li> Mikrop tüpünü (GT) formları oluşturun (3 ml FBS, temsili koloniler almak 3 saat, 37 ° C, Abs 600, 0.3). inkübasyondan sonra, GT yıkama (HBSS; 2x, 4000 xg). (37 ısıtıldı HBSS ile yıkandı, GT ekleme# 176; C; 0.32 Abs 600). GT formları hemositometre sayımı ile tespit edildiği üzere gözlenen hücre% 99 olmalıdır. </li><li> Temsili Fungisel koloniler seçerek maya formu (YF) stok süspansiyonları olun (HBSS, 3 ml 0.32 Abs 600). YF formlarının sayısını / mikroskopik hemasitometre kullanarak ml. YF formları hemositometre sayımı ile tespit edildiği üzere gözlenen hücre% 99 olmalıdır. </li><li> Mantar stok çalışma yapmak (25 ml HBSS GT veya YF stokunun 250 ul; 37 ° C; 10 5 CFU / ml) </li></ol> 4. S. aureus Taşıma <ol><li> Mağaza S. aureus ATCC 25923 (-80 ° C; Remmel süt 2x yağsız). koyun kanlı agara Kültürü (% 5; 37 ° C; 24 saat). temsili koloniler seçin ve hisse senedi için 2 gün içinde orta tuzları mannitol transfer (37 ° C, 18 saat). </li><li> S. olun aureus stok süspansiyonu (3 mi HBSS; 1.32 Abs 600, 10 8 CFU / mL) <ol><li> S. çalışma yapmak aureus stok (100 ul25 ml HBSS stoklar; 10 5 CFU / ml). </li></ol></li></ol> 5. Candida ve S. aureus Süspansiyonlar <ol><li> Karışık C olun albicans ve S. aureus süspansiyon (250 ul YF veya GT stok ve 25 ml HBSS 100 ul S. aureus stok). </li></ol> 6. polimikrobik Biyofilm Deneyi <ol><li> 2 x 10 5 HeLa hücre / ml 200 ul (% 85 birleşen seviyesi) Tohum 96 oyuklu plakalar. Kaya plakaları (30-45 dakika; 37 ° C), inkübasyondan önce (37 ° C,% 5 CO2 kuluçka, 18 saat). Yıkama mono tabakaları (1x; Opt-MEM) daha sonra HSV ile tohum (HSV-1 (KOS) gL86 veya HSV-2 (KOS) 33 GJ - 100 ul Opt-MEM; MOI 50 ve 10). Inkübe edin (37 ° C, 3 saat,% 5 CO2). günde sadece bir virüs suşu kullanın. </li><li> Enfekte tek tabakaları yıkayın (1 x fosfat tamponlu tuzlu su, Mg + 2 ve Ca + 2 ile (PBS); 100 ul). 25 &amp; # bırakarak sıcak HBSS ile PBS değiştirin181; her bir L. <ol><li> YF, GT ve / veya S. ekle (hücre oranı = 5 hedef 100 ul: 1, n = 16), S. aureus çalışma süspansiyonlar. Tablo 1 &#39;de gösterildiği gibi inkübe edin (statik; 30 dakika; 37 ° C,% 5 CO2). </li></ol></li><li> İnkübasyondan sonra, her seferinde aspire bir sütun hemen Mg + 2 ve Ca + 2 ile 300 ul PBS ile yeniden doldurmak. (1:50 seyreltme 200 ul;, filtre sterilize RIPA) radyo-immünopresipitasyon tahlil lizis tamponu eklemek sonra da iki kez bu adımı yineleyin. </li><li> Hızla HeLa hücre lisatı daha sonra manitol tuzları (MS) ve / veya Fungisel (F) ortam (Şekil 2) üzerine 50 ul koyun Karışım. 90 ° açıyla cam çubuk bükülmüş kullanarak lizat yayıldı. (37 ° C&#39;de 18 saat) inkübe edin. El ile plaka başına koloni sayısını saymak. Kontroller S. oluşur aureus ve / veya C HSV-bulaşmamış HeLa hücrelerinde albicans bağlılık. </li></ol> 7. Görüntüleme Çalışmaları &lt;/ P&gt; <ol><li> Her yuvarlak cam lamel yıkayın (12 mm; 50 ml aseton ml beher 100). Kuru ve sterilize lamelleri (Kimwipes, cam petri). Alkol alev sterilize forseps ile steril bir 24 yuvalı plakalara ait kuyucuklar içerisine, kuru steril lamelleri yerleştirin. </li><li> yıkandı, steril yuvarlak cam lamelleri içeren 24 gözlü plakalara, HeLa hücreleri (96 gözlü levhalar için kullanılan 5x hacmi 1 mi) eklenir. Adımda yukarıda belirtilen 6.4 6.2.1&#39;de tarif edildiği gibi inkübe ve işlem, 5X 96 gözlü levhalar için kullanılan ses şablonun (Tablo 2) &#39;e uygun bir virüs, bakteri ya da mantarları ekleyin. </li><li> Son yıkamadan sonra, metanol ile slayt sel ve buharlaşmasına izin vererek mikroskopi için hücreleri düzeltin. boyanma kadar oda sıcaklığında plakaları saklayın. </li><li> Aydınlık alan mikroskobu (1,000x nihai orijinal büyütme) için deiyonize su ile metanol-sabit lamelleri içeren kuyu doldurun. Hemen su aspire. Grams kristal viyole ile her lamel örtün. Yıkama olmayan bağlı leke (deiyonize su) ücretsiz lamelleri. In situ Kuru lamelleri sonra etiketli slayt montaj orta sert seti (Şekil 3) ile yapışır. </li><li> floresan mikroskobu (100x objektif; 1,000x son orijinal büyütme), adım 7.4 açıklandığı gibi yıkama esas metanol ücretsiz lamelleri. kuyularda lamelleri kurulayın. <ol><li> Kuruduktan sonra, kapak fişleri kaldırmak ve etiketli slaytlar üzerine koyun. (- 5 ul 1) Daha sonra floresan izotiyosiyanat (FITC) ile birleştirilmiş bayır Herpes Simplex virüs tip 1:20 seyreltme lamel kapsayacak şekilde 1 + 2 gD antikoru yeterli miktarda ilave edin. </li><li> 30 dakika boyunca 37 ° C&#39;de bir nem odasında slaytlar inkübe edin. İnkübasyondan sonra, PBS 4 değişiklikler lamelleri yıkayın. </li><li> Son yıkamadan sonra, etiketli slayt lamel dönün. 4 &#39;, 6-diamidino-2-fenilindol (, nem odası; 30 dakika için 37 ° C DAPI) ile leke. İnkübasyondan sonra 4 Chan lamelleri yıkamaPBS ges, daha sonra sabit set montaj orta ile etiketlenmiş slayt yapıştırın. </li><li> montaj orta karanlıkta oda sıcaklığında 24 saat boyunca tedavi etmek için izin verin. parlak bir alan mikroskobu veya FITC ve DAPI kesme filtreleri ile floresan mikroskop ya petrol hedefi altında lamelleri inceleyin. Eş-lokalizasyonu (Şekil 4) için en az 50 alanlar (organizma başına en az 100 hücre) fotoğraflarını inceleyin. </li></ol></li></ol>

The authors have nothing to disclose.

Şu anda hiçbir bilgi, prokaryot ökaryot ve viral yani çoklu taksonomik etki, çapraz konak mikrobiyomları yarı daimi üyelerinin kalıcı arasındaki karmaşık etkileşimlerin mevcuttur. Bu nedenle S. biyofilm başlamasını incelemek için in vitro model sisteminde bir roman geliştirdi aureus ve C. HSV-1 veya HSV-2 albicans HeLa 229 (HeLa) hücreler 38 etkilemiştir. HeLa hücre model sistem benzersiz bir avantaj sunuyor. Bu, her iki S için bir reseptör görevi görür yüzey fibronektin ifade onların eksikliği, nedeniyle aureus ve C. albicans 39-41. Mukozal epitel apikal 42 yüzeyi normalde daha yakından doğal enfeksiyon ve kolonizasyonu 43-47 gözlenen mimiklerin fibronektin, bu sistemi yoksun beri. Böylece, daha doğrudan mikrobiyomları diğer üyeleri tarafından daha sonraki bağlılık rolü spesifik viral giriş reseptör ciro çalış incelemek mümkün. Kullanma giriş yetkin olmayan yayılan HSV-1 ve HSV-2, bu bulgular HSV-1 veya HSV-2 hücre giriş S ile süper enfeksiyon dirençli hücreleri oluşturur göstermektedir aureus, C artırırken bir virüs konsantrasyon bağımlı bir tarzda albicans yapışma (Şekil 4). İlginçtir, YF vs GT formları HSV-1 etkileri, HSV-2, klinik sunumlar 48-51 vajinal kandidiyazis teşviki üzerinde önemli bir etkiye sahip olabilen bir bulgu için ölçülen ters oldu. Bir patogenezi açısından bakıldığında, genel olarak kabul edilmektedir C. GT fenotip albicans YF ortakçı devlet 51-54 ile patojenik şeklidir. C yapışma S ile birlikte inkübe edildi albicans GT aureus YF için ölçülen edilene kıyasla, HSV bulaşmış HeLa hücrelerinde bağlanabilen değiştirilmiş bir modelini göstermektedir - S. aureus bağlanmasını. HSV-1 ama bir sig için, HeLa hücrelerinde GT yapışmasını gelişmişyukarıda tartışıldığı gibi bu, YF bağlılık için YF bağlılık ve GT bağlılık için 190% kontrolü için, yani% 270 kontrol ölçülen göre, önemli ölçüde daha az oranda (p &lt;0.05). Buna ek olarak, ise S. aureus GT bağlanmasının HSV-1 geliştirilmesi üzerinde herhangi bir etki, kok HSV-2 ile aracılık ettiği gelişmiş yapışmasını etkisiz. Ters desen S. gözlendi virüs bulaşmış hücreleri ile YF etkileşimi aureus etkisi. HSV-1 HSV-2 (GT) vs (YF) farklı mantar formlar için bu tercih in vivo kommensal devletin bir rolü yönlendiren bakım oynayabilir. S. GT formunun etkisi ile ilgili olarak aureus bağlama, GT neredeyse tamamen HeLa hücrelerinde stafilokok bağlılığın HSV-1 inhibisyonu kaldırıldı. Bunun aksine, HSV-1, S. varlığı ile karşılaştırıldığında, HSV-2 ile enfekte olmuş hücreler ile ilişkilendirmek için GT kabiliyeti önemli ölçüde artmıştır, ancak aureus, yapışık olarak HSV-2 kaynaklı artışı bloke etmiştir. <p class = &quot;jove_content&quot;&gt; mikrop bağlılık herhangi bir değişiklik mevcut değişmiş spesifik varsayılan reseptörlerin sonucudur nedeniyle ya da mekanik-sterik engelleme, bu modelde cevap verilebilir sorusu. Mikrop-hücre etkileşimleri (CFU sayımı) ve etkileşimleri mikroskopik inceleme ölçülmesi kombine kullanımı sayesinde, biz HSV-1 ve HSV-2 S. engellemek için göründüğünü belirlemek için başardık aureus S. beri, etkileşim cell aureus bulaşmamış HeLa hücrelerinde sadece yapıştırılır. Bundan başka, hücrelerin mikroskobik inceleme, Candida ve HSV-1 ve HSV-2 ile birlikte lokalize olduğunu göstermektedir. Bu çalışmadan elde edilen bulgular, polimikrobiyal etkileşimleri çalışma için bu modelin programı belirten kolonizasyonu için in vivo gözlemler bölgesi özelliği paralel bir arada burada kullanılır. Bu tarifnamede tarif edilen protokol etkin kullanımı, çeşitli faktörlere bağlıdır. İlk olarak, yayılma eksik virüsün kullanımı. Bu temiz muayenesinde sağlaretki viral giriş ve hücre sinyalizasyon tion saran edinme öncesinde hücre bırakılmasından dolayı ortaya çıkabilir değişikliklerin komplikasyon olmadan, sonraki mikrop etkileşimleri vardır. Buna ek olarak, kusurlu virüsün kullanımı Biyogüvenlik Sınıfı İki patojenlerin taşınması için daha güvenli bir ortam sağlar. İkinci olarak, bu protokol, viral ve mikrop yapışma donanımlarında kullanılmasına imkan verir. Yalnızca belirli reseptörlere bağlanan varyantları kullanılması mikroplar ya da yeni bir reseptör alternatif olarak algılama arasında paylaşılan reseptörlerinin sınırlandırılmasını sağlar. reseptörlerine monoklonal antikorların kullanımı yoluyla, var mikrop yüzeyinde adezin lokalizasyonu görselleştirilmesi için potansiyeli ve değiştirilmiş adezin ekspresyonunu incelemek için bir araç sağlar. Bu protokol, seçici olarak ayırıcı ortamı üzerinde izole edilemez mikropların çalışma için uygun değildir. yöntem, aynı zamanda, virüs spesifik proteinlere monoklonal antikorun mevcudiyetine bağlıdır. Her ne kadarBu çalışmada nalysis söz konusu mikropların morfoloji ve büyüklük bakımından benzer olmalıdır etkili bir iş çevresinde olacağını maya ve bakteri, diferansiyel floresan etiketli kullanımı, örneğin Teksas kırmızı, mikrop spesifik monoklonal antikor arasındaki boyut farkı tarafından geliştirilmiştir.

<html> İnsan mikrobiyomları vücudunda coğrafi bölgeleri paylaşan birden taksonomik krallıklardan farklı organizmaların içerir. hücre yüzeylerine yapışma mikrobiyomları kolonizasyon sürecinin bir parçasıdır biyofilm, önemli bir ilk adımdır. mikrobiyomları dahil kronik ve inatçı enfeksiyonlara neden virüsler olabilir. Bu virüslerin kronik hücre enfeksiyon, farazi reseptörü durumunu bir değişikliğe neden olabilir. Ek olarak 1,2, hücre içi patojenler ile hücre girişi da sırayla bakteri ve mantarlar da dahil olmak üzere, diğer mikrobiyomları üyelerinin eki değiştirebilir ana membran akışkanlığını / hidrofobiklik etkileyebilecek . İnsan konağın aynı coğrafi bölgelerde lokalize co bu çoklu patojen arasında oluşabilir etkileşimleri anlamak için, biz mukozal yüzeyinde mevcut taksonomik krallıkların spektrumunu temsil patojenlerin etkileşimini incelemek gerekir. t &quot;&gt; Herpesviridae mikrobiyomu daimi üyeleri olarak insanlarda% 100 mevcut mikropların ailesidir 3,4. Buna ek olarak aynı zamanda sürekli semptomlarının varlığı ve yokluğunda hem döken edilebilir. Spesifik olarak, herpes simplex virüs-1 ve herpes simplex virüs-2 (HSV-1 ve HSV-2 sırasıyla) oronasopharynx ve genital bölgesindeki mikrobiyomu daimi üyeleridir. bağışıklık yetkin kişiler, her iki HSV-1 ve HSV-2 neden gingivostomatit yanısıra genital herpes 5-8. bu bölgelerde, HSV kronik kalıcı nectins, heparan sülfat, lipid sallar ve herpes virüs giriş arabulucu yüzey ifadesinde değişiklikler hücreler sonuçlara HSV 9. entry dökülme viral asemptomatik / tümör nekrozu ile karakterize bir gizli enfeksiyona neden faktör reseptörü (HVEM / TNFR) 10-25. bazı bakteriler ve mantarlar, örneğin, S. aureus ve C. albicans Bu potansiyel olarak ortak temsil alıcıları, fırsatçı patojenler ise,Ayrıca oronasopharynx 26,27 mukozal mikrobiyomları üyeleri olarak bulunabilir. Oronasopharynx S. içinde aureus ve C. albicans kolonizasyon iki ayrı siteler işgal. Doğal diş ana olarak, oral mukoza, HSV-1 ve C tarafından paylaşılır albicans, anterior nazal nares S. tarafından işgal edilirken aureus 28. Ancak, rağmen, in vitro bulgular S. aureus ağız epitel hücrelerine yapışır, 29,30 S. Normal doku 29,30 mevcut olduğunda aureus seyrek Oral örneklerden izole edilir. Küçük klinik bulguların ötesinde genital yol ko-kolonizasyon niş ile ilgili bilinen S. aureus C iken, genital iltihap, akıntı ve disparoni ile karakterize, aerobik vajinit ile ilişkilidir albicans ağız boşluğu 31-35 gözlenene benzer bir mukozal lezyonlar. Böylece, ağız ve genital microbi bu üyelerin her ne kadaronların etkileşimine ilişkin bilinen küçük ome çapraz taksonomik krallıklar konak hücre yüzeyinde 5 bağlılık yoluyla biyofilm oluşumunu başlatmak için bu etkileri kendi yeteneği gibi. Bu protokol etkin bir ko-kolonizasyon / enfeksiyon fonksiyonel sonuçlarını belirlemek amacıyla uygulanmıştır.

<table><tbody><tr><td>&lt;strong&gt;&lt;em&gt;C.albicans&lt;/em&gt;&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>BBL Sabouraud Dextrose</td><td>BD</td><td>211584</td><td></td></tr><tr><td>Fungisel Agar</td><td>Dot Scientific</td><td>7205A</td><td></td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;&lt;em&gt;S.aureus&lt;/em&gt;&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Mannitol Salt Agar</td><td>Troy Biologicals</td><td>7143B</td><td></td></tr><tr><td>Sheep blood agar</td><td>Troy Biologicals</td><td>221239</td><td></td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;Hela cells&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>1x DMEM (Dubelcco&#039;s Modified Eagle Medium, with 4.5 g/L glucose and L-glutamine, without sodium pyruvate</td><td>Corning</td><td>10-017-CM</td><td></td></tr><tr><td>Gentamicin 50 mg/ml</td><td>Sigma</td><td>1397</td><td>50 &amp;micro;g/ml final concentration in the complete DMEM</td></tr><tr><td>Trypsin EDTA (0.05% Trypsin, 0.53 M EDTA)Solution 1x</td><td>Corning</td><td>25-052-CI</td><td></td></tr><tr><td>Fetal Bovine Serum</td><td>Atlanta Biologicals</td><td>S11150</td><td>10% final concentration in the complete DMEM</td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;Other medium and reagents&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>ONPG</td><td>Thermo Scientific</td><td>34055</td><td></td></tr><tr><td>Ultra-Pure X gal</td><td>Invitrogen</td><td>15520-018</td><td></td></tr><tr><td>1x HBSS (Hanks&#039; Balanced Salt Solution)</td><td>Corning</td><td>20-021-CV</td><td></td></tr><tr><td>1x PBS</td><td>Dot Scientific</td><td>30042-500</td><td></td></tr><tr><td>RIPA Lysis</td><td>Life Technologies</td><td>89901</td><td></td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;Staining&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Methanol</td><td>Fisher Scientific</td><td>A433P-4</td><td></td></tr><tr><td>HSV 1&amp;amp;2, specific for gD</td><td>ViroStat</td><td>196</td><td></td></tr><tr><td>DAPI</td><td>SIGMA</td><td>D8417-5MG</td><td></td></tr><tr><td>Gram Crystal Violet</td><td>Troy Biologicals</td><td>212527</td><td></td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;Supplies&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Petri dish 100 x 15</td><td>Dot Scientific</td><td>229693&amp;nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Petri dish 150 x 15</td><td>Kord Valmark</td><td>2902</td><td></td></tr><tr><td>96-Well plates</td><td>Evergreen Scientific</td><td>222-8030-01F</td><td></td></tr><tr><td>24-well plates</td><td>Evergreen Scientific</td><td>222-8044-01F</td><td></td></tr><tr><td>Culture tubes 100 x 13</td><td>Thomas Scientific</td><td>9187L61</td><td></td></tr><tr><td>Cover slip circles, 12 mm</td><td>Deckglaser</td><td>CB00120RA1</td><td></td></tr></tbody></table>

determination of biofilm initiation on virus-infected cells by bacteria and fungi

mantarlar, bakteriler ve virüs içeren taksonomik krallıklar arasında polimikrobiyal etkileşimlerin incelenmesi önceden mikrobiyomları viral üyeleri bu virüs bulaşmış konak hücreleri ile sonraki mikrop etkileşimleri nasıl etkilediği ile ilgili incelenmiş değildir. bakteri ve mantarlar ile virüs birlikte yaşama ağız boşluğu ve genital mukoza yüzeyleri üzerinde esas olarak mevcuttur. Mukozal hücrelerin, kalıcı kronik veya kalıcı geç viral enfeksiyonları, özellikle de ifade edilen reseptör, önemli sayıda virüs değiştirilerek mikrobiyomu üyeleri üzerindeki etkisini ve türü olabilir. Ev sahibi hücre membranı mimarisinde Modifikasyon biyofilm, yani yapışma ilk adımı başlatmak için normal flora ve fırsatçı patojenlerin daha sonraki üye değiştirilmiş yeteneğine neden olur. Bu çalışma, biofil başlatılmasından HSV etkisinin ölçülmesi ve görsel inceleme için bir yöntem tarif ederS. m formasyonu (yapışma) aureus ve C. albicans.

Bu raporda tarif edilen sistem elde edilebilen veri sağlamlık düzeyi Şekil 2, af 38 &#39;de gösterilmiştir. Bu sistemin kullanılmasıyla viral yönden enfekte hücreleri ve birbirlerinin yapışma üzerindeki etkisi ile stafilokok ve mantar etkileşimin modülasyonuna tarif edilebilir. Polimikrobiyal etkileşimi, aynı hücreler üzerinde oluşup oluşmadığını tespit etmek için, Şekil 3 ve 4 38 &#39;de gösterildiği gibi bu tür çalışmalar etkileşim mikroskopik inceleme gerektirmektedir. Bu çalışmada, farklı hücre etkileşim spesifik viral türler olan stafilokok ve mantar yapışma HSV-modülasyon sonucunda görülmektedir. S. aureus ve C. Aynı HSV ile enfekte olmayan HeLa kontrol hücrelerine yapıştırılır albicans (GT ve YF). hücreleri üzerinde bu ko-lokalizasyon phys eksikliğini gösterir<html> Ölçülen diferansiyel bağlılık ölçülen düzeyler birbirlerinin HeLa hücre yapışması ve bu ical çıkarım HSV-aracılı (Şekil 3A, A1) 38 olasılığı vardı. Bununla birlikte, HSV-1 veya HSV-2 üzerine HeLa hücrelerinde stafilokoklar ve C hiçbir ko-lokalizasyonunu enfekte albicans gözlenmiştir. (Şekil 3B, B1, B2, B3, C1, C2). Floresan mikroskobu kullanılarak (FITC-konjuge anti-HSV-gD monoklonal antikoru) ayrıca doğruladı S. aureus C ile birlikte lokalize görünmedi albicans veya HSV-1 veya HSV-2 (Şekil 4A, A1, A2, A3, A4, B1, B2, B3). HSV ve Candida arasındaki bu işbirliğinin, hem maya ve germ tüp formları C. (Şekil 2A-F) genişletilmiş albicans. Mikropların üçlüsü arasındaki ilişki Bu özgünlüğü konak oronasopharynx mukozada çok daha geniş bir ölçekte görülen kolonizasyon özgünlüğünü yansıtmaktadır. <html> 1 &quot;&gt; <img alt="Şekil 1" src="/files/ftp_upload/54162/54162fig1.jpg" /> HeLa hücrelerinde dozaj bağımlı HSV-1 enfeksiyonları Şekil 1. X-gal ile boyama Resimlerde. Lekeli çeşitli MOI ve X-Gal HSV-1 ile enfekte edilmiş HeLa hücreleri. X-Gal lekeli sözde-enfekte HeLa hücre kontrolü ile 96 oyuklu plakanın her bir kuyucuğu (A) HeLa hücreleri; 20x ilk büyütme; (B) bir enfeksiyon çokluğu 10 (MOI) HSV-1 ile enfekte edilmiş X-Gal lekeli HeLa hücre 96 oyuklu plakanın her bir kuyucuğu HeLa hücreleri; 20x ilk büyütme; Enfeksiyon çokluğu 50 (MOI) HSV-1 ile enfekte edilmiş X-Gal lekeli HeLa hücre 96 oyuklu plakanın her bir kuyucuğu (C), HeLa hücreleri; 20x ilk büyütme; bar için geçerli ölçek. <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/54162/54162fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> dosyaları / ftp_upload / 54162 / 54162fig2.jpg &quot;/&gt; (Panel A, C, E) Enfeksiyon çokluklar de ve HSV-2 (panel B, D, F), 50 ve 10 (MOI) S. yapışması ile ilgili HSV-1 Şekil 2. Etkisi aureus ve / veya C HeLa hücrelerinde albicans. (A) S. aureus (Sa) C varlığında, HSV-1 ile enfekte edilmiş hücrelere bağlanmasını albicans germ tüpleri (GT) ya da maya formları (YF); (B) S. aureus (Sa) C varlığında, HSV-2 ile enfekte olmuş hücrelere bağlanması albicans germ tüpleri (GT) ya da maya formları (YF); (C) C S. mevcudiyetinde, HSV-1 ile enfekte edilmiş hücrelere bağlanma albicans tohumu borular (GT) aureus (SA), (d) C S. mevcudiyetinde, HSV-2 ile enfekte olmuş hücrelere bağlanması albicans tohumu borular (GT) aureus (sa); (E) C S. mevcudiyetinde, HSV-1 ile enfekte edilmiş hücrelere bağlanma albicans maya formları (YF) aureus (sa); (F) C S. mevcudiyetinde, HSV-2 ile enfekte olmuş hücrelere bağlanması albicans maya formları (YF) aureus (Sa). Bütün veri noktaları, ortalama olarak +/- SEM, n = 16 normalize virüssüz kontrole. * = Enfekte HeLa hücre kontrolünden önemli ölçüde farklı (p &lt;0.05). dirsek ile gösterilen eşleştirilmiş noktadan # = önemli ölçüde farklı (p &lt;0.05); Ölçek çubuğu herkes için geçerlidir. 38 <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/54162/54162fig2large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <img alt="Şekil 3," src="/files/ftp_upload/54162/54162fig3.jpg" /> S. Şekil 3. eksikliği aureus ve C. HSV-1 ve HSV-2 ile enfekte olmuş HeLa hücrelerinde ilgili albicans etkileşimler. S ile HSV-1 ve HSV-2 ile enfekte olmuş (MOI 50) HeLa hücre mono tabakaları aureus ve C. albicans (5: hücreye 1 hedef). Parlak alan için<html> mikroskopi, hücre mono tabakaları daha sonra ışık mikroskopisi ile incelendi Gram kristal viyole ile boyandı. Candida veya S için pozitif hücreler aureus (mikrop sinyal başına 100 ayrı hücre / lamel başına) ikincil ek mikrop co-lokalizasyon sinyalleri varlığı (1,000x ilk büyütme) için tarandı. (A &amp; A1) S. aureus (SA) ve C albicans maya formları (YF) ya da germ tüp formları (GT) enfekte edilmemiş HeLa hücreleri üzerinde birlikte lokalize; (A2, insert). ko-lokalize ya da tek tek mikroplarla HeLa hücrelerinin yüzdesi; (B - B3) S. eksikliği. aureus ve C. HSV-1 mevcudiyetinde albicans eş lokalizasyonu; (Cı - C2) S. eksikliği aureus ve C. HSV-2&#39;nin mevcudiyetinde albicans ko-lokalizasyon. Ortalama ± SEM; Ölçek çubuğu herkes için geçerlidir. 38rYer = &quot;_ blank&quot;&gt; bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayınız. <img alt="Şekil 4," src="/files/ftp_upload/54162/54162fig4.jpg" /> S. Eş lokalizasyonu Şekil 4. eksikliği C ile aureus albicans HSV-1 veya HSV-2 ile enfekte olmuş HeLa hücreleri üzerinde. S ile HeLa hücre mono tabakaları meydan HSV bulaşmış aureus ve C. albicans (5: 1 hücreye hedef) boyanmıştır (FITC-konjüge anti-HSV gD antikoru ve DAPI). Resimler daha sonra Candida ve S. taranan HSV için sinyalin pozitif hücrelerin tarama elde edilen bulgular temsilcisi aureus sonra ikincil ek mikrop co-lokalizasyon sinyallerinin varlığı için tarandı (lamel başına mikrop sinyal başına 100 ayrı hücreler) (1,000x ilk büyütme; Nikon). (A - A4) C albicans (A2, insert; DAPI boyama) co-lokalize HSV-1 ile; (B- B3) C albicans ko-lokalize HSV-2 (B1, insert, C. DAPI boyama albicans) ile. Ortalama ± SEM; Ölçek çubuğu herkes için geçerlidir. 38 <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/54162/54162fig4large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <table fo:keep-together.within-page="1"><tbody><tr><td></td><td> 1 </td><td> 2 </td><td> 3 </td><td> 4 </td><td> 6 </td><td> 7 </td><td> 8 </td><td> 9 </td><td> 10 </td><td> 11 </td><td> 12 </td></tr><tr><td> tüpler </td><td> GT </td><td> YF </td><td> MSSA </td><td colspan="2"> GT / MSSA </td><td colspan="2"> YF / MSSA </td><td> GT </td><td> YF </td><td> MSSA </td><td colspan="2"> GT / MSSA </td><td colspan="2"> YF / MSSA </td><td></td><td></td></tr><tr><td> MEDYA </td><td> F </td><td> F </td><td> BAYAN </td><td> BAYAN </td><td> F </td><td> BAYAN </td><td> F </td><td> F </td><td> F </td><td> BAYAN </td><td> BAYAN </td><td> F </td><td> BAYAN </td><td> F </td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> bir </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> B </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> C </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> D </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> E </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> F </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> G </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> H </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table> Tablo 1. Polimikrobik Etkileşimleri Mikrobiyal bağlılık Genel Şablon Tayini GT = Candida albicans germ tüp fenotip.; YF = C albicans maya formu fenotip; MSSA = metisiline duyarlı Staphylococcus aureus; MS ortamı manitol tuzları =; F = Fungisel orta. <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/54162/54162table1.xlsx" target="_blank">Bu dosyayı indirmek için tıklayınız.</a> <table fo:keep-together.within-page="1"><tbody><tr><td> Levha 1 </td><td> 1 </td><td> 2 </td><td> 3 </td><td> 4 </td><td> 5 </td><td> 6 </td></tr><tr><td&gt; Kontrol </td><td> HeLa hücreleri, sadece </td><td> HeLa + GT </td><td> HeLa + YF </td><td> HeLa + Sa </td><td> HeLa + GT + Sa </td><td> HeLa + YF + Sa </td></tr><tr><td> bir </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> B </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> C </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> D </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> plaka 2 </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> HSV </td><td> HeLa hücreleri + HSV </td><td> HSV + HeLa + GT </td<html> &gt; <td> HSV + HeLa + YF </td><td> HSV + HeLa + Sa </td><td> HSV + HeLa + GT + Sa </td><td> HSV + HeLa + YF + Sa </td></tr><tr><td> bir </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> B </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> C </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> D </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table> Tablo 2. HSV bulaşmış ve Bulaşmamış HeLa Hücreleri ile polimikrobik etkileşimleri Görsel Analizi Genel Şablon GT = Candida albicans germ tüp fenotip.; YF = C albicans maya formu fenotip; SA metisilin duyarlı Staphylococcus aureus =; HSV Herpes simpleks virüsü =.ve.com/files/ftp_upload/54162/54162table2.xlsx &quot;target =&quot; _ blank &quot;&gt; Bu dosyayı indirmek için tıklayınız.

Watch this Scientific Journal Video about Determination of Biofilm Initiation on Virus-infected Cells by Bacteria and Fungi at JoVE.com

Determination of Biofilm Initiation on Virus-infected Cells by Bacteria and Fungi

A method is described herein for the determination of inter-Kingdom association and competition (bacterial and fungal) for adherence to virus-infected HeLa cell monolayers. This protocol can be extended to multiple combinations of prokaryotes, eukaryotes, and viruses.

Bakteri ve mantar virüsle enfekte olmuş hücreler üzerinde Biyofilm Başlatma Belirlenmesi

The study of polymicrobial interactions across the taxonomic kingdoms that include fungi, bacteria and virus have not been previously examined with ...

determination-biofilm-initiation-on-virus-infected-cells-bacteria

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

9.6K Görüntüleme.  Midwestern University. A method is described herein for the determination of inter-Kingdom association and competition (bacterial and fungal) for adherence to virus-infected HeLa cell monolayers. This protocol can be extended to multiple combinations of prokaryotes, eukaryotes, and viruses.

Video: Determination of Biofilm Initiation on Virus-infected Cells by Bacteria and Fungi

Assay for Adhesion and Agar Invasion in S. cerevisiae

Yeasts are found in natural biofilms, where many microorganisms colonize surfaces. In artificial environments, such as surfaces of man-made objects, biofilms can reduce industrial productivity, destroy structures, and threaten human life. 1-3 On the other hand, harnessing the power of biofilms can help clean the environment and generate sustainable energy. 4-8
The ability of S. cerevisiae to colonize surfaces and participate in complex biofilms was mostly ignored until the rediscovery of the differentiation programs triggered by various signaling pathways and environmental cues in this organism. 9, 10 The continuing interest in using S. cerevisiae as a model organism to understand the interaction and convergence of signaling pathways, such as the Ras-PKA, Kss1 MAPK, and Hog1 osmolarity pathways, quickly placed S. cerevisiae in the junction of biofilm biology and signal transduction research. 11-20 To this end, differentiation of yeast cells into long, adhesive, pseudohyphal filaments became a convenient readout for the activation of signal transduction pathways upon various environmental changes. However, filamentation is a complex collection of phenotypes, which makes assaying for it as if it were a simple phenotype misleading. In the past decade, several assays were successfully adopted from bacterial biofilm studies to yeast research, such as MAT formation assays to measure colony spread on soft agar and crystal violet staining to quantitatively measure cell-surface adherence. 12, 21 However, there has been some confusion in assays developed to qualitatively assess the adhesive and invasive phenotypes of yeast in agar.
Here, we present a simple and reliable method for assessing the adhesive and invasive quality of yeast strains with easy-to-understand steps to isolate the adhesion assessment from invasion assessment. Our method, adopted from previous studies, 10, 16 involves growing cells in liquid media and plating on differential nutrient conditions for growth of large spots, which we then wash with water to assess adhesion and rub cells completely off the agar surface to assess invasion into the agar. We eliminate the need for streaking cells onto agar, which affects the invasion of cells into the agar. In general, we observed that haploid strains that invade agar are always adhesive, yet not all adhesive strains can invade agar medium. Our approach can be used in conjunction with other assays to carefully dissect the differentiation steps and requirements of yeast signal transduction, differentiation, quorum sensing, and biofilm formation.

We describe a qualitative assay for yeast adhesion and agar invasion as a measure of invasive and pseudohyphal differentiation. This simple assay can be used to assess the invasive phenotype of various mutants as well as the effects environmental cues and signaling pathways on yeast differentiation.

S. cerevisiae yapışma ve Agar Invasion için Testi

Yeasts are found in natural biofilms, where many microorganisms colonize surfaces. In artificial environments, such as surfaces of man-made objects, ...

Biyoloji

Invasion of Human Cells by a Bacterial Pathogen

Here we will describe how we study the invasion of human endothelial cells by bacterial pathogen Staphylococcus aureus . The general protocol can be applied to the study of cell invasion by virtually any culturable bacterium. The stages at which specific aspects of invasion can be studied, such as the role of actin rearrangement or caveolae, will be highlighted. Host cells are grown in flasks and when ready for use are seeded into 24-well plates containing Thermanox coverslips. Using coverslips allows subsequent removal of the cells from the wells to reduce interference from serum proteins deposited onto the sides of the wells (to which S. aureus would attach). Bacteria are grown to the required density and washed to remove any secreted proteins (e.g. toxins). Coverslips with confluent layers of endothelial cells are transferred to new 24-well plates containing fresh culture medium before the addition of bacteria. Bacteria and cells are then incubated together for the required amount of time in 5% CO2 at 37&deg;C. For S. aureus this is typically between 15-90 minutes. Thermanox coverslips are removed from each well and dip-washed in PBS to remove unattached bacteria. If total associated bacteria (adherent and internalised) are to be quantified, coverslips are then placed in a fresh well containing 0.5% Triton X-100 in PBS. Gentle pipetting leads to complete cell lysis and bacteria are enumerated by serial dilution and plating onto agar. If the number of bacteria that have invaded the cells is needed, coverslips are added to wells containing 500 &mu;l tissue culture medium supplemented with gentamicin and incubation continued for 1 h, which will kill all external bacteria. Coverslips can then be washed, cells lysed and bacteria enumerated by plating onto agar as described above. If the experiment requires direct visualisation, coverslips can be fixed and stained for light, fluorescence or confocal microscopy or prepared for electron microscopy.

A general protocol for the study of invasion of host cells by a bacterial pathogen, focusing on Staphylococcus aureus and human endothelial cells.

Bakteriyel Patojen İnsan Hücreleri Invasion

Here we will describe how we study the invasion of human endothelial cells by bacterial pathogen Staphylococcus aureus . The general protocol can be ...

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Methodologies for Studying B. subtilis Biofilms as a Model for Characterizing Small Molecule Biofilm Inhibitors

This work assesses different methodologies to study the impact of small molecule biofilm inhibitors, such as D-amino acids, on the development and resilience of Bacillus subtilis biofilms. First, methods are presented that select for small molecule inhibitors with biofilm-specific targets in order to separate the effect of the small molecule inhibitors on planktonic growth from their effect on biofilm formation. Next, we focus on how inoculation conditions affect the sensitivity of multicellular, floating B. subtilis cultures to small molecule inhibitors. The results suggest that discrepancies in the reported effects of such inhibitors such as D-amino acids are due to inconsistent pre-culture conditions. Furthermore, a recently developed protocol is described for evaluating the contribution of small molecule treatments towards biofilm resistance to antibacterial substances. Lastly, scanning electron microscopy (SEM) techniques are presented to analyze the three-dimensional spatial arrangement of cells and their surrounding extracellular matrix in a B. subtilis biofilm. SEM facilitates insight into the three-dimensional biofilm architecture and the matrix texture. A combination of the methods described here can greatly assist the study of biofilm development in the presence and absence of biofilm inhibitors, and shed light on the mechanism of action of these inhibitors.

Methodologies for Studying B. subtilis Biofilms as a Model for Characterizing Small Molecule Biofilm Inhibitors

This study presents the development of reproducible methodologies to study biofilm inhibitors and their effects on Bacillus subtilis multicellularity.

Araştırma yöntemleri<em&gt; B. subtilis</emKüçük Molekül Biyofilm İnhibitörleri Karakterizasyonu için Bir Model Olarak&gt; Biyofilmler

This work assesses different methodologies to study the impact of small molecule biofilm inhibitors, such as D-amino acids, on the development and ...

A New Method for Qualitative Multi-scale Analysis of Bacterial Biofilms on Filamentous Fungal Colonies Using Confocal and Electron Microscopy

Bacterial biofilms frequently form on fungal surfaces and can be involved in numerous bacterial-fungal interaction processes, such as metabolic cooperation, competition, or predation. The study of biofilms is important in many biological fields, including environmental science, food production, and medicine. However, few studies have focused on such bacterial biofilms, partially due to the difficulty of investigating them. Most of the methods for qualitative and quantitative biofilm analyses described in the literature are only suitable for biofilms forming on abiotic surfaces or on homogeneous and thin biotic surfaces, such as a monolayer of epithelial cells.
While laser scanning confocal microscopy (LSCM) is often used to analyze in situ and in vivo biofilms, this technology becomes very challenging when applied to bacterial biofilms on fungal hyphae, due to the thickness and the three dimensions of the hyphal networks. To overcome this shortcoming, we developed a protocol combining microscopy with a method to limit the accumulation of hyphal layers in fungal colonies. Using this method, we were able to investigate the development of bacterial biofilms on fungal hyphae at multiple scales using both LSCM and scanning electron microscopy (SEM). This report describes the protocol, including microorganism cultures, bacterial biofilm formation conditions, biofilm staining, and LSCM and SEM visualizations.

This protocol describes a new method to grow and qualitatively analyze bacterial biofilms on fungal hyphae by confocal and electron microscopy.

Yeni Bir Yöntem Filamentli Mantar kolonileri ile ilgili Bakteriyel Biyofilmler Niteliksel Çok ölçekli Analizi için kullanılması Eşodaklı ve Elektron Mikroskobu

Bacterial biofilms frequently form on fungal surfaces and can be involved in numerous bacterial-fungal interaction processes, such as metabolic ...

Visualization of Biofilm Formation in Candida albicans Using an Automated Microfluidic Device

Candida albicans is the most common fungal pathogen of humans, causing about 15% of hospital-acquired sepsis cases. A major virulence attribute of C. albicans is its ability to form biofilms, structured communities of cells attached to biotic and abiotic surfaces. C. albicans biofilms can form on host tissues, such as mucosal layers, and on medical devices, such as catheters, pacemakers, dentures, and joint prostheses. Biofilms pose significant clinical challenges because they are highly resistant to physical and chemical perturbations, and can act as reservoirs to seed disseminated infections. Various in vitro assays have been utilized to study C. albicans biofilm formation, such as microtiter plate assays, dry weight measurements, cell viability assays, and confocal scanning laser microscopy. All of these assays are single end-point assays, where biofilm formation is assessed at a specific time point. Here, we describe a protocol to study biofilm formation in real-time using an automated microfluidic device under laminar flow conditions. This method allows for the observation of biofilm formation as the biofilm develops over time, using customizable conditions that mimic those of the host, such as those encountered in vascular catheters. This protocol can be used to assess the biofilm defects of genetic mutants as well as the inhibitory effects of antimicrobial agents on biofilm development in real-time.

Visualization of Biofilm Formation in Candida albicans Using an Automated Microfluidic Device

This protocol describes the use of a customizable automated microfluidic device to visualize biofilm formation in Candida albicans under host physiological conditions.

Görselleştirme bir otomatik mikrosıvısal aygıtı kullanarak Candida albicans biyofilm oluşumu

Candida albicans is the most common fungal pathogen of humans, causing about 15% of hospital-acquired sepsis cases. A major virulence attribute of C. ...

Microfluidic Tools for Probing Fungal-Microbial Interactions at the Cellular Level

Filamentous fungi are successful inhabitants of soil and play a major role in soil ecosystems, such as in the decomposition of organic and inorganic matter, as well as regulation of nutrient levels. There they also find numerous opportunities to interact with a variety of other microbes such as bacteria or other fungi. Studying fungal interactions at the cellular level, however, can be challenging owing to the black box-like nature of soil. New microfluidic tools are being developed for the study of fungal interactions; two platforms designed to study bacterial-fungal and fungal-fungal interactions are highlighted. Within these microchannels, fungal-microbial interactions can be monitored in controlled physico-chemical environments at higher temporal and spatial resolution than previously possible. Application of these tools have yielded numerous novel biological insights, such as the observation of bacterial polar attachment to hyphae or revealing uncharacterised fungal-fungal antagonisms. A key feature of these methodologies regards the ease of use of this tool by non-experts, yielding highly translatable technologies for use in microbiology labs.

Owing to the opacity of soil, interactions between its constituent microbes cannot easily be visualised with cellular resolution. Here, two microfluidic tools are presented, which offer new opportunities for investigating fungal-microbial interactions. The devices are versatile and simple to use, enabling high spatiotemporal control and high-resolution imaging at the cellular level.

Hücresel Düzeyde Mantar-Mikrobiyal Etkileşimleri Probalamak için Mikroakışkan Araçlar

Filamentous fungi are successful inhabitants of soil and play a major role in soil ecosystems, such as in the decomposition of organic and inorganic ...

Biyomühendislik

Measuring the Migration and Biofilm Formation of Various Bacteria

As microbes that thrive in the host body primarily have adaptive abilities that facilitate their survival, methods for classifying and identifying their nature would be beneficial in facilitating their characterization. Currently, most studies focus only on one specific characterization method; however, the isolation and identification of microorganisms from the host is a continuous process and usually requires several combinatorial characterization methods. Herein, we describe methods of identifying the microbial biofilm-forming ability, the microbial respiration state, and their chemotaxis behavior. The methods are used to identify five microbes, three of which were isolated from the bone tissue of Sprague-Dawley (SD) rats (Corynebacterium stationis, Staphylococcus cohnii subsp. urealyticus, and Enterococcus faecalis) and two from the American Type Culture Collection (ATCC)-Staphylococcus aureus ATCC 25923&#160;and Enterococcus faecalis V583. The microbes isolated from the SD rat bone tissue include the gram-positive microbes. These microbes have adapted to thrive under stressful and nutrient-limiting environments within the bone matrix. This article aims to provide the readers with the specific know-how of determining the nature and behavior of the isolated microbes within a laboratory setting.

<meta charset="utf8"></head><body>Çeşitli Bakterilerin Migrasyonunun ve Biyofilm Oluşumunun Ölçülmesi

Here, we present a practical method for the isolation and identification of microorganisms within the host. In this way, the physicochemical properties of microorganisms and possible ways of living in the host are clearly described.

Çeşitli Bakterilerin Migrasyonunun ve Biyofilm Oluşumunun Ölçülmesi

As microbes that thrive in the host body primarily have adaptive abilities that facilitate their survival, methods for classifying and identifying their ...

Candida albicans Biofilm Formation in an In Vivo Mouse Model

Source: Kuchar&#237;kov&#225;, S., et al.&#160; <a href="https://app-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/v/52239">Candida albicans Biofilm Development on Medically-relevant Foreign Bodies in a Mouse Subcutaneous Model Followed by Bioluminescence Imaging.</a> J. Vis. Exp. (2015).
This video demonstrates the development of an in vivo mouse model to study the biofilm formation of Candida albicans in subcutaneous tissue. The experiment involves implanting Candida-infected devices in the animal&#39;s back region for biofilm development.

Candida albicans Bir İn Vivo Fare Modelinde Biyofilm Oluşumu

1. C. albicans Growth

	Twenty-four hours before the initiation of the animal experiment, prepare yeast extract peptone dextrose, YPD plates by adding 10 ...

JoVE Encyclopedia of Experiments

İmmünoloji

İmmünodiyagnostik

İn Vitro ve İn Vivo Modeller

A Method for Sample Preparation to Visualize Biofilm Forming Bacteria on Fungal Hyphae

Source: Guennoc, Cora Miquel, et al, <a href="https://app-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/v/54771">A New Method for Qualitative Multi-scale Analysis of Bacterial Biofilms on Filamentous Fungal Colonies Using Confocal and Electron Microscopy.</a> J. Vis. Exp. (2017).
This video describes a method to grow and qualitatively analyze bacterial biofilms on fungal hyphae using microscopy. Bacterial biofilms frequently form on fungal surfaces and involve numerous bacterial-fungal interaction processes, such as metabolic cooperation, competition, or predation.

Mantar Hifleri Üzerinde Biyofilm Oluşturan Bakterileri Görselleştirmek için Numune Hazırlama Yöntemi

1. Preparation of an In Vitro Biofilm of Bacteria on the Fungal Colony

	Centrifuge the bacterial culture at 5,000 x g for 3 min and suspend the pellet in ...

Bakteri ve mantar virüsle enfekte olmuş hücreler üzerinde Biyofilm Başlatma Belirlenmesi

Özet

Daha Fazla Video Keşfet

Bu videodaki bölümler

S. cerevisiae yapışma ve Agar Invasion için Testi

Bakteriyel Patojen İnsan Hücreleri Invasion

Araştırma yöntemleri

Yeni Bir Yöntem Filamentli Mantar kolonileri ile ilgili Bakteriyel Biyofilmler Niteliksel Çok ölçekli Analizi için kullanılması Eşodaklı ve Elektron Mikroskobu

Görselleştirme bir otomatik mikrosıvısal aygıtı kullanarak Candida albicans biyofilm oluşumu

Hücresel Düzeyde Mantar-Mikrobiyal Etkileşimleri Probalamak için Mikroakışkan Araçlar

Çeşitli Bakterilerin Migrasyonunun ve Biyofilm Oluşumunun Ölçülmesi

Çeşitli Bakterilerin Migrasyonunun ve Biyofilm Oluşumunun Ölçülmesi

Candida albicans Bir İn Vivo Fare Modelinde Biyofilm Oluşumu

Mantar Hifleri Üzerinde Biyofilm Oluşturan Bakterileri Görselleştirmek için Numune Hazırlama Yöntemi