Yazarlar ayrıca ince-ayar çalışmalarıyla bu deney için Kris Burner, Stephen McKinney, Laura Tobin, Jenny Gilbreath, Ashley Olley, Megan Hoffer ve Megan Hyde teşekkürlerimizi ifade etmek istiyoruz.

1.. Bireysel hazırlanması Locomotion Testi için Sinekler <ol><li> Transferi hafifçe bireysel boş şişeleri içine dokunarak ve bir pamuk yumağı ile şişeleri kap ile uçuyor. Sinekler gözlem öncesinde rahatsız 20-30 dk bekletin. Daha önceki çalışmalar, anestezisiz sinekler 14 oranla anestezi poz davranışını değiştirebilir bulduk önce davranışsal gözlem saat içinde sinekler uyutmak değil önemlidir. </li><li> Yavaşça şişeden sinek dokunun ve hava geçişini sağlamak için küçük yarıklar ile (5 mm yüksekliğinde), 5 cm çaplı Petri kapsamındaki bireysel sinekler yerleştirin. Alttan aydınlatmak ve Petri kabı üzerine monte edilmiş bir web kamerası kullanarak sinekler gözlemlemek. </li></ol> 2. Bireysel hazırlanması nöbet Testi için Sinekler <ol><li> İki günlük nöbet duyarlı sinekler Yem standart maya / mısır unu / agar ortam veya standart medya ya doğrudan ilaç ile birlikte karıştırılır. Burada sunulan veriler için, sinekler 1 gitmesine ya beslenen edildistandart medya veya metformin 25 mg ile karışık standart ortam 1 gr f. </li><li> Sinekler bireysel boş şişeler içine nazik dokunarak bunları aktarmak ve bir pamuk yumağı ile şişeleri kap, medya ya da medya artı ilaç iki gün boyunca beslendi sonra. Sinekler gözlem önce 20 dakika süreyle rahatsız bekletin. Daha önceki çalışmalar, anestezisiz sinekler 14 oranla anestezi poz davranışını değiştirebilir bulduk önce davranışsal gözlem saat içinde sinekler uyutmak değil önemlidir. </li><li> 10 saniye boyunca yüksek ayarı kullanarak bir laboratuar vortexer tek bir sinek içeren Vortex tek ampuller. Doğrudan kağıt üzerine monte edilmiş bir web kamerası altında kağıt boş bir beyaz kağıda hareketsiz sinek yerleştirin. </li></ol> 3. Video Kaydı <ol><li> HandyAvi yazılım programını kullanarak hareket veya SLA kaydedin <a href="http://www.azcendant.com/download.htm">http://www.azcendant.com/download.htm</a> . Bu program web kamerası kullanıyorsakullanıcı ayarları dayalı görüntüleri yakalayabilir. </li><li> Capture sekmesi altında Time-Lapse görüntüleri seçeneği penceresi açıldığında, yakalama aygıtı olarak web kamerasını seçin seçin. Çoğu deneyler için 640 x 480 video çerçeve boyutu yeterli değildir. </li><li> Sıkıştırma için Intel IYUV codec seçin ve nöbet tahlil için 0.1 sn / kare seçebilir veya hareket tahlil için 0.1-0.5 sn / çerçeve seçmek. Gelişmiş sekmesinde, her yakalamak için bir. Bmp resim dosyası oluşturmak seçin ve o (Görüntü yığını) alır görüntüleri saklamak için program için bir klasör seçin. </li><li> Kağıdın üzerinde bir ölü sinek yerleştirin. Video ayarları kutusuna tıklayın ve parlak beyaz arka plan ve koyu sinek ile açık bir karşıtlık olduğunu böylece Cihaz ayarları sekmesi altında ayarlarını. </li><li> Kayda başlamak için start düğmesine tıklayın. Kayıt dönemi bittikten sonra, durdurma düğmesine basın. Görüntü yığını şimdi seçili klasörde olmalıdır. Not: Kayıttan önce, emin olun folGörüntü yığını için seçilen der boştur. </li></ol> 4. ImageJ kullanma Veri Analizi <ol><li> Indirilebilir açık NIH ücretsiz görüntü işleme yazılımı ImageJ, <a href="http://rsbweb.nih.gov/ij/download.html">http://rsbweb.nih.gov/ij/download.html</a> . Not: Programı indirmek için ek olarak, MultiTracker plug-in indirilen ve de belirtildiği gibi monte edilmelidir <a href="http://rsbweb.nih.gov/ij/plugins/index.html">http://rsbweb.nih.gov/ij/plugins/index.html</a> . </li><li> Dosya sekmesini tıklayarak ve daha sonra ithalat → Görüntü dizisi seçerek ImageJ içine Görüntü yığını aktarın. <ol><li> Görüntü yığını içeren klasörü seçin, görüntülerden birini vurgulayın ve açık seçin. Bir Dizi Seçenekleri iletişim kutusu açılacaktır. Sayısal Sıralama adlarını tıklatın ve sonra Tamam &#39;ı seçin ve görüntü yığını ImageJ yüklenecektir. </li></ol></li><li> Eşik tüm görüntüler her sinek olmak beyaz bir arka plan oluşur, böylecesiyah bir nokta ile dönüştürüldü. , Bu süreci başlatmak Görüntü sekmesi altında Tipi → 8 bit seçerek bir 8-bit biçimine dönüştürmek görüntü. <ol><li> Yine Görüntü sekmesine tıklayın ve → Eşik ayarlayın belirleyin. Bu eşik noktası ayarlanabilir kesti hangi Eşik diyalog kutusu açılacaktır. </li><li> Bir dilim siyah bir nokta yoksun eğer orada ekstra siyah noktalar veya görmek için görüntüleri ile tarayın. Bu durumda ise, bu sorunu hafifletmek için eşik ayarlayın. Genellikle uygun bir eşik değere programı, varsayılan olarak ayarlanması gerekmez. Not: yığını Her slayt sineğin konumunu temsil eden sadece bir siyah nokta olmalıdır. </li><li> Eşik diyalog kutusunda uygulamak seçin ve diyalog kutusunu Maske için bir dönüştürme açılacaktır. Seçeneklerden herhangi birini tıklatın ama sadece eşik OK görüntü yığınını tıklatın etmeyin. </li></ol></li><li> Görüntü yığını eşikleyerek sonra, seçin MultiTracker plug-in Eklentiler sekmesi altında amacıylapiksel sineğin hareketini ölçmek. Nesne Tracker diyalog kutusu görünecektir. <ol><li> Diyalog kutusunda verilen dört tüm seçenekleri tıklatın ve ardından Tamam seçeneğini seçin. MultiTracker plug-in sonra her dilim siyah nokta için koordinatları eklemek ve Sonuçlar yanı sıra pencere piksel toplam yol uzunluğu bu listeler. Yollar penceresi sinek aldı yolun bir grafik görüntü verir. </li><li> Sonuçlar penceresinden x-ve y-koordinatı listesini kopyalayın ve bir Excel tablosuna veri yapıştırabilirsiniz. Yığını herhangi bir slayt içinde siyah bir nokta yoksa, MultiTracker program o slayta durur. Bu durum ortaya çıkarsa, bu sağlamak için 4.2 ve yeniden eşik yığını adıma geri dönmek için gerekli olduğunu söz slayt siyah bir nokta olarak sinek kaydolur. </li></ol></li><li> Boş bir kağıt parçası üzerinde beyaz bir cm aralıklı iki nokta ayrı bir görüntü almak, yol cm piksel uzunlukları dönüştürmek için. <ol><li> Yukarıda izleyinadım (3.1-4.4.2), x belirlemek için, y piksel iki nokta koordinatları ve bir cm&#39;ye karşılık piksel sayısını belirlemek için bu bilgileri kullanabilirsiniz. Bu dönüşüm faktörü cm olarak hareket verilerini oluşturmak için beş adımda kullanılır. Not: Bu yapıldıktan sonra, gelecekteki tüm kayıtlar için sabit kamera tutmak için önemlidir. Kamera taşınır veya ayarlanır Her zaman, bir cm piksel dönüştürmek için bu adımı tekrarlayın gerekiyor. </li><li> Vücut pozisyonu ve ışık şiddeti / yansıması hafif dalgalanmalar görüntüleri eşikleyerek çıktığında oluşturulan siyah nokta boyutunu ve merkezini etkileyecek çünkü MultiTracker plug-in tarafından oluşturulan yol uzunluğu hareketi overestimates. Bu parazit sinek hareketin doğru bir tahminini elde etmek için uzaklaştırılmalıdır. </li></ol></li></ol> 5. Excel kullanma Veri Analizi <ol><li> X serisi ithal tarafından kaydedilen verilerden gürültü çıkarmak, y MultiTracker pr tarafından oluşturulan koordinatlarıFly Analizi, yazarlar tarafından oluşturulan bir Excel Visual Basic programına Ogram. (Program yazarları başvurarak edinilebilir.) </li><li> Click Me düğmesini tıklatın ve bir eşik değeri cut-off seçin. SLA analizi için 0.5 cm / sn bir eşik değer seçin veya hareket analizi için 0,1-0,3 cm / sn arasında bir değer seçin. Tamam&#39;a tıklayın ve programın hız, zaman ve hareket mesafesini hesaplar. Not: Program sıralı 0.5-1.0 sn kutularına verileri değerlendirmek için bir sürgülü pencere analizi kullanır ve bu pencerede sırasında hızı hesaplar. Kullanıcı-tanımlı kesim üzerinde bir şey sinek hareketi olarak kabul edilir. </li></ol>

<ol>
	<li>Stone, B., Evans, L., Coleman, J., Kuebler, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+and+pharmacological+manipulations+that+alter+metabolism+suppress+seizure-like+activity+in.">Genetic and pharmacological manipulations that alter metabolism suppress seizure-like activity in.</a> 1496, 94-103 (2013).</li><li>Benzer, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Behavioral+mutants+of+Drosophila+isolated+by+countercurrent+distribution.">Behavioral mutants of Drosophila isolated by countercurrent distribution.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 58, 1112-1119 (1967).</li><li>Slawson, J. B., Kim, E. Z., Griffith, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-Resolution+Video+Tracking+of+Locomotion+in+Adult+Drosophila+melanogaster.">High-Resolution Video Tracking of Locomotion in Adult Drosophila melanogaster.</a> J. Vis. Exp. (24), (2009).</li><li>Spink, A. J., Tegelenbosch, R. A., Buma, M. O., Noldus, L. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+EthoVision+video+tracking+systema+tool+for+behavioral+phenotyping+of+transgenic+mice.">The EthoVision video tracking systema tool for behavioral phenotyping of transgenic mice.</a> Physiol. Behav. 73, 731-744 (2001).</li><li>Kohlhoff, K. J., Jahn, T. R., Lomas, D. A., Dobson, C. M., Crowther, D. C., Vendruscolo, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+iFly+tracking+system+for+an+automated+locomotor+and+behavioural+analysis+of+Drosophila+melanogaster.">The iFly tracking system for an automated locomotor and behavioural analysis of Drosophila melanogaster.</a> Integr. Biol. 3, 755-760 (2011).</li><li>Gomez-Marin, A., Partoune, N., Stephens, G. J., Louis, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automated+tracking+of+animal+posture+and+movement+during+exploration+and+sensory+orientation+behaviors.">Automated tracking of animal posture and movement during exploration and sensory orientation behaviors.</a> PLoS ONE. 7, (2002).</li><li>Wolf, F. W., Rodan, A. R., Tsai, L. T., Heberlein, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-Resolution+analysis+of+ethanol-induced+locomotor+stimulation+in+Drosophila.">High-Resolution analysis of ethanol-induced locomotor stimulation in Drosophila.</a> J. Neurosci. 22, 11035-11044 (2002).</li><li>Martin, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+portrait+of+locomotor+behaviour+in+Drosophila+determined+by+a+video-tracking+paradigm.">A portrait of locomotor behaviour in Drosophila determined by a video-tracking paradigm.</a> Behav. Processes. 67, 207-219 (2004).</li><li>Meunier, N., Belgacem, Y. H., Martin, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+feeding+behaviour+and+locomotor+activity+by+takeout+in+Drosophila.">Regulation of feeding behaviour and locomotor activity by takeout in Drosophila.</a> J. Exp. Biol. 210, 1424-1434 (2007).</li><li>Koudounas, S., Green, E. W., Clancy, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reliability+and+variability+of+sleep+and+activity+as+biomarkers+of+ageing+in+Drosophila.">Reliability and variability of sleep and activity as biomarkers of ageing in Drosophila.</a> Biogerontology. 13, 489-499 (2012).</li><li>Catterson, J. H., Knowles-Barley, S., James, K., Heck, M. M., Harmar, A. J., Hartley, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dietary+modulation+of+Drosophila+sleep-wake+behaviour.">Dietary modulation of Drosophila sleep-wake behaviour.</a> PLoS One. 5, (2010).</li><li>Donelson, N., Kim, E. Z., Slawson, J. B., Vecsey, C. G., Huber, R., Griffith, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-Resolution+positional+tracking+for+long-term+analysis+of+Drosophila+sleep+and+locomotion+using+the+''Tracker''+program.">High-Resolution positional tracking for long-term analysis of Drosophila sleep and locomotion using the ''Tracker'' program.</a> PLos ONE. 7, (2012).</li><li>Duboff, B., Fridovich-Keil, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mediators+of+a+long-term+movement+abnormality+in+a+Drosophila+melanogaster+model+of+classic+galactosemia.">Mediators of a long-term movement abnormality in a Drosophila melanogaster model of classic galactosemia.</a> Dis. Model Mech. 5, 796-803 (2012).</li><li>Seiger, M. B., Kink, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+anesthesia+on+the+photoresponses+of+four+sympatric+species+of+Drosophila.">The effect of anesthesia on the photoresponses of four sympatric species of Drosophila.</a> Behav. Genet. 23, 99-104 (1993).</li><li>Pavlidis, P., Ramaswami, M., Tanouye, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Drosophila+easily+shocked+gene:+a+mutation+in+a+phospholipid+synthetic+pathway+causes+seizure,+neuronal+failure,+and+paralysis.">The Drosophila easily shocked gene: a mutation in a phospholipid synthetic pathway causes seizure, neuronal failure, and paralysis.</a> Cell. 79, 2333 (1994).</li><li>Royden, C. S., Pirrotta, V., Jan, L. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+tko+locus,+site+of+a+behavioral+mutation+in+D.+melanogaster,+codes+for+a+protein+homologous+to+prokaryotic+ribosomal+protein+S12.">The tko locus, site of a behavioral mutation in D. melanogaster, codes for a protein homologous to prokaryotic ribosomal protein S12.</a> Cell. 51, 165-173 (1987).</li><li>Parker, L., Padilla, M., Du, Y., Dong, K., Tanouye, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+as+a+model+for+epilepsy:+bss+is+a+gain-of-function+mutation+in+the+para+sodium+channel+gene+that+leads+to+seizures.">Drosophila as a model for epilepsy: bss is a gain-of-function mutation in the para sodium channel gene that leads to seizures.</a> Genetics. , 187-534 (2011).</li><li>Hardie, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+AMP-activated+protein+kinase+in+the+metabolic+syndrome+and+in+heart+disease.">Role of AMP-activated protein kinase in the metabolic syndrome and in heart disease.</a> FEBS Lett. 582, 81-89 (2008).</li><li>Fulgencio, J. P., Kohl, C., Girard, J., Pegorier, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+metformin+on+fatty+acid+and+glucose+metabolism+in+freshly+isolated+hepatocytes+and+on+specific+gene+expression+in+cultured+hepatocytes.">Effect of metformin on fatty acid and glucose metabolism in freshly isolated hepatocytes and on specific gene expression in cultured hepatocytes.</a> Biochem. Pharma. 62, 439-446 (2001).</li></ol>

Yazarlar, hiçbir rakip mali çıkarlarını olmadığını beyan ederim.

Drosophila da hareket veya hareket kalıplarını incelerken, bu kat edilen mesafe ile ilgili bilgiler, hareket hızı ve hareket deseni elde edebilmek için yararlıdır. Bu bilgileri ayıklamak için, pahalı ekipman geleneksel genellikle idareli 4,8,9 gibi deneylerin kullanmak isteyen küçük laboratuarları veya laboratuarları için yasak olduğu istihdam edilmiştir. Burada tarif edilen deney, mesafe (Şekil 2 ve 6) hareketinin, seyahat hızı belirlemek için kullanılmıştır (Şekiller 4 ve 7) edilebilir en az iki yüz Dolar hareketi (Şekil 1 ve 5) ile ekipman ve desen . Geliştirdiğimiz Excel Visual Basic programını kullanarak, x serisi, y ImageJ program tüm bu bilgileri ayıklamak için analiz edilebilir tarafından oluşturulan koordine eder. Bu sistem vardırNöbet duyarlı Drosophila BS mutantlar 1 SLA hem genetik ve farmakolojik bastırıcılara tanımlamak için önceden kullanılmıştır. Sistem değerli bilgiler elde ederken, biz sadece bir defada bir sinek analiz ettik. Bu, son derece paralel ticari seçenekleri 4 ile karşılaştırıldığında, önemli bir dezavantaj olabilir. MultiTracker plug-in ImageJ için aynı anda birden fazla nesneleri izlemek için yeteneği var ama biz bu seçeneği denemedim. Bu lokomotor deneyde, tek bir sinek, plastik Petri kabı kapağı altına yerleştirilir. Kameranın konumuna bağlı olarak, bir paralel kayıtları yapmak için birden fazla Petri yemekleri olabilir film. Dezavantajı web kamera daha büyük bir alanı almak için konumlandırılmış gibi çözünürlük azalacak olmasıdır. Bu bilinmemektedir kaydın bütünlüğünü etkileyen, ancak bir paralel kayıtları devam etmek istiyorsa bir yüksek uç kamera bir seçenek nasıl olurdu. Kayıtları dBurada kimse 15 dakika sınırlı ama bir ImageJ 64-bit sürümünü kullanan varsa uzun kayıt yapmak mümkündür. 32-bit sürümü bir analiz edebilir dosyaların boyutu kısıtlar bir bellek sınırı vardır. Uzun kayıtları için, ImageJ 64-bit sürümünü kullanmak esastır. Bu yöntemle ilgili en büyük sorunlardan biri ImageJ yazılım işlenmesi tarafından oluşturulan verilerden gürültü çıkarmak için ihtiyaçtır. Benzer gürültü sorunları diğer kayıt seçenekleri 3,5,6,8 ile çözülmesi gerekir Ancak, bu yönteme özgü değildir. Yöntemlerinde ele alındığı gibi ImageJ ile işlenmiş, program nesnenin merkezine hareket ölçen için, sabit bir sinek nedeniyle hafif dalgalanmalar için bile bir hareketsiz nesneye değişir ve duruş uçabilir ki, hareket az miktarda görüntüleyebilir. Bizim Visual Basic Excel programı hareketi için bir eşik ayarlamak için sürgülü pencere analizi kullanır. Bu threshold denemeye bağlı olarak değişebilir. Nöbet analiz için, sürgülü pencere gerçek zamanlı 1 saniye yayılan on kayıt noktasına bakar. Sinek bu süre içinde 0,5 cm ya da daha fazla hareket varsa, aktif olarak ele geçirmek olarak kabul edilir. Daha az ise, bu hareketsiz olarak kabul edilir. Normal hareket bakarken, bir alt eşik kesim kapalı belirlemek için gerekli ve bu deneme yanılma yoluyla elde edilmesi vardır. 0.1 cm / sn &#39;lik bir eşik bu çalışmada kullanılmıştır. Bunu başarmak için en iyi yolu, o zaman kısa bir süre için sabit iken bir sinek kaydetmek ve daha sonra kayıt sırasında hiçbir hareket gösterir, böylece cutoff ayarlamaktır. Özetle, bu düşük maliyetli bir yöntem sinek lokomosyon çeşitli parametrelere ilişkin anlamlı bilgi ayıklamak için uygun bir tahlil temsil eder. Bu, davranışsal genetik ya da farmakolojik manipülasyon hareketin veya nöbet yatkınlık üzerinde bir etkisi olup olmadığını belirlemek için kullanmak için ideal bir tarama tekniğidir.

Kısa ömürlü ve mevcut güçlü genetik araçlar göz önüne alındığında, Drosophila melanogaster çeşitli hastalıkların etiyolojisi ve çeşitli biyolojik süreçlerin temelinde yatan fizyolojisi araştırmak için mükemmel bir model sistemidir. Birçok durumda, bu davranış, genetik ya da farmakolojik işlemi bu model organizmaların 1,2 hareket yeteneği üzerindeki sahip olduğu etkilerini ölçmek için avantajlıdır. Genel olarak, iki boyutta 3-7 uçucu hareket ölçmek için kullanılan çeşitli yöntemler vardır. Bu sistemler aynı anda birden fazla sinek izlemeyi desteklemek ve hız, rekor yol uzunluklarını ölçmek ve bir sinek hareketli geçirdiği zaman yüzdesini kaydedebilirsiniz. Onlar hareketlilik ve sinek hareketi 6-9 cinsel dimorfik doğası üzerine ilaçların etkileri dahil çeşitli bağlamlarda içinde hareketini incelemek için kullanılır olmuştur. Bu sistemlerin en önemli dezavantajı izleme sys maliyetidirtem veya ilgili yazılım ve kamera. Bazı durumlarda, bu dolar binlerce çalıştırabilirsiniz. Maliyet, sadece yeni izole edilmiş mutant lokomotif kalıpları miktarının belirlenmesi, örneğin, bu tür bir sistemin sınırlı kullanımı gerekir bir laboratuar için özel bir sorundur. Daha basit ama daha az sağlam bir yöntem rekor hareketi, bir sinek, bir kapalı tüp 10,11 ortasına yerleştirilen bir kızılötesi ışın yolu haçlar kaç kere tabanlı sistemleri kullanmaktır. Bu tür sistemlerin hareket ve uyku-uyanıklık döngüsü hakkında değerli bilgiler verebilir iken, onlar sineğin gerçek yolu yakalamak için başarısız üzerinden veya tahmin hareketi altında çünkü. Ek yüksek çözünürlüklü yöntemleri bu sınırlamadan 12 denemek ve aşmak için kullanılmış olmakla birlikte, örneğin, tüpün uçlarında önemli bir hareket sergileyen sinekler gibi düşük hareket kaydedecektir uçar. Basit ve ucuz hala geotaxi ölçmek cihazları tırmanıyors, bir tek tüp veya tüplerin 2,13 bir dizi sinekler yukarı doğru hareketi,. Bu tür sistemleri ucuz ve kolayca geotaxis kusurları tespit ederken, onlar araştırmacılar için ilgi olacağını hareketinin pek çok diğer yönlerini yakalamak için başarısız. Birçok laboratuvar, set-up ve işletmek D. melanogaster suşları davranış farklılıkları karakterize için avantajlı bir araç olacaktır basit, düşük maliyetli sağlam analiz sistemi için. Burada az iki yüz dolar için set-up ve sineğin hareketinin yolu, hızı ve süresi hakkında bilgi vermek mümkün olabilir bir deneyi tarif. Tayinin etkinliğini göstermek için, bunun belirlemek için kullanılabileceğini gösteren verileri sunmak, nöbet ve ilaç metformin 2) yeteneği, açık olan bir Bang duyarlı (BS) mutant 1) bir lokomotor kusur hangi yaygın olarak nöbet benzeri etkinliği (SLA) i yoğunluğunu azaltmak için, tip II diyabet tedavisinde kullanılann iki BS mutantlar.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1117px;" width="1117">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="68">
			<td height="68" style="height:68px;width:251px;">Name of the Reagent/Equipment</td>
			<td style="width:152px;">Company</td>
			<td style="width:169px;">Catalog Number/Model</td>
			<td style="width:545px;">Comments</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">WebCam</td>
			<td>Logitech</td>
			<td>Pro900</td>
			<td>Any quality webcam will suffice.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">HandiAVI time-lapse software</td>
			<td>Azcendant software</td>
			<td></td>
			<td>Latest version can be found at http://www.azcendant.com/</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">ImageJ</td>
			<td>NIH</td>
			<td></td>
			<td>Latest version can be found at http://rsbweb.nih.gov/ij/download.html</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Multiracker Plug-In</td>
			<td>NIH</td>
			<td></td>
			<td>Latest version can be found at http://rsbweb.nih.gov/ij/plugins/index.html</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Vortexer</td>
			<td>VWR</td>
			<td>Vortex Genie 2</td>
			<td>Most standard size vortexers such as the Vortex Genie 2 will suffice.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">5cm petri dish cover</td>
			<td>LabM Limited</td>
			<td>D011</td>
			<td>Smaller or larger petri dish covers can be used for an arena in movement assay.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Light box</td>
			<td colspan="2">Built from scrap material.</td>
			<td>Illumination is used for the locomotion assay. Depending on the room lighting, it is possible to perform the assay without the light box.&#160;</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a low-cost method for analyzing seizure-like activity and movement in drosophila

Video izleme sistemleri Drosophila melanogaster hareketini analiz ve lokomotif davranış çeşitli anormallikleri tespit etmek için yaygın olarak kullanılmaktadır. Bu sistemler davranışsal bilgi hazinesi sağlayabilir, bu sistemlerin maliyeti ve karmaşıklığı birçok laboratuvar için engelleyici olabilir. Biz, D. melanogaster lokomotif davranışı ve nöbet hareketinin ölçülmesi için düşük maliyetli bir analiz geliştirdik. Sistem mesafe hareket izlemek için ucuz ve serbest bir yazılım kombinasyonu kullanılarak işlenebilir görüntüleri yakalamak için bir web-cam kullanan, belirli bir zaman dilimi sırasında hareket ve hareket süresi, ortalama hız. Bu sistemin kullanılmasını göstermek için, D&#39;nin bir grubu, 3-10 kat daha duyarlı nöbet benzeri aktiviteye (SLA) vahşi tip sinekler göre olan mutantlar, Bang duyarlı (BS) Felç melanogaster incelenmiştir. Bu yeni bir sistem kullanarak, tespit etmek mümkün olduğu BS mutant patlama anlamsız (BSS) vahşi tip sinekler daha yeni bir ortamda keşif hareketlilik düşük seviyelerini sergiler. Buna ek olarak, sistem yaygın tip II diyabet tedavisinde kullanılan ilaç metformin, BS mutantlar SLA yoğunluğunu azalttığını tespit etmek için kullanıldı.

Burada anlatılan teknik Drosophila BS mutantlar 1 SLA farklılıkları analiz etmek için daha önce kullanılan olmuştur. Burada sunulan sonuçlar kolayca şok BS suşları (EAS), patlama anlamsız (BSS), ve teknik nakavt (TKO) içerir. EAS eğrisi fosfatidil etanolamin 15 sentezinde rol oynayan bir kinaz kodlayan etanolamin ve tko lokus bir mitokondriyal riboprotein 16 kodlar. Bss mutasyon paralitik (para) voltaj-kapılı sodyum kanalının 17 bir allel. Bu çalışmada kullanılan allel EAS 1, BSS 1 ve tko 25t edildi. SLA ölçmek için yöntemin etkinliğinin bir örneği ile karşılaştırıldığında bir EAS nöbet duyarlı kontrol sineğin yol uzunluğu gösteren Şekil 1 &#39;de görülebilirbu ilaç metformin beslenen edilmiştir. Metformin tip II diyabet tedavisinde kullanılan bir biguaniddir. Ilaç AMPK yukarı doğru düzenleme ile, memeli hücrelerinde 18 glikoliz ve glukoz alımında bir artışa tetikler, mitokondriyal solunum zinciri kompleksi I, inhibe eder. Önceki çalışmalar metformin 19. Şekil 2, bu BS mutantlar EAS besleme ve iki gün (yemek 25 mg / g) için metformin tko SLA yol uzunluğunu azalttığını göstermektedir yolaklar muhtemelen aerobik metabolizma inhibisyonu telafi etmek için, glikolitik genlerin yukarı doğru düzenleyen bulduk . Yol uzunluğunu azaltmaya ek olarak, bu yöntem tarafından üretilen veriler SLA hız ve SLA süresi farklılıklarını analiz etmek için kullanılabilir. Bu durumda, veri SLA hız (Şekil 4) önemli ölçüde değişmemiştir ise SLA süresi belirgin şekilde (Şekil 3) düşük olduğunu göstermektedir. Yukarıda açıklanan tahlil de zaman tanımlanmış bir süre üzerinde lokomosyonu ölçmek için kullanılabilir. 5 vahşi tip Canton-Özel geçtiği bir yolun bir örneğini göstermektedir (CS) sinek ve bss geçtiği bir yol, bir süre aşırı uçmak 15 dak. Her iki sineklerin hareket dairesel alanın kenarlarında konsantre edilmiş olsa da, CS sinek 15 dakika kayıt süresi boyunca çok daha fazla hareketlilik sergiledi. Deney Bu nedenle hareket miktarına ve sineklerin hareketinin desen hem de ideal yararlıdır. Bss sinekler tarafından geçilen ortalama mesafe Şekil 6&#39;da gösterildiği gibi CS uçar anlamlı olarak daha düşüktü. Bss sinekler daha yavaş bir hızda hareket etmek eğiliminde, daha az hareket gösterilecek vermedi sadece. Iki ayrı sinek hareketinin hız değişiklikleri Şekil 7&#39;de tasvir edilmiştir. Bu verileri kullanarak, bir ortalama hız F olarak hesaplanır ve karşılaştırılabilir<html> SLA için ŞEKIL 4. Şekil 7&#39;de gösterilen örnek sinekler dayanarak, BSS sinekler Şekilde gösterilen işlem süresi boyunca daha nöbetleri vardı CS sinekler hızlı hareket nöbetleri arasında daha sık olduğu fark edilmektedir. <img alt="Şekil 1" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51460/51460fig1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51460/51460fig1.jpg" /> Şekil 1. EAS mutantlar ve EAS mutantlar SLA Temsilcisi yolları metformin beslenir. Bireysel sinekler SLA ikna etmek için mekanik şaşırdılar. Bir EAS mutant beslenen metformin bir EAS mutantının SLA sırasında tek bir sineğin yolu şekilde temsil edilmektedir. A) Path. B) Path. (Bar 1 cm temsil eder). files/ftp_upload/51460/51460fig2highres.jpg &quot;src =&quot; / files/ftp_upload/51460/51460fig2.jpg &quot;/&gt; Şekil 2. Bireysel sinekler SLA ikna etmek için mekanik şaşırdılar. Sinek SLA sırasında taşınır mesafe SLA yoğunluğunun bir ölçüsü olarak kullanılmıştır. Her iki muayene BS mutanlarında, metformin önemli miktarda hareket mesafesi azalır. Veriler, Mann-Whitney U testi kullanılarak analiz edildi (* p &lt;0.05; *** p &lt;0.001, n = 15). <img alt="Şekil 3," fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51460/51460fig3highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51460/51460fig3.jpg" /> Şekil 3,. Bireysel sinekler SLA ikna etmek için mekanik şaşırdılar. Sinek SLA SLA yoğunluğu bir önlem olarak kullanılan geçiren harcanan zaman. Her iki muayene BS mutanlarında, metformin önemli SLA süresini düşürmüştür. Veriler, Mann-Whitney U testi kullanılarak analiz edildi (* p &lt;0.05; *** p &lt;0.001, n = 15). <img alt="Şekil 4," fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51460/51460fig4highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51460/51460fig4.jpg" /> Şekil 4. Bireysel sinekler SLA ikna etmek için mekanik şaşırdılar. SLA nöbeti sırasında sinek ortalama hızı SLA yoğunluğunun bir ölçüsü olarak kullanılmıştır. Metformin beslenen zaman test iki BS mutantlar için ortalama hızında önemli bir değişiklik yoktu. Veriler, Mann-Whitney U testi (n = 15) kullanılarak analiz edilmiştir. <img alt="Şekil 5," fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51460/51460fig5highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51460/51460fig5.jpg" /> Şekil 5,. Arenada bireysel sinek yollar. Izleri bireysel sinekler 15 dk izleme döneminde arenada geçilen yolları temsil eder. A) aktif CS Yolu mo ile uçmakvement dairesel alanda tipik bir bss sinek. B) Path çevresi etrafında yoğunlaşmıştır. Hareket hala çevresine konsantre fakat CS sinekler kıyasla çok daha az hareket yoktu. (Bar 1 cm temsil eder) <img alt="Şekil 6," fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51460/51460fig6highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51460/51460fig6.jpg" /> Şekil 6,. Yeni bir ortama maruz kaldığında lokomosyon uç. Bağımsız sinekler, 5 cm çapında bir alan (yüksekliği 5 mm) ve hareket içine yerleştirildi, 15 dakika boyunca izlenmiştir. Yol uzunluğu, her sinek için hesaplandı ve ortalama uzunlukları, her bir genotip için alındı. BSS mutantlar CS sinekler ile karşılaştırıldığında yol uzunluğunda belirgin bir azalma göstermiştir. Veriler, Mann-Whitney U testi kullanılarak analiz edildi (** p &lt;0.01, n = 10). <isrc = &quot;/ files/ftp_upload/51460/51460fig7highres.jpg&quot; src = &quot;/ files/ftp_upload/51460/51460fig7.jpg&quot; /&gt;: fo içerik-width = &quot;5in&quot;: fo mg alt = &quot;Resim 7&quot; Şekil 7. Bir CS, (A) için keşif hareket sırasında zamanın bir fonksiyonu olarak hızı ve bir BSS (B) uç. Bir tek uçucu, 5 cm çapında bir alan (yükseklik 5 mm) ve hareket içine yerleştirildi, 15 dakika boyunca izlenmiştir. Hız 1 sn sürgülü pencere üzerinde hızını ortalama her 0.5 sn hesaplanmıştır (sonraki 0.5 saniye aralığının önceki 0.5 sn arasında hareketi.) Faaliyet birkaç ilk patlamaları sonra bss sinek yargılama boyunca nispeten inaktif kalır.

Watch this Scientific Journal Video about A Low-cost Method for Analyzing Seizure-like Activity and Movement in Drosophila at JoVE.com

A Low-cost Method for Analyzing Seizure-like Activity and Movement in Drosophila

Özgür ve ucuz yazılım programları bir web kamerası ve bir arada kullanarak, Drosophila melanogaster lokomotif desenler hız, mesafe, ve çeşitli motor etkinlikler zamanında farklılıkları tespit etmek için analiz edilebilir.

Nöbet gibi Aktivite Analizi ve Hareket için A Düşük maliyetli Yöntemi<em&gt; Drosophila</em

Video tracking systems have been used widely to analyze Drosophila melanogaster movement and detect various abnormalities in locomotive behavior. While ...

a-low-cost-method-for-analyzing-seizure-like-activity-movement

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Neuroscience

A Low-cost Method for Analyzing Seizure-like Activity and Movement in Drosophila

13.5K Görüntüleme.  Franciscan University of Steubenville.  Özgür ve ucuz yazılım programları bir web kamerası ve bir arada kullanarak, Drosophila melanogaster lokomotif desenler hız, mesafe, ve çeşitli motor etkinlikler zamanında farklılıkları tespit etmek için analiz edilebilir. 

Video: A Low-cost Method for Analyzing Seizure-like Activity and Movement in Drosophila

Assaying Locomotor Activity to Study Circadian Rhythms and Sleep Parameters in Drosophila

Most life forms exhibit daily rhythms in cellular, physiological and behavioral phenomena that are driven by endogenous circadian (&equiv;24 hr) pacemakers or clocks. Malfunctions in the human circadian system are associated with numerous diseases or disorders. Much progress towards our understanding of the mechanisms underlying circadian rhythms has emerged from genetic screens whereby an easily measured behavioral rhythm is used as a read-out of clock function. Studies using Drosophila have made seminal contributions to our understanding of the cellular and biochemical bases underlying circadian rhythms. The standard circadian behavioral read-out measured in Drosophila is locomotor activity. In general, the monitoring system involves specially designed devices that can measure the locomotor movement of Drosophila. These devices are housed in environmentally controlled incubators located in a darkroom and are based on using the interruption of a beam of infrared light to record the locomotor activity of individual flies contained inside small tubes. When measured over many days, Drosophila exhibit daily cycles of activity and inactivity, a behavioral rhythm that is governed by the animal's endogenous circadian system. The overall procedure has been simplified with the advent of commercially available locomotor activity monitoring devices and the development of software programs for data analysis. We use the system from Trikinetics Inc., which is the procedure described here and is currently the most popular system used worldwide. More recently, the same monitoring devices have been used to study sleep behavior in Drosophila. Because the daily wake-sleep cycles of many flies can be measured simultaneously and only 1 to 2 weeks worth of continuous locomotor activity data is usually sufficient, this system is ideal for large-scale screens to identify Drosophila manifesting altered circadian or sleep properties.

Assaying Locomotor Activity to Study Circadian Rhythms and Sleep Parameters in Drosophila

We describe procedures for recording daily locomotor activity rhythms of Drosophila and subsequent data analysis. Locomotor activity rhythms are a reliable behavioral output of animal circadian clocks and are used as the standard readout of clock function when studying circadian mutants or examining how the environment regulates the circadian system.

Sirkadiyen Rhythms Eğitim ve Parametreler Uyku Lokomotor Aktivitesi Assaying Drosophila</em

Most life forms exhibit daily rhythms in cellular, physiological and behavioral phenomena that are driven by endogenous circadian (&equiv;24 hr) ...

Nörobilim

A Low Cost Setup for Behavioral Audiometry in Rodents

In auditory animal research it is crucial to have precise information about basic hearing parameters of the animal subjects that are involved in the experiments. Such parameters may be physiological response characteristics of the auditory pathway, e.g. via brainstem audiometry (BERA). But these methods allow only indirect and uncertain extrapolations about the auditory percept that corresponds to these physiological parameters. To assess the perceptual level of hearing, behavioral methods have to be used. A potential problem with the use of behavioral methods for the description of perception in animal models is the fact that most of these methods involve some kind of learning paradigm before the subjects can be behaviorally tested, e.g. animals may have to learn to press a lever in response to a sound. As these learning paradigms change perception itself 1,2 they consequently will influence any result about perception obtained with these methods and therefore have to be interpreted with caution. Exceptions are paradigms that make use of reflex responses, because here no learning paradigms have to be carried out prior to perceptual testing. One such reflex response is the acoustic startle response (ASR) that can highly reproducibly be elicited with unexpected loud sounds in na&iuml;ve animals. This ASR in turn can be influenced by preceding sounds depending on the perceptibility of this preceding stimulus: Sounds well above hearing threshold will completely inhibit the amplitude of the ASR; sounds close to threshold will only slightly inhibit the ASR. This phenomenon is called pre-pulse inhibition (PPI) 3,4, and the amount of PPI on the ASR gradually depends on the perceptibility of the pre-pulse. PPI of the ASR is therefore well suited to determine behavioral audiograms in na&iuml;ve, non-trained animals, to determine hearing impairments or even to detect possible subjective tinnitus percepts in these animals. In this paper we demonstrate the use of this method in a rodent model (cf. also ref. 5), the Mongolian gerbil (Meriones unguiculatus), which is a well know model species for startle response research within the normal human hearing range (e.g. 6).

A fast and inexpensive method for the behavioral determination of hearing parameters like hearing thresholds, hearing impairments or phantom perceptions (subjective tinnitus) is described. It uses pre-pulse inhibition of the acoustic startle response and can be easily implemented in a personal computer using a programmable AD/DA-converter and a piezo sensor.

Kemirgenler Davranış Odyometri için Düşük Maliyetli Kurulum

In auditory animal research it is crucial to have precise information about basic hearing parameters of the animal subjects that are involved in the ...

A Human-machine-interface Integrating Low-cost Sensors with a Neuromuscular Electrical Stimulation System for Post-stroke Balance Rehabilitation

A stroke is caused when an artery carrying blood from heart to an area in the brain bursts or a clot obstructs the blood flow to brain thereby preventing delivery of oxygen and nutrients. About half of the stroke survivors are left with some degree of disability. Innovative methodologies for restorative neurorehabilitation are urgently required to reduce long-term disability. The ability of the nervous system to reorganize its structure, function and connections as a response to intrinsic or extrinsic stimuli is called neuroplasticity. Neuroplasticity is involved in post-stroke functional disturbances, but also in rehabilitation. Beneficial neuroplastic changes may be facilitated with non-invasive electrotherapy, such as neuromuscular electrical stimulation (NMES) and sensory electrical stimulation (SES). NMES involves coordinated electrical stimulation of motor nerves and muscles to activate them with continuous short pulses of electrical current while SES involves stimulation of sensory nerves with electrical current resulting in sensations that vary from barely perceivable to highly unpleasant. Here, active cortical participation in rehabilitation procedures may be facilitated by driving the non-invasive electrotherapy with biosignals (electromyogram (EMG), electroencephalogram (EEG), electrooculogram (EOG)) that represent simultaneous active perception and volitional effort. To achieve this in a resource-poor setting, e.g., in low- and middle-income countries, we present a low-cost human-machine-interface (HMI) by leveraging recent advances in off-the-shelf video game sensor technology. In this paper, we discuss the open-source software interface that integrates low-cost off-the-shelf sensors for visual-auditory biofeedback with non-invasive electrotherapy to assist postural control during balance rehabilitation. We demonstrate the proof-of-concept on healthy volunteers.

A novel low-cost human-machine interface for interactive post-stroke balance rehabilitation system is presented in this article. The system integrates off-the-shelf low-cost sensors towards volitionally driven electrotherapy paradigm. The proof-of-concept software interface is demonstrated on healthy volunteers.

İnme sonrası Denge Rehabilitasyon bir Nöromüsküler Elektriksel Stimülasyon Sistemi ile düşük maliyetli Sensörler entegre bir İnsan-makine arayüzü

A stroke is caused when an artery carrying blood from heart to an area in the brain bursts or a clot obstructs the blood flow to brain thereby preventing ...

A Simple and Inexpensive Method for Determining Cold Sensitivity and Adaptation in Mice

Cold hypersensitivity is a serious clinical problem, affecting a broad subset of patients and causing significant decreases in quality of life. The cold plantar assay allows the objective and inexpensive assessment of cold sensitivity in mice, and can quantify both analgesia and hypersensitivity. Mice are acclimated on a glass plate, and a compressed dry ice pellet is held against the glass surface underneath the hindpaw. The latency to withdrawal from the cooling glass is used as a measure of cold sensitivity.
Cold sensation is also important for survival in regions with seasonal temperature shifts, and in order to maintain sensitivity animals must be able to adjust their thermal response thresholds to match the ambient temperature. The Cold Plantar Assay (CPA) also allows the study of adaptation to changes in ambient temperature by testing the cold sensitivity of mice at temperatures ranging from 30 &#176;C to 5 &#176;C. Mice are acclimated as described above, but the glass plate is cooled to the desired starting temperature using aluminum boxes (or aluminum foil packets) filled with hot water, wet ice, or dry ice. The temperature of the plate is measured at the center using a filament T-type thermocouple probe. Once the plate has reached the desired starting temperature, the animals are tested as described above.
This assay allows testing of mice at temperatures ranging from innocuous to noxious. The CPA yields unambiguous and consistent behavioral responses in uninjured mice and can be used to quantify both hypersensitivity and analgesia. This protocol describes how to use the CPA to measure cold hypersensitivity, analgesia, and adaptation in mice.

The Cold Plantar Assay (CPA) measures cold responsiveness between 30 &#176;C and 5 &#176;C, and can also measure cold adaptation. This protocol describes how to use the CPA to measure cold hypersensitivity, analgesia, and adaptation in mice.

Fareler Soğuk Hassasiyeti ve Uyum belirlenmesi için Basit ve ucuz Yöntem

Cold hypersensitivity is a serious clinical problem, affecting a broad subset of patients and causing significant decreases in quality of life.  The cold ...

A Method to Inflict Closed Head Traumatic Brain Injury in Drosophila

Traumatic brain injury (TBI) affects millions of people each year, causing impairment of physical, cognitive, and behavioral functions and death. Studies using Drosophila have contributed important breakthroughs in understanding neurological processes. Thus, with the goal of understanding the cellular and molecular basis of TBI pathologies in humans, we developed the High Impact Trauma (HIT) device to inflict closed head TBI in flies. Flies subjected to the HIT device display phenotypes consistent with human TBI such as temporary incapacitation and progressive neurodegeneration. The HIT device uses a spring-based mechanism to propel flies against the wall of a vial, causing mechanical damage to the fly brain. The device is inexpensive and easy to construct, its operation is simple and rapid, and it produces reproducible results. Consequently, the HIT device can be combined with existing experimental tools and techniques for flies to address fundamental questions about TBI that can lead to the development of diagnostics and treatments for TBI. In particular, the HIT device can be used to perform large-scale genetic screens to understand the genetic basis of TBI pathologies.

A Method to Inflict Closed Head Traumatic Brain Injury in Drosophila

Here we describe a method to inflict closed head traumatic brain injury (TBI) in Drosophila. This method provides a gateway to investigate the cellular and molecular mechanisms that underlie TBI pathologies using the vast array of experimental tools and techniques available for flies.

Kapalı Başkanı Travmatik Beyin yaralayabilecek Bir Yöntem<em&gt; Drosophila</em

Traumatic brain injury (TBI) affects millions of people each year, causing impairment of physical, cognitive, and behavioral functions and death. Studies ...

Direct-current Stimulation and Multi-electrode Array Recording of Seizure-like Activity in Mice Brain Slice Preparation

Cathodal transcranial direct-current stimulation (tDCS) induces suppressive effects on drug-resistant seizures. To perform effective actions, the stimulation parameters (e.g., orientation, field strength, and stimulation duration) need to be examined in mice brain slice preparations. Testing and arranging the orientation of the electrode relative to the position of the mice brain slice are feasible. The present method preserves the thalamocingulate pathway to evaluate the effect of DCS on anterior cingulate cortex seizure-like activities. The results of the multichannel array recordings indicated that cathodal DCS significantly decreased the amplitude of the stimulation-evoked responses and duration of 4-aminopyridine and bicuculline-induced seizure-like activity. This study also found that cathodal DCS applications at 15 min caused long-term depression in the thalamocingulate pathway. The present study investigates the effects of DCS on thalamocingulate synaptic plasticity and acute seizure-like activities. The current procedure can test the optimal stimulation parameters including orientation, field strength, and stimulation duration in an in vitro mouse model. Also, the method can evaluate the effects of DCS on cortical seizure-like activities at both the cellular and network levels.

Studies have shown that cathodal transcranial direct-current stimulation can produce suppressive effects on drug-resistant seizures. In this study, an in vitro experimental setup was devised in which the direct-current stimulation and multielectrode array recording of seizure-like activity were evaluated in mice brain slice preparation. The direct-current stimulation parameters were evaluated.

Fare Beyin Dilim Hazırlık içinde nöbet benzeri Faaliyet doğrudan akım Stimülasyon ve Multi-elektrot Dizi Kaydı

Cathodal transcranial direct-current stimulation (tDCS) induces suppressive effects on drug-resistant seizures. To perform effective actions, the ...

High-density Electroencephalographic Acquisition in a Rodent Model Using Low-cost and Open-source Resources

Advanced electroencephalographic analysis techniques requiring high spatial resolution, including electrical source imaging and measures of network connectivity, are applicable to an expanding variety of questions in neuroscience. Performing these kinds of analyses in a rodent model requires higher electrode density than traditional screw electrodes can accomplish. While higher-density electroencephalographic montages for rodents exist, they are of limited availability to most researchers, are not robust enough for repeated experiments over an extended period of time, or are limited to use in anesthetized rodents.1-3 A proposed low-cost method for constructing a durable, high-count, transcranial electrode array, consisting of bilaterally implantable headpieces is investigated as a means to perform advanced electroencephalogram analyses in mice or rats.

Procedures for headpiece fabrication and surgical implantation necessary to produce high signal to noise, low-impedance electroencephalographic and electromyographic signals are presented. While the methodology is useful in both rats and mice, this manuscript focuses on the more challenging implementation for the smaller mouse skull. Freely moving mice are only tethered to cables via a common adapter during recording. One version of this electrode system that includes 26 electroencephalographic channels and 4 electromyographic channels is described below.

Instructions for the low-cost construction and surgical implantation of a chronic transcranial high-density electroencephalographic montage into mice are provided. Signal recording, extraction, and processing techniques are also described.

Bir Kemirgen Modelinde Yüksek yoğunluklu Elektroensefalografik Toplama Düşük maliyetli ve Açık kaynak Kaynakları Kullanma

Advanced electroencephalographic analysis techniques requiring high spatial resolution, including electrical source imaging and measures of network ...

Analyzing Synaptic Modulation of Drosophila melanogaster Photoreceptors after Exposure to Prolonged Light

The nervous system has the remarkable ability to adapt and respond to various stimuli. This neural adjustment is largely achieved through plasticity at the synaptic level. The Active Zone (AZ) is the region at the presynaptic membrane that mediates neurotransmitter release and is composed of a dense collection of scaffold proteins. AZs of Drosophila melanogaster (Drosophila) photoreceptors undergo molecular remodeling after prolonged exposure to natural ambient light. Thus the level of neuronal activity can rearrange the molecular composition of the AZ and contribute to the regulation of the functional output.
Starting from the light exposure set-up preparation to the immunohistochemistry, this protocol details how to quantify the number, the spatial distribution, and the delocalization level of synaptic molecules at AZs in Drosophila photoreceptors. Using image analysis software, clusters of the GFP-fused AZ component Bruchpilot were identified for each R8 photoreceptor (R8) axon terminal. Detected Bruchpilot spots were automatically assigned to individual R8 axons. To calculate the distribution of spot frequency along the axon, we implemented a customized software plugin. Each axon&#39;s start-point and end-point were manually defined and the position of each Bruchpilot spot was projected onto the connecting line between start and end-point. Besides the number of Bruchpilot clusters, we also quantified the delocalization level of Bruchpilot-GFP within the clusters. These measurements reflect in detail the spatially resolved synaptic dynamics in a single neuron under different environmental conditions to stimuli.

Analyzing Synaptic Modulation of Drosophila melanogaster Photoreceptors after Exposure to Prolonged Light

Here we show how to quantify the number and spatial distribution of synaptic active zones in Drosophila melanogaster&#160;photoreceptors, highlighted with a genetically encoded molecular marker, and their modulation after prolonged exposure to light.

Synaptic Modülasyon Analizi<em&gt; Drosophila melanogaster</em&gt; Uzun süreli ışığa maruz kaldıktan sonra Fotoreseptörler

The nervous system has the remarkable ability to adapt and respond to various stimuli. This neural adjustment is largely achieved through plasticity at ...

Acute In Vivo Electrophysiological Recordings of Local Field Potentials and Multi-unit Activity from the Hyperdirect Pathway in Anesthetized Rats

Converging evidence shows that many neuropsychiatric diseases should be understood as disorders of large-scale neuronal networks. To better understand the pathophysiological basis of these diseases, it is necessary to precisely characterize in which way the processing of information is disturbed between the different neuronal parts of the circuit. Using extracellular in vivo electrophysiological recordings, it is possible to accurately delineate neuronal activity within a neuronal network. The application of this method has several advantages over alternative techniques, e.g., functional magnetic resonance imaging and calcium imaging, as it allows a unique temporal and spatial resolution and does not rely on genetically engineered organisms. However, the use of extracellular in vivo recordings is limited since it is an invasive technique that cannot be universally applied. In this article, a simple and easy to use method is presented with which it is possible to simultaneously record extracellular potentials such as local field potentials and multiunit activity at multiple sites of a network. It is detailed how a precise targeting of subcortical nuclei can be achieved using a combination of stereotactic surgery and online analysis of multi-unit recordings. Thus, it is demonstrated, how a complete network such as the hyperdirect cortico-basal ganglia loop can be studied in anesthetized animals in vivo.

Acute In Vivo Electrophysiological Recordings of Local Field Potentials and Multi-unit Activity from the Hyperdirect Pathway in Anesthetized Rats

In this study, the methodology is presented on how to perform multi-site in vivo electrophysiological recordings from the hyperdirect pathway under urethane anesthesia.

Akut<emIn vivo</em&gt; Anestezi Uygulanan Sıçanlarda Hiperdirect Pathway&#39;den Lokal Alan Potansiyellerinin Elektrofizyolojik Kayıtları ve Çoklu Ünite Aktivitesi

Converging evidence shows that many neuropsychiatric diseases should be understood as disorders of large-scale neuronal networks. To better understand the ...

In vivo Calcium Imaging in Mouse Inferior Olive

Inferior olive (IO), a nucleus in the ventral medulla, is the only source of climbing fibers that form one of the two input pathways entering the cerebellum. IO has long been proposed to be crucial for motor control and its activity is currently considered to be at the center of many hypotheses of both motor and cognitive functions of the cerebellum. While its physiology and function have been relatively well studied on single-cell level in vitro, presently there are no reports on the organization of the IO network activity in living animals. This is largely due to the extremely challenging anatomical location of the IO, making it difficult to subject to conventional fluorescent imaging methods, where an optic path must be created through the entire brain located dorsally to the region of interest.
Here we describe an alternative method for obtaining state-of-the-art -level calcium imaging data from the IO network. The method takes advantage of the extreme ventral location of the IO and involves a surgical procedure for inserting a gradient-refractive index (GRIN) lens through the neck viscera to come into contact with the ventral surface of the calcium sensor GCaMP6s-expressing IO in anesthetized mice. A representative calcium imaging recording is shown to demonstrate the feasibility to record IO neuron activity after the surgery. While this is a non-survival surgery and the recordings must be conducted under anesthesia, it avoids damage to life-critical brainstem nuclei and allows conducting large variety of experiments investigating spatiotemporal activity patterns and input integration in the IO. This procedure with modifications could be used for recordings in other, adjacent regions of the ventral brainstem.

In vivo Calcium Imaging in Mouse Inferior Olive

We present a protocol to expose the brainstem of adult mouse from the ventral side. By using a gradient-refractive index lens with a miniature microscope, calcium imaging can be used to examine the activity of inferior olive neural somata in vivo.