Finansman Avrupa Topluluğu Yedinci Çerçeve Programı (FP7/2007-2013) kapsamında Avrupa Araştırma Konseyi alındı ​​/ ERC Hibe sözleşmesi hiçbir [239603]

<ol><li> V hazırlanması (V) kompleksi (Şekil 2); 18 davranış bir eldiven kutu içinde 1,1-1,4 adımları, bir eldiven kutusu mevcut değilse, alternatif atlayın 2 (2,1-2,6) adım. <ol><li> Ligandların 0,42 mmol, kuru THF H 2 L çözülür ve THF içinde VO eşdeğer miktarda eden karıştırılan bir çözeltiye (O i Pr) 3 ekleyin. </li><li> 15 dakika boyunca oda sıcaklığında reaksiyon karışımını karıştırın ve vakum altında uçucu maddeler uzaklaştırılmıştır. </li><li> Soğuk hekzan ekleyin ve vakum altında çıkarın. Koyu mor renkli bir toz kantitatif bir verimle elde edilmelidir. </li><li> Bir Eppendorf şişede elde edilen bileşik 8 mg tartılır. 3. adıma atlayın. </li></ol></li><li> Bir Schlenk hat kullanılarak V (V) kompleksi hazırlayın. <ol><li> Bir septum kapak ile kuru bir Schlenk şişesine kuru THF içinde ligand L 2, H, 0.42 mmol çözülür, bir Schlenk hattına eklemek ve vakum / inert gaz (N2 veya Ar) ortamlarda dönüşümlü uygulanır; üç s uygulanması önerilirmermi uch ve vakum sahnelerinde 2-5 dakika bekleyin. </li><li> Septum kapak ile, şırınga ile kuru THF ekleyin. </li><li> VO (O i Pr) eşdeğer miktarda ekleme, hattına uygun bir kuru bir Schlenk şişesi çengel eylemsiz bir ortam uygulanması ve bu için vanadyum çözeltiden, bir şırınga vasıtasıyla, reaktiflerin eklenmesi ile benzer bir şekilde hazırlanmış olan bir THF çözeltisine, 3 ligand. </li><li> 15 dakika boyunca oda sıcaklığında reaksiyon karışımını karıştırın ve vakum altında uçucu maddelerin ayrılması, kararsız bir ürün endişe ise, atıl bir atmosfer altında uçucu Schlenk tipi damıtma yerine, ön-kurutma edilmiş gerekli cam takmak için atıl gaz akışının kullanımı . </li><li> Soğuk hekzan ekleyin ve vakum altında çıkarın. Koyu mor renkli bir toz kantitatif bir verimle elde edilmelidir. </li><li> Bir Eppendorf şişede elde edilen bileşik 8 mg tartılır. </li></ol></li><li> Ti hazırlanması (IV) kompleksi (Şekil 2); 28 </skadar&gt; davranış bir eldiven kutu içinde 3,1-3,3 adımları, bir eldiven kutusu mevcut değilse, bunun yerine bir Schlenk çizgi istihdam vanadyum analog (adım 2) için tartışılan alternatif adımları ayarlayın. <ol><li> , Kuru THF içindeki bir ligand L 2, H 0.35 mmol, THF içinde çözülür ve Ti (O Pr i) 4 eşdeğer miktarlarının bir karıştırılan çözeltisine ekleyin. </li><li> 2 saat boyunca oda sıcaklığında reaksiyon karışımını karıştırdıktan. Kantitatif verimle sarı bir ürün vermek üzere vakum altında uçucu maddeler uzaklaştırılmıştır. </li><li> Eppendorf şişede elde edilen bileşik 8 mg tartılır. </li></ol></li><li> HT-29 hücreleri, 96 oyuklu plaka hazırlanması <ol><li> % 1 penisilin / streptomisin antibiyotik,% 1 L-glutamin, ve 37 ° C&#39;de% 10 fetal sığır serumu (FBS),% 5 CO2 ile birlikte içeren RPMI-1640 ortamıyla, 75 cm 2 şişede Culture HT-29 hücreleri, . </li><li> HT-29 hücreleri (altkültür olmadan her 3-4 gün 90-100%) maksimal confluency ulaştığınızda ortamı çıkarın. 1 ml &#39;si ile yıkayınıztripsin (% 0.25) / EDTA (% 0.05) çözümü ve çıkarın. </li><li> Tripsin 1 ml (% 0.25) / EDTA (% 0.05) çözeltisi ilave edin ve 5 dakika boyunca inkübe edin. </li><li> Şişeden HT-29 hücreleri ayırın ve tripsin aktivitesi devre dışı bırakmak için ortam 10 ml ekleyin. Bir tübe hücreler karışımın 5 ml aktarın. </li><li> Sayaç haznesine hücreler karışımın birkaç damla aktarmak için pipet kullanın. Sayaç odası 5 x 5 kare içerir. </li><li> Köşelerde 4 kare ve ortasında bir: bir mikroskop kullanılarak 5 temsilci meydanlarda hücreleri saymak. </li><li> Mevcut hücre tahmini miktarını hesaplayın. 5 temsilci meydanlarda hücreleri toplamak ve 20&#39;ye bölün. </li><li> Adım 4.7 sonuçla 0.6 bölün. Alınan plaka başına gereken hücre karışımı miktarıdır. Bu hesaplama, 0.6 x 10 6 hücre (oyuk başına 9,000 hücre) içeren bir plaka ile ilgilidir. </li><li> P başına gereken hücre karışımının miktarını aktarmak için pipet kullanınGeç (bölüm 4.8 hesaplanan) ve orta 13.2 ml ekleyin (kuyunun × 66 kuyu başına 200 ul). </li><li> 11 kanallı bir pipet (oyuk başına 200 ul, 6 hatları, toplam 66 kuyu) ile 96 oyuklu plakaya karışımı ekleyin. Her satırın biri de boş kontrolü için boş kalmalıdır. </li><li> Hücreler plaka takmak için izin vermek için 24 saat boyunca% 5 CO2 ile 37 ° C&#39;de inkübe edin. </li></ol></li><li> Bileşiklerin Ekleme <ol><li> Aşama 1.4 (ya da 2.6) ve 3.3 &#39;de tarif edildiği gibi her bir bileşiğin 8 mg kuru THF içinde (arzu edilen konsantrasyon aralığı uygun olarak ya da farklı miktarda) 200 ul ekle tartılır. Da, ligand L 2, H 8 mg tartılır. </li><li> 9 farklı Eppendorf şişelere THF içinde 60 ul ekleyerek ayrıca her bileşik çözeltisi ile seyreltilir. </li><li> 10 farklı konsantrasyonları o kadar çok ilk Eppendorf şişe, tekrar süspansiyon ve bir sonraki şişeye transferi 60 ul, ve Bölüm 5.1 &#39;de karışımdan bir pipet 60 ul transfer(bölüm 5.1 ana karışıma dahil) btained. </li><li> Ortamın 180 ul THF içinde her bir konsantrasyonu 20 ul seyreltin. </li><li> Sadece THF ile bir kontrol çözelti hazırlayın, her ölçüm ortamı 180 ul THF içinde 20 ul. </li><li> Zaten konsantrasyon aralığı olabilir (en fazla 200 mg / L bileşiğinin son konsantrasyonları vermek üzere ortam içinde hücrelerin belirtilen çözeltisi içeren 200 ul her bir oyuğuna, (THF kontrolü dahil) elde edilen çözeltiden 10 ul ekle ) Bileşik aktivitesine göre değiştirilebilir. </li><li> Bu bileşiğin çözünürlüğüne bağlı olarak, uygulanan en yüksek konsantrasyonda bir çökeltme görülebilir. </li><li> Bileşik 3x (aynı bileşiğin plakasında hat 3) her bir ölçüm tekrar, her bir çizgi içerir: 10 farklı konsantrasyonda, iyi boş için hücreler olmaksızın sadece kontrol ve 1 çözücüsü ile işlemden geçirildi 1 de içeren hücrelerde, bileşik ile muamele edilmiş hücrelerin kontrolü. </li><li> CO2 atmosfer,% 5 37 ° C&#39;de 3 gün için yüklenen plaka inkübe edin. </li></ol></li><li> MTT tahlili kullanılarak sitotoksisite ölçümü <ol><li> Fenol kırmızısı olmadan RPMI-1640 ortamı içinde 200 ml&#39;lik bir solüsyona MTT tozu, 1 g ekleyerek MTT çözeltisi hazırlayın. Stok çözelti, 15 ml tüplere bölünmüştür ve -20 ° C&#39;de saklanabilir </li><li> (Adım 4.10 arasındaki hücreleri olmadan boş kontrol çukurları hariç) her bir kullanan 11 kanallı pipet MTT çözeltisinin 20 ul ve ilave 3 saat boyunca inkübe edin. </li><li> Her bir ikinci ortam çözeltisini çıkarın. </li><li> Formazan&#39;ın çözülmesi için her bir oyuğa 200 ul izopropanol ekleyin. Homojenliğine ulaşıncaya kadar 0.5 saat için plaka karıştırın. </li><li> Bir mikro-plaka okuyucu spektrofotometre ile yukarıda sözü edilen solüsyon 200 ul için 550 nm&#39;deki absorbansı ölçülür. </li><li> 3 farklı günlerde (ki 3 tekrarlar içeren, adım 5.8) her ölçümü tekrarlayın. </li><li> T hesaplamakTHF çözücü kontrol değerinin absorbans ile bölünmesi sonucu, ölçülen değer arasındaki boş kontrol absorbans değerinin düşülmesi ve% 100 ile çarpılması suretiyle hücre canlılığının o yüzdesi. </li><li> GraphPad Prism yazılımı (ya da eşdeğeri) kullanılarak IC50 değerleri hesaplanır. </li><li> Başka IC 50, en az üç farklı günlerde toplanan bütün IC50 değerlerinin ortalama ve hata değeri standart sapmasıdır. </li></ol></li></ol>

<ol>
	<li>Niles, A. L., Moravec, R. A., Riss, T. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Update+on+in+vitro+cytotoxicity+assays+for+drug+development.">Update on in vitro cytotoxicity assays for drug development.</a> Expert Opinion on Drug Discovery. 3, 655-669 (2008).</li><li>Hatok, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+assays+for+the+evaluation+of+drug+resistance+in+tumor+cells.">In vitro assays for the evaluation of drug resistance in tumor cells.</a> Clinical and Experimental Medicine. 9, 1-7 (2009).</li><li>Wang, D., Lippard, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+processing+of+platinum+anticancer+drugs.">Cellular processing of platinum anticancer drugs.</a> Nature Reviews Drug Discovery. 4, 307-320 (2005).</li><li>Muggia, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Platinum+compounds+30+years+after+the+introduction+of+cisplatin:+Implications+for+the+treatment+of+ovarian+cancer.">Platinum compounds 30 years after the introduction of cisplatin: Implications for the treatment of ovarian cancer.</a> Gynecologic Oncology. 112, 275-281 (2009).</li><li>Bruijnincx, P. C., Sadler, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+trends+for+metal+complexes+with+anticancer+activity.">New trends for metal complexes with anticancer activity.</a> Current Opinion in Chemical Biology. 12, 197-206 (2008).</li><li>Ott, I., Gust, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non+platinum+metal+complexes+as+anti-cancer+drugs.">Non platinum metal complexes as anti-cancer drugs.</a> Archiv der Pharmazie (Weinheim. 340, 117-126 (2007).</li><li>Desoize, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metals+and+metal+compounds+in+cancer+treatment.">Metals and metal compounds in cancer treatment.</a> Anticancer Research. 24, 1529-1544 (2004).</li><li>Jakupec, M. A., Galanski, M., Arion, V. B., Hartinger, C. G., Keppler, B. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antitumour+metal+compounds:+more+than+theme+and+variations.">Antitumour metal compounds: more than theme and variations.</a> Dalton Transactions. , 183-194 (2008).</li><li>Mel&#233;ndez, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Titanium+complexes+in+cancer+treatment.">Titanium complexes in cancer treatment.</a> Critical Reviews in Oncology/Hematology. 42, 309-315 (2002).</li><li>Evangelou, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vanadium+in+cancer+treatment.">Vanadium in cancer treatment.</a> Critical Reviews in Oncology/Hematology. 42, 249-265 (2002).</li><li>Djordjevic, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antitumor+activity+of+vanadium+compounds.">Antitumor activity of vanadium compounds.</a> Metal ions in biological systems. 31, 595-616 (1995).</li><li>Caruso, F., Rossi, M., Pettinari, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anticancer+titanium+agents.">Anticancer titanium agents.</a> Expert Opinion on Therapeutic Patents. 11, 969-979 (2001).</li><li>Caruso, F., Rossi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antitumor+titanium+compounds.">Antitumor titanium compounds.</a> Mini-Review in Medicinal Chemistry. 4, 49-60 (2004).</li><li>Kostova, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Titanium+and+vanadium+complexes+as+anticancer+agents.">Titanium and vanadium complexes as anticancer agents.</a> Anti-Cancer Agents in Medicinal Chemistry. 9, 827-842 (2009).</li><li>Tshuva, E. Y., Ashenhurst, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytotoxic+Titanium(IV)+Complexes:+Renaissance.">Cytotoxic Titanium(IV) Complexes: Renaissance.</a> European Journal of Inorganic Chemistry. , 2203-2218 (2009).</li><li>Buettner, K. M., Valentine, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bioinorganic+Chemistry+of+Titanium.">Bioinorganic Chemistry of Titanium.</a> Chemical Reviews. 112, 1863-1881 (2012).</li><li>Meker, S., Margulis-Goshen, K., Weiss, E., Magdassi, S., Tshuva, E. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+antitumor+activity+of+highly+resistant+salan-titanium(IV)+complexes+in+nanoparticles:+an+identified+active+species.">High antitumor activity of highly resistant salan-titanium(IV) complexes in nanoparticles: an identified active species.</a> Angewandte Chemie International Edition in English. 51, 10515-10517 (2012).</li><li>Reytman, L., Braitbard, O., Tshuva, E. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Highly+cytotoxic+vanadium(V)+complexes+of+salan+ligands;+insights+on+the+role+of+hydrolysis.">Highly cytotoxic vanadium(V) complexes of salan ligands; insights on the role of hydrolysis.</a> Dalton Transactions. 41, 5241-5247 (2012).</li><li>Tzubery, A., Tshuva, E. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytotoxicity+and+Hydrolysis+of+trans-Ti(IV)+Complexes+of+Salen+Ligands:+Structure-Activity+Relationship+Studies.">Cytotoxicity and Hydrolysis of trans-Ti(IV) Complexes of Salen Ligands: Structure-Activity Relationship Studies.</a> Inorganic Chemistry. 51, 1796-1804 (2012).</li><li>Tshuva, E. Y., Peri, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modern+cytotoxic+titanium(IV)+complexes;+Insights+on+the+enigmatic+involvement+of+hydrolysis.">Modern cytotoxic titanium(IV) complexes; Insights on the enigmatic involvement of hydrolysis.</a> Coordination Chemistry Reviews. 253, 2098-2115 (2009).</li><li>Shavit, M., Peri, D., Manna, C. M., Alexander, J. S., Tshuva, E. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Active+cytotoxic+reagents+based+on+non-metallocene+non-diketonato+well-defined+C-2-symmetrical+titanium+complexes+of+tetradentate+bis(phenolato)+ligands.">Active cytotoxic reagents based on non-metallocene non-diketonato well-defined C-2-symmetrical titanium complexes of tetradentate bis(phenolato) ligands.</a> Journal of the American Chemical Society. 129, 12098-12099 (2007).</li><li>Mosmann, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+Colorimetric+Assay+for+Cellular+Growth+and+Survival+-+Application+to+Proliferation+and+Cyto-Toxicity+Assays.">Rapid Colorimetric Assay for Cellular Growth and Survival - Application to Proliferation and Cyto-Toxicity Assays.</a> Journal of Immunological Methods. 65 (83), 55-63 (1983).</li><li>Ahmadian, S., Barar, J., Saei, A. A., Fakhree, M. A. A., Omidi, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+Toxicity+of+Nanogenomedicine+in+MCF-7+Cell+Line:+MTT+assay.">Cellular Toxicity of Nanogenomedicine in MCF-7 Cell Line: MTT assay.</a> Journal of Visualized Experiments. (26), e1191 (2009).</li><li>Gonzalez, R. J., Tarloff, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+hepatic+subcellular+fractions+for+Alamar+blue+and+MTT+reductase+activity.">Evaluation of hepatic subcellular fractions for Alamar blue and MTT reductase activity.</a> Toxicology in Vitro. 15, 257-259 (2001).</li><li>Denizot, F., Lang, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+Colorimetric+Assay+for+Cell-Growth+and+Survival+-+Modifications+to+the+Tetrazolium+Dye+Procedure+Giving+Improved+Sensitivity+and+Reliability.">Rapid Colorimetric Assay for Cell-Growth and Survival - Modifications to the Tetrazolium Dye Procedure Giving Improved Sensitivity and Reliability.</a> Journal of Immunological Methods. 89, 271-277 (1986).</li><li>Alley, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Feasibility+of+drug+screening+with+panels+of+human+tumor+cell+lines+using+a+microculture+tetrazolium+assay.">Feasibility of drug screening with panels of human tumor cell lines using a microculture tetrazolium assay.</a> Cancer Research. 48, 589-601 (1988).</li><li>Weyermann, J., Lochmann, D., Zimmer, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+practical+note+on+the+use+of+cytotoxicity+assays.">A practical note on the use of cytotoxicity assays.</a> International Journal of Pharmaceutics. 288, 369-376 (2005).</li><li>Chmura, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Group+4+complexes+with+aminebisphenolate+ligands+and+their+application+for+the+ring+opening+polymerization+of+cyclic+esters.">Group 4 complexes with aminebisphenolate ligands and their application for the ring opening polymerization of cyclic esters.</a> Macromolecules. 39, 7250-7257 (2006).</li><li>Sebaugh, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Guidelines+for+accurate+EC50/IC50+estimation.">Guidelines for accurate EC50/IC50 estimation.</a> Pharmaceutical Statistics. 10, 128-134 (2011).</li><li>Yung, W. K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+Chemosensitivity+Testing+and+its+Clinical-Application+in+Human+Gliomas.">In vitro Chemosensitivity Testing and its Clinical-Application in Human Gliomas.</a> Neurosurgical Review. 12, 197-203 (1989).</li><li>McCarthy, N. J., Evan, G. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Current Topics in Developmental Biology. 36, 259-278 (1997).</li></ol>

Yazarlar, hiçbir rakip mali çıkarları var beyan.

Bu yazıda tarif edildiği gibi bir yöntem, biyolojik hücre canlılığı deneyi ile, kimyasal sentez birleştirir. Canlı hücreler ile ilgili herhangi bir biyolojik yöntemlerle olduğu gibi, laminar bir kaput çalışma ve steril organik çözücülerin kullanılması dahil olmak üzere steril koşullar korumak için çok önemlidir. Ayrıca, hidrolitik olarak stabil olmayan metal bazlı ilaçların hazırlanması ve depolanması için olan bir eldiven kutusu ya da bir Schlenk hat teknikleri kullanılması gerekmektedir, atıl koşullar altında gerçekleştirilmelidir. Atıl ortamında çalışmak için tekniğinin seçimi bir eldiven kutusu mevcudiyetine çok bağlıdır. Biri varsa, oda sıcaklığı koşulları gerektiren tüm sentezleri gerçekleştirmek için son derece uygundur. Isıtma gerektiren sentezi normal olarak bir Schlenk şişesi içinde kutunun dışına alınır ve bir Schlenk hattına bağlıdır. Bir eldiven kutusu mevcut olmadığı durumlarda, tüm manipülasyonlar bir Schle üzerinde özenle seçilmiş cam ile yapılabilirnk hattı, kuru atmosferini korumak için vakum / inert gaz (N 2 veya Ar) manipülasyonlar kullanırken. Sitotoksisite değerlendirmesi işleminde, bu deney boyunca hücrelerin görünümünü incelemek gerekir. Deneyin başlamasından önce, sağlıklı yapışık hücre büyüme ortamı açık olmalıdır. Bir kontamine kültür bulanık görünecektir. Ayrıca, tripsin-EDTA ile hücrelerin inkübasyonundan sonra, hücreler şişeden ayırmak gerekir ve ortama bırakın. Hücrelerin en şişeye yapışık kalır ise, daha fazla şişe, birkaç dakika boyunca inkübe edilmelidir. Böyle bir ölçüm uzunluğu beş gündür. Yapışan hücreler apoptosise devam etmek için hücreleri sağlamak amacıyla test edilen ilaçlar ile hücrelerin inkübasyon için takmak ve hücre plakasına gelmesini ve üç gün için Bir gün izin verir. Bir ek gün MTT ile inkübasyon için gereklidir. Tüm bu ölçüm teknint ölçümler bağımsız olduğu için sırayla, farklı hücre kültürlerinden başlayarak farklı günde en az iki kez daha tekrar edilmelidir. Bu tarifnamede tarif edildiği gibi, teknik yapışık hücre tipleri üzerinde uygulanır. Nonadherent hücre tipleri üzerinde bu yöntemi uygulamak için çeşitli ayarlamalar yapılmalıdır. Artık, hücreler takmak ve hücre plakasına gelmesini ve bu nedenle plakanın hazırlanması ve test edilen ilaçların ek aynı gün gerçekleştirilebilir için bir gün ayırmak için gereklidir. Buna ek olarak, ölçüm, nihai bir adım olarak, sadece MTT ile hücrelerin inkübasyondan sonra, çözelti orta ve izopropanol eklenmesi sökülmeden önce santrifüj edilmelidir. Bu hücre büyümesi inhibisyonu için alternatif bir yöntemi ile hayati hücrelerinin belirteci olarak MTT kullanımını değiştirmek de mümkündür, burada işaretleyici olan hücre inkübasyon süresi t daha kısadırMTT 30 ile şapka. Işaretleyici seçerken dikkate diğer bir faktör test ilacın 27 etki olası mekanizmasıdır. MTT deneyi mitokondri metabolik aktivitesi hakkında bilgi verir, ve enzimatik reaksiyonlar bağımlı olduğundan, bu enzim inhibitörleri tarafından etkilenmiş olabilir. MTT deneyi aracılığıyla sitotoksisite değerlendirilmesi ile ilaç hazırlama kombinasyonu yeni metal-bazlı sitotoksik ilaçların geliştirilmesi için etkili bir yöntemi temsil eder. Bununla birlikte, bu yöntem, hücre ölümü mekanizmasına, ilaç ve olası biyolojik hedefleri etkilenen hücre döngüsünün faz ile ilgili herhangi bir bilgi sağlamaz. Bu amaçlar için, bu tür Propidium iyodür (PI) Uptake Tahlili ve Hücre Döngüsü Analizi gibi ek yöntemler, 31, yapılmalıdır.

Kemoterapi hala çeşitli kanser hastalıkları için klinikte kullanılan tedavilerin temel derslerden biridir ve araştırma böylece büyük miktarda yeni ve geliştirilmiş antikanser ilaçlar geliştirmek amacı ile dünya çapında yapılır. Bu tür çalışmalar, daha çok in vitro sitotoksik biyolojik özelliklerinin değerlendirilmesi ardından bileşiklerin tasarımı ve hazırlığı ile, kimyasal düzeyinde başlar. Hücre canlılığı, hücresel aktivite 1-2 ile ilgili bilgi sağlayacak çeşitli deneyleri ile değerlendirilebilir. Cisplatin yaygın olarak testis ve yumurtalık kanserlerinde 3-4 için ağırlıklı olarak etkili bir tedavi olarak kabul edilir bir kemoterapötik ajan olarak kullanılan bir platin kompleksi bir örnektir. Bununla birlikte, dar bir aktivite yelpazesi ve ciddi yan etkiler diğer kuvvetli geçiş metali komplekslerinin 5-8 çalışmaları tetikler. Diğerlerinin arasında, titanyum (IV) ve vanadyum (V) kompleksleri, yüksek aktivite ümit verici sonuçlar göstermiştir ve azaltılmıştoksisite 9-16. Ti (IV) kompleksleri nedeniyle bu özelliklerinden sisplatin sonrasında klinik denemeler girmek için ilk idi, ancak onlar yüzünden formülasyon zorluklar ve hidrolitik istikrarsızlığa denemeler başarısız olmuştur. Su direnci 15,17-21 yüksek anti-kanser aktivitesi birleşebilmektedir, bu metal komplekslerinin gelişmiş türevlerini geliştirmek için geçerli bir ihtiyaç vardır. Ti (IV) ve V hazırlanmasında bir sorun (V) kompleksleri öncü reaktifleri hidrolitik kararsızlık anlamına gelir ve bu nedenle, atıl bir atmosfer muhafaza edilmelidir. Ti (IV) ve V (V) bileşiklerinin hazırlanması Bir eldiven kutusu ya da bir Schlenk hat teknikleri kullanılarak N, 2 veya Ar koşullar altında gerçekleştirilmektedir. Tahlil - anti-kanser etkinliğinin değerlendirilmesi için yaygın bir yöntem, MTT ((4,5-Dimetiltiazolil) -2,5-difeniltetrazolyum bromür 3) üzerine dayanmaktadır. Bu deney, Mosmann 1983 sunulan bir kolorimetrik canlılık deneyidir22. Bu, son derece iyi çalışılmış ve karakterize edici özelliği, ve nedeniyle hassas, hız ve hücre çizgilerinin çeşitliliği uygulanacak yeteneği yeni sitotoksik bileşiklerin etkinliğini değerlendirmek zaman yüksek verimli olarak kabul edilir. Bu deney, bu canlılığı yaşayabilir hücrelerin maruz kaldığı MTT molekülün renk değişikliğine dayanmaktadır. Canlı hücre sayısı ile orantılıdır emme, ve muamele edilmemiş kontroller ile karşılaştırıldığında ölçülmesi, test edilen bileşiğin, hücre büyüme inhibisyonu yetenekleri değerlendirilmesini sağlar. MTT kolorimetrik deneyi, 96 kuyucuklu bir plaka biçiminde 23 olarak gerçekleştirilmiştir. Hücreler, test edilen ilaç eklenmesinden önce kuyularda, bir ön kuluçka gerektirebilir. Inkübasyon saatleri hücre hattı özelliklerine bağlı olarak 0-24 saat arasında değişebilir. Hücreler, genellikle, ilaç aktivitesine bağlı olarak 24-96 saat boyunca ilaca maruz kalmaktadır. MTT çözeltisi daha sonra bağırma muamele edilmiş hücrelere ilave edilirow MTT (Şekil 1) 24 canlı hücrelerde işlevsel olan mitokondrial ve sitosolik enzimlerin çeşitli mor formazan indirgenir. MTT molekül ölü hücre ya da kırmızı kan hücrelerinin (metabolik açıdan aktif olmayan hücre), dalak hücreleri (dinlenme hücreleri) ve konkanavalin A ile uyarılan lenfosit (aktif hücreler) 22 ile azaltılmaz. MTT formazan çökeltiler ile inkübasyon 3-4 saat sonra. Formazan oluşumu inkübasyon 0.5 saat sonra başlar, ama en iyi sonuçlar için en az 3 saat 22 boyunca MTT hücreleri ortaya çıkarmak için en iyisidir. Sonuç olarak, yetiştirme ortamı çıkarıldı ve DMSO da 26 kullanılabilir olmasına rağmen, formazan, organik bir çözücü, tercihen de 25 izopropanol içinde eritilir. Ortamın ortadan kaldırılması büyüme ortamı içinde çok yaygın olan fenol kırmızı, bu yana doğru sonuçlar elde etmek, ve proteinler absorbans ölçümü 25 engelleyebilir çökeltilmesi için çok önemlidir. Ne zaman formazan çözelti, çözeltinin absorbansı, bir mikro-plaka okuyucu spektrofotometre kullanılarak ölçülmüştür, homojen ulaşır. 550 nm&#39;de absorbans, oyuk başına 200-50.000 hücre aralığındaki hücre sayısı ile doğru orantılıdır ve bu nedenle hücre çok küçük miktarlarda 22 tespit edilebilir. Absorbans ilaç ile tedavi sonrasında kalan canlı hücre miktarı belirtir ve ilaca maruz bırakılmamış kontrol hücreler absorbans ile karşılaştırılır. Uygun yazılım ile sonuçların analizi IC 50 (inhibisyon konsantrasyon,% 50) içerir ve bunların değerlerinin istatistiksel hatalar ölçümün kaç kez tekrar göre. MTT deneyi doğruluğu ve göreli basitliği nedeniyle yeni antikanser bileşikleri, taranması için sitotoksisite çalışmalarında yaygın olarak yaygındır. Enzimatik reaksiyon bağlı olan MTT tahlili kullanarak, ancak, bir çeşitli enzim inhibitörleri MTT An indirgenmesini etkileyebilir dikkat edilmesi gereken hususlaryanlış sonuçlara yol 27 d. Buna ek olarak, MTT deneyi, ilacın 2 sitotoksik aktivitesinin moleküler mekanizma hakkında herhangi bir bilgi sağlamaz.

<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Reagent/Material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum (FBS)</td>
			<td>Biological Industries</td>
			<td>04-007-1A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hexane AR</td>
			<td>Gadot</td>
			<td>830122313</td>
			<td>Dried using a solvent drying system</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HT-29 cell line</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>HTB-38</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isopropanol AR</td>
			<td>Gadot</td>
			<td>830111370</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-glutamine</td>
			<td>Biological Industries</td>
			<td>03-020-1B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MTT</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M5655-1G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/streptomycin antibiotics</td>
			<td>Biological Industries</td>
			<td>03-031-1B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI-1640 with phenol red with L-glutamine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>R8758</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI without phenol red</td>
			<td>Biological Industries</td>
			<td>01-103-1A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tetrahydrofuran (THF) AR</td>
			<td>Gadot</td>
			<td>830156391</td>
			<td>dried using a solvent drying system</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ti(OiPr)4</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>205273-500ML</td>
			<td>moisture sensitive</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin/EDTA</td>
			<td>Biological Industries</td>
			<td>03-052-1B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VO(OiPr)3</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>404926-10G</td>
			<td>moisture sensitive</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>12-channel pipette 30-300 &#956;l</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>12-channel pipette 5-50 &#956;l</td>
			<td>Finnpipette</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>75 cm2 flask</td>
			<td>NUNC</td>
			<td>156472</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96-well plate with lid (flat bottom)</td>
			<td>NUNC</td>
			<td>167008</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CO2 Incubator</td>
			<td>Binder</td>
			<td>APT.line C150</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Counter chamber</td>
			<td>Marienfeld-Superior</td>
			<td>650030</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf vial</td>
			<td>KARTELL</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glove box</td>
			<td>M. Braun</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laminar flow hood</td>
			<td>ADS LAMINAIRE</td>
			<td>OPTIMALE 12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microplate reader spectrophotometer</td>
			<td>Bio-Tek</td>
			<td>El-800</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>Eclipse TS100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette 20-200 &#956;l</td>
			<td>Finnpipette</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette 5-50 &#956;l</td>
			<td>Finnpipette</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

anticancer metal complexes: synthesis and cytotoxicity evaluation by the mtt assay

Titanyum (IV) ve vanadyum (V) komplekslerinin yüksek ölçüde kuvvetli anti-kanser ajanlardır. Bunların sentezinde bir meydan okuma hidrolitik kararsızlık anlamına gelir, bu nedenle bunların hazırlanması bir inert atmosfer altında yapılmalıdır. Bu komplekslerin Antikanser aktivitesinin değerlendirilmesi MTT deneyi ile elde edilebilir. MTT deneyi, bu canlı hücreler maruz kaldığı zaman formazan MTT molekülün enzimatik azalma dayanan kolorimetrik canlılık deneyidir. Indirgeme sonucu, MTT molekülünün bir renk değişimdir. Bir kontrole göre emme ölçümleri bileşik, anti-kanser aktivitesi ve IC50 değerlerine çevrilmiştir bir test edilen bileşiğin, değişen konsantrasyonları ile tedavi sonrası canlı kalan kanser hücrelerinin yüzdesini belirlemek. MTT deneyi doğruluğu, hız ve nispi basitliği nedeniyle sitotoksisite çalışmalarda yaygın olarak yaygındır. Burada biz preHücre plakaların hazırlanması hücreleri ile inkübe bileşiklerin dahil olmak üzere hava duyarlı metal bazlı ilaç ve hücre canlılığı ölçümlerin sentezi için ayrıntılı bir protokol gönderilen, MTT deneyi ve IC50 değerlerinin tayini kullanılarak canlılığı ölçümleri.

Bu kompleksler, yerleşik prosedürlere 18,28 ve saflığı NMR ve element analizi ile değerlendirilebilir göre hazırlanmıştır. MTT deneyi alınan veriler, bileşiğin 18,21 sitotoksisitesini değerlendirmek için analiz edilir. İlk olarak, tüm diğer değerleri işlenmemiş kontrol absorbans değerinin çıkarılması gerçekleştirilir. İkinci olarak, çözücü THF kontrol değeri bileşiği herhangi bir büyüme inhibe edici olarak ilave edildi,% 100 canlılığı ayarlanır. Diğer tüm değerler kontrolüne göre canlılığının yüzdesi haline dönüşür. Konsantrasyonları uygulanmış ve hesaplanan nispi yüzde canlılığı, bir değişken eğimli (dört parametre) modeli bir doğrusal olmayan regresyon (Şekil 4, Tablo 1) 29 dayalı olarak, IC50 değerlerini belirlemek için, GraphPad Prism yazılımı (ya da eşdeğeri) eklenir. Ölçümler, bir dizi yapılmalıdırHer plato üzerinde en az üç puan ve üç puan eğimi (Şekil 3, grafik A) tanımlamak için: Bir daha nokta dağılımını gösteren bir grafik üretecek konsantrasyonlarının. Yüksek konsantrasyonlarda veya düşük konsantrasyonlarda (Şekil 3, grafik B) de yetersiz ölçümler IC50 değerlerinin belirlenmesi için gerekli olan eğrinin doğrusal olmayan regresyon uyum zarar, ve bunun sonucu olarak, bunların doğruluğunu azalacaktır. Rölatif IC50 değerleri, 29 fit doğrusal olmayan regresyon ile tespit edildiği üzere, ölçülen maksimal ve minimal hücre canlılığı arasındaki orta noktaya (değil olarak hesaplanır test edilen bileşiğin, mümkün hücre büyüme inhibisyonu% 50 yol açan konsantrasyonlara karşılık mutlaka 100 ve% 0%, bkz. Şekil 3, grafik C,). Örneğin, bir bileşik, düşük bir konsantrasyonda hücre büyümesi kontrolüne nispetle sadece% 60 (ve% 0 ise inhibes), onun nispi IC50 kontrolüne% 30 nisbetle inhibisyon yol açan konsantrasyonudur. Hata değerleri, cinsel yolla bulaşan hastalıklar olarak alınan bilgi, ortalama IC50 değerinden farklı tekrarlar için elde edilen sonuçların bir sapma yansıtmalıdır. Buna ek olarak, maksimum hücre büyümesi inhibisyon (%) değerleri asgari dayanıklılığı ölçülmüştür% 100 çıkarılarak hesaplanmıştır olarak rapor edilmelidir. Alternatif bir analizi mutlak IC 50 değerlerinin belirlenmesini içerebilir. Bunlar bağımsız olarak ölçülen maksimal ve minimal hücre canlılığının,% 100 kontrol% 50 hücre büyümesi inhibisyon nisbetle yol açan konsantrasyonlara karşılık gelir. Bu değerler de, doğrusal olmayan bir regresyon modeli ile elde edilebilir. Bu değerler, mutlak olarak, maksimum hücre büyümesi inhibisyon değerleri rapor isteğe bağlıdır. Şekil 3&#39;te de görüldüğü gibi, grafik C, bileşik maksimum hücre g açısından nispeten düşük bir aktiviteye sahip olabilirrowth engelleme özellikleri, (a eğrisi) ve yine mutlak birden değil sadece düşük olan bir nispi IC50 değeri gösterirler, ama aynı zamanda% 100 gelişme inhibisyonu (eğri b) yakın ulaşan bir bileşiğin daha. Bu, her türlü bilgi IC 50 değerleri ile birlikte eğri sunmak için bu nedenle son derece değerlidir. Protokolde tarif edilen deneylerin sonuçları (Şekil 4, Tablo 1) kontrol ederken, bu cisplatin açıktır ve LTI (i O Pr) 2 ve VO (i O Pr) kompleksleri, yüksek ölçüde aktiftir. Verilen bir bileşiğin yakın maksimal inhibisyon değeri% 100, daha yakın nispi IC50 değeri, mutlak bir etmektir olduğu da belirgindir. Farklı bileşikler arasında IC50 değerleri karşılaştırıldığında, Ti (IV) &#39;ün kompleks en yüksek sitotoksisiteye sahiptir ve IC50 değerleri, sisplatin ve V (V), karmaşık göre daha düşüktür. Ancak, free ligand sergiler belirgin, aktivitesi azaltılmış onun kompleksleri için olduğu gibi, farklı konsantrasyonlarda ligandın ilave edildikten sonra bu yana, hücre canlılığı önemli ölçüde çökmez. Bu komplekslerin yüksek anti-kanser aktivitesi metal merkezleri dayanır olduğunu garanti eder. Serbest ligand ancak% 50 hücre büyümesi inhibisyonu ulaştığı için, mutlak IC50 değeri, doğru olarak elde edilemez. Aslında, bir göreli değer de yeterince nedeniyle küçük aktivitesi için yazılım ile hesaplanan ve yüksek hata değerleri karşılık gelen olamazdı. Bununla birlikte, göreceli bir IC 50 değeri H 2 L için elde edilmiş olsa dahi, bu nedenle göreli IC 50 değerleri (ve tasvir ile birlikte maksimal inhibisyon değerinin rapor oluşturma, kayda değer bir aktivite yansıyan olmazdı açıktır Eğrinin) esas. <table border="1"><tbody><tr><td></td><td> Rölatif IC50 (uM) </td><td> Mutlak IC50 (uM) </td><td> Maksimal inhibisyonu (%) </td></tr><tr><td> LVO (O i Pr) </td><td> 13 ± 3 </td><td> 19 ± 8 </td><td> 81% </td></tr><tr><td> LTi (O i-Pr) 2 </td><td> 3 ± 1 </td><td> 5 ± 3 </td><td> 87% </td></tr><tr><td> H 2 L </td><td> - </td><td> - </td><td> 47% </td></tr><tr><td> Sisplatin </td><td> 14 ± 5 </td><td> 13 ± 6 </td><td> % 91 </td></tr></tbody></table> Tablo 1. Test edilen bileşikler için Sitotoksisite sonuçları: Göreli ve mutlak IC50 (uM) ve V (V), kompleks LVO (O i Pr), Ti (IV ile, üç günlük bir kuluçka döneminden sonra, HT-29 hücreleri üzerinde en yüksek hücre büyümesi inhibisyon değerleri ) kompleksi LTi (O i-Pr) 2, serbest ligand L 2, H ve sisplatin; 18,21 IC50 değerleri l ortalama olarak verilmektedir<html> cinsel yolla bulaşan hastalıklar gibi hata değerleri ile doğu üç kere üç tekrarlar. <img alt="Şekil 1" fo:content-width="6in" fo:src="/files/ftp_upload/50767/50767fig1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50767/50767fig1.jpg" /> Şekil 1. Formazana mitokondrial ve sitozolik enzimler tarafından MTT indirgeme. <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/50767/50767fig1large.jpg" target="_blank">büyük rakam görmek için buraya tıklayın</a> . <img alt="Şekil 2," fo:content-width="6in" fo:src="/files/ftp_upload/50767/50767fig2highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50767/50767fig2.jpg" /> Şekil 2.. V hazırlanması (V) ve Ti (IV) 18,28 kompleksleri. <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/50767/50767fig2large.jpg" target="_blank">büyük rakam görmek için buraya tıklayın</a> . t &quot;fo: keep-together.within-page =&quot; always &quot;&gt; <img alt="Şekil 3," fo:content-width="6in" fo:src="/files/ftp_upload/50767/50767fig3highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50767/50767fig3.jpg" /> Şekil 3.. Hücre canlılığı ölçüm sonuçlarından örnekler. <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/50767/50767fig3large.jpg" target="_blank">büyük rakam görmek için buraya tıklayın</a> . <img alt="Şekil 4," fo:content-width="3.5in" fo:src="/files/ftp_upload/50767/50767fig4highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50767/50767fig4.jpg" /> Şekil 4. (V) kompleksi LVO (O i-Pr) (mavi), Ti (IV) kompleksi LTi (O i-Pr) 2 V tatbik konsantrasyonuna HT-29 hücre canlılığının Bağımlılığı (: test edilen bileşikler için, bağımlı sitotoksisite eğrileri Doz kırmızı), serbest ligand H 2 L (siyah) ve cisplatin (yeşil), üç günlük bir kuluçka döneminden sonra, olduğu gibi ohata tarafından yansıtıldığı gibi en az üç kez, üç tekrarlar dan btained 18,21 değerleri.

Watch this Scientific Journal Video about Anticancer Metal Complexes: Synthesis and Cytotoxicity Evaluation by the MTT Assay at JoVE.com

Anticancer Metal Complexes: Synthesis and Cytotoxicity Evaluation by the MTT Assay

Havaya duyarlı bir titanyum ve vanadyum anti-kanser ajanlarının sentezi için bir yöntem olup, MTT testi ile insan kanser hücre çizgisi karşı sitotoksik aktivitenin değerlendirilmesi ile birlikte tarif edilmiştir.

MTT deneyi ile sentez ve Sitotoksisite Değerlendirilmesi: Anticancer Metal Kompleksleri

Titanium (IV) and vanadium (V) complexes are highly potent anticancer agents. A challenge in their synthesis refers to their hydrolytic instability; ...

anticancer-metal-complexes-synthesis-cytotoxicity-evaluation-mtt

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Chemistry

57.3K Görüntüleme.  The Hebrew University of Jerusalem.  Havaya duyarlı bir titanyum ve vanadyum anti-kanser ajanlarının sentezi için bir yöntem olup, MTT testi ile insan kanser hücre çizgisi karşı sitotoksik aktivitenin değerlendirilmesi ile birlikte tarif edilmiştir. 

Video: Anticancer Metal Complexes: Synthesis and Cytotoxicity Evaluation by the MTT Assay

Structure and Coordination Determination of Peptide-metal Complexes Using 1D and 2D 1H NMR

Copper (I) binding by metallochaperone transport proteins prevents copper oxidation and release of the toxic ions that may participate in harmful redox reactions. The Cu (I) complex of the peptide model of a Cu (I) binding metallochaperone protein, which includes the sequence MTCSGCSRPG (underlined is conserved), was determined in solution under inert conditions by NMR spectroscopy.
NMR is a widely accepted technique for the determination of solution structures of proteins and peptides. Due to difficulty in crystallization to provide single crystals suitable for X-ray crystallography, the NMR technique is extremely valuable, especially as it provides information on the solution state rather than the solid state. Herein we describe all steps that are required for full three-dimensional structure determinations by NMR. The protocol includes sample preparation in an NMR tube, 1D and 2D data collection and processing, peak assignment and integration, molecular mechanics calculations, and structure analysis. Importantly, the analysis was first conducted without any preset metal-ligand bonds, to assure a reliable structure determination in an unbiased manner.

Structure and Coordination Determination of Peptide-metal Complexes Using 1D and 2D 1H NMR

The NMR-solution structure of a metallochaperone model peptide with Cu (I) was determined, and a detailed protocol from sample preparation and 1D and 2D data collection to a three-dimensional structure is described.

Copper (I) binding by metallochaperone transport proteins prevents copper oxidation and release of the toxic ions that may participate in harmful redox ...

Kimya

Amide Coupling Reaction for the Synthesis of Bispyridine-based Ligands and Their Complexation to Platinum as Dinuclear Anticancer Agents

Amide coupling reactions can be used to synthesize bispyridine-based ligands for use as bridging linkers in multinuclear platinum anticancer drugs. Isonicotinic acid, or its derivatives, are coupled to variable length diaminoalkane chains under an inert atmosphere in anhydrous DMF or DMSO with the use of a weak base, triethylamine, and a coupling agent, 1-propylphosphonic anhydride. The products precipitate from solution upon formation or can be precipitated by the addition of water. If desired, the ligands can be further purified by recrystallization from hot water. Dinuclear platinum complex synthesis using the bispyridine ligands is done in hot water using transplatin. The most informative of the chemical characterization techniques to determine the structure and gross purity of both the bispyridine ligands and the final platinum complexes is 1H NMR with particular analysis of the aromatic region of the spectra (7-9 ppm). The platinum complexes have potential application as anticancer agents and the synthesis method can be modified to produce trinuclear and other multinuclear complexes with different hydrogen bonding functionality in the bridging ligand.

This protocol describes the use of amide coupling reactions of isonicotinic acid and diaminoalkanes to form bridging ligands suitable for use in the synthesis of multinuclear platinum complexes, which combine aspects of the anticancer drugs BBR3464 and picoplatin.

Çekirdekli Antikanser Maddeleri olarak Platinum bispiridin tabanlı Ligandların ve kompleks Sentezlenmesi için kullanılan amid bağlantı reaksiyon

Amide coupling reactions can be used to synthesize bispyridine-based ligands for use as bridging linkers in multinuclear platinum anticancer drugs. ...

Synthesis and Characterization of Functionalized Metal-organic Frameworks

Metal-organic frameworks have attracted extraordinary amounts of research attention, as they are attractive candidates for numerous industrial and technological applications. Their signature property is their ultrahigh porosity, which however imparts a series of challenges when it comes to both constructing them and working with them. Securing desired MOF chemical and physical functionality by linker/node assembly into a highly porous framework of choice can pose difficulties, as less porous and more thermodynamically stable congeners (e.g., other crystalline polymorphs, catenated analogues) are often preferentially obtained by conventional synthesis methods. Once the desired product is obtained, its characterization often requires specialized techniques that address complications potentially arising from, for example, guest-molecule loss or preferential orientation of microcrystallites. Finally, accessing the large voids inside the MOFs for use in applications that involve gases can be problematic, as frameworks may be subject to collapse during removal of solvent molecules (remnants of solvothermal synthesis). In this paper, we describe synthesis and characterization methods routinely utilized in our lab either to solve or circumvent these issues. The methods include solvent-assisted linker exchange, powder X-ray diffraction in capillaries, and materials activation (cavity evacuation) by supercritical CO2 drying. Finally, we provide a protocol for determining a suitable pressure region for applying the Brunauer-Emmett-Teller analysis to nitrogen isotherms, so as to estimate surface area of MOFs with good accuracy.

Synthesis, activation, and characterization of intentionally designed metal-organic framework materials is challenging, especially when building blocks are incompatible or unwanted polymorphs are thermodynamically favored over desired forms. We describe how applications of solvent-assisted linker exchange, powder X-ray diffraction in capillaries and activation via supercritical CO2 drying, can address some of these challenges.

Fonksiyonlu Sentezi ve Karakterizasyonu Metal-organik Altyapıları

Metal-organic frameworks have attracted extraordinary amounts of research attention, as they are attractive candidates for numerous industrial and ...

Metal-free Synthesis of Ynones from Acyl Chlorides and Potassium Alkynyltrifluoroborate Salts

Ynones are a valuable functional group and building block in organic synthesis. Ynones serve as a precursor to many important organic functional groups and scaffolds. Traditional methods for the preparation of ynones are associated with drawbacks including harsh conditions, multiple purification steps, and the presence of unwanted byproducts. An alternative method for the straightforward preparation of ynones from acyl chlorides and potassium alkynyltrifluoroborate salts is described herein. The adoption of organotrifluoroborate salts as an alternative to organometallic reagents for the formation of new carbon-carbon bonds has a number of advantages. Potassium organotrifluoroborate salts are shelf stable, have good functional group tolerance, low toxicity, and a wide variety are straightforward to prepare. The title reaction proceeds rapidly at ambient temperature in the presence of a Lewis acid without the exclusion of air and moisture. Fair to excellent yields may be obtained via reaction of various aryl and alkyl acid chlorides with alkynyltrifluoroborate salts in the presence of boron trichloride.

The goal of this manuscript is to demonstrate a straightforward method for the preparation of ynones from acyl chloride and potassium alkynyltrifluoroborate salt starting materials. The one-pot reaction proceeds rapidly in the presence of boron trichloride without exclusion of air and moisture.

Asil klorür ve potasyum Alkynyltrifluoroborate Tuzlarından Ynones Metal içermeyen sentezi

Ynones are a valuable functional group and building block in organic synthesis. Ynones serve as a precursor to many important organic functional groups ...

The Synthesis, Characterization and Reactivity of a Series of Ruthenium N-triphosPh Complexes

Herein we report the synthesis of a tridentate phosphine ligand N(CH2PPh2)3 (N-triphosPh) (1) via a phosphorus based Mannich reaction of the hydroxylmethylene phosphine precursor with ammonia in methanol under a nitrogen atmosphere. The N-triphosPh ligand precipitates from the solution after approximately 1 hr of reflux and can be isolated analytically pure via simple cannula filtration procedure under nitrogen. Reaction of the N-triphosPh ligand with [Ru3(CO)12] under reflux affords a deep red solution that show evolution of CO gas on ligand complexation. Orange crystals of the complex [Ru(CO)2{N(CH2PPh2)3}-&#954;3P] (2) were isolated on cooling to RT. The 31P{1H} NMR spectrum showed a characteristic single peak at lower frequency compared to the free ligand. Reaction of a toluene solution of complex 2 with oxygen resulted in the instantaneous precipitation of the carbonate complex [Ru(CO3)(CO){N(CH2PPh2)3}-&#954;3P] (3) as an air stable orange solid. Subsequent hydrogenation of 3 under 15 bar of hydrogen in a high-pressure reactor gave the dihydride complex [RuH2(CO){N(CH2PPh2)3}-&#954;3P] (4), which was fully characterized by X-ray crystallography and NMR spectroscopy. Complexes 3 and 4 are potentially useful catalyst precursors for a range of hydrogenation reactions, including biomass-derived products such as levulinic acid (LA). Complex 4 was found to cleanly react with LA in the presence of the proton source additive NH4PF6 to give [Ru(CO){N(CH2PPh2)3}-&#954;3P{CH3CO(CH2)2CO2H}-&#954;2O](PF6) (6).

The Synthesis, Characterization and Reactivity of a Series of Ruthenium N-triphosPh Complexes

Ruthenium phosphine complexes are widely used for homogeneous catalytic reactions such as hydrogenations. The synthesis of a series of novel tridentate ruthenium complexes bearing the N-triphos ligand N(CH2PPh2)3 is reported. Additionally, the stoichiometric reaction of a dihydride Ru&#8211;N-triphos complex with levulinic acid is described.

Rutenyum bir Serisi Sentezi, Karakterizasyonu ve Tepkime<em&gt; K</em&gt; -triphos<sup&gt; Ph</sup&gt; Kompleksi

Herein we report the synthesis of a tridentate phosphine ligand N(CH2PPh2)3 (N-triphosPh) (1) via a phosphorus based Mannich reaction of the ...

Reverse Microemulsion-mediated Synthesis of Monometallic and Bimetallic Early Transition Metal Carbide and Nitride Nanoparticles

A reverse microemulsion is used to encapsulate monometallic or bimetallic early transition metal oxide nanoparticles in microporous silica shells. The silica-encapsulated metal oxide nanoparticles are then carburized in a methane/hydrogen atmosphere at temperatures over 800 &#176;C to form silica-encapsulated early transition metal carbide nanoparticles. During the carburization process, the silica shells prevent the sintering of adjacent carbide nanoparticles while also preventing the deposition of excess surface carbon. Alternatively, the silica-encapsulated metal oxide nanoparticles can be nitridized in an ammonia atmosphere at temperatures over 800 &#176;C to form silica-encapsulated early transition metal nitride nanoparticles. By adjusting the reverse microemulsion parameters, the thickness of the silica shells, and the carburization/nitridation conditions, the transition metal carbide or nitride nanoparticles can be tuned to various sizes, compositions, and crystal phases. After carburization or nitridation, the silica shells are then removed using either a room-temperature aqueous ammonium bifluoride solution or a 0.1 to 0.5 M NaOH solution at 40-60 &#176;C. While the silica shells are dissolving, a high surface area support, such as carbon black, can be added to these solutions to obtain supported early transition metal carbide or nitride nanoparticles. If no high surface area support is added, then the nanoparticles can be stored as a nanodispersion or centrifuged to obtain a nanopowder.

A &#8220;removable ceramic coating method&#8221; is presented in visual format for the synthesis of non-sintered and metal-terminated monometallic and bimetallic early transition metal carbide and nitride nanoparticles with tunable sizes and crystal structures.

Monometalik ve Bimetalik Erken Geçiş Metal Carbide ve Nitrür Nanopartiküller Ters Mikroemülsiyon aracılı sentezi

A reverse microemulsion is used to encapsulate monometallic or bimetallic early transition metal oxide nanoparticles in microporous silica shells. The ...

Synthesis of a Water-soluble Metal&#8211;Organic Complex Array

We demonstrate a method for the synthesis of a water-soluble multimetallic peptidic array containing a predetermined sequence of metal centers such as Ru(II), Pt(II), and Rh(III). The compound, named as a water-soluble metal-organic complex array (WSMOCA), is obtained through 1) the conventional solution-chemistry-based preparation of the corresponding metal complex monomers having a 9-fluorenylmethyloxycarbonyl (Fmoc)-protected amino acid moiety and 2) their sequential coupling together with other water-soluble organic building units on the surface-functionalized polymeric resin by following the procedures originally developed for the solid-phase synthesis of polypeptides, with proper modifications. Traces of reactions determined by mass spectrometric analysis at the representative coupling steps in stage 2 confirm the selective construction of a predetermined sequence of metal centers along with the peptide backbone. The WSMOCA cleaved from the resin at the end of stage 2 has a certain level of solubility in aqueous media dependent on the pH value and/or salt content, which is useful for the purification of the compound.

A potential general method for the synthesis of water-soluble multimetallic peptidic arrays containing a predetermined sequence of metal centers is presented.

suda çözünür bir metal-organik kompleks dizi sentezi

We demonstrate a method for the synthesis of a water-soluble multimetallic peptidic array containing a predetermined sequence of metal centers such as ...

Palladium N-Heterocyclic Carbene Complexes: Synthesis from Benzimidazolium Salts and Catalytic Activity in Carbon-carbon Bond-forming Reactions

Detailed and generalized protocols are presented for the synthesis and subsequent purification of four palladium N-heterocyclic carbene complexes from benzimidazolium salts. Detailed and generalized protocols are also presented for testing the catalytic activity of such complexes in arylation and Suzuki-Miyaura cross-coupling reactions. Representative results are shown for the catalytic activity of the four complexes in arylation and Suzuki-Miyaura type reactions. For each of the reactions investigated, at least one of the four complexes successfully catalyzed the reaction, qualifying them as promising candidates for catalysis of many carbon-carbon bond-forming reactions. The protocols presented are general enough to be adapted for the synthesis, purification and catalytic activity testing of new palladium N-heterocyclic carbene complexes.

Palladium N-Heterocyclic Carbene Complexes: Synthesis from Benzimidazolium Salts and Catalytic Activity in Carbon-carbon Bond-forming Reactions

Detailed and generalized protocols are presented for the synthesis and subsequent purification of four palladium N-heterocyclic carbene complexes from benzimidazolium salts. The complexes were tested for catalytic activity in arylation and Suzuki-Miyaura reactions. For each reaction investigated, at least one of the four complexes successfully catalyzed the reaction.

palladyum<em&gt; K</em&gt; -Heterosiklik Karben Kompleksleri: Benzimidazolyum Tuzlarından Sentez ve Karbon-karbon Bağ Oluşturma Reaksiyonlarında Katalitik Aktivite

Detailed and generalized protocols are presented for the synthesis and subsequent purification of four palladium N-heterocyclic carbene complexes from ...

Synthesis and Evaluation of a Ruthenium-based Mitochondrial Calcium Uptake Inhibitor

We detail the synthesis and purification of a mitochondrial calcium uptake inhibitor, [(OH2)(NH3)4Ru(&#181;-O)Ru(NH3)4(OH2)]5+. The optimized synthesis of this compound commences from [Ru(NH3)5Cl]Cl2 in 1 M NH4OH in a closed container, yielding a green solution. Purification is accomplished with cation-exchange chromatography. This compound is characterized and verified to be pure by UV-vis and IR spectroscopy. The mitochondrial calcium uptake inhibitory properties are assessed in permeabilized HeLa cells by fluorescence spectroscopy.

A protocol for the synthesis, purification, and characterization of a ruthenium-based inhibitor of mitochondrial calcium uptake is presented. A procedure to evaluate its efficacy in permeabilized mammalian cells is demonstrated.

Sentez ve rutenyum tabanlı mitokondrial kalsiyum alımını inhibitörü değerlendirilmesi

We detail the synthesis and purification of a mitochondrial calcium uptake inhibitor, [(OH2)(NH3)4Ru(&#181;-O)Ru(NH3)4(OH2)]5+. The optimized synthesis of ...

Synthesis and Performance Characterizations of Transition Metal Single Atom Catalyst for Electrochemical CO2 Reduction

This protocol presents both the synthesis method of the Ni single atom catalyst, and the electrochemical testing of its catalytic activity and selectivity in aqueous CO2 reduction. Different from traditional metal nanocrystals, the synthesis of metal single atoms involves a matrix material that can confine those single atoms and prevent them from aggregation. We report an electrospinning and thermal annealing method to prepare Ni single atoms dispersed and coordinated in a graphene shell, as active centers for CO2 reduction to CO. During the synthesis, N dopants play a critical role in generating graphene vacancies to trap Ni atoms. Aberration-corrected scanning transmission electron microscopy and three-dimensional atom probe tomography were employed to identify the single Ni atomic sites in graphene vacancies. Detailed setup of electrochemical CO2 reduction apparatus coupled with an on-line gas chromatography is also demonstrated. Compared to metallic Ni, Ni single atom catalyst exhibit dramatically improved CO2 reduction and suppressed H2 evolution side reaction.

Synthesis and Performance Characterizations of Transition Metal Single Atom Catalyst for Electrochemical CO2 Reduction

Here, we present a protocol for the synthesis and electrochemical testing of transition metal single atoms coordinated in graphene vacancies as active centers for selective carbon dioxide reduction to carbon monoxide in aqueous solutions.

Sentez ve elektrokimyasal CO2 azaltılması için geçiş metalleri tek Atom katalizör performans karakterizasyonu

This protocol presents both the synthesis method of the Ni single atom catalyst, and the electrochemical testing of its catalytic activity and selectivity ...