Yazarlar yukarıda anlatılan çalışmalarda katıldıkları için Yunnan eyaleti, Çin Halk Cumhuriyeti ve Agboville, Fildişi Sahili, toplumların minnettarız. Biz protokollerin test ve yürütülmesine yardımcı olmuştur yerel saha ekipleri borçluyuz. Video çekimi sırasında ona yardım için mikroskobik görüntüleri, laboratuar desteği ve Stefanie Krauth için Hanspeter Marti ve ekibi sağlamak için Yvette Endriss: Biz İsviçre Tropikal ve Halk Sağlığı Enstitüsü şu meslektaşlarına özellikle minnettarız. Son olarak, yararlı görüş bir dizi için iki anonim hakeme teşekkür ederim.

1. Kato-Katz Tekniği <ol><li> Bir mikroskop lamı üzerine dışkı 41.7 miligram (mg) tutmak için bir deliği olan bir standart Kato-Katz şablonu yerleştirin. </li><li> Gazete ya da alüminyum folyo bir parça üzerine taze bir dışkı örneği 2-3 gram (g) Scoop ve elek buna üstüne tel veya plastik örgü bir parça basın. </li><li> Küçük plastik bir spatula kullanarak, kafes kapalı elenmiş malzeme kazıyın ve tamamen onunla Kato-Katz şablon boşluğu doldurmak. Aşırı dışkı materyali kaldırmak için, spatula ile deliğin içeriği yıkacağız. </li><li> Dikey Şimdi mikroskop lamı bağlı kalarak fekal madde bozmadan şablonu kaldırın. Şablon ve spatula deterjanla suda temizlenir ve tekrar kullanılabilir. </li><li> Selofan bir parça koyun, mikroskop lamı üzerine dışkı örneği üzerinden, en az 24 saat (sa) için gliserin-malakit yeşil çözüm önceden ıslatılır. </li><li> Kalın bir smear içine fekal madde yaymak için, hafifçe bir temiz mikro basınÖrnek slayt karşı kapsamında slayt, eşit mikroskop slayt genişliği biraz daha küçük çaplı bir daire içinde malzeme dağıtmak. </li><li> Slayt slaytlar doğrudan güneş ışığından uzak tutulmalıdır sırasında 30-60 dakika (dk) için temizlemek için izin ver. Sonra, sistematik bir ışık mikroskobu (40-100x büyütme) altında kalın yayma inceleyin. STH yumurta sayısını ve türler (yani, A.lumbricoides, T.trichiura ve kancalı kurt) bunları tabakalandırmak. Not, diğer parazit yumurtaları (örneğin, Schistosoma mansoni) da bu yöntem ile tespit edilebilir ve sayılmış ve ayrı ayrı kaydedilmelidir. </li><li> Enfeksiyonun şiddeti standardize edilmiş bir tahminini elde etmek için, geleneksel olarak dışkı (EPG) gram başına yumurta sayısı olarak ifade edilen, 24 (24 x 41.7 mg ≈ 1 g) ile yumurta sayısı çarpın. </li></ol> 2. Baermann Tekniği <ol><li> Zekâ kapalı, cam huni ve lastik bir boru eklemek tutabilecek bir stand kurmahuni altına ha klibi. </li><li> Tıbbi gazlı bez parçası ile huni ve katman, bir elek veya bir koni şeklinde tel ekran bir parça yerleştirin. </li><li> Musluk suyu ile huni doldurun ve set-up tüm sızıntı olmadığından emin olmak. </li><li> Tıbbi gazlı bez ortasında üzerine taze dışkı 20-30 g boşaltınız ve tamamen su altında olduğundan emin olun. Gerekirse daha fazla su ekleyin. Örneklem üzerinde tıbbi gazlı bez katlayın. </li><li> Aşağıda itibaren, 2 saat süreyle huni de yapay ışık parlayacak. </li><li> Nazikçe lastik boru üzerinde küçük serbest bırakarak bir santrifüj tüpü içine huni içindeki suyun alt bölümünün 50 mililitre (mL) boşaltılır. </li><li> 5 dakika boyunca 600 xg&#39;de (göreli merkezkaç kuvveti) de toplanan su santrifüjleyin ve dikkatli sediman bozmadan süpernatant dökmek. Tüp içinde son birkaç damla saklayın. </li><li> Bir mikroskop lamı üzerine çözüm sediment ve pipet 2 damla yeniden askıya ve slayt incelemekışık mikroskobunda (türler onay için algılama ve 100-400x büyütme 40x büyütme). S. Birinci evre larvaları (L1) stercoralis canlı ve aktif mikroskop altında hareket ettirin. </li></ol> 3. 20 m Mekik Koşu Testi <ol><li> 20 m Yassı ve düz koşu kurs ölçün ve koniler ile işaretleyin. </li><li> Test katılımcının göğüs yaklaşık 18 bilek ve ilgili verici bir kalp hızı monitörü giymek Yardım. Bu ekipman katılımcının kalp hızı test öncesi ve sonrası ölçülen izin verir ve böylece katılımcının maksimal efor sarf olup olmadığını izler. </li><li> 20-m tur sınırlayan önceden kaydedilmiş ses sinyallerinin hızını izleyerek ders ileri geri çalıştırmak için katılımcı söyleyin. Saatte 8,5 kilometre (km / saat) çalışan bir hız, bir 0.5 km eşdeğeri / her dakika HR 20 m aralıklarla artar gösteren sinyallerin frekans ile başlayarak. </li><li> Inci olunde katılımcı yeni bir 20-m aralıklarla bir sinyal sesi duyulur her saati ve bir sonraki sinyal gelmeden önce onu bitirir. </li><li> Katılımcı durdur o / o iki ardışık 20 m aralıklarla hızını takip etmek başarısız olursa. </li><li> Katılımcının katılımcının yaş ve cinsiyet ile birlikte, tamamen tamamlanmış son aralığı için belirtilen en yüksek çalışma hızı kaydedin. </li><li> Testin sonunda elde kalp hızı çocuğun maksimal kalp hızı 19 olduğunu doğrulayın. Bu kalp hızı ulaşılamaması halinde, çocuğun maksimal efor sarf olmayabilir ve bu nedenle test tekrar edilmelidir. </li><li> 3.248 * Yaş (yıl) + - VO 2 max = 31.025 + 3.238 * hız (km / saat): Léger ve arkadaşları tarafından ileri sürülen bir denklem kullanarak katılımcının maksimum aerobik kapasitesi (VO2max), tahmin 0,1536 * hız (km / saat) * Yaş (yıl olarak). </li></ol> 4. Temsilcisi Sonuçlar AçısındanKato-Katz tekniği ile STH teşhis, farklı parazit yumurtaları benzersiz özellikleri çoğu türün 20 tanımlanması için izin verir. A.lumbricoides ve yumurta (Şekil 1, yaklaşık 45-75 mikrometre (mikron) uzun ve 35-50 mikron geniş) T.trichiura (Şekil 2) ve kancalı kurt (Şekil 3) yumurtaları daha kalın kabuk duvarlara sahiptir. Olmayan bir döllenmiş yumurta bu dış ceket yoksun ve genel biraz uzun ve daha büyük iken A.lumbricoides bir döllenmiş yumurta (Şekil 1), bu altın kahverengi görünmesini sağlar bir dış albüminli ceket vardır. T.trichiura (Şekil 2, yaklaşık 50 mikron uzunluğunda ve 22 mikron genişliğinde) yumurtaları uzun ve ayrı kutup fişleri var. Kancalı kurt yumurta (Şekil 3, yaklaşık olarak 64-76 um uzunluğunda ve 36-40 mikron genişliğinde), diğer yandan da, hücreler yoğun bir küme etrafında bir açık halka, ardından bir çok ince bir duvar vardıryumurta merkezinde. S.stercoralis L 1 larvaları (Şekil 4), yaklaşık 180-380 mikron uzun ve çok kısa bir ağız boşluğu var. Bir farklı genital primordium&#39;un (Şekil 4 mavi ok ile işaretli) gözlenen ve larvaları (Şekil 4 kırmızı ok ile işaretli) ve kuyruk keskin bir uca sahiptir edilebilir. Çocukların fiziksel uygunluk üzerindeki STH enfeksiyonların gerçek etkisi hala 13,14,15 tartışılıyor edilirken, bu noktada onların etkisini hiçbir temsili bir sonuç var. 20-m mekik tarafından işletilen deney Sonuçların yorumlanması çeşitli yollarla gerçekleştirilebilir. Çocukların fiziksel uygunluk yaş ve cinsiyet, diğer potansiyel olarak ilgili sağlık koşulları, sosyoekonomik ve kültürel alışkanlıkları açısından benzer enfekte ve enfekte olmayan denekler arasında mukayese edilebilir. Bu, bir kesitsel 13,14,15 yapılabilir neredeSTH bulaşma durumu ve enfekte ve enfekte olmayan çocukların spor fiziksel belli bir zaman noktasında değerlendirilir. Okul çağındaki çocukların fiziksel uygunluk anthelminthic / plasebo tedavi öncesi ve sonrası değerlendirilir randomize kontrollü bir çalışma tasarımı takip ederken kanıtların gücü hem kısa hem de uzun vadeli değerlendirilmesi için izin daha yüksek olacaktır. Bir başka STH enfeksiyonlar ve fiziksel uygunluk yoğunluğu arasında olası bir doz-yanıt ilişkisi tespit ve fiziksel fitness multiparasitism 1 farklı düzeylerde karşılaştırmak için deneyebilirsiniz. Yapı ve arkadaşları 15 tarafından sunulan çalışmada, gibi VO 2 max tasvir fiziksel uygunluk, anlamlı T.trichiura ile enfekte olmayan çocuklarda (Şekil 5) ile karşılaştırıldığında T.trichiura ile enfekte çocuklarda azalmış olduğu tespit edildi . <img alt="Şekil 1" src="/files/ftp_upload/3966/3966fig1.jpg" /> Figu<html> . A.lumbricoides yumurta yeniden 1 mikroskobik görüntüleri: döllenmiş (A) ve (B) 500x büyütme altında olmayan döllenmiş. Ölçek bar = 50 mikron. <img alt="Şekil 2," src="/files/ftp_upload/3966/3966fig2.jpg" /> Şekil 2. 500x büyütme altında bir T.trichiura yumurta mikroskobik görüntüsü. Ölçek bar = 50 mikron. <img alt="Şekil 3" src="/files/ftp_upload/3966/3966fig3.jpg" /> Şekil 3. 500x büyütme altında bir kancalı kurt yumurta mikroskobik görüntüsü. Ölçek bar = 50 mikron. <img alt="Şekil 4," src="/files/ftp_upload/3966/3966fig4.jpg" /> Şekil 4. 250x büyütme altında bir S.stercoralis L 1 larva mikroskobik görüntüsü. Oklar kuyruk (kırmızı) ve genital primordium&#39;un (mavi) gösterir. Ölçek bar = 100 mikron. d/3966/3966fig5.jpg &quot;/&gt; Şekil 5. T. ile enfekte olmayan çocukların fiziksel uygunluk seviyesine göre T.trichiura ile enfekte çocukların fiziksel uygunluk düzeyini gösteren grafiği trichiura.

<ol>
	<li>Steinmann, P., Utzinger, J., Du, Z. W., Zhou, X. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiparasitism:+a+neglected+reality+on+global,+regional+and+local+scale.">Multiparasitism: a neglected reality on global, regional and local scale.</a> Advances in Parasitology. 73, 21-50 (2010).</li><li>Bethony, J., Brooker, S., Albonico, M., Geiger, S., Loukas, A., Diemert, D., Hotez, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+soil-transmitted+helminth+infections:+ascariasis,+trichuriasis,+and+hookworm.">The soil-transmitted helminth infections: ascariasis, trichuriasis, and hookworm.</a> Lancet. 367, 1521-1532 (2006).</li><li>Hotez, P. J., Molyneux, D. H., Fenwick, A., Kumaresan, J., Ehrlich Sachs, S., Sachs, J. D., Savioli, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Control+of+neglected+tropical+diseases.">Control of neglected tropical diseases.</a> New England Journal of Medicine. 357, 1018-1027 (2007).</li><li>Chan, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+global+burden+of+intestinal+nematode+infections-fifty+years+on.">The global burden of intestinal nematode infections-fifty years on.</a> Parasitology Today. 13, 438-443 (1997).</li><li>Olsen, A., van Lieshout, L., Marti, H., Polderman, T., Polman, K., Steinmann, P., Stothard, R., Thybo, S., Verweij, J. J., Magnussen, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Strongyloidiases+-+the+most+neglected+of+the+neglected+tropical+diseases.">Strongyloidiases - the most neglected of the neglected tropical diseases.</a> Transactions of the Royal Society of Tropical Medicine and Hygiene. 103, 967-972 (2009).</li><li>Becker, S. L., Sieto, B., Silue, K. D., Adjossan, L., Kone, S., Hatz, C., Kern, W. V., N'Goran, E. K., Utzinger, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnosis,+clinical+features,+and+self-reported+morbidity+of+Strongyloides+stercoralis+and+hookworm+infection+in+a+co-endemic+setting.">Diagnosis, clinical features, and self-reported morbidity of Strongyloides stercoralis and hookworm infection in a co-endemic setting.</a> PLoS Neglected Tropical Diseases. 5, e1292 (2011).</li><li>World Health Organization. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Action+against+worms.">Action against worms.</a> WHO Newsletter. (11), (2008).</li><li>Montresor, A., Crompton, D. W. T., Hall, A., Bundy, D. A. P., Savioli, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Guidelines+for+the+evaluation+of+soil-transmitted+helminthiasis+and+schistosomiasis+at+community+level.">Guidelines for the evaluation of soil-transmitted helminthiasis and schistosomiasis at community level.</a> World Health Organization. , (1998).</li><li>Garc&#237;a, L. S., Bruckner, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Diagnostic medical parasitology. , (2001).</li><li>Brooker, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estimating+the+global+distribution+and+disease+burden+of+intestinal+nematode+infection:+adding+up+the+numbers+-+a+review.">Estimating the global distribution and disease burden of intestinal nematode infection: adding up the numbers - a review.</a> International Journal for Parasitology. 40, 1137-1144 (2010).</li><li>Stephenson, L. S., Latham, M. C., Kinoti, S. N., Kurz, K. M., Brigham, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improvements+in+physical+fitness+of+Kenyan+schoolboys+infected+with+hookworm,+Trichuris+trichiura+and+Ascaris+lumbricoides+following+a+single+dose+of+albendazole.">Improvements in physical fitness of Kenyan schoolboys infected with hookworm, Trichuris trichiura and Ascaris lumbricoides following a single dose of albendazole.</a> Transactions of the Royal Society of Tropical Medicine and Hygiene. 84, 277-282 (1990).</li><li>Stephenson, L. S., Latham, M. C., Adams, E. J., Kinoti, S. N., Pertet, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Physical+fitness,+growth+and+appetite+of+Kenyan+school+boys+with+hookworm,+Trichuris+trichiura+and+Ascaris+lumbricoides+infections+are+improved+four+months+after+a+single+dose+of+albendazole.">Physical fitness, growth and appetite of Kenyan school boys with hookworm, Trichuris trichiura and Ascaris lumbricoides infections are improved four months after a single dose of albendazole.</a> Journal of Nutrition. 123, 1036-1046 (1993).</li><li>Bustinduy, A. L., Thomas, C. L., Fiutem, J. J., Parraga, I. M., Mungai, P. L., Muchiri, E. M., Mutuku, F., Kitron, U., King, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measuring+fitness+of+Kenyan+children+with+polyparasitic+infections+using+the+20-meter+shuttle+run+test+as+a+morbidity+metric.">Measuring fitness of Kenyan children with polyparasitic infections using the 20-meter shuttle run test as a morbidity metric.</a> PLoS Neglected Tropical Diseases. 5, e1213 (2011).</li><li>M&#252;ller, I., Coulibaly, J. T., F&#252;rst, T., Knopp, S., Hattendorf, J., Krauth, S. J., Stete, K., Righetti, A. A., Glinz, D., Yao, A. K., P&#252;hse, U., N'Goran, E. K., Utzinger, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+schistosomiasis+and+soil-transmitted+helminth+infections+on+physical+fitness+of+school+children+in+C&#244;te+d'Ivoire.">Effect of schistosomiasis and soil-transmitted helminth infections on physical fitness of school children in C&#244;te d'Ivoire.</a> PLoS Neglected Tropical Diseases. 5, e1239 (2011).</li><li>Yap, P., Du, Z. W., Chen, R., Zhang, L. P., Wu, F. W., Wang, J., Wang, X. Z., Zhou, H., Zhou, X. N., Utzinger, J., Steinmann, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Soil-transmitted+helminth+infections+and+physical+fitness+in+school-aged+Bulang+children+of+southwest+China:+results+from+a+cross-sectional+survey.">Soil-transmitted helminth infections and physical fitness in school-aged Bulang children of southwest China: results from a cross-sectional survey.</a> Parasites and Vectors. 5, 50 (2012).</li><li>L&#233;ger, L. A., Mercier, D., Gadoury, C., Lambert, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+multistage+20+metre+shuttle+run+test+for+aerobic+fitness.">The multistage 20 metre shuttle run test for aerobic fitness.</a> Journal of Sports Sciences. 6, 93-101 (1988).</li><li>Tomkinson, G. R., L&#233;ger, L. A., Olds, T. S., Cazorla, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Secular+trends+in+the+performance+of+children+and+adolescents+(1980-2000):+an+analysis+of+55+studies+of+the+20+m+shuttle+run+test+in+11+countries.">Secular trends in the performance of children and adolescents (1980-2000): an analysis of 55 studies of the 20 m shuttle run test in 11 countries.</a> Sports Medicine. 33, 285-300 (2003).</li><li>Mahon, A. D., Marjerrison, A. D., Lee, J. D., Woodruff, M. E., Hanna, L. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluating+the+prediction+of+maximal+heart+rate+in+children+and+adolescents.">Evaluating the prediction of maximal heart rate in children and adolescents.</a> Research Quarterly for Exercise and Sport. 81, 466-471 (2010).</li><li>Bogitsh, B. J., Carter, C. E., Oeltmann, T. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Human Parasitology. , (2011).</li><li>Steinmann, P., Zhou, X. N., Du, Z. W., Jiang, J. Y., Wang, L. B., Wang, X. Z., Li, L. H., Marti, H., Utzinger, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Occurence+of+Strongyloides+stercoralis+in+Yunnan+province,+China,+and+comparison+of+diagnostic+methods.">Occurence of Strongyloides stercoralis in Yunnan province, China, and comparison of diagnostic methods.</a> PLoS Neglected Tropical Diseases. 1, e75 (2007).</li><li>Martin, L. K., Beaver, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+Kato+thick-smear+technique+for+quantitative+diagnosis+of+helminth+infections.">Evaluation of Kato thick-smear technique for quantitative diagnosis of helminth infections.</a> American Journal of Tropical Medicine and Hygiene. 17, 382-391 (1968).</li><li>Dacombe, R. J., Crampin, A. C., Floyd, S., Randall, A., Ndhlovu, R., Bickle, Q., Fine, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Time+delays+between+patient+and+laboratory+selectively+affect+accuracy+of+helminth+diagnosis.">Time delays between patient and laboratory selectively affect accuracy of helminth diagnosis.</a> Transactions of the Royal Society of Tropical Medicine and Hygiene. 101, 140-145 (2007).</li><li>Knopp, S., Mgeni, A. F., Khamis, I. S., Steinmann, P., Stothard, J. R., Rollinson, D., Marti, H., Utzinger, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnosis+of+soil-transmitted+helminths+in+the+era+of+preventive+chemotherapy:+effect+of+multiple+stool+sampling+and+use+of+different+diagnostic+techniques.">Diagnosis of soil-transmitted helminths in the era of preventive chemotherapy: effect of multiple stool sampling and use of different diagnostic techniques.</a> PloS Neglected Tropical Diseases. 2, e331 (2008).</li></ol>

Çıkar çatışması ilan etti.

Bu yazıda anlatılan üç protokol Yunnan eyaletinin Bulang etnik azınlık 21 üyeleri arasında ve Afrika 6,13,14 farklı yerlerinde Çin Halk Cumhuriyeti&#39;nin güney-batı kısmında test ve idam edilmiştir. Kato-Katz tekniği için çeşitli şablonlar vardır. Delik boyutu ayrı her fekal madde ayrı bir miktarda teslim edecek. EPGs hesaplanması için, EPG tahmine ulaşmak için doğru faktörü ile yumurta sayısı sayılır çarpmak için, böylece bu nedenle şablonun birim bilmek gereklidir. Ayrıca, kancalı kurt inceleme altında topluluk içinde mevcut olduğunda, (30 dakikalık bir süre temizledikten sonra, ancak 60 dakikalık bir süre içinde maksimum açıklığa) kısa bir süre sonra hazırlık slaytlar okumak için gereklidir. Temel nedeni yüksek sıcaklıklarda, kancalı kurt yumurtaları hızla 22 parçalanır olmasıdır. Çalışmanın par fekal üretim arasındaki süregörüşmeci ve numunelerin incelenmesi de 3 saat ya da daha fazla tanı hookworm 23 Kato-Katz tekniğinin duyarlılığı% 50 azalmaya yol açabilir bir aralık kadar önemlidir. Son olarak, özellikle düşük yoğunluklu STH enfeksiyonları, birden fazla dışkı örnekleri Gönüllülerden elde edilmeli ve çift ya da üç nüsha Kato-Katz kalın yayma ile alanlarda, Kato-Katz tekniğinin tanısal duyarlılığını artırmak için her dışkı numunesinden hazırlanmış olmalıdır 7,24. Infektif larvaların mevcut ve bu nedenle, eldiven takılmalıdır olabilir gibi deney yapılırken Baermann tekniği ile ilgili olarak, dikkat alınması gerekir. Baermann tekniği diğer toplama teknikleri oranla önemli ölçüde yüksek hassasiyet gösterir ve kültür yöntemlerine göre daha az zahmetli olsa da, önemli eksiklikler bulunmaktadır. Örneğin, yeni dışkı maddesinin büyük bir miktarı hastanın küçük dışkı numuneleri bir sorun olan, gereklidir.Öte yandan, büyük bir dışkı örneği düşük yoğunluklu enfeksiyonları 9 larva algılama şansını artırabilir. Buna ek olarak, bu tür kancalı kurt ya da Trichostrongylus türleri gibi diğer nematodlar, larvaları., Mevcut olabilir riski vardır, bu nedenle dikkatli bir mikroskopik inceleme garanti edilir. Aerobik fitness değerlendirmeler için VO2max ölçüm doğrudan ve dolaylı yolu vardır. Doğrudan protokolleri ekshale hava hacmi ve gaz konsantrasyonlarını ölçebilir koşu bandı, bisiklet ergometresi, ve diğer özel ve hantal ekipman gerektirir. Böyle bir yaklaşım, gelişmekte olan dünyada bir kaynak kısıtlı kırsal ortamda mümkün değildir. Bu tür ayarlar için, örneğin 20 metrelik mekik koşusu testi gibi dolaylı yollardan, tercih edilen yöntemlerdir. Dolaylı yöntemler doğrudan yöntemler kadar doğru asla rağmen, Leger ve arkadaşları tarafından kurulan 20 metrelik mekik koşusu testi yüksek tekrarlanabilirlik (r = 0.89) ve validit göstermiştirbir koşu bandı 16 maksimal oksijen alımı karşı y. Ayrıca, araştırmacı ve katılımcı oranı daha düşük olabilir ve birden fazla katılımcı insan kaynakları ve zaman tasarrufu, aynı zamanda da test gerçekleştirebilir. Kalp hızı monitörleri genellikle bu tür testler 13,16 kullanılmaz. Ancak, bunların kullanımı araştırmacı katılımcı testinde maksimal efor sarf olup olmadığına ilişkin ek bilgi elde etmesini sağlar. Sonunda, onlar çalışan hız ve tabii aşina böylece katılımcıların ilk birkaç aralıklarla bir deneme yapalım önerilir. Sonuç olarak, biz standart protokoller sonrasında yukarıda bahsedilen yöntemleri bir arada, STH enfeksiyonlar ve henüz bir bilimsel okul çağındaki çocukların, yönetilebilir ve ekonomik bir şekilde fiziksel uygunluk yaygınlığı ve yoğunluğu değerlendirmesi için izin inanıyoruz.

Not: Bu listede Malzeme jenerik ve farklı kaynaklardan elde edilebilir. <table border="1"><tbody><tr><td> Reaktif Adı </td><td> Şirket </td><td> Katalog numarası </td><td> Yorumlar </td></tr><tr><td> Kato-Katz kiti 1.5 mm kalınlığında şablon milimetre 6 (mm) (çap) bir delik [400 plastik şablonlar; 400 plastik spatula; 80 mesh boyutu naylon ekranın 20 m rolü; hidrofilik selofanla 20 m rolü, 34 kalın mikron.] </td><td> Vestergaard Frandsen </td><td></td><td> Gliserin-malakit yeşil çözüm bu kit dahil değildir ancak herhangi bir kimyasal tedarikçisi satın alınabilir unutmayın. </td></tr><tr><td> Cam huni [8 santimetre (cm) genişliğinde ve 6 cm derinliğinde] </td><td></td><td></td><td> Baermann tekniği için cam huni su, yaklaşık 60 ml tutmak gerekir. Thkauçuk hortum ve gazlı e boyutu kullanılan cam huni tipine bağlıdır. </td></tr><tr><td> Biyolojik Mikroskop </td><td> Olimpos </td><td> CX21LED/CX21 </td><td></td></tr><tr><td> Santrifüj </td><td> Şangay Tıbbi Cihazlar Grubu </td><td> 80 - 2T </td><td></td></tr><tr><td> Önceden kaydedilmiş sinyalleri </td><td> Bitworks Tasarım </td><td> Takım Bleep Testi Sürüm 1.3.1 </td><td> iPhone uygulaması </td></tr><tr><td> Kalp hızı monitörü </td><td> POLAR </td><td> FT1 </td><td> İzle ve verici </td></tr></tbody></table>

determining soil-transmitted helminth infection status and physical fitness of school-aged children

Toprak bulaşan helmint (STH) enfeksiyonları sık görülür. Nitekim, 1 milyardan fazla kişi başta yoksulluğun hakim ve hijyen davranışları, su temini ve sanitasyon çoğu zaman yetersiz 1,2 vardır. Ascaris lumbricoides, Trichuris trichiura ve iki kancalı kurt türlerinin Ancylostoma duodenale ve Necator gelişmekte olan dünyada, etkilenen americanus, en yaygın STHS 3 vardır. Kancalı kurt hastalığı, Askariasise ve trichuriasis nedeniyle tahmini global yükü, 10.5 22.1, ve sırasıyla 6.4 milyon sakatlığa ayarlanmış yaşam yılı (DALY), 4. Ayrıca, yaklaşık 30-100000000 kişi belki de önemli bir halk sağlığı etkisi 5,6 sebep Strongyloides stercoralis, küresel öneme sahip en ihmal edilen STH türleri ile enfekte olmaktadır. Çoklu-tür enfeksiyonlar (yani, tek bir bireyde barındıran farklı STHS) yaygındır, ve enfeksiyonlar lin olmuştur<html> düşük verimlilik ve gelişmekte olan ülkelerde 1,3 böylece ekonomik görünümüne KED. Ortak STHS tanısı için Dünya Sağlık Örgütü (WHO) gibi enfeksiyonların sıklığını ve yoğunluğunu belirlemek için oldukça basit bir yöntemdir Kato-Katz tekniği 7,8, önerir. Bu enfekte konularda onların dışkısının geçmesi parazit yumurtaları tespitini kolaylaştırır. S.stercoralis tanısı ile ilgili olarak, bulunmamaktadır basit ve doğru bir araç bulunmuyor. Baermann tekniğin teşhis için en yaygın olarak kullanılan bir yöntemdir. Baermann tekniğin ardındaki prensip larvalar phototactic 9 gibi, aktif S.stercoralis larvaları bir ışıklı taze dışkı örneği dışına göç olduğunu. Bu az gelişmiş laboratuar malzemeleri gerektirir ve kültür ve immunolojik yöntemler 5 daha az zaman alıcı olduğunu. t &quot;gibi karın ağrısı, ishal ve kaşıntı, anemi gibi kronik semptomlar için, altında ve yetersiz beslenme, bilişsel 10 olarak akut ancak ortak belirtiler. gelen STH enfeksiyonları aralığı ile ilişkili&gt; morbidite belirtileri genellikle belirsiz olduğundan ve ince, genellikle fark edilmeden gitmek, etkilenen bireyler tarafından normal bir durum olarak kabul edilir, ya da belirli bir ortamda daha sık olabilir diğer hastalıkların belirtileri olarak kabul edilir. Dolayısıyla, STH enfeksiyonların gerçek yükünün değerlendirmesi tarafından hafife alınmaktadır düşünülebilir genellikle nüfus tabanlı anketlerinde olduğu gibi araçları kendi kendine ilan ettiği belirtileri dayanarak. 1980&#39;lerin sonu ve 1990&#39;ların başında, Stephenson ve arkadaşları 6-12 yaş 11,12 yaş erkek çocukların fiziksel uygunluk düşürücü STH enfeksiyonlarının olasılığı vurgulanır. Bilimsel araştırma Bu satır yakın 13,14,15 yeni bir ivme kazanmıştır. 20-metre (m) mekik koşusu testi geliştirildid Leger et al. 16 tarafından doğrulanır ve çocuk 17 aerobik ölçmek için dünya çapında kullanılır. Testi standardize etmek kolaydır ve 20 m uzunluğunda ve düz koşu sahası ve bir ses kaynağı mevcuttur her yerde yapılabilir, kaynak kısıtlı ayarları 13 kullanımı cazip hale. STH enfeksiyonlar okul çağındaki çocukların fiziksel uygunluk üzerinde bir etkiye sahip olup olmadığının değerlendirilmesi girişimleri kolaylaştırmak ve standardize etmek için, biz yürütmek ve henüz, doğru ve tekrarlanabilir sonuçlar sağlamak için basit STH enfeksiyonlar veya tedbir kondisyon teşhis yöntemleri sunuyoruz. Bu STH enfeksiyonların sağlık etkileri ile ilgili yeni kanıtlar oluşturmak için yardımcı olacaktır.

Watch this Scientific Journal Video about Determining Soil-transmitted Helminth Infection Status and Physical Fitness of School-aged Children at JoVE.com

Determining Soil-transmitted Helminth Infection Status and Physical Fitness of School-aged Children

Toprak yolla bulaşan helmint (STHS) ile oluşan kronik enfeksiyon Bodurluk ve büyüyen çocukta harcıyorsun, malabsorpsiyon neden olur. Bu nedenle, bu enfeksiyonlar aynı zamanda çocukların fiziksel uygunluk azaltmak kaçınılmazdır. Burada, STHS ve çocukların fiziksel uygunluk değerlendirilmesi için 20 metrelik mekik koşusu testi tanı için iki teknik görselleştirmek.

Belirlenmesi Toprak bulaşan Helmint Enfeksiyon Durum ve Okul Çağındaki Çocuklarda Fiziksel Uygunluk

Soil-transmitted helminth (STH) infections are common. Indeed, more than 1 billion people are affected, mainly in the developing world where poverty ...

determining-soil-transmitted-helminth-infection-status-physical

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

23.3K Görüntüleme.  Swiss Tropical and Public Health Institute, Basel, Switzerland. Toprak yolla bulaşan helmint (STHS) ile oluşan kronik enfeksiyon Bodurluk ve büyüyen çocukta harcıyorsun, malabsorpsiyon neden olur. Bu nedenle, bu enfeksiyonlar aynı zamanda çocukların fiziksel uygunluk azaltmak kaçınılmazdır. Burada, STHS ve çocukların fiziksel uygunluk değerlendirilmesi için 20 metrelik mekik koşusu testi tanı için iki teknik görselleştirmek.

Video: Determining Soil-transmitted Helminth Infection Status and Physical Fitness of School-aged Children

Determining the Phagocytic Activity of Clinical Antibody Samples

Antibody-driven phagocytosis is induced via the engagement of Fc receptors on professional phagocytes, and can contribute to both clearance as well as pathology of disease. While the properties of the variable domains of antibodies have long been considered critical to in vivo function, the ability of antibodies to recruit innate immune cells via their Fc domains has become increasingly appreciated as a major factor in their efficacy, both in the setting of recombinant monoclonal antibody therapy, as well as in the course of natural infection or vaccination1-3.
Importantly, despite its nomenclature as a constant domain, the antibody Fc domain does not have constant function, and is strongly modulated by IgG subclass (IgG1-4) and glycosylation at Asparagine 2974-6. Thus, this method to study functional differences of antigen-specific antibodies in clinical samples will facilitate correlation of the phagocytic potential of antibodies to disease state, susceptibility to infection, progression, or clinical outcome.
Furthermore, this effector function is particularly important in light of the documented ability of antibodies to enhance infection by providing pathogens access into host cells via Fc receptor-driven phagocytosis7. Additionally, there is some evidence that phagocytic uptake of immune complexes can impact the Th1/Th2 polarization of the immune response8.
Here, we describe an assay designed to detect differences in antibody-induced phagocytosis, which may be caused by differential IgG subclass, glycan structure at Asn297, as well as the ability to form immune complexes of antigen-specific antibodies in a high-throughput fashion. To this end, 1 &mu;m fluorescent beads are coated with antigen, then incubated with clinical antibody samples, generating fluorescent antigen specific immune complexes. These antibody-opsonized beads are then incubated with a monocytic cell line expressing multiple Fc&gamma;Rs, including both inhibitory and activating. Assay output can include phagocytic activity, cytokine secretion, and patterns of Fc&gamma;Rs usage, and are determined in a standardized manner, making this a highly useful system for parsing differences in this antibody-dependent effector function in both infection and vaccine-mediated protection9.

We present a high-throughput flow cytometric assay to determine the phagocytic activity of antigen-specific antibodies from clinical samples, utilizing fluorescent antigen-coated beads and a monocytic cell line expressing multiple Fc receptors&#x2014;providing receptor usage and phagocytic activity determinations in a standardized and reproducible fashion for any antigen of interest.

Klinik Antikor Örnekleri fagositik Aktivitesi Belirlenmesi

Antibody-driven phagocytosis is induced via the engagement of Fc receptors on professional phagocytes, and can contribute to both clearance as well as ...

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Using Eggs from Schistosoma mansoni as an In vivo Model of Helminth-induced Lung Inflammation

Schistosoma parasites are blood flukes that infect an estimated 200 million people worldwide 1. In chronic infection with Schistosoma, the severe pathology, including liver fibrosis and splenomegaly, is caused by the immune response to the parasite eggs rather than the parasite itself 2. Parasite eggs induce a Th2 response characterized by the production of IL-4, IL-5 and IL-13, the alternative activation of macrophages and the recruitment of eosinophils. Here, we describe injection of Schistosoma mansoni eggs as a model to examine parasite-specific Th2 cytokine responses in the lung and draining lymph nodes, the formation of pulmonary granulomas surrounding the egg, and airway inflammation. 
Following intraperitoneal sensitization and intravenous challenge, S. mansoni eggs are transported to the lung via the pulmonary arteries where they are trapped within the lung parenchyma by granulomas composed of lymphocytes, eosinophils and alternatively activated macrophages 3-6. Associated with granuloma formation, inflammation in the broncho-alveolar spaces, expansion of the draining lymph nodes and CD4 T cell activation can be observed. Here we detail the protocol for isolating Schistosoma mansoni eggs from infected livers (modified from 7), sensitizing and challenging mice, and recovering the organs (broncho-alveolar lavage (BAL), lung and draining lymph nodes) for analysis. We also include representative histologic and immunologic data and suggestions for additional immunologic analysis. 
Overall, this method provides an in vivo model to investigate helminth-induced immunologic responses in the lung, which is broadly applicable to the study of Th2 inflammatory diseases including helminth infection, fibrotic diseases, allergic inflammation and asthma. Advantages of this model for the study of type 2 inflammation in the lung include the reproducibility of a potent Th2 inflammatory response in the lung and draining lymph nodes, the ease of assessment of inflammation by histologic examination of the granulomas surrounding the egg, and the potential for long-term storage of the parasite eggs.

Using Eggs from Schistosoma mansoni as an In vivo Model of Helminth-induced Lung Inflammation

Schistosoma mansoni eggs are potent stimulators of the T helper type 2 (Th2) immune response, characteristic of parasite infection, asthma and allergic inflammation. This protocol utilizes S. mansoni egg injection to generate a CD4 Th2 cytokine-induced inflammatory response in the lung, characterized by lung granuloma formation around the egg, eosinophilia and macrophage alternative activation.

Gelen Yumurta kullanma<em&gt; Schistosoma mansoni</em&gt; Bir şekilde<em&gt; In vivo</emHelmint bağlı Akciğer iltihabı ve&gt; Model

Schistosoma parasites are blood flukes that infect an estimated 200 million people worldwide 1. In chronic infection with Schistosoma, the severe ...

Analysis of Pulmonary Dendritic Cell Maturation and Migration during Allergic Airway Inflammation

Dendritic cells (DCs) are the key players involved in initiation of adaptive immune response by activating antigen-specific T cells. DCs are present in peripheral tissues in steady state; however in response to antigen stimulation, DCs take up the antigen and rapidly migrate to the draining lymph nodes where they initiate T cell response against the antigen1,2. Additionally, DCs also play a key role in initiating autoimmune as well as allergic immune response3.
DCs play an essential role in both initiation of immune response and induction of tolerance in the setting of lung environment4. Lung environment is largely tolerogenic, owing to the exposure to vast array of environmental antigens5. However, in some individuals there is a break in tolerance, which leads to induction of allergy and asthma. In this study, we describe a strategy, which can be used to monitor airway DC maturation and migration in response to the antigen used for sensitization. The measurement of airway DC maturation and migration allows for assessment of the kinetics of immune response during airway allergic inflammation and also assists in understanding the magnitude of the subsequent immune response along with the underlying mechanisms.
Our strategy is based on the use of ovalbumin as a sensitizing agent. Ovalbumin-induced allergic asthma is a widely used model to reproduce the airway eosinophilia, pulmonary inflammation and elevated IgE levels found during asthma6,7. After sensitization, mice are challenged by intranasal delivery of FITC labeled ovalbumin, which allows for specific labeling of airway DCs which uptake ovalbumin. Next, using several DC specific markers, we can assess the maturation of these DCs and can also assess their migration to the draining lymph nodes by employing flow cytometry.

We describe a strategy to monitor maturation and migration of pulmonary dendritic cells in response to ovalbumin in the setting of ovalbumin induced allergic airway inflammation. This strategy can be modified to assess migration of pulmonary dendritic cells in settings of infection.

Alerjik Havayolu Enflamasyon sırasındaki solunum Dendritik Hücre olgunlaşması ve Göç Analizi

Dendritic cells (DCs) are the key players involved in initiation of adaptive immune response by activating antigen-specific T cells. DCs are present in ...

Fluorescence Microscopy Methods for Determining the Viability of Bacteria in Association with Mammalian Cells

Central to the field of bacterial pathogenesis is the ability to define if and how microbes survive after exposure to eukaryotic cells. Current protocols to address these questions include colony count assays, gentamicin protection assays, and electron microscopy. Colony count and gentamicin protection assays only assess the viability of the entire bacterial population and are unable to determine individual bacterial viability. Electron microscopy can be used to determine the viability of individual bacteria and provide information regarding their localization in host cells. However, bacteria often display a range of electron densities, making assessment of viability difficult. This article outlines protocols for the use of fluorescent dyes that reveal the viability of individual bacteria inside and associated with host cells. These assays were developed originally to assess survival of Neisseria gonorrhoeae in primary human neutrophils, but should be applicable to any bacterium-host cell interaction. These protocols combine membrane-permeable fluorescent dyes (SYTO9 and 4&#39;,6-diamidino-2-phenylindole [DAPI]), which stain all bacteria, with membrane-impermeable fluorescent dyes (propidium iodide and SYTOX Green), which are only accessible to nonviable bacteria. Prior to eukaryotic cell permeabilization, an antibody or fluorescent reagent is added to identify extracellular bacteria. Thus these assays discriminate the viability of bacteria adherent to and inside eukaryotic cells. A protocol is also provided for using the viability dyes in combination with fluorescent antibodies to eukaryotic cell markers, in order to determine the subcellular localization of individual bacteria. The bacterial viability dyes discussed in this article are a sensitive complement and/or alternative to traditional microbiology techniques to evaluate the viability of individual bacteria and provide information regarding where bacteria survive in host cells.

Central to the field of bacterial pathogenesis is the ability to define if and how microbes survive after exposure to eukaryotic cells. This article outlines protocols for the use of fluorescent dyes that reveal the viability of individual bacteria inside and associated with host cells.

Memeli Hücreleri ile Derneği&#39;nin Bakterilerin Canlılık belirlenmesi için Floresan Mikroskopi Yöntemleri

Central to the field of bacterial pathogenesis is the ability to define if and how microbes survive after exposure to eukaryotic cells. Current protocols ...

Total Protein Extraction and 2-D Gel Electrophoresis Methods for Burkholderia Species

The investigation of the intracellular protein levels of bacterial species is of importance to understanding the pathogenic mechanisms of diseases caused by these organisms. Here we describe a procedure for protein extraction from Burkholderia species based on mechanical lysis using glass beads in the presence of ethylenediamine tetraacetic acid and phenylmethylsulfonyl fluoride in phosphate buffered saline. This method can be used for different Burkholderia species, for different growth conditions, and it is likely suitable for the use in proteomic studies of other bacteria. Following protein extraction, a two-dimensional (2-D) gel electrophoresis proteomic technique is described to study global changes in the proteomes of these organisms. This method consists of the separation of proteins according to their isoelectric point by isoelectric focusing in the first dimension, followed by separation on the basis of molecular weight by acrylamide gel electrophoresis in the second dimension. Visualization of separated proteins is carried out by silver staining.

Total Protein Extraction and 2-D Gel Electrophoresis Methods for Burkholderia Species

Members of the Burkholderia genus are pathogens of clinical importance. We describe a method for total bacterial protein extraction, using mechanical disruption, and 2-D gel electrophoresis for subsequent proteomic analysis.

Toplam Protein Ekstraksiyon ve 2-D Jel Elektroforez Yöntemleri<em&gt; Burkholderia</em&gt; Türler

The investigation of  the intracellular protein levels of bacterial species is of importance to  understanding the pathogenic mechanisms of diseases ...

In vitro Coculture Assay to Assess Pathogen Induced Neutrophil Trans-epithelial Migration

Mucosal surfaces serve as protective barriers against pathogenic organisms.&#160;Innate immune responses are activated upon sensing pathogen leading to the infiltration of tissues with migrating inflammatory cells, primarily neutrophils.&#160;This process has the potential to be destructive to tissues if excessive or held in an unresolved state.&#160; Cocultured in vitro models can be utilized to study the unique molecular mechanisms involved in pathogen induced neutrophil trans-epithelial migration.&#160;This type of model provides versatility in experimental design with opportunity for controlled manipulation of the pathogen, epithelial barrier, or neutrophil.&#160;Pathogenic infection of the apical surface of polarized epithelial monolayers grown on permeable transwell filters instigates physiologically relevant basolateral to apical trans-epithelial migration of neutrophils applied to the basolateral surface.&#160;The in vitro model described herein demonstrates the multiple steps necessary for demonstrating neutrophil migration across a polarized lung epithelial monolayer that has been infected with pathogenic P. aeruginosa (PAO1).&#160;Seeding and culturing of permeable transwells with human derived lung epithelial cells is described, along with isolation of neutrophils from whole human blood and culturing of PAO1 and nonpathogenic K12 E. coli (MC1000).&#160; The emigrational process and quantitative analysis of successfully migrated neutrophils that have been mobilized in response to pathogenic infection is shown with representative data, including positive and negative controls.&#160;This in vitro model system can be manipulated and applied to other mucosal surfaces.&#160;Inflammatory responses that involve excessive neutrophil infiltration can be destructive to host tissues and can occur in the absence of pathogenic infections.&#160;A better understanding of the molecular mechanisms that promote neutrophil trans-epithelial migration through experimental manipulation of the in vitro coculture assay system described herein has significant potential to identify novel therapeutic targets for a range of mucosal infectious as well as inflammatory diseases.

In vitro Coculture Assay to Assess Pathogen Induced Neutrophil Trans-epithelial Migration

Neutrophil trans-epithelial migration in response to mucosal bacterial infection contributes to epithelial injury and clinical disease.&#160;An in vitro model has been developed that combines pathogen, human neutrophils, and polarized human epithelial cell layers grown on transwell filters to facilitate investigations towards unraveling the molecular mechanisms orchestrating this phenomenon.

Tüp bebek Patojen Kaynaklı Nötrofil Trans-epitel Göçünü Değerlendirmek için Coculture Tahlili

Mucosal surfaces serve as protective barriers against pathogenic organisms.&#160;Innate immune responses are activated upon sensing pathogen leading to ...

Pairwise Growth Competition Assay for Determining the Replication Fitness of Human Immunodeficiency Viruses

In vitro fitness assays are essential tools for determining viral replication fitness for viruses such as HIV-1. Various measurements have been used to extrapolate viral replication fitness, ranging from the number of viral particles per infectious unit, growth rate in cell culture, and relative fitness derived from multiple-cycle growth competition assays. Growth competition assays provide a particularly sensitive measurement of fitness since the viruses are competing for cellular targets under identical growth conditions. There are several experimental factors to consider when conducting growth competition assays, including the multiplicity of infection (MOI), sampling times, and viral detection and fitness calculation methods. Each factor can affect the end result and hence must be considered carefully during the experimental design. The protocol presented here includes steps from constructing a new recombinant HIV-1 clone to performing growth competition assays and analyzing the experimental results. This protocol utilizes experimental parameter values previously shown to yield consistent and robust results. Alternatives are discussed, as some parameters need to be adjusted according to the cell type and viruses being studied. The protocol contains two alternative viral detection methods to provide flexibility as the availability of instruments, reagents and expertise varies between laboratories.

Growth competition between nearly isogenic viruses provides a sensitive measurement for determining relative replication fitness. The protocols described here include the construction of recombinant HIV-1 clones, virus propagation and growth competition and analysis methods optimized to yield sensitive and consistent results.

İnsan İmmün Yetmezlik Virüs çoğaltma Fitness belirlenmesi için İkili Büyüme Rekabet Analizi

In vitro fitness assays are essential tools for determining viral replication fitness for viruses such as HIV-1. Various measurements have been used to ...

Determining Immune System Suppression versus CNS Protection for Pharmacological Interventions in Autoimmune Demyelination

A major hallmark of the autoimmune demyelinating disease multiple sclerosis (MS) is immune cell infiltration into the brain and spinal cord resulting in myelin destruction, which not only slows conduction of nerve impulses, but causes axonal injury resulting in motor and cognitive decline. Current treatments for MS focus on attenuating immune cell infiltration into the central nervous system (CNS). These treatments decrease the number of relapses, improving quality of life, but do not completely eliminate relapses so long-term disability is not improved. Therefore, therapeutic agents that protect the CNS are warranted. In both animal models as well as human patients with MS, T cell entry into the CNS is generally considered the initiating inflammatory event. In order to assess if a drug protects the CNS, any potential effects on immune cell infiltration or proliferation in the periphery must be ruled out. This protocol describes how to determine whether CNS protection observed after drug intervention is a consequence of attenuating CNS-infiltrating immune cells or blocking death of CNS cells during inflammatory insults. The ability to examine MS treatments that are protective to the CNS during inflammatory insults is highly critical for the advancement of therapeutic strategies since current treatments reduce, but do not completely eliminate, relapses (i.e., immune cell infiltration), leaving the CNS vulnerable to degeneration.

This protocol describes how to determine whether pharmacological treatments for experimental autoimmune encephalomyelitis show CNS protection as a consequence of suppressing immune cell infiltration or are neuroprotective during the onslaught of immune cell infiltration.

Otoimmün demiyelinizasyonun Farmakolojik Müdahaleler için CNS Koruma karşı Belirlenmesi Bağışıklık Sistemi Bastırma

A major hallmark of the autoimmune demyelinating disease multiple sclerosis (MS) is immune cell infiltration into the brain and spinal cord resulting in ...

High-throughput Parallel Sequencing to Measure Fitness of Leptospira interrogans Transposon Insertion Mutants During Golden Syrian Hamster Infection

In this manuscript, we describe a transposon sequencing (Tn-Seq) technique to identify and quantify Leptospira interrogans mutants altered in fitness during infection of Golden Syrian hamsters. Tn-Seq combines random transposon mutagenesis with the power of high-throughput sequencing technology. Animals are challenged with a pool of transposon mutants (input pool), followed by harvesting of blood and tissues a few days later to identify and quantify the number of mutants in each organ (output pools). The output pools are compared to the input pool to evaluate the in vivo fitness of each mutant. This approach enables screening of a large pool of mutants in a limited number of animals. With minor modifications, this protocol can be performed with any animal model of leptospirosis, reservoir host models such as rats and acute infection models such as hamsters, as well as in vitro studies. Tn-Seq provides a powerful tool to screen for mutants with in vivo and in vitro fitness defects.

High-throughput Parallel Sequencing to Measure Fitness of Leptospira interrogans Transposon Insertion Mutants During Golden Syrian Hamster Infection

We describe here a technique that combines transposon mutagenesis with high-throughput sequencing to identify and quantify transposon leptospiral mutants in tissues after a challenge of hamsters. This protocol can be used to screen mutants for survival and dissemination in animals and can also be applied to in vitro studies.

Yüksek üretilen iş paralel sıralama ölçü Fitness Leptospira interrogans Transposon ekleme mutantlar sırasında altın Suriye Hamster enfeksiyon için

In this manuscript, we describe a transposon sequencing (Tn-Seq) technique to identify and quantify Leptospira interrogans mutants altered in fitness ...

Immunization of Adult Zebrafish for the Preclinical Screening of DNA-based Vaccines

The interest in DNA-based vaccination has increased during the past two decades. DNA vaccination is based on the cloning of a sequence of a selected antigen or a combination of antigens into a plasmid, which enables a tailor-made and safe design. The administration of DNA vaccines into host cells leads to the expression of antigens that stimulate both humoral and cell-mediated immune responses. This report describes a protocol for the cloning of antigen sequences into the pCMV-EGFP plasmid, the immunization of adult zebrafish with the vaccine candidates by intramuscular microinjection, and the subsequent electroporation to improve intake. The vaccine antigens are expressed as green fluorescent protein (GFP)-fusion proteins, which allows the confirmation of the antigen expression under UV light from live fish and the quantification of expression levels of the fusion protein with ELISA, as well as their detection with a western blot analysis. The protective effect of the vaccine candidates is tested by infecting the fish with Mycobacterium marinum five weeks postvaccination, followed by the quantification of the bacteria with qPCR four weeks later. Compared to mammalian preclinical screening models, this method provides a cost-effective method for the preliminary screening of novel DNA-based vaccine candidates against a mycobacterial infection. The method can be further applied to screening DNA-based vaccines against various bacterial and viral diseases.

Here we describe a protocol for the immunization of the adult zebrafish (Danio rerio) with a DNA-based vaccine and demonstrate the validation of a successful vaccination event. This method is suitable for the preclinical screening of vaccine candidates in various infection models.

Yetişkin zebra balığı bağışıklama DNA tabanlı aşıların preklinik tarama için

The interest in DNA-based vaccination has increased during the past two decades. DNA vaccination is based on the cloning of a sequence of a selected ...

Belirlenmesi Toprak bulaşan Helmint Enfeksiyon Durum ve Okul Çağındaki Çocuklarda Fiziksel Uygunluk

Özet

Daha Fazla Video Keşfet

Bu videodaki bölümler