Onların destek için aşağıdaki teşekkür şunlardır: Federal Burs Komisyonu Birleşik Krallık finansman (HP), EPSRC (HP), BBSRC (MFN) ve Avrupa Birliği Marie Curie Eylemleri (MFN).

1. Parasagital Dilim Hazırlık 1.1 hemisferdeki dışarı parçalara ayır Tüm hayvan deneyleri yerel etik inceleme ve ulusal düzenlemelere uymak. Burada tarif edilen deneyler söz konusu olduğunda, çalışma İngiltere Hayvanlar (Scientific Procedures) Act 1986 uygundur. Biz rutin beyin çıkarmadan önce fare euthanize için anestezi olmadan servikal dislokasyon kullanın. Alternatif olarak, fare ölümcül anestetize olabilir, ancak bu durumda anestezik tercih nöronal özelliklerini etkiler olmadığını belirlemek için gerekli olabilir. Fareden beyin çıkarın ve soğuk hemen yer (4-8 ° C) yapay beyin omurilik sıvısı (ACSF) (çözüm bileşimleri için bkz. Tablo 1) kesme carbogen (% 95 O 2,% 5 CO 2) ile doygunluğa kabarmış. Üç dakika maksimum sonra, dikkatlice c beyin kaldırmakestere kesme ACSF bir spatula kullanarak ve hafifçe kesme ACSF (Şekil 1A) ile nemlendirilmiş filtre kağıdı üzerine dik bir pozisyonda (yukarı bakacak şekilde sırt tarafında) yerleştirin. Hemisferlerin montaj doğru kolaylaştırmak için, MEC (beyinin kaudal aşırı yer) etkilemeden mümkün olduğunca serebellumun kaldırmak ve koronal planda kesitler ile beyinin rostral üçüncü kaldırmak için bir jilet veya neşter kullanın (Şekil 1B). Bölümü tam orta hat (Şekil 1C) dikey düzlemi boyunca olduğu özen beyin, Hemisect. Bir buçuk dakika kabarmış kesme ACSF için hemisferlerin dönün. 1.2 vibratome üzerinde hemisfer monte Montaj öncesi, vibratome bıçağın kesme kenarı yatay ile 20 derece açılı olduğundan emin olun ( <sTrong&gt; Şekil 1D). Montaj yüzeyine yaklaşık vibratome bıçağa superglue paralel sığ bir şerit, bir hemisfer genişliği yapmak ve yeterince uzun iki hemisfer uçtan uca karşılamak için. Onun medial yüzeyi spatula dayanmaktadır ve dorsal ölçüde mikrotom bıçağı doğru bakacak şekilde fiziksel etkileri en aza indirmek için bakımı, spatula ve pozisyon ile kesme ACSF her yarımkürede kaldırın. Yavaşça her hemisfer medial yüzeyi mikrotom tabanına paralel olmasını sağlamak için özen superglue şeridi üzerine her yarımkürede kaydırın. Biz en iyi sonuç için her yarımkürenin dorsal yüzeyine paralel olması ve vibratome bıçak (Şekil 1D) bakmalıdır bulduk. Dilimleme sırasında hazırlanması 1,3 Bakım Hemen montaj soğuk kesme ACSF (- 8 ° C&#39;de 4) daldırın hemisferlerin ardından. Sıcaklık koruyundilimleme prosedür boyunca e ve carbogen doygunluk. Kesme odacık içinde çözelti doğrudan soğutma ve köpürme pratik değildir, periyodik taze soğutulmuş ve kabarmış çözeltisi ile haznesindeki kesme ACSF çözeltisi takviye. 1.4 Kesme bölümler Eğer (Şekil 1F) (lateral yüzeyinden genelde ~ 1mm aşağı) MEC lateral en ölçüde bulana kadar bir vibratome kullanarak, sagital düzlemde her iki yarımkürede gelen korteks kaldırın. Kesikler içinde geri bıçak sürükleyerek, maruz kalınan doku zarar vermemek için ~ 200 mikron vibratome bıçak kaldırın arasında. MEC medial dereceye ulaşıncaya kadar aynı anda (Şekil 1D de gösterildiği gibi dizilmiş iseler aynı anda kesilir hem de) her iki yarımkürede 400 mikron parasagital bölümleri kesmek. Bu, bir t-ventro kaudal eğrisi etrafında kalın beyaz bir bant yokluğu ile tespit edilebilirO hipokampus (dış kapsül), onun rostral sınır dışbükey şekil ve açısal dorso-kaudal &#39;köşe&#39;. Şekil 1E MEC lateral parasagital düzlemde hipokampusun dairesel bir görünüm göstermektedir. Şekil 1F-G göstermek dilimleme zaman MEC içindeki bölümlerde farklı yanal-medial pozisyonlarda nasıl görüneceğini. Daha medial pozisyonlarda hipokampusun gittikçe fasulye biçimli bir görünüm unutmayın. Her yarımkürede genellikle MEC içeren iki veya üç 400 mikron kalınlığında dilimler verir. 1.5 inkübe dilimleri Her kesim hemen sonra 35 ° C&#39;de su banyosunda muhafaza carbogen doymuş standart ACSF dilimleri yerleştirin Dilimler dilimleme sonra ACSF yaklaşık 15 dakika boyunca 35 ° C&#39;de inkübe edilir izin tamam olmaktadır. Su banyosundan dilim tutucu çıkarın ve l boyunca oda sıcaklığında carbogen ile kabarcıklar devamdoğusunda 45 dakika. 2. Örnek parasagital Dilim Deneyi Bu hazırlık kullanarak tipik bir deney MEC katman II stellat hücrelerin elektrofizyolojik yapmaktır. 2.1 Optimize optikler Kayıttan önce, kondenser dilim düzlemi (Koehler aydınlatma) odaklanma ve yüksek büyütme (örneğin 40x) objektif altında merkezli emin olun. Faiz 2.2 belirlenmesi hücreleri Düşük bir büyütme MEC (Şekil 2A-B) içinde yaklaşık kayıt bölgesi belirlemek için (örneğin 4x) objektif kullanın. Bu bölgede canlı hücreler (Şekil 2C-D) tanımlamak için yüksek büyütme amacı geçin. Bir örnek olarak, kabul edilen tabaka II stellat hücreleri görsel olarak benzer olan poligonal bir çap veya oval şekil ve birden fazla primer dendritler tarafından tanımlananter, ve dendrit 2,13,14 apikal tek bir büyük çaplı olmaması. Onlar küçük gruplar 2,9 (Şekil 2C-D) görünür genellikle bol ve nerede onlar güvenilir Layer I / II sınır kenarında tanımlanır. Böyle internöronlardan ve piramidal hücreleri gibi diğer hücre tipleri de tanımlanabilir olmalıdır. Bu noktada deneyler kaydedildi nöron sinaptik girişleri aktive zar potansiyeli ya da tespit nöronlar gelen akım membran ve elektrik veya optogenetic yöntemler kaydetmek için tam hücre yama-kelepçe kullanılarak, örneğin gerçekleştirilebilir. Nöron kimlik kaydedilen nöronun elektrofizyolojik özelliklerinden ve hücre içi çözüm içinde floresan etiketler dahil doğrulanabilir. 3. Dorso-ventral eksen boyunca Yer ölçün 3.1 Görüntü ilgi yeri ve çevresindeki dilim Bir recor pozisyonunu belirlemek içindorsal-ventral eksen boyunca ded nöron, ilk görüntüyü dilim ve çevresindeki alanların MEC bölgeye düşük bir büyütme hedefi kullanın. Bir görüntü (Şekil 3A) veya yinelenen bir görüntüsünü ilgi konum etrafında parlak bir daire bırakmak alan iris diyafram aşağı atlama tarafından kayıt elektrot içeren örneğin tarafından ilgi konumu, işaretleyin. Yinelenen sonra kayıt konumu ve çevresi (Şekil 3B) ilk görüntü üzerine yerleştirilebilir görüntüsü içinde kayıt konumunu saptamak için. Up görüntüleri MEC dorsal sınırına bir ventral kayıt yerden alanı kapsayacak şekilde gerekli olabilir 3 ayrı düşük büyütme (4x) için. Bu görüntüler daha sonra mesafe ölçümleri (Şekil 3) alınabilir bir görüntü sağlamak için görüntü işleme yazılımı kullanılarak dikilen edilebilir. Nöron kimliği ve konumu daha da doğrulama dahil edilerek kayıt takip yapılabilirgibi hücre içi çözüm içinde ve daha sonra kayıt 2 takiben doku uygun işleme kullanarak biocytin veya Alexa boyalar olarak inaktif işaretleri. 3.2 MEC dorsal sınırında kurulması MEC dorsal sınır dorsal-ventral pozisyonu ölçmek için hangi uygun bir dönüm noktası sağlar. MEC ventral sınır olarak iyi tanımlanmış değildir. Şekil 4 farklı medial-lateral pozisyonlarda Nissl lekeli dilimler tanımlanan MEC hücresel yerlerinden DIC aydınlatma altında nasıl göründüğünü göstermektedir. Şekil 4, bir dairesel hipokampus (Şekil 4, (i)) ve tabaka I (Şekil 4, (iv)) Yanal entorinal Cortex (LEC) içeren parasagital dilimleri ile ilişkili bir parasubicular çıkıntı eksikliği gösterir. Şekil 4 M.Ö. ME içeren tipik bir dilim göstermekC. DIC ışıklı dilimleri içinde önde gelen karanlık dorsal Parasubicular / entorinal sınır bölge sırt kısmı parasubiculum bir alanı içerir. Parasubiculum alanı açıkça kolon (iii) karşılık gelen görüntüleri Nissl boyama ile ortaya çıkar. MEC (4B ve 4C kolonu (iv) &#39;te siyah oklar) dorsal sınır tabakası I (4B ve 4C kolonu (iv) içinde kırmızı oklar) içine kadar dışarı doğru çıkıntı yapan parasubicular hücrelerinin grubuna ventral olup. Şekil 4B ve 4C kolonlar (ii) ve Nissl bölümlerde MEC dorsal sınır DIC dilim koyu Parasubicular / entorinal sınır bölgenin dorsal kenarına ventral bir yere karşılık gelen, (iii) gösterir (karşılaştırılması siyah oklar). Sınır konumu (aynı zamanda ref. 14) DIC görüntüleri ve karşılaştırma referans görüntüler tahmin edilebilir. Moleküler belirteçleri ile dorsal MEC sınırın Geleceği doğrulama bu tahminin doğruluğunu artıracaktır. Biz tha dikkatt referans bölümleri boyandı, ve etiketli nöronlar, morfolojik tanımlama için işlenir bölümlerde ciddi daralma tabi olabilir. DIC ve referans bölümlerde önemli noktalara göre mutlak uzaklıkların karşılaştırılması bu nedenle ilk ölçüm ve büzülme için düzeltme (örneğin ref 2) gerektirir. 3.3 mesafeleri kalibre ve ölçmek Mesafe dönüşüm oranı: görüntülerinde mesafe kolay ölçümü kolaylaştırmak için, bir pikselin kurmak için resmi bir başvuru kılavuzuna aynı düşük büyütmeli objektif kullanın. Bir grafik programı kullanarak MEC ile kontur boyunca ilgi konuma MEC dorsal sınırından piksel mesafeyi ölçün ve mikron mesafe (Şekil 5A) piksel mesafesi dönüştürebilirsiniz. Nöronlar gibi biocytin gibi bir kalem ile doldurulur, sonra kaydedilen nöron yerini daha sonra da (örneğin ref 2) uygun işleme tarafından kurtarılabilir. 4. Representative Sonuçlar Şekil 5A bir örnek düşük büyütme (4x) üst üste kaydedilen nöronlar ve ölçüm kılavuzların konumları ile kayıt sonra parasagital dilim, kompozit görüntü gösterir. İşaretli dorsal ve ventral stellat hücrelerinden kayıtlar Şekil 5B &#39;de gösterilmiştir. Bu kayıtlar hücrelerinin kimliğini belirlemek ve MEC layer II stellat hücreler elektriksel özellikleri dorsal ve ventral yerlerde nasıl farklı göstermek için yardımcı olur. <img alt="Şekil 1" src="/files/ftp_upload/3802/3802fig1.jpg" /> Şekil 1.. Parasagital dilimleri hazırlanması. Filtre kağıdı üzerinde yukarı bakacak şekilde sırt tarafında dinlenme A Whole beyin ACSF. B kesme ile nemlendirilmiş C Hemisected beyin beyincik ve rostral üçüncü çıkarıldıktan sonra&gt; Beyin. D paralel ACSF kesim öncesinde dalma için vibratome bıçak kenar kesme ve LEC içeren bölüm. E Görünüm dilimleme için esnasında yapıştırıcı şerit üzerinde hemisferlerin monte Doku daha ileri bir 400 mikron (yüzeyi gösterildiği üzere medyal 400 um olan çıkarıldıktan sonra MEC arasında &#39;yanal&#39; kısmının yanal doku çıkarılmasından sonra prosedürü dilimleme ve standart bir parasagital MEC dilim için henüz yeterince medyal değildir. F görünümü . (F)) 400 mikron parasagital dilim sonra MEC bir &#39;orta&#39; parçası G Görünüm kesilmiştir sırasıyla anatomik, c belirten EF HI Schematics:. beyincik, L: Lateral entorinal korteks (LEC), m: Medial entorinal Cortex (MEC), h: hipokampus, portakal: dış kapsül, mavi: Korpus kallosum, camgöbeği: dentat girus, green: CA3 ve CA1. (H siyah ok) sadece MEC içeren dilimler halinde ise, sınır lineer olabilir (kırmızı I ok) veya içbükey (J kırmızı ok) LEC içeren dilimler halinde hipokampüsün rostral sınır görünümü içbükey olduğunu. Renkli anatomik yerlerinden yaklaşık şekiller Allen Beyin Atlası (ek açıklamaları elde edilmiştir <a href="http://mouse.brain-map.org/atlas/ARA/Sagittal/browser.html">http://mouse.brain-map.org/atlas/ARA/Sagittal/browser.html</a> ). <img alt="Şekil 2" src="/files/ftp_upload/3802/3802fig2.jpg" /> Şekil 2. DIC aydınlatma altında MEC layer II hücrelerinin belirlenmesi. Bir para Bir Örnek kompozit görüntü<html> düşük büyütmede sagital beyin kesit (4x). Ayrı görüntüleri uyumlu ve dikkat dağıtıcı kenarları ve vinyet kaldırmak için harmanlanmış edilmiştir. Önemli dönüm alanda saat: hipokampus, m:.. Yüksek büyütmede sağ kenarına yakın koyu dikey çizgi olarak görünür, MEC C MEC katman II layer II (içeren bireysel bir düşük büyütme (4x) görüntüden MEC B Kırp DIC aydınlatma ile 40x). Görüntü birkaç görüntülerin bir uyum ve harmanlanmış karmaşıktır. Hücrelerin yoğun merkezi &#39;Sütun&#39; layer II sağlıklı olası yıldızsı hücreleri ve internöronlardan bir grup gösteren Katman II. D Tek yüksek büyütme DIC görüntüdür. Burada gösterildiği gibi, hücreler genellikle katmanı I / II sınırında gruplar meydana Stellate. Piramidal hücreler yakın Katman II / III sınır bulunabilir eğilimindedir. AC noktalı hatları sırasıyla BD miktarını göstermektedir. Ölçek çubukları: A ve B 500 um, C ve D 100 mikron in. Şekil 3 &quot;src =&quot; / files/ftp_upload/3802/3802fig3.jpg &quot;/&gt; Şekil 3. Ilgi yerleri dorsal-ventral pozisyonu Ölçme. Bir Bağlantısızlar düşük büyütme (4x) ilgi yeri (bir kayıt elektrot ucu ile işaretlenmiş) ve karanlık entorinal / Parasubicular sınır bölgesi dönüm (dorsal sınır kurmak için kullanılan arasındaki MEC tüm dorso-ventral ölçüde dahil görüntüleri MEC ile -. A ve B gibi) bkz. Şekil 4 ama bir alan iris diyafram (düşük opacity ile kaplanmış) yerine ilgi konumunu işaretlemek için bir kayıt elektrodu durdurulabilir ile üst üste görüntü dahil. <img alt="Şekil 4" src="/files/ftp_upload/3802/3802fig4.jpg" /> Şekil 4. Parasagital dilim DIC görüntülerden MEC dorsal sınır tahmin. Entorinal Cortex gelen AC parasagital bölümler (medial lateral). DIC ve Nissl bölümlerde farklı mikrofon gelmektedire AC sütun: (i).. Tüm parasagital dilim (400 mikron kalınlığında) (uyumlu ve düşük büyütme (4x) görüntülerin karışımlı kompozit) AC sütun (ii): karakteristik koyu Parasubicular / entorinal sınır bölgesi ile entorinal korteks Yakın Her görüntünün üst alan. AC kolon (iii) Nissl lekeli dilimleri (kalınlığı 40 mikron) farklı bir fareden AC (ii) görüntüleri ile uyumlu. Hücrelerinin koyu, yoğun bir tabaka tabaka II. Karşılaştırma kolonlar (ii) ve (iii) Nissl boyanan hücrelerin DIC görüntü görünümünü gösterir AC kolonu (iv):. Nissl boyanmış kesitler gösterdiler. B ve C sütunu (iv) parasubiculum (DIC resimlerde koyu Parasubicular / entorinal sınır bölgenin dorsal kısım) ve dorsal MEC hücreleri hücreleri içerir. B (iv) ve C (iv) katman derinliklerine uzanan parasubicular hücrelerinin büyük dorsal yama I (kırmızı oklar) kolayca görülebilir. Bu yamalar ventral kenarı dorsal bo tekabülMEC of order (siyah oklar). A (iv) parasubicular yama dilim standart bir parasagital MEC dilim hazırlanması için çok yanal olduğunu belirten yoktur. Tüm panelleri, siyah oklar MEC dorsal sınır gösterir. Gri oklar MEC yaklaşık ventral sınır göstermektedir. <img alt="Şekil 5," src="/files/ftp_upload/3802/3802fig5.jpg" /> Şekil 5. Temsilci sonuçlanır. Şekil 3&#39;te görüntünün bir kısmının harmanlanmıştır ve kırpılır. A, bir hücre dorsal ve ventral hücrenin pozisyonları sırasıyla, yeşil ve mavi dolu daireler ile gösterilir. Siyah ok MEC tahmini dorsal sınırını ve beyaz noktalı çizgiyle derin tabakalar halinde uzatılır. Katı beyaz çizgi MEC dorsal sınırından ön yerleşimli hücreye mesafenin piksel ölçümü alındığı boyunca kontur yolu gösteren bir kılavuzdur. Ölçek çubuğu: 500 mikron B Elektro.hücrelerinden fizyolojik izleri Soldan sağa A&#39;da belirtilen - giriş direnci hesaplamak için kullanılan geçerli adımları için eşik altı yanıtları, büyük bir pozitif akım adım, başak ayrıntılı yanıt spiking.

<ol>
	<li>O'Donnell, C., Nolan, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tuning+of+synaptic+responses:+an+organizing+principle+for+optimization+of+neural+circuits.">Tuning of synaptic responses: an organizing principle for optimization of neural circuits.</a> Trends Neurosci. 34, 51-60 (2011).</li><li>Garden, D. L. F., Dodson, P. D., O'Donnell, C., White, M. D., Nolan, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tuning+of+synaptic+integration+in+the+medial+entorhinal+cortex+to+the+organization+of+grid+cell+firing+fields.">Tuning of synaptic integration in the medial entorhinal cortex to the organization of grid cell firing fields.</a> Neuron. 60, 875-889 (2008).</li><li>Kuba, H., Yamada, R., Fukui, I., Ohmori, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tonotopic+specialization+of+auditory+coincidence+detection+in+nucleus+laminaris+of+the+chick.">Tonotopic specialization of auditory coincidence detection in nucleus laminaris of the chick.</a> Journal of Neuroscience. 25, 1924-1934 (2005).</li><li>Hafting, T., Fyhn, M., Molden, S., Moser, M. -. B., Moser, E. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microstructure+of+a+spatial+map+in+the+entorhinal+cortex.">Microstructure of a spatial map in the entorhinal cortex.</a> Nature. 436, 801-806 (2005).</li><li>Sargolini, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conjunctive+representation+of+position,+direction,+and+velocity+in+entorhinal+cortex.">Conjunctive representation of position, direction, and velocity in entorhinal cortex.</a> Science. 312, 758-762 (2006).</li><li>Fyhn, M., Hafting, T., Witter, M. P., Moser, E. I., Moser, M. -. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Grid+cells+in+mice.">Grid cells in mice.</a> Hippocampus. 18, 1230-1238 (2008).</li><li>Giocomo, L. M., Zilli, E. A., Frans&#233;n, E., Hasselmo, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Temporal+frequency+of+subthreshold+oscillations+scales+with+entorhinal+grid+cell+field+spacing.">Temporal frequency of subthreshold oscillations scales with entorhinal grid cell field spacing.</a> Science. 315, 1719-1722 (2007).</li><li>Giocomo, L. M., Hasselmo, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Time+constants+of+h+current+in+layer+II+stellate+cells+differ+along+the+dorsal+to+ventral+axis+of+medial+entorhinal+cortex.">Time constants of h current in layer II stellate cells differ along the dorsal to ventral axis of medial entorhinal cortex.</a> Journal of Neuroscience. 28, 9414-9425 (2008).</li><li>Burgalossi, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microcircuits+of+functionally+identified+neurons+in+the+rat+medial+entorhinal+cortex.">Microcircuits of functionally identified neurons in the rat medial entorhinal cortex.</a> Neuron. 70, 773-786 (2011).</li><li>Dodson, P. D., Pastoll, H., Nolan, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dorsal-ventral+organization+of+theta-like+activity+intrinsic+to+entorhinal+stellate+neurons+is+mediated+by+differences+in+stochastic+current+fluctuations.">Dorsal-ventral organization of theta-like activity intrinsic to entorhinal stellate neurons is mediated by differences in stochastic current fluctuations.</a> J. Physiol. (Lond). 589, 2993-3008 (2011).</li><li>Nolan, M., Dudman, J., Dodson, P., Santoro, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HCN1+channels+control+resting+and+active+integrative+properties+of+stellate+cells+from+layer+II+of+the+entorhinal+cortex.">HCN1 channels control resting and active integrative properties of stellate cells from layer II of the entorhinal cortex.</a> Journal of Neuroscience. 27, (2007).</li><li>Boehlen, A., Heinemann, U., Erchova, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+range+of+intrinsic+frequencies+represented+by+medial+entorhinal+cortex+stellate+cells+extends+with+age.">The range of intrinsic frequencies represented by medial entorhinal cortex stellate cells extends with age.</a> Journal of Neuroscience. 30, 4585-4589 (2010).</li><li>Klink, R., Alonso, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphological+characteristics+of+layer+II+projection+neurons+in+the+rat+medial+entorhinal+cortex.">Morphological characteristics of layer II projection neurons in the rat medial entorhinal cortex.</a> Hippocampus. 7, 571-583 (1997).</li><li>van Groen, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Entorhinal+cortex+of+the+mouse:+cytoarchitectonical+organization.">Entorhinal cortex of the mouse: cytoarchitectonical organization.</a> Hippocampus. 11, 397-407 (2001).</li><li>Dolorfo, C. L., Amaral, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Entorhinal+cortex+of+the+rat:+organization+of+intrinsic+connections.">Entorhinal cortex of the rat: organization of intrinsic connections.</a> The Journal of Comparative Neurology. 398, 49-82 (1998).</li></ol>

Ifşa şey yok.

Biz burada ayrıntılı olarak MEC dorsal-ventral ölçüde koruyan bir parasagital dilim hazırlık üretmek için bir prosedür tarif ettiğim bir dorsal-ventral organizasyonu takip MEC devre özelliklerinin incelenmesi kolaylaştırmak için. Kritik adımlar Hayvan beyni kaldırılıyor. Beyin makamlara baskı önlemek için özellikle dikkat edin. Bu, hızlı bir şekilde kaldırılması beyin daha önemlidir. Dilimleme. Dilim sıkıca tutarak odasının yere yapıştırılmış olmalıdır. Vibratome z ekseni titreşim &lt;2 mikron olmalı ve yüksek genlikli ve düşük hız ayarıyla kullanılmalıdır. Optimum ayarları modelleri arasında farklılık ve deneme yanılma ile konulmalıdır. Çözüm sıcaklıkları izlenmesi. Biz dilim kaliteli kesim sırasında ve sonrasında sıcaklığına duyarlı olduğunu bulmak. Outsid<html> sağlıklı nöron sayısı azalır e önerilen sıcaklık aralıkları, nöronlar azaltılabilir sinaptik girdi yama ve yanıtları için daha zor olabilir. Görüntüleme. Koehler aydınlatma ve saha iris diyafram merkezleme Kayıttan önce hücre görüntülenmesi için önemlidir. Sorun Giderme Dilimler birkaç sağlıklı hücreler içerir. Çözümler değiştirin. Vibratome z ekseni deplasman kontrol edin. Çözümler sıcaklığını kontrol ediniz. Kesme dilim yönünü kontrol edin. Dilim nöronların görmek zordur. Koehler aydınlatma doğru yapılandırıldığını kontrol edin. Mikroskop lensleri temiz olup olmadığını denetleyin. Zorluk oluşturan gigaseals. Kayıt elektrotları şeklini kontrol edin. Hücre ölümü, örneğin yuvarlak hücreli şekiller veya yüksek kontrast hücrelerin işaretleri dilim inceleyin. dilimin ve_content &quot;&gt; Görüntüler. dilim maksimum detay yakalamak için odak olduğundan emin olun. hizalamak zordur Otomatik görüntü uyum için&gt;% 40 görüntü bindirme genellikle yeterlidir. Sınırlamalar Parasagital dilim hazırlık potansiyel bir sınırlama MEC içinde çok uzun menzilli sinaptik bağlantıları korunur olmayabilir parasagital uçağı 9, 15 doğrudan paralel olamaz ve olmasıdır. Bu bağlantıları bakımı ya rostral-kaudal düzleminde bir açıyla vibratome üzerine beyin hemisfer hemisecting veya montaj kesilmiş dilim açısını değiştirmek için hazırlık prosedürü değiştirilmesi gerekebilir. Benzer düşünceler medial septumdan Örneğin afferent girişler için, diğer bağlantıların korunması için başvuruda bulunabilir. Yatay MEC dilim preparatları ile Karşılaştırılması <ol><li> Dorsal-ventral konuma doğru ölçülmesi önemlidirdorsal-ventral eksen ve fizyolojik özellikleri üzerinde birlikte konumu arasındaki kantitatif ilişkileri kurmak için. Yatay dilim hazırlıkları 7,8,11,12 yılında tam dorsal-ventral kesim yeri ve bu tutarlı bir referans merkezi haline zorlaştırıyor belirlemek zordur. Buna karşılık, parasagital dilim hazırlık MEC dorsal sınırında bir referans noktası ve bir dilim nöronun derinlik bilgisi olan dorsal-ventral pozisyonu ölçmek için gereksiz olduğu kurmak kolaydır. Parasagital dilimleri nedenle büyük dorsal-ventral konumu ve hücresel ve devre özellikleri arasındaki nicel ilişkilerin daha hızlı ve hassas soruşturma izin, dorsal-ventral konuma doğru ölçümü kolaylaştırmak. </li><li> Moleküler geçişlerini MEC topografik devre organizasyon için önemli olan ve floresan veya diğer etiketleme teknikleri kullanarak görüntülenebilmekte. Yatay dilim, karşılaştırıldığında hangi the sinyal farklı dorsal-ventral yerlerde dilimleri arasında karşılaştırıldı gerekecekti, parasagital hazırlık dorsal-ventral molekül geçişlerini daha kolay, daha ince taneli ve daha güvenilir görselleştirme ve miktar tayini için izin verir. </li><li> Sinaptik bağlantı dorsal-ventral geçişlerini MEC fonksiyonu önemli bir rol oynayabilir. Parasagital dilim hazırlık bağlantıları içinde ve farklı lokasyonlar arasında MEC dorsal-ventral eksen boyunca ve farklı dorsal-ventral azından eşit devre bütünlüğünü korumak için nasıl farklı soruşturma için önemli olduğunu MEC içinde dorsal ve ventral alanlar arasındaki sinaptik bağlantıları koruyabilirsiniz yerler. Bağlantı dorsal-ventral eksen boyunca önemli ölçüde değişiyorsa, yatay dilimler eşit, her uç noktada tüm fonksiyonel mikrodevreler de daha az olasıdır. </li></ol> Gelecekteki gelişmeler ve uygulamalar Bir moleküler belirteçleriMEC hücresel kimlik nöronal kimliğinin kesin karakterizasyonu etkinleştirmek ve dorsal-ventral konumu daha kesin belirlenmesi izin verecektir. Parasagital dilim hazırlık kullanarak, birden fazla nöron hücre tipine ve bölgeye özel bir aktivite topografik organize yanıtları tek bir dilim içinde (voltaj hassas boyalar veya kalsiyum görüntüleme kullanarak örneğin) aynı anda gözlenebilir. Optogenetic araçları ile birlikte, parasagital hazırlık dorsal-ventral eksen boyunca farklı pozisyonlarda selektif aktivasyon izin verir. Farklı dorsal-ventral yerlerde mikrodevreler mekansal hedef aktivasyon nasıl tepki İstenen MEC mikrodevre işlevi önemli bilgiler teslim olabilir. Biz bu hazırlık fizyolojik özellikleri dorsal-ventral geçişlerini araştırmak için basit, güçlü ve standardize temel sağlamak ve kolaylaştırmak u bekliyoruzbu basamaklara MEC bilgi işlem özelliklerini nasıl katkıda nderstanding.

<table border="1"><tbody><tr><td></td><td> Kesme ACSF (mM) </td><td> Standart ACSF (mM) </td><td> İç çözeltisi (mM) </td><td> CASNumber </td><td> Tedarikçi Katalog Numarası </td></tr><tr><td> NaCl </td><td> 86 </td><td> 124 </td><td></td><td> 7647-14-5 </td><td> Sigma S9888 </td></tr><tr><td> NaH 2 PO 4 </td><td> 1.2 </td><td> 1.2 </td><td></td><td> 13472-35-0 </td><td> Sigma 71.505 </td></tr><tr><td> KCl </td><td> 2.5 </td><td> 2.5 </td><td> 10 </td><td> 7447-40-7 </td><td> Sigma P3911 </td></tr><tr><td> NaHCO 3 </td><td> 25 </td><td> 25 </td><td></td><td> 144-55-8 </td><td> Fischer S/4240 </td></tr><tr><td> Glikoz </td><td> 25 </td><td> 20 </td><td></td><td> 50-99-7 </td><td> Sigma G5767 </td></tr><tr><td> Sakaroz </td><td> 75 </td><td></td><td></td><td> 57-50-1 </td><td> Sigma S5016 </td></tr><tr><td> CaCl 2 </td><td> 0.5 </td><td> 2 </td><td></td><td> 10043-52-4 </td><td> VWR 190464K </td></tr><tr><td> MgCl2 </td><td> 7 </td><td> 1 </td><td> 2 </td><td> 7786-30-3 </td><td> Sigma 63020 </td></tr><tr><td> K Glukonat </td><td></td><td></td><td> 130 </td><td> 299-27-4 </td><td> Sigma G4500 </td></tr><tr><td> HEPES </td><td></td><td></td><td> 10 </td><td> 7365-45-9 </td><td> Sigma H3375 </td></tr><tr><td> EGTA </td><td></td><td></td><td> 0.1 </td><td> 67-42-5 </td><td> Sigma E4378 </td></tr><tr><td> Na 2 ATP </td><td></td><td></td><td> 2 </td><td> 34369-07-8 </td><td> Sigma A7699 </td></tr><tr><td> Na 2 GTP </td><td></td><td></td><td> 0.3 </td><td> 36051-31-7 </td><td> Sigma G8877 </td></tr><tr><td> NaPhospho-Creatine </td><td></td><td></td><td> 10 </td><td> 19333-65-4 </td><td> Sigma P7936 </td></tr><tr><td> Biocytin (isteğe bağlı) </td><td></td><td></td><td> 2.7 </td><td> 576-19-2 </td><td&gt; Sigma B4261 </td></tr></tbody></table> Tablo 1. ACSF, standart ACSF ve K-Glukonat iç çözüm tarifleri Kesme.

preparation of parasagittal slices for the investigation of dorsal-ventral organization of the rodent medial entorhinal cortex

Beyinde Hesaplama bunların sinaptik girişlerine uygun yanıt nöronlar dayanır. Nöronlar da tamamlayıcı ve sinaptik girişleri nasıl tepki belirlemek membran iyon kanallarının dağılımı farklıdır. Bununla birlikte, bu hücresel özellikleri ve hayvanlar davranmaya nöronal fonksiyonu arasındaki ilişki iyi anlaşılmış değildir. Bu sorunun bir yaklaşım onlar kodlamak bilgi veya hesaplamalar üzerine tek tek nöronları haritaların konumu da 1 yürütmek hangi topografik düzenlenen nöral devrelerin araştırmaktır. Bu yaklaşımı kullanarak deneyler duyusal ve bilişsel devrelerin 2,3 bilgi kodlama yatan sinaptik yanıtları ayarı için ilkeleri öneririz. Medial entorinal korteks (MEC) dorsal-ventral eksen boyunca mekansal temsilleri topografik organizasyonu hücresel mekanizmaları ve hesaplamalar arasındaki ilişkiler kurmak için bir fırsat sağlar iuzaysal algı için mportant. Kemirgen MEC katman II Nöronlar kullanarak konumu alanlarını 4-6 atış ızgara gibi kodlayın. Giderek daha ventral pozisyonlarda nöronlar için bu mesafe daha büyük 1 m artar ise MEC dorsal pozisyonlarda bulunan nöronlar için bir ızgara oluşturur tek tek atış alanları arasındaki mesafe 30 cm sırasını üzerindedir. Çeşitli çalışmalar bu hücresel özellikleri mekansal hesaplama 2,7-10 için önemli olduğunu öne sürerek, ızgara pişirme alanları arasındaki boşluk gibi, ayrıca dorsal-ventral konumuna göre farklılık, bu MEC katman II nöronların hücresel özellikleri ortaya koymuştur. Burada MEC nöronların biyofiziksel ve anatomik özellikleri topografik organizasyon MEC sağlayan soruşturmanın dorsal-ventral ölçüde korumak beyin dilimleri ile hazırlanması ve elektrofizyolojik kayıt için prosedürler açıklanmaktadır. Tespit n dorsal-ventral pozisyonuBu dilim tam dorsal-ventral konumu için referans noktaları kurmak zor olduğu gibi anatomik göre eurons, MEC 7,8,11,12 yatay dilim kullanan protokollerde doğru kurmak zor. Bizim tarif ettiğimiz işlemler MEC yanı sıra moleküler geçişlerini 2,10 görselleştirilmesi dorsal-ventral eksen boyunca kaydedilen hücrelerin yerini doğru ve tutarlı ölçüm sağlar. Prosedürler erişkin farelerde (&gt; 28 gün) ile kullanılmak üzere geliştirilmiş ve başarıyla 1,5 yaşına fareler ile istihdam edilmiştir. Ayarlamalar ile de daha küçük olan farelere veya diğer kemirgen türleri ile kullanılabilir. Hazırlanması ve ölçüm standart bir sistem bu bölgedeki hücresel mikrodevreler özelliklerinin sistematik olarak incelenmesi yardımcı olacaktır.

Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Parasagittal Slices for the Investigation of Dorsal-ventral Organization of the Rodent Medial Entorhinal Cortex at JoVE.com

Preparation of Parasagittal Slices for the Investigation of Dorsal-ventral Organization of the Rodent Medial Entorhinal Cortex

Biz medial entorinal korteks (MEC) dorsal-ventral eksen korumak beyin dilimleri ile hazırlanması ve elektrofizyolojik kayıt için prosedürler açıklanmaktadır. Konumu nöral kodlama MEC içinde dorsal-ventral organizasyonu aşağıdaki Çünkü, bu işlemler navigasyon ve bellek için önemli hücresel mekanizmaların incelenmesi kolaylaştırmak.

Kemirgen Medial entorinal Korteksin dorsal-ventral Örgütü Soruşturma parasagital Dilimleri hazırlanması

Computation in the brain relies on neurons responding appropriately to their synaptic inputs. Neurons differ in their complement and distribution of ...

preparation-parasagittal-slices-for-investigation-dorsal-ventral

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Neuroscience

15.5K Görüntüleme.  University of Edinburgh. Biz medial entorinal korteks (MEC) dorsal-ventral eksen korumak beyin dilimleri ile hazırlanması ve elektrofizyolojik kayıt için prosedürler açıklanmaktadır. Konumu nöral kodlama MEC içinde dorsal-ventral organizasyonu aşağıdaki Çünkü, bu işlemler navigasyon ve bellek için önemli hücresel mekanizmaların incelenmesi kolaylaştırmak.

Video: Preparation of Parasagittal Slices for the Investigation of Dorsal-ventral Organization of the Rodent Medial Entorhinal Cortex

Brain Imaging Investigation of the Neural Correlates of Emotional Autobiographical Recollection

Recollection of emotional autobiographical memories (AMs) is important to healthy cognitive and affective functioning 1 - remembering positive AMs is associated with increased personal well-being and self-esteem 2, whereas remembering and ruminating on negative AMs may lead to affective disorders 3. Although significant progress has been made in understanding the brain mechanisms underlying AM retrieval in general (reviewed in 4, 5), less is known about the effect of emotion on the subjective re-experience of AMs and the associated neural correlates. This is in part due to the fact that, unlike the investigations of the emotion effect on memory for laboratory-based microevents (reviewed in 6, 7-9), often times AM studies do not have a clear focus on the emotional aspects of remembering personal events (but see 10). Here, we present a protocol that allows investigation of the neural correlates of recollecting emotional AMs using functional magnetic resonance imaging (fMRI). Cues for these memories are collected prior to scanning by means of an autobiographical memory questionnaire (AMQ), therefore allowing for proper selection of emotional AMs based on their phenomenological properties (i.e., intensity, vividness, personal significance). This protocol can be used in healthy and clinical populations alike.

We present a protocol that allows investigation of the neural correlates of recollecting emotional autobiographical memories, using functional magnetic resonance imaging. This protocol can be used with both healthy and clinical participants.

Duygusal Otobiyografik Anımsama Sinir Bağlantılı Beyin Görüntüleme İncelenmesi

Recollection of emotional autobiographical memories (AMs) is important to healthy cognitive and affective functioning 1 - remembering positive AMs is ...

Nörobilim

Brain Imaging Investigation of the Memory-Enhancing Effect of Emotion

Emotional events tend to be better remembered than non-emotional events1,2. One goal of cognitive and affective neuroscientists is 
to understand the neural mechanisms underlying this enhancing effect of emotion on memory. A method that has proven particularly influential in the 
investigation of the memory-enhancing effect of emotion is the so-called subsequent memory paradigm (SMP). This method was originally used to investigate the 
neural correlates of non-emotional memories3, and more recently we and others also applied it successfully to studies of emotional memory (reviewed in4, 5-7). 
Here, we describe a protocol that allows investigation of the neural correlates of the memory-enhancing effect of emotion using the SMP in conjunction with 
event-related functional magnetic resonance imaging (fMRI). An important feature of the SMP is that it allows separation of brain activity specifically 
associated with memory from more general activity associated with perception. Moreover, in the context of investigating the impact of emotional stimuli, 
SMP allows identification of brain regions whose activity is susceptible to emotional modulation of both general/perceptual and memory-specific processing. 
This protocol can be used in healthy subjects8-15, as well as in clinical patients where there are alterations in the neural correlates of emotion perception 
and biases in remembering emotional events, such as those suffering from depression and post-traumatic stress disorder (PTSD)16, 17.

We present a protocol that uses functional magnetic resonance imaging to investigate the neural correlates of the memory-enhancing effect of emotion. This protocol allows identification of brain activity specifically linked to memory-related processing, contrary to more general perceptual processing, and can be used with healthy and clinical populations.

Duygu Bellek Artırıcı Etkisi Beyin Görüntüleme İncelenmesi

Emotional events tend to be better remembered than non-emotional events1,2. One goal of cognitive and affective neuroscientists is 
to understand the ...

Brain Imaging Investigation of the Impairing Effect of Emotion on Cognition

Emotions can impact cognition by exerting both enhancing (e.g., better memory for emotional events) and impairing (e.g., increased emotional distractibility) effects (reviewed in 1). Complementing our recent protocol 2 describing a method that allows investigation of the neural correlates of the memory-enhancing effect of emotion (see also 1, 3-5), here we present a protocol that allows investigation of the neural correlates of the detrimental impact of emotion on cognition. The main feature of this method is that it allows identification of reciprocal modulations between activity in a ventral neural system, involved in 'hot' emotion processing (HotEmo system), and a dorsal system, involved in higher-level 'cold' cognitive/executive processing (ColdEx system), which are linked to cognitive performance and to individual variations in behavior (reviewed in 1). Since its initial introduction 6, this design has proven particularly versatile and influential in the elucidation of various aspects concerning the neural correlates of the detrimental impact of emotional distraction on cognition, with a focus on working memory (WM), and of coping with such distraction 7,11, in both healthy 8-11 and clinical participants 12-14.

We present a protocol that allows investigation of the neural mechanisms mediating the detrimental impact of emotion on cognition, using functional magnetic resonance imaging. This protocol can be used with both healthy and clinical participants.

Biliş üzerine Duygu bozarak Etkisi Beyin Görüntüleme İncelenmesi

Emotions can impact cognition by exerting both enhancing (e.g., better memory for emotional events) and impairing (e.g., increased emotional ...

Preparation of Acute Subventricular Zone Slices for Calcium Imaging

The subventricular zone (SVZ) is one of the two neurogenic zones in the postnatal brain. The SVZ contains densely packed cells, including neural progenitor cells with astrocytic features (called SVZ astrocytes), neuroblasts, and intermediate progenitor cells. Neuroblasts born in the SVZ tangentially migrate a great distance to the olfactory bulb, where they differentiate into interneurons. Intercellular signaling through adhesion molecules and diffusible signals play important roles in controlling neurogenesis. Many of these signals trigger intercellular calcium activity that transmits information inside and between cells. Calcium activity is thus reflective of the activity of extracellular signals and is an optimal way to understand functional intercellular signaling among SVZ cells.
Calcium activity has been studied in many other regions and cell types, including mature astrocytes and neurons. However, the traditional method to load cells with calcium indicator dye (i.e. bath loading) was not efficient at loading all SVZ cell types. Indeed, the cellular density in the SVZ precludes dye diffusion inside the tissue. In addition, preparing sagittal slices will better preserve the three-dimensional arrangement of SVZ cells, particularly the stream of neuroblast migration on the rostral-caudal axis.
Here, we describe methods to prepare sagittal sections containing the SVZ, the loading of SVZ cells with calcium indicator dye, and the acquisition of calcium activity with time-lapse movies. We used Fluo-4 AM dye for loading SVZ astrocytes using pressure application inside the tissue. Calcium activity was recorded using a scanning confocal microscope allowing a precise resolution for distinguishing individual cells. Our approach is applicable to other neurogenic zones including the adult hippocampal subgranular zone and embryonic neurogenic zones. In addition, other types of dyes can be applied using the described method.

A method to load subventricular zone (SVZ) cells with calcium indicator dyes for recording calcium activity is described. The postnatal SVZ contains tightly packed cells including neural progenitor cells and neuroblasts. Rather than using bath loading we injected the dye by pressure inside the tissue allowing better dye diffusion.

Kalsiyum Görüntüleme için akut subventricular dilimi Dilimleri hazırlanması

The subventricular zone (SVZ) is one of the two neurogenic zones in the postnatal brain. The SVZ contains densely packed cells, including neural ...

A Comprehensive Protocol for Manual Segmentation of the Medial Temporal Lobe Structures

The present paper describes a comprehensive protocol for manual tracing of the set of brain regions comprising the medial temporal lobe (MTL): amygdala, hippocampus, and the associated parahippocampal regions (perirhinal, entorhinal,&#160;and parahippocampal proper). Unlike most other tracing protocols available, typically focusing on certain MTL areas (e.g., amygdala and/or hippocampus), the integrative perspective adopted by the present tracing guidelines allows for clear localization of all MTL subregions. By integrating information from a variety of sources, including extant tracing protocols separately targeting various MTL structures, histological reports, and brain atlases, and with the complement of illustrative visual materials, the present protocol provides an accurate, intuitive, and convenient guide for understanding the MTL anatomy. The need for such tracing guidelines is also emphasized by illustrating possible differences between automatic and manual segmentation protocols. This knowledge can be applied toward research involving not only structural MRI investigations but also structural-functional colocalization and fMRI signal extraction from anatomically defined ROIs, in healthy and clinical groups alike.

The present work provides a comprehensive set of guidelines for manually tracing the medial temporal lobe (MTL) structures. This protocol can be applied to research involving structural and/or combined structural-functional magnetic resonance imaging (MRI) investigations of the MTL, in both healthy and clinical groups.

Medial Temporal Lob Yapıların El segmentasyonu için Kapsamlı Protokolü

The present paper describes a comprehensive protocol for manual tracing of the set of brain regions comprising the medial temporal lobe (MTL): amygdala, ...

Preparation of Acute Brain Slices Using an Optimized N-Methyl-D-glucamine Protective Recovery Method

This protocol is a practical guide to the N-methyl-D-glucamine (NMDG) protective recovery method of brain slice preparation. Numerous recent studies have validated the utility of this method for enhancing neuronal preservation and overall brain slice viability. The implementation of this technique by early adopters has facilitated detailed investigations into brain function using diverse experimental applications and spanning a wide range of animal ages, brain regions, and cell types. Steps are outlined for carrying out the protective recovery brain slice technique using an optimized NMDG artificial cerebrospinal fluid (aCSF) media formulation and enhanced procedure to reliably obtain healthy brain slices for patch clamp electrophysiology. With this updated approach, a substantial improvement is observed in the speed and reliability of gigaohm seal formation during targeted patch clamp recording experiments while maintaining excellent neuronal preservation, thereby facilitating challenging experimental applications. Representative results are provided from multi-neuron patch clamp recording experiments to assay synaptic connectivity in neocortical brain slices prepared from young adult transgenic mice and mature adult human neurosurgical specimens. Furthermore, the optimized NMDG protective recovery method of brain slicing is compatible with both juvenile and adult animals, thus resolving a limitation of the original methodology. In summary, a single media formulation and brain slicing procedure can be implemented across various species and ages to achieve excellent viability and tissue preservation.

Preparation of Acute Brain Slices Using an Optimized N-Methyl-D-glucamine Protective Recovery Method

This protocol demonstrates the implementation of an optimized N-methyl-D-glucamine (NMDG) protective recovery method of brain slice preparation. A single media formulation is used to reliably obtain healthy brain slices from animals of any age and for diverse experimental applications.

En iyi duruma getirilmiş bir Nkullanarak akut beyin dilimleri hazırlanması-metil-D-glucamine koruyucu kurtarma yöntemi

This protocol is a practical guide to the N-methyl-D-glucamine (NMDG) protective recovery method of brain slice preparation. Numerous recent studies have ...

The Preparation of Oblique Spinal Cord Slices for Ventral Root Stimulation

Electrophysiological recordings from spinal cord slices have proven to be a valuable technique to investigate a wide range of questions, from cellular to network properties. We show how to prepare viable oblique slices of the spinal cord of young mice (P2 - P11). In this preparation, the motoneurons retain&#160;their axons coming out from the ventral roots of the&#160;spinal cord. Stimulation of these axons elicits back-propagating action potentials invading the motoneuron&#160;somas and exciting the motoneuron&#160;collaterals within the spinal cord. Recording of antidromic action potentials is an immediate, definitive and elegant way to characterize motoneuron identity, which surpasses&#160;other identification methods. Furthermore, stimulating the motoneuron collaterals is a simple and reliable way to excite the collateral targets of the motoneurons within the spinal cord, such as other motoneurons or Renshaw cells. In this protocol, we present antidromic recordings from the motoneuron somas as well as Renshaw cell excitation, resulting from ventral root stimulation.

We show how to prepare oblique slices of the spinal cord in young mice. This preparation allows for the stimulation of the ventral roots.

Ventral Kök Stimulation için eğik Omurilik Dilimleri hazırlanması

Electrophysiological recordings from spinal cord slices have proven to be a valuable technique to investigate a wide range of questions, from cellular to ...

Preparation of Horizontal Slices of Adult Mouse Retina for Electrophysiological Studies

Vertical slice preparations are well established to study circuitry and signal transmission in the adult mammalian retina. The plane of sectioning in these preparations is perpendicular to the retinal surface, making it ideal for the study of radially oriented neurons like photoreceptors and bipolar cells. However, the large dendritic arbors of horizontal cells, wide-field amacrine cells, and ganglion cells are mostly truncated, leaving markedly reduced synaptic activity in these cells. Whereas ganglion cells and displaced amacrine cells can be studied in a whole-mounted preparation of the retina, horizontal cells and amacrine cells located in the inner nuclear layer are only poorly accessible for electrodes in whole retina tissue.
To achieve maximum accessibility and synaptic integrity, we developed a horizontal slice preparation of the mouse retina, and studied signal transmission at the synapse between photoreceptors and horizontal cells. Horizontal sectioning allows&#160;(1) easy and unambiguous visual identification of horizontal cell bodies for electrode targeting, and (2) preservation of the extended horizontal cell dendritic fields, as a prerequisite for intact and functional cone synaptic input to horizontal cell dendrites.
Horizontal cells from horizontal slices exhibited tonic synaptic activity in the dark, and they responded to brief flashes of light with a reduction of inward current and diminished synaptic activity. Immunocytochemical evidence indicates that almost all cones within the dendritic field of a horizontal cell establish synapses with its peripheral dendrites. The horizontal slice preparation is therefore well suited to study the physiological properties of horizontally extended retinal neurons as well as sensory signal transmission and integration across selected synapses.

We developed a horizontal slice preparation of the adult mammalian retina with the plane of sectioning parallel to the retinal surface. Dendritic fields of nonradially oriented retinal neurons were not truncated, allowing the study of signal processing with patch-clamp and imaging techniques.

Elektrofizyolojik Çalışmalar Yetişkin Fare Retina Yatay Dilimleri hazırlanması

Vertical slice preparations are well established to study circuitry and signal transmission in the adult mammalian retina. The plane of sectioning in ...

Effects of Transcranial Alternating Current Stimulation on the Primary Motor Cortex by Online Combined Approach with Transcranial Magnetic Stimulation

Transcranial Alternating Current Stimulation (tACS) is a neuromodulatory technique able to act through sinusoidal electrical waveforms in a specific frequency and in turn modulate ongoing cortical oscillatory activity. This neurotool allows the establishment of a causal link between endogenous oscillatory activity and behavior. Most of the tACS studies have shown online effects of tACS. However, little is known about the underlying action mechanisms of this technique because of the AC-induced artifacts on Electroencephalography (EEG) signals. Here we show a unique approach to investigate online physiological frequency-specific effects of tACS of the primary motor cortex (M1) by using single pulse Transcranial Magnetic Stimulation (TMS) to probe cortical excitability changes. In our setup, the TMS coil is placed over the tACS electrode while Motor Evoked Potentials (MEPs) are collected to test the effects of the ongoing M1-tACS. So far, this approach has mainly been used to study the visual and motor systems. However, the current tACS-TMS setup can pave the way for future investigations of cognitive functions. Therefore, we provide a step-by-step manual and video guidelines for the procedure.

Transcranial Alternating Current Stimulation (tACS) allows the modulation of cortical excitability in a frequency-specific fashion. Here we show a unique approach which combines online tACS with single pulse Transcranial Magnetic Stimulation (TMS) in order to "probe" cortical excitability by means of Motor Evoked Potentials.

Transkraniyal manyetik stimülasyon ile transkranyal alternatif akım stimülasyon Online kombine yaklaşım tarafından birincil Motor korteks üzerinde etkileri

Transcranial Alternating Current Stimulation (tACS) is a neuromodulatory technique able to act through sinusoidal electrical waveforms in a specific ...

Preparation of Rhythmically-active In Vitro Neonatal Rodent Brainstem-spinal Cord and Thin Slice

Mammalian inspiratory rhythm is generated from a neuronal network in a region of the medulla called the preB&#246;tzinger complex (pBC), which produces a signal driving the rhythmic contraction of inspiratory muscles. Rhythmic neural activity generated in the pBC and carried to other neuronal pools to drive the musculature of breathing may be studied using various approaches, including en bloc nerve recordings and transverse slice recordings. However, previously published methods have not extensively described the brainstem-spinal cord dissection process in a transparent and reproducible manner for future studies. Here, we present a comprehensive overview of a method used to reproducibly cut rhythmically-active brainstem slices containing the necessary and sufficient neuronal circuitry for generating and transmitting inspiratory drive. This work builds upon previous brainstem-spinal cord electrophysiology protocols to enhance the likelihood of reliably obtaining viable and rhythmically-active slices for recording neuronal output from the pBC, hypoglossal premotor neurons (XII pMN), and hypoglossal motor neurons (XII MN). The work presented expands upon previous published methods by providing detailed, step-by-step illustrations of the dissection, from whole rat pup, to in vitro slice containing the XII rootlets.

This protocol both visually communicates the brainstem-spinal cord preparation and clarifies the preparation of brainstem transverse slices in a comprehensive step-by-step manner. It was designed to increase reproducibility and enhance the likelihood of obtaining viable, long lasting, rhythmically-active slices for recording neural output from the respiratory regions of the brainstem.

Ritmik aktif hazırlanması Vitro yenidoğan kemirgen beyin-omurilik ve ince dilim

Mammalian inspiratory rhythm is generated from a neuronal network in a region of the medulla called the preB&#246;tzinger complex (pBC), which produces a ...