В этом исследовании для быстрого выявления Helicobacter pylori и ее устойчивости к антибиотикам использовалась ПЦР на слизистой оболочке желудка, что является быстрым и точным диагностическим инструментом с большим клиническим значением для лечения этой инфекции. Крайне важно обеспечить стандарты качества контраста для QPCR. Следовательно, ИС QPCR для выявления Helicobacter pylori соответствует определенным критериям, и каждое условие должно выполняться одновременно.
Раннее отклонение делает тест недействительным, требуя повторного запуска. Нам нужен мощный и всеобъемлющий диагностический инструмент для выявления Helicobacter pylori и лекарственной устойчивости. Мы используем QPCR слизистой оболочки желудка.
Для этой цели мы используем специальные грунтовки. Мы считаем, что будущие исследования с участием больших групп пациентов позволят подтвердить и реализовать весь потенциал QPCR слизистой оболочки желудка, улучшая диагностику, мониторинг и лечение Helicobacter pylori. Для начала откройте зажимной клапан для биопсии и медленно переместите его к доминирующей руке.
Когда головка щипцов окажется в поле зрения, откройте лоскут зажима и манипулируйте эндоскопом на слизистой оболочке желудка места забора пробы. Слегка надавите и закройте щипцы для биопсии, чтобы пережать ткань слизистой оболочки желудка. С помощью плоскогубцев извлеките образцы тканей и поместите их в пробирку для отбора проб, содержащую жидкость для консервации.
После отбора проб на всех участках затяните крышку пробоотборной пробирки и закройте ее, чтобы предотвратить высыхание. Маркируйте пробирки уникальным идентификационным номером на внешней стороне. Как можно скорее отправьте собранные образцы на тестирование, избегая хранения.
Заранее отрегулируйте температуру металлической ванны до 100 градусов по Цельсию. Если образец заморожен, извлеките его и дайте ему нагреться до комнатной температуры. Тщательно перемешайте лизат, чтобы суспензировать смолу аминодиуксусной кислоты.
Возьмите 100 микролитров лизата в центрифужную пробирку с фильтрующим элементом, и добавьте слизистую желудка. Перемешайте содержимое с помощью вихревых колебаний. Поместите трубку центрифуги в металлическую ванну при температуре 100 градусов Цельсия на 10 минут.
После нагрева снимите трубку и дайте ей остыть до комнатной температуры. Центрифугируйте образец при температуре 9, 500G в течение 5-10 минут и осторожно переложите надосадочную жидкость в другую стерилизованную пробирку с маркировкой. Если вы не приступаете к следующему этапу сразу, временно храните образец при температуре четыре градуса Цельсия.
Извлеките из комплекта праймерный щуп, смешанный раствор фермента и буфер детектирования. Растопите все компоненты на льду или при температуре от двух до восьми градусов Цельсия. Чтобы перемешать образцы, осторожно встряхните их и выполните кратковременное центрифугирование на низкой скорости.
Смешайте 12,5 микролитров детектирующего буфера, семь микролитров праймерного зонда и 0,5 микролитра раствора фермента. Смешайте содержимое в пробирке и кратковременно центрифугируйте ее. Диспонируйте 20 микролитров раствора для ПЦР-реакции и добавьте по пять микролитров нуклеиновой кислоты в каждую лунку для ПЦР-реакции.
Вставьте реакционную пробирку в флуоресцентный термоциклер для ПЦР. Задайте параметры цикла и запустите программу. Соберите флуоресцентные сигналы при температуре 58 градусов Цельсия для нужных маркеров.
После реакции сохраните данные и проанализируйте их с помощью специального программного обеспечения QPCR. Анализ QPCR подтвердил наличие Helicobacter pylori в образцах A, B, C и E, в то время как образец F дал отрицательный результат. Образец А был чувствителен к обоим антибиотикам.
Образец В продемонстрировал устойчивость как к кларитромицину, так и к левофлоксацину. Образец С показал устойчивость к кларитромицину, но остается чувствительным к левофлоксацину. Образец Е был резистентен к левофлоксацину, но чувствителен к кларитромицину.
