Пострезекционная модель рецидива глиобластомы для терапевтических гидрогелевых исследований

Рецидив опухоли является основной причиной неэффективности режима хирургической резекции ГБМ. Наш протокол предоставляет уникальную модель рецидива ГБМ для эффективных локальных исследований рецидива после исследования. Этот метод обеспечивает удобный и осуществимый метод построения пострезекционной модели рецидива ГБМ и может быть использован в различных исследованиях рецидива ГБМ.

Начните с подготовки животного. Разрежьте офтальмологическими ножницами кожу головы мыши примерно на один сантиметр по средней линии на правом лбу. Настройте стереотаксический аппарат так, чтобы шов «елочка» и точка переднего родничка располагались на одном уровне.

С помощью ватного тампона, смоченного в фиалке гении, отметьте точку на один миллиметр спереди, на 1,8 миллиметра справа и на три миллиметра вниз от переднего родничка. Просверлите острие с помощью мини-краниального сверла диаметром один миллиметр. Создайте пору диаметром около одного миллиметра и глубиной один миллиметр.

Удалить экссудированную спинномозговую жидкость стерильным ватным тампоном. Далее микрошприцем аспирируют пять микролитров суспензии опухолевых клеток. Совместите кончик иглы микрошприца вертикально с отверстием для сверления черепа и вводите до тех пор, пока кончик иглы не войдет в плоскость черепа на три миллиметра.

Затем втяните иглу на 0,5 миллиметра. Откройте микрошприц и введите раствор со скоростью один микролитр в минуту. Держите иглу в течение 10 минут после инъекции.

Затем медленно извлеките микрошприц и прижмите место инъекции стерильным сухим ватным тампоном. Зашить волосистую часть головы нерассасывающимся хирургическим шовным материалом 10-0 и продезинфицировать разрез. Следите за здоровьем животного и держите его в теплых условиях.

После того, как мышь проснется, переместите ее обратно в клетку корпуса. Через 10 дней после вынашивания опухоли обнаружить трансплантированную опухоль. Для этого введите мыши внутрибрюшинно флуоресцеин калия, а через 11 секунд визуализируйте мышь с помощью биолюминесцентной системы визуализации in vivo.

Отделите ткани волосистой части головы и черепа и проверьте отверстие, используемое для построения ортотопической внутричерепной модели GBM. Если отверстие зажило, определите отверстие с помощью стереотаксического аппарата и просверлите отверстие, как показано выше. Увеличьте весь диаметр до пяти миллиметров с помощью сверла для черепа и удалите выделяемую спинномозговую жидкость стерильным ватным тампоном.

Сфокусируйте микроскоп на головке мыши и отрегулируйте настройки так, чтобы отверстие для сверления находилось в центре поля зрения. Вырежьте мозговые оболочки микроножницами. Затем удаляют часть опухолевой ткани микрокюреткой и микроскальпелем под микроскопом.

Остановите кровотечение стерильной марлей и промойте укол стерильным физиологическим раствором. С помощью шприца объемом один миллилитр введите в полость резекции 10 микролитров имеющегося в продаже гидрогеля. Используя этот протокол, клетки GBM были имплантированы в мозг мышей, и рост опухоли был проверен с помощью биолюминесцентной визуализации in vivo на 10-й день.

Резекция и инъекция гидрогеля были выполнены на 11-е сутки. Размер опухолей в пострезекционной модели ГБМ был значительно меньше, чем в ортотопической внутричерепной модели ГБМ. Наблюдение за остаточным ростом опухоли на 25-е сутки показало рецидив опухолей.

Окрашивание H&E подтвердило, что модель рецидива GBM после резекции была построена успешно, и что остаточные опухоли значительно рецидивировали после резекции. Самое главное, что нужно помнить при этой процедуре – это разрезать мозговые оболочки и удалить часть опухолевой ткани под микроскопом.