Это исследование показывает, что ультразвуковое исследование под ручным контролем хорошо подходит для мониторинга развития патологии матки в индуцированной мышиной модели рака эндометрия. Ультразвуковая визуализация является неинвазивной и, таким образом, позволяет проводить лонгитюдные исследования отдельных мышей в течение нескольких дней и недель. Это позволяет фиксировать индивидуальные вариации и, в конечном итоге, использовать меньшее количество животных для изучения.
Этот метод может быть легко применен для мониторинга патологических изменений и других зеркальных моделей, в том числе для неоплазии и хронических заболеваний мочевыводящего и пищеварительного тракта. Начните настройку ультразвукового аппарата для визуализации матки или яичника, выбрав датчик или зонд с диапазоном от 32 до 56 мегагерц. Перейдите на вкладку «Приложения» на главном экране и выберите «Режим маленького живота мыши».
Затем нажмите «Сканировать», чтобы вернуться на главный экран, и дождитесь отображения живого изображения. Затем выберите «Режим B» из параметров на левой панели инструментов, прежде чем нажать «Дополнительные элементы управления», чтобы просмотреть дополнительные инструменты для уточнения изображения, такие как усиление и глубина изображения, или настроить параметры захвата клипа, такие как количество кадров в секунду. После выбора настроек изображения вернитесь на главный экран, нажав «Режим B».
Поместите шприц объемом от трех до 10 миллилитров, наполненный стерильным раствором изотонической жидкости, между грелкой и абсорбирующей прокладкой на несколько минут, чтобы предварительно нагреть его до 35-40 градусов по Цельсию. Если в аппарате нет грелки, поместите флакон с ультразвуковым гелем на грелку. Чтобы ввести один-два миллилитра раствора в брюшную полость мыши, закрепите мышь за загривок в одной руке, обнажив брюшное отверстие.
Затем держите мышь под углом примерно 20 градусов носом в пол. Введите иглу туберкулинового шприца 25-го калибра через кожу и брюшную стенку каудального правого квадранта брюшной полости. Чтобы избежать инъекции в сосудистую сеть или желудочно-кишечный тракт, потяните поршень шприца с минимальным давлением для поиска крови.
Расположите мышь в брюшном положении лежа на впитывающей прокладке над грелкой, а затем надежно поместите носовой конус грызуна на нос и морду мыши. Поместите небольшое количество предварительно нагретого ультразвукового геля абаксиально к позвоночнику по обе стороны от анестезированной мыши между последним ребром и тазом. Нанесите небольшое количество геля на ультразвуковой датчик.
Затем поместите зонд параллельно позвонкам передней частью зонда на краниальной стороне. С мышью, находящейся в вентральном лежачем положении, медленно просканируйте область на наличие ориентира для почек. Имея в поле зрения почку, потяните зонд каудально, чтобы найти яичник, который представляет собой слегка гиперэхогенную овальную или круглую структуру в очень гиперэхогенном жировом пакете яичников, граничащий с краниально-вентрально почкой и дорсально-латерально с дорсальной брюшной стенкой.
Повысьте контрастность изображения, отрегулировав усиление сигнала с помощью ползунка в нижней части экрана управления. Чтобы улучшить визуализацию почки, надавите пальцем на контралатеральную часть живота. Варьируйте давление и угол от параллели к позвоночнику примерно до 20 градусов вентрально.
Как только интересующий вас орган окажется в поле зрения, захватите видео, нажав «Сохранить клип» или «Начать запись». После этого нажмите «Остановить запись», чтобы сохранить изображения с заданным количеством кадров. Держите зонд каудально до тех пор, пока яичник не окажется в самом краниальном аспекте поля зрения.
Варьируйте давление зонда и угол наклона, чтобы увидеть и визуализировать матку. Повторите сбор видео и кадров для каждого интересующего органа. Найдите матку, идущую продольно вдоль дорсальной брюшной стенки с боковой мускулатурой ног.
Следите за перистальтическим движением ткани, чтобы дифференцировать петли кишечника от неподвижных рогов матки. Поместите мышь в спинное лежачее положение, чтобы собрать изображения с вентрального подхода. Убедитесь, что смазка для глаз достаточна, а морда закреплена в носовом конусе.
Нанесите небольшое количество предварительно подогретого ультразвукового геля на брюшную полость живота, прежде чем наносить зонд на среднюю линию и череп лобка, чтобы определить местонахождение мочевого пузыря в качестве гипоэхогенного ориентира. Чтобы найти рога матки, потяните зонд сбоку к мочевому пузырю. Приложите легкое цифровое давление с одной или обеих сторон мыши.
Как только рога матки окажутся в поле зрения, держите зонд перпендикулярно мыши и сканируйте обе стороны живота, чтобы получить поперечные виды обоих рогов. Поверните зонд, чтобы захватить сагиттальные виды. После УЗИ протрите мышь бумажным полотенцем, прежде чем вернуть ее в клетку для восстановления.
Как только мышь полностью проснется через две-пять минут, верните мышь в комнату для животных. Сравнение ультразвуковых изображений брюшной полости мыши до и после инъекции физиологического раствора показало улучшенную визуализацию органов брюшной полости, включая матку и яичники после инъекции физиологического раствора. Вентральный доступ был использован для исследования поперечных срезов рогов матки, прилегающих к гипоэхогенному мочевому пузырю.
Иммуногистохимия с антителами, направленными против Arid1a и Pten, была использована для изучения адекватной потери белка-супрессора опухоли, достигнутой в эпителиальных клетках матки по сравнению с соседней стромальной тканью. Ультразвуковые изображения матки мыши с ранними патологическими изменениями были обнаружены после трех недель лечения доксициклином, показывая гипоэхогенный и расширенный просвет матки. При грубой патологии и гистопатологическом исследовании одной и той же матки наблюдались меньшая, но расширенная тонкостенная матка и ранняя гиперплазия эндометрия с сохранением отчетливого просвета соответственно.
Мыши, подвергшиеся эвтаназии в более поздние моменты времени, показали более крупную матку с меньшим просветом и утолщенной стенкой. При обучении ручному размещению зондов чрезмерное давление или быстрое движение могут затруднить идентификацию органов. Используйте мягкие, преднамеренные движения и сосредоточьтесь на определении органов, которые являются ориентирами в первую очередь.
На конечной точке исследования мышей приносят в жертву и собирают ткань, чтобы подтвердить нокдаун гена и охарактеризовать изменения тканей. Этот метод позволяет исследователям контролировать внутрибрюшные поражения с течением времени. И в нашем случае мы использовали его для мониторинга прогрессирования рака матки в модели iPad, что мы затем подтвердили гистопатологией.
