В модели нити, описанной здесь, полное восстановление кровотока и его записи являются требованиями для обеспечения производимого притока среди мышей, особенно в исследованиях трансляционного инсульта. Данная модель имеет два основных преимущества по сравнению с другими ранее описанными моделями хода. Трепанация черепа не требуется, и достигается полная повторная перфузия кровеносного сосуда.
Модель нити представляет собой комплексное хирургическое вмешательство, включающее в себя процесс манипуляции с различными артериями. Визуализация и объяснение всего этого, небольшие, но важные шаги, могут ускорить период обучения нейрохирургов. Подключите тепловое одеяло для поддержания температуры рабочей зоны и температуры тела мыши во время анестезии на уровне 37 градусов цельсия.
Приготовьте автоклавные ножницы и щипцы, 70% раствор этанола и глазную мазь декспантенола, а также держите несколько кусочков хлопка и плетеного полиэфирного шва с покрытием Five O, готовыми к использованию. Приготовьте 0,9% физиологический раствор в одном миллилитре шприца без иглы, чтобы сохранить участок разреза гидратированным. Подготовьте держатель для лазерного доплеровского зонда, разрезав наконечник 10-микролитрового наконечника пипетки.
Как только мышь будет полностью обезболена, поместите ее в положение лежа в зоне операции. Осторожно вставьте ректальный зонд, чтобы контролировать температуру на протяжении всех хирургических процедур. После дезинфекции места операции разрезайте эту кожу головы между левым ухом и глазом, чтобы обнажить кость черепа.
Затем отрежьте и уберите височную мышцу, чтобы визуализировать множественные мозговые артерии или MCA под черепом. Зафиксируйте наружную часть наконечника, удерживая лазерный допплеровский зонд или волокно поверх левого MCA, с помощью клея и закройте кожу так, чтобы кожа также была склеена. Нанесите две-три капли клея отвердителя для ускорения процесса.
Убедитесь, что лазерное допплеровское волокно не склеено и может быть легко удалено из держателя наконечника в любое время. Поверните мышь в положение лежа на спине, затем вставьте морду в конус анестезии и зафиксируйте лапы скотчем. Продезинфицируйте кожу и волосы, окружающие грудь, и сделайте двухсантиметровый разрез средней линии на шее.
Используйте щипцы, чтобы раздвинуть подчелюстную железу и грудино-сосцевидную мышцу. Используйте втягивающие средства, чтобы обнажить хирургическое поле и найти левую общую сонную артерию или CCA. Рассекните ККА без соединительной ткани и окружающих нервов без вреда для блуждающего нерва и выполните транзиторную перевязку перед бифуркацией.
Рассекните наружную сонную артерию или ЭКА и завяжите постоянный узел в самой дистальной видимой части. Поместите еще один шов под ЭКА и близко к бифуркации, затем подготовьте свободный узел для последующего использования. Рассекните внутреннюю сонную артерию или ИКА и поместите на нее микрососудистый клипс примерно на пять миллиметров над бифуркацией.
Следите за тем, чтобы не повредить блуждающий нерв. Затем вырежьте небольшое отверстие в ЭКА между плотной и рыхлой лигами, следя за тем, чтобы не разрезать весь ЭКА. Введите нить накала и продвигайте ее к ОАС.
Затяните свободную перевязку в ECA вокруг просвета, чтобы на мгновение закрепить нить накала в этом положении. Удаление микрососудистого клипса и предотвращение кровотечения. После удаления микрососудистого зажима вставьте нить через ICA до тех пор, пока не будет достигнуто происхождение MCA.
Зафиксируйте нить в этом положении, дополнительно затянув узел вокруг ЭКА. Запись значений лазерной допплерографии до и после введения нити накаливания. Удалите втягиватель и переместите грудиномастоидную мышцу в подчелюстовую железу перед зашиванием раны.
Снимите лазерный доплеровский зонд и поместите животное в восстановительную камеру при температуре 37 градусов Цельсия на какой час. Поместите мышь в положение лежа в зоне операции мордой в анестезиологической маске, затем зафиксируйте лапы животного скотчем. Вставьте лазерный доплеровский зонд в держатель зонда.
Снимите раневой шов и используйте щипцы, чтобы раздвинуть кожу, подчелюстную железу и стерномастоидную мышцу. Используйте втягивающие устройства для обнажения хирургического поля. Ослабьте шов ECA, который затягивает нить накаливания, и осторожно потяните нить.
Избегайте повреждения силиконового резинового покрытия нити накала во время удаления. Запишите значения лазерной допплерографии до и после удаления нити. Плотно завяжите шов ЭКА и подтвердите увеличение мозгового кровотока в лазерном допплеровском аппарате.
Откройте транзиторную перевязку перед бифуркацией от ОАС, чтобы восстановить полный кровоток. Удалите втягиватель и переместите грудиномастоидную мышцу в подчелюстовую железу перед зашиванием раны. Затем поместите животное в восстановительную камеру при температуре 37 градусов цельсия на один час, чтобы восстановиться после анестезии.
После выздоровления верните мышей в свои клетки в комнату с контролируемой температурой и позаботьтесь о животных, добавляя гранулы влажного корма и гидрогель в небольшие чашки Петри на полу клетки и вводя анальгезию каждые 12 часов до третьего дня после операции. Как только кровоток в ОАС восстанавливается после удаления нити, происходит полная реперфузия головного мозга, что аналогично ситуации, наблюдаемой после успешной механической тромбэктомии у пациентов человека. У животных, перенесших инсульт, наблюдалось значительное изменение в составной и очаговой нейробильной оценке, но не в общей нейробиологической оценке по сравнению с фиктивными животными.
Извлеченный объем инфаркта также выполняли с использованием кремолевого фиолетового окрашивания корональных последовательных участков мозга через 24 часа после индукции инсульта. Область поражения включает в себя соматосенсорную и моторную кору, а также подкорковые структуры, такие как полосатое тело. Средний объем инфаркта составлял от 61 до 62 миллиметров в квадрате, что составляет 48% пораженного полушария мозга.
Важно выполнить адекватное рассечение CCA, ECA и RCA, не вызывая повреждения прилегающей ткани, особенно блуждающего нерва, иметь хорошую визуализацию всех структур, а также иметь возможность вставлять нить и закупоривать происхождение MCA.
