Этот протокол может быть использован для биосинтеза церкоспоринов путем микробного брожения, которое, в свою очередь, может быть использовано для синтеза азотсодержащих гетероциклов в зеленых и мягких условиях. Преимуществом этого метода является то, что он может быть использован в качестве моста между микробными методами брожения и органическими синтезированными процессами. Азотсодержащие гетероциклы являются не только важным скелетом для многих натуральных продуктов с биоактивности, но они являются синтетическими прекурсорами для многих агрохимикатов и наркотиков.
Демонстрацией процедуры с Филиппом Icyishaka будет Ян Чжан, техник из моей лаборатории. Для альфа-Halo-N-acyl-гидразон подготовки, весят 10 миллимолейлар кетона и 10 миллимоляйр бензоил гидразина в колбу. Добавьте в колбу 20 миллилитров метанола и оснастив колбу батончиком и резиновой пробкой.
Медленно введите в смесь 250 микролитров соляной кислоты и инкубировать колбу в воздух при комнатной температуре. Через час соберите осадок после реакции путем фильтрации и вымойте продукт ацетоном. Затем высушите осадок вакуумом и определите продукт по ЯМР.
Чтобы подготовить cercosporin, зарядить трехлитровую колбу встряхивания с одним литром S-7 среды, и привить cercosporin производства штамма в колбу встряхивания. Культура смеси в условиях света на 135 оборотов в минуту и 25 градусов по Цельсию в течение двух недель. В конце инкубации используйте вакуумный насос, чтобы подвергать ферментационный бульон вакуумной фильтрации, и извлекайте гранулы и супернатант отдельно с тремя 50-миллилитровыми томами дихлорметана.
Соберите гранулы для сушки в морозильной камере сушилки, и объединить органические фазы. Вымойте органические фазы водой два-три раза, и сконцентрировать раствор в вакууме. Redissolve остатков с аналитическим метанолом, и фильтровать продукт через 18-микрометровую, органическую микрофильтрацию мембраны.
Затем очистите cercosporin колонкой Sephadex LH-20 и определите продукт HPLC в соответствии со стандартными протоколами. Чтобы подготовить 1, 2, 3-тиадиазол, добавьте весь объем альфа-гало-N-акил-гидразона, один миллиграмм церкоспорина, 27 миллиграммов терта-бутоксида калия и 39 миллиграммов тиоцианата калия в 10-миллиметровую трубку Schlenk, оснащенную резиновой пробкой и перемешиванием. Очистить трубку Шленка кислородом три раза, прежде чем вводить два миллилитров сухого ацетонитрила в трубку.
Подай трубку на пяти ватт, синий светодиод со дна в течение 16 часов перед стиркой четыре раза с 15 миллилитров насыщенного раствора хлорида натрия. После последней стирки смешайте aqueous фазы, и повторно извлечь aqueous фазы с четырьмя 15-миллилитровых томов этилового ацетата. Комбинат органической фазы, и сухой с ангидроса сульфата натрия.
Удалите растворитель с помощью вакуумного испарителя. Чтобы очистить продукт тонкослойной хроматографией, нарисуйте прямую линию на пластине кремнезема и добавьте растворенный продукт в линию. Положите пластину кремнезема в хроматографический цилиндр с 10 к одному PE к EA. После растворить кремнезем в DCM.
Удалить кремнезем из продукта путем фильтрации, и высушить DCM с поворотным испарителем. Затем определите соединение по ЯМР в соответствии со стандартным протоколом. Чтобы подготовить 1, 4, 5, 6-тетрагидропиридазин, добавьте весь объем альфа-гало-N-акил-гидразона, 2,7 миллиграмма церкоспорина и 195 миллиграммов карбоната цезия в 10-миллилитровую трубку Шленка, оснащенную резиновой пробкой и перемешиванием.
Очистить трубку Шленка три раза азотом и ввести в трубку два миллилитров ацетонитрила в воду. Тема Шленк трубки на пять ватт, синий светодиод снизу в течение 16 часов, а затем четыре моет с 15 миллилитров насыщенного хлорида натрия на стирку. Объедините aqueous фазы, и повторно извлечь aqueous фазы с четырьмя 15-миллилитровых томов этилового ацетата.
Комбинат органической фазы, и сухой с ангидроса сульфата натрия. Удалите растворитель с помощью вакуумного испарителя. Чтобы очистить продукт тонкослойной хроматографией, нарисуйте прямую линию на пластине кремнезема и добавьте растворенный продукт в линию.
Положите пластину кремнезема в хроматографический цилиндр с 10 к одному PE к EA. После растворить кремнезем в DCM. Удалить кремнезем из продукта с фильтрацией, и высушить DCM с поворотным испарителем. Затем определите соединение по ЯМР в соответствии со стандартным протоколом.
Эти репрезентативные результаты показывают, как 4-арил-1, 2, 3-тиадиазолы и 1, 4, 5, 6-тетрагидропиридазины могут быть удобно синтезированы cercosporin-катализированные фотокаталитические реакции из альфа-Halo-N-акил-гидразон. Процедура приобретения 4-арил-1, 2, 3-тиадиазолов подходит для субстратов, несущих как электрон-пожертвования, так и электрон-приемные группы в фениловом кольце, обеспечивая желаемые продукты умеренной и хорошей урожайностью. Всегда помните, использовать азот и кислород для двух различных категорий реакций.
