Это видео даст подробное описание, как выполнять ортопедические правой задней конечности, середине бедра пересаженной крысы. Донорская крыса правая задняя конечность ампутирована на уровне среднего бедра, затем хранится на льду. Получатель крысы правой задней конечности также ампутирован на уровне среднего бедра.
Донор крыс конечности затем прилагается к реципиенту крысы. Мы опишем, как прикрепить кости, артерии, вены, нерва, мышц и кожи систем. Пересадка конечностей, точнее, васкуляризированный композитный алотрансплант, VCA, имеет широкие терапевтические перспективы.
Но в настоящее время она ограничена методами, иммуносупрессией и плохим функциональным восстановлением нейромотора. Наша модель подчеркивает тщательно проверенные временем микрохирургические методы, такие как сшитый вручную сосудистый анатомоз и нервная коаптация. За год мы провели более 200 таких операций.
Хотя есть начальная кривая обучения к началу микрохирурга, с помощью этого видео, чтобы узнать наш метод и их приверженность самоотверженной практике, любой микрохирург сможет освоить эту модель. Все эксперименты были проведены в соответствии с руководством по уходу и использованию лабораторных животных Национальных институтов здравоохранения, NIH, и были одобрены Северо-Западного университета по уходу за животными и использования комитета. Конкретные процедуры были выполнены по протоколу IS 00001663.
Выберите крысу в возрасте от восьми до 16 недель весом от 250 до 400 граммов во время операции. Индуцировать общую анестезию с 5%isoflurane через испаритель перед обрезкой заднего меха конечностей крысы. Использование носового конуса для поддержания анестезии от двух до 2,5% положение крысы на операционной доске с нагревателем под ним.
Дезинфицировать лысую кожу 70%-ным спиртом и защитить хирургическое поле стерильной марлей. Используя соответствующий микрохирургический микроскоп и микрохирургические приборы, показанные здесь, наряду с легкой в доступе биполярной и монополярной электрокаутерией, вы будете готовы начать вскрытие. Используйте ножницы, чтобы сделать окружной и разрез кожи вокруг правой задней конечности.
Начните в паховой складке сразу же примерно на том же уровне, что и паховая связка и расширить спинной боковой завершить окружной разрез. А затем подвергать мышечный слой прямо под разрезом, вскрыть и прижигать поверхностные эпигастральные сосуды, которые ведут от мышечного слоя к проксимальной кожи лоскут только что создан. Отражение проксимального лоскута суперомедиально паховой связки и дистальной кожи лоскут inferolaterally к колену.
Используйте проволочный ретрактор или свернутую марлю, чтобы помочь разоблачить поле. Отмечается, что паховая анатомия крысы похожа на человека; от боковой до медиальной лежат нерв, артерия и вена. Вскрыть бедренной нерв, разделить его резко на паховой связки проксимальной бифуркации, если это возможно.
Убирать разделенный нерв некачественно, сохраняя его безопасно в сторону, покрытые влажной марлей. Обращая внимание на бедренную артерию и вену использовать четыре сантиметра длиной 7-0 шелковые связи, чтобы атравматично втягивать сосуды вместо обработки их непосредственно. Уделяя пристальное внимание в настоящее время улучшит ваш окончательный анастомотический результат.
Ligate все ветви бедренной кости с 7-0 шелковых связей. Разделите ветви между связями. Артериальные и венозные ветви, которые требуют деления включают поверхностный окружной подвих и мышечные сосуды.
Поверхностный окружной подвздошной кости, как правило, крупнейший и, кажется, нырять глубоко, как бы profunda бедренной кости у людей, но profunda отсутствует в крысы. Более дистальные ветви бедренной кости, такие как высший геникуляр и сафенозная ветвь, как правило, не требуют деления. Теперь ligate бедренной артерии с 7-0 шелковые связи, как проксимальные для паховой связки, как это возможно, и разделить между связями.
Подобно артерии, лигат и разделить бедренную вену. Отражение артерии и вены нижне, безопасно в сторону, покрытые под влажной марлей вместе с бедренным нервом покрыты ранее. Рассекаете группы брюшной мышцы, заботясь о прижигании любого видимого сосуда, который возникает.
Внимание к гемостазу теперь сведет к минимуму кровопотерю реципиента во время перепрофузии позже. Глубоко к группам брюшной мышцы, определить и резко разделить седалищного нерва проксимальных его ветвей. Все три седалищные ветви, как правило, видны, трибиальные, перонеальные и sural.
Все три должны быть сохранены в донорской конечности. Четвертая каяная ветвь обычно не наблюдается в этом вскрытии. Закончите деление оставшихся брюшной и спинной групп мышцы на уровне среднего бедра с тщательным гемостазом.
Это может быть необходимо, чтобы втягивать конечности medially для полного деления мышц. Перевлеки бедренную кость в середине валу с помощью портативной беспроводной роторной пилы. Теперь конечность свободна от донора.
Свясть трансплантат конечностей с донора, вырезать шелковые связанные концы от трансплантата стороны бедренной артерии и пни вены, тем самым вновь открывая сосуды. Вставьте 24-го калибра ангиокатетера в пень трансплантатной артерии и промыть трансплантат с 250 международных единиц гепарина разбавленной в 5 миллилитров ледяного нормального солевого раствора, будьте осторожны, чтобы посмотреть его вытекать из открытой вены. Медленно, аккуратно промыть трансплантат в течение примерно трех минут.
Избыток силовой промывки может повредить эндотелий. Поместите трансплантат в охлажденное солевой блюдо, вложенное в ведро со льдом до трансплантации. Евтанизировать донорскую крысу двусторонней торакотомией.
Операция реципиента начинается подобно донорской операции, обезболивания крысы, обрезки меха, сделать окружной разрез в паховой складке, отражая лоскуты кожи, рассекая бедренной нерв, артерии и вены. И лигаирование же ветки судов, как описано ранее. Однако, во время этой операции, разделить бедренной нерв более distally, чем для донора, но проксимально бифуркации, если это возможно.
Разделите и освободите бедренную артерию и вену и непосредственно зажимите их соответственно на уровне паховой связки с микрохирургическими бульдогами. Продолжить операцию, как описано ранее, разделяя брюшной одобрить мышцы бедра на уровне среднего бедра с тщательной гемостаз, в то время как втягивание конечности medially по мере необходимости. Определите и разделите седалищный нерв проксимальным к точке ветви и трансект бедренной кости в середине вала с помощью роторной пилы.
Удалите реципиента родной правой задней конечности и распоряжаться надлежащим образом в соответствии с местными руководящими принципами Комитета по уходу за животными и использованию. На данном этапе очень важно отказаться от изофлюрана до 1,5% через носовой конус. Слишком много анестезии во время этой менее болезненной части процедуры приведет к смерти крысы.
Настало время, чтобы coapt кости вместе. Используя портативную роторную пилу, сбрить любые нарушения как от донора, так и от реципиента бедренной кости. Отрежьте конец концентратора 18-го калибра иглы, которая станет бедренной кости внутримедуллярного стержня.
Прежде чем манипулировать костью, нанесите небольшое количество костного воска на получателя вырезать конец бедренной кости, чтобы уменьшить кровотечение костного мозга во время процесса замыкания. Коапт донора и реципиента бедренной кости с использованием 18-го калибра иглы в качестве внутримедуллярного стержня. Некоторая сила необходима, но не ream ни кости до сих пор, чтобы перелом коры.
По мере необходимости, удалить иглу и обрезать его до неподходящей длины, так что обе кости плавно вписываются над иглой без иглы, показывающей между костью. Поместите небольшую опору, такую как марлевая площадка или небольшая скала или модельная глина под донорской конечностью, чтобы удержать ее от напряжения. Reapproximate брюшной мышцы групп с 8 до 10 простых прервал 5-0 полиглактина швы так, что трансплантат не вращается вокруг бедренной кости иглы.
Это дает конечности стабильности для анастомосов. Теперь начните анастомы. Периодически орошают трансплантат и хирургическое поле ледяным солевым раствором для лучшей визуализации и уменьшения ишемической реперфузии.
Выравнивание донорских и реципиентных бедренных артерий и анатомозы в конце-конец моды с помощью простых прерванных 10-0 нейлоновый шов, избегая как напряженности и петли. Артерия требует в среднем шесть швов. Как и в артерии, анатомоза донора и реципиента бедренной вены в конце-к-конец моды.
Вена требует от шести до восьми швов. Обильные холодные солевые орошения, атравматические технологии обработки сосудов, и оставляя длинные хвосты, чтобы служить в качестве шов пребывания для опрокидывания сосудов являются важными инструментами для эффективных микрохирургических анастомосов. Поместите умеренное количество гемостатической целлюлозы порошок на обоих анастомоз, а затем удалить проксимальные микрохирургические бульдог зажимы на вену и артерию.
Осмотрите обоих анастомосов на хорошую проходимость и поток. Используйте ватный тампон палочки, чтобы мягко подталкивать вену и проверить на хороший гемостаз на обоих анастомозах. Когда оба anastomoses подтверждены удовлетворительным, обрезать любые оставшиеся долгое пребывание шва хвосты, чтобы соответствовать другим.
Перепозиционирование крысы в левую боковое положение обливитуса, использовать либеральную электрокаутерию для достижения тщательного гемостаз любого реперфузионного мышечного кровотечения. Внимание обращено на нервные анастомосы, как только мышечный гемостаз гарантирован. Пожинать спинной группы мышц, которые лежат непосредственно под седалищного нерва с простым прерван 5-0 полиглактина швов.
Обрезать назад любые нервные концы вырезать, которые появляются оборванные. Пожинать седалищного нерва с 10-0 нейлоновых швов, стремящихся к эпиневральным укусам. От восьми до 10 простых прерванных швов, как правило, достаточно.
Пожинать оставшиеся спинные группы мышц с 5-0 полиглактина швов. Затем закройте спинную кожу 4-0 полиглактином непрерывного ходового шва. Перепозиционирование крысы на положение, повторное приближение бедренной нерва с 10-0 нейлонового шва, опять же, стремление к эпиневральным укусам.
Двух-трех простых прерванных швов, как правило, достаточно. Закройте оставшуюся вентраловую кожу так же, как спинную кожу. Избегайте избыточного хвоста шва, который может раздражать крысу, как только проснется.
Как только животные находятся вне немедленного послеоперационного окна, они могут быть проверены на восстановление нейромотора. Тест Hargreaves используется для проверки теплового ощущения. Поместите крысу в испытательный контейнер и дать ей акклиматизироваться в течение 20 минут.
Стекло аппарата подтверждено чистым, и источник тепла, как подтверждено, работает с пальцем следователя. Перед тестированием подтвердите, что крыса бодрствует, а испытанная лапа расположена над инфракрасным детектором движения. Передача тепловой энергии на уровне интенсивности 90.
Записываются задержки во времени, когда животное отохав лапу от источника тепла. Если движение не происходит в течение 20 секунд, тест прерывается, чтобы предотвратить травму. Получить пять испытаний на проверенную конечность, за исключением самого высокого и самого низкого значения до расчета среднего времени задержки вывода для каждого животного.
Здесь изображен оперативный дизайн в формате мультфильма. Правая задняя конечность как донора, так и крыс-реципиентов ампутирована на уровне среднего бедра в качестве седалищного сечения. Бедренная артерия, вена и нерв, а также седалищного нерва и бедренной кости должны быть восстановлены в операции получателя.
Модель может быть использована, чтобы показать дифференциальные эффекты выживания иммунной подавления и трансплантации стратегии. С помощью этой техники, долгосрочное выживание достижимо. Модель может быть использована для исследования восстановления сенсорного нерва, которое может быть очевидно в течение четырех недель после операции.
Моторная функция также может быть допрошена с помощью платформы анализа походки. Здесь мы представили платформу крысиной модели с благоприятными характеристиками выживания, которую мы используем для зондирования сенсорного и моторного восстановления, как видно из данных о процессе. Трансплантация конечностей под более широкой категорией VCA, алотрансплантация сосудистого компонента имеет широко применимое терапевтическое обещание, но не выполнено.
Основные блокпосты линии текущих иммуносупрессии и нейромоторных методов восстановления. Разработка новых методов будет зависеть от гибкого, надежного и воспроизводимого моделирования животных. Используя эту платформу, мы надеемся, что исследователи смогут продвинуться несколько аспектов трансплантации конечностей.
Спасибо за просмотр и удачи в ваших следующих шагах.
