Хроническое администрирование изопротеренола с помощью осмотического насоса широко используется для повторения изменений в прогрессившей сердечной недостаточности у мышей. Этот метод прост и требует меньше хирургического опыта, чем другие модели, такие как LAD и TAC. Демонстрацией процедуры будет доктор Винсент Рен, научный сотрудник лаборатории доктора Ибина Вана.
После взвешивания и записи массы тела каждой мыши, рассчитать соответствующее количество и концентрацию изопротеренола для каждого животного, и растворить изопротеренол в 120 микролитров стерильных 0,9% хлорида натрия. Тщательно смешайте в течение одной минуты, чтобы полностью solubilize изопротеренола, и взвесить и записать вес одного пустого осмотического насоса, вместе с и без его модератор потока, на мышь. Прикрепите 27-калибровочный, тупой наконечником заполнения трубки при условии осмотических насосов, и загрузить один, один миллилитр шприц со 120 микролитров раствора изопротеренола на мышь.
Держа насос в вертикальном положении, вставьте трубку заполнения через отверстие насоса в верхней части, пока кончик трубки для заполнения сидит в нижней части резервуара насоса, и медленно угнетать поршень шприца, пока раствор изопротеренола не заполнится до открытия насоса. Когда насос был загружен, осторожно удалите трубку и стереть лишний раствор. Вставьте обратно модератор потока, чтобы закрыть насос, и стереть любой избыток решения.
Затем переутомить насос, чтобы подтвердить, что более 90% объема водохранилища было заполнено. Поместите мышь в положение лежа на подогретой площадке, и удалить воздух из нижней части живота. Для хирургической имплантации осмотического насоса, подтвердите отсутствие реакции на щепотку ноша в анестезироваемой мыши, и нанесите мазь на глаза животного.
Очистите обитаемую кожу подходящим дезинфицирующим средством и сделайте разрез кожи средней линии на один сантиметр. Используйте пару тупых ножниц, чтобы тщательно вскрыть кожу от основных перитонеаических стенок, и использовать типсы, чтобы вытащить брюшной стенки от основного кишечника. Используйте тонкие ножницы, чтобы вырезать 0,8-сантиметровое отверстие в брюшной стенке, и вставьте осмотический модератор потока насоса сначала в брюшную полость.
Когда насос на месте, использовать 5-0 абсорбируемых швов в прерванной моды, чтобы закрыть отверстие в брюшной стенке, и использовать 6-0 неабсорбируемых швов, чтобы закрыть кожу. Затем поместите мышь в специальный инкубатор с мониторингом до полного лежачих, прежде чем вернуть животное в свою домашнюю клетку. Здесь представлено резюме еженедельных изменений, основанных на выбранных эхокардиографических параметрах и ожидаемом времени разработки модели.
Хотя различия наблюдаются между штаммами мыши, в среднем, interventricular перегородки стенки толщиной в конце диастола и дробного сокращения увеличение в первую неделю, но уменьшить на более поздние сроки. Левый желудочковый внутренний диаметр в конце диастола и левой желудочковой массы увеличиваются в течение трех недель. Кроме того, сердца мышей демонстрируют заметно большие размеры левой желудочковой камеры под изопротеренолом, а также большее количество фиброза по отношению к солевым обработанным контролем.
Крайне важно поддерживать стерильную хирургическую среду во время операции по выживанию, чтобы свести к минимуму послеоперационную инфекцию и заболеваемость. Успешное создание модели можно оценить по серийной эхокардиографии на гипертрофию, расширение и дисфункцию, а также ex vivo с помощью гистологической и молекулярной оценки заготовляемой сердечной ткани. Мы применили этот метод к более чем 100 штаммов инбредных мышей для оценки сердечной ремоделирования черты из-за хронической бета-адренергической стимуляции.
Результаты публикуются и легко доступны.
