Этот протокол имеет важное значение, потому что наш метод замораживания оттаивания является подходящим процессом для подготовки биосовместимых гидрогелей для использования в биомедицинских, фармацевтических или косметических целях. Основным преимуществом этого метода является то, что он не использует химические перекрестные агенты, которые могут вызвать врожденный дефект. Кроме того, состояние замораживания, используемое в этом методе, контролирует конечное свойство гидрогелей, таких как градусы.
Этот метод может быть применен к гидрогелям с другими приложениями. Это делает использовать для лечения загрязнения воды. Действительно, он может быть использован для производства полимерных бусин, используемых в качестве контейнера для воды для новой культуры.
Важно полностью гомогенизировать полимерный раствор, который он измеряет. В противном случае гидрогели представят точки растрескивания. Кроме того, вы должны быть осторожны с замораживанием раз в каждом цикле.
Для начала этой процедуры растворяют 0,2 грамма хитозана и 10 миллилитров 0,1 молярной уксусной кислоты при комнатной температуре и поддерживают непрерывное механическое перемешивание на ночь для приготовления 2%хитозанового раствора. На следующий день растворите один грамм PVA и 10 миллилитров дистиллированной воды и перемешайте при 80 градусах По Цельсию в течение одного часа. Используйте магнитный мешалку, чтобы смешать одинаковое количество обоих растворов при комнатной температуре, пока они не будут однородными.
Налейте смеси на чашки Петри. Оставьте образцы при атмосферном давлении на два часа для дегазации. Заморозить гидрогели при температуре минус четырех градусов по Цельсию, минус 20 градусов по Цельсию, или минус 80 градусов по Цельсию в течение 20 часов и четырех циклов.
Заморозить еще один гидрогель при температуре минус 80 градусов по Цельсию в течение 20 часов, используя пять или шесть циклов замораживания. После третьего цикла замораживания, мыть гидрогели с деионизированной водой. В конце последнего цикла замораживания заморозить сухой гидрогели при температуре минус 50 градусов по Цельсию в течение 48 часов и перемешать для дальнейшей характеристики.
При готовности к работе характеристика FT-IR поместит небольшой кусочек гидрогеля в спектрофотометр FT-IR в режиме ATR. Возьмите спектр FT-IR от 4000 до 600 длин волн. Во-первых, вырезать диски из гидрогеля, которые 13 миллиметров в диаметре и 10 миллиметров в высоту.
Взвесь их. Инкубировать диски в 50 миллилитров деионизированной воды при 25 градусов по Цельсию во время встряхивания. Каждые 30 минут удаляем образец из среды.
Пятно образца для устранения излишков воды и взвесить его. Затем рассчитайте степень отеков и выполните электронную микроскопию и поревую асимметрию, как указано в текстовом протоколе. Перед погрузкой приготовьте четыре литра дифлюнизального раствора по 15 миллиграммов на литр и перемешайте на ночь.
Подтвердите концентрацию раствора с помощью УФ-виз-спектроскопии. Затем набухают 400 миллиграммов лиофилизированных образцов гидрогеля и шесть миллилитров дистиллированной воды в течение 24 часов. Для загрузки заполните колбу 50 миллилитров дифлюнизального раствора и поддерживайте при 25 градусах Цельсия при постоянном перемешивании.
Погрузим каждый раздутый гидрогель в колбу. Затем возьмите 2 миллилитровых алицита оставшегося дифлюнисального раствора в разное время, чтобы определить область плато кривой. Через 24 часа замените раствор свежим.
Измерьте абсорбцию каждой алициты на 252 нанометров и определите концентрацию дифлюнисаля, присутствуют в растворе, используя кривую калибровки дифлюнисаля. Определите количество дифлюнисала, сохраненного в гидрогеле, и эффективность инкапсуляции, как указано в текстовом протоколе. Затем заморозить загруженные гидрогели при температуре минус 80 градусов по Цельсию и лиофилизировать их при температуре минус 50 градусов по Цельсию.
Для высвобождения препарата погрузим 300 миллиграммов лиофилизированных гидрогтелей, загруженных дифлюнисом, и 50 миллилитров фосфатного буфера при рН 7,4 и при 25 градусах Цельсия. Поддерживайте постоянное перемешивание. Свяжете два миллилитровых алицита в разное время и замените свежей средой, чтобы сохранить постоянный объем.
Определите дифлюнисальный выпущенный спектрофотометрически на 252 нанометров в соответствии с кривой калибровки. После этого вывести преобладающий механизм высвобождения препарата в гидрогелях, как указано в текстовом протоколе. Здесь гидрогели CSPVA готовятся без перекрестных агентов с использованием метода замораживания оттаивания.
Спектр FT-IR показывает семь характерных сигналов обоих полимеров. Все гидрогели CSPVA показывают очень пористую поверхность и отличительные изменения наблюдаются в зависимости от условий подготовки. Гидрогели, приготовленные при температуре минус четыре градуса по Цельсию, представляют самые большие поры.
Гидрогели, подготовленные при температуре минус 80 градусов по Цельсию, как представляется, имеют более пористую сеть, и количество циклов замораживания, как представляется, способствует более определенным и круговым порам. Тем не менее, гидрогели, подготовленные с шестью циклами замораживания при температуре минус 80 градусов по Цельсию, показывают меньшую проницаемость, чем те, которые подготовлены с четырьмя циклами замораживания при минус 80 градусах по Цельсию, вероятно, из-за их высокой тортуозности, что нашло отражение в более низком общем объеме вторжения. При отеках гидрогели быстро поглощают большое количество воды, сохраняя в десять раз их вес в течение первых пяти часов и до 15 раз их вес после 20 часов.
При наблюдении эффекта температуры видно, что гидрогель, подготовленный с четырьмя циклами замораживания при температуре минус 80 градусов по Цельсию, показывает меньшую емкость отеков в первые пять часов. Количество циклов замораживания не создает никаких различий в любое время. Высвобождение кинетики дифлюниса из гидрогелей поддерживается около 30 часов во всех случаях с гидрогелем, подготовленным с четырьмя циклами замораживания при температуре минус 80 градусов по Цельсию, высвобождая наибольшее количество.
Нет никакой разницы в выпуске между гидрогелем, подготовленным с четырьмя циклами замораживания при температуре минус 80 градусов по Цельсию, и гидрогелем, подготовленным с шестью циклами замораживания при минус 80 градусах по Цельсию. Самое главное помнить при попытке этой процедуры являются условия замораживания. Вы должны начать с почти трех циклов замораживания для того, чтобы получить завершенные, сформированные гидрогели.
Этот метод можно было бы объединить с клеточной культурой для оценки биосовместимости in-vitro. Она также может сочетаться с исследованиями деградации. После разработки этих процедур мы поняли, что мы могли бы изучить возможность включения других полимеров в смесь или даже природных соединений, таких как алоэ вера.
Это позволило бы нам включить новые свойства в эти материалы.
