Терапия стволовыми клетками широко сообщалось как перспективное лечение многих заболеваний. И методы листа клетки были разработаны для того, чтобы улучшить удержание клетки и выживание в пределах целей, тоже. Во время строительства клеточных листов недостаточное питание остается ключевой проблемой для потери функции стволовых клеток, и является неудовлетворительным свойством стволовых клеток, наконец, эффект терапевтического воздействия in vivo.
Наша цель, чтобы подготовить доступные многослойные стволовые клетки лист продукта, наша команда разработала клеточных полюсов, перикард и лист клеток эшафот. Основываясь на эшафот многослойных клеток стартер будет быстро построен с неапептидом водорода и динамика перфузии система используется для обеспечения питания питания стволовых клеток в пробирке. Вынул высушенный DBP эшафот и положил его в центре черного основания.
Положите белое кольцо напряжения на эшафот DBP, и прикрепить его в ткани перевозчика. Убедитесь, что DBP эшафот полностью закреплен в ткани перевозчика. Добавьте 100 сред культуры микролитров на эшафот DBP.
Положите эшафот в инкубатор 37 градусов по Цельсию, и дайте ему впитаться в течение 15 минут. Вынюйте клетки из инкубатора, удалите культурные среды из культурного блюда, аккуратно вымойте клетки двумя миллилитров теплого PBS. Удалите все PBS из культуры блюдо, и убедитесь, что не остается жидкости.
Добавьте два миллилитра в раствор 1,25%трипсина в блюдо и инкубировать клетки в течение трех минут. Остановите эффект трипсина, добавив два миллилитров культуры среды. Аккуратно вымойте клетки из тарелки.
Перенесите подвески клеток в новую центробежную трубку на 15 миллилитров. Центрифугат клеток в 220 раз тяжести в течение пяти минут, и получить клеточные отложения. Удалите супернатант и уничтожь клеточный осадок.
Повторно приостанавливать клетки с тремя миллилитров 10% раствор сахарозы. Аспират 10 микролитров клеточной подвески, и содержание номера клетки читает гемоцитометр, извлечь три миллиона клеток и передачи в вашей новой 1,5 миллилитров центробежной трубки. Центрифугат клеток в 220 раз квадратный корень в течение пяти минут, полностью удалить supernatants и получить клетки осадок.
Приготовьте 20 микролитров 10% раствора сахарозы. Аккуратно повторно приостанавливайте клетки и получите единую подвеску. Добавить 20 микролитров пептид гидрогеля в верхней части подвески осторожно смешать пептид гидро гель, и клетки подвески с T, вынюхить DBP эшафот, оставляя ткани перевозчика, а затем осторожно аспирировать исчисление медианы с T.Aspirate смесь смеси и равномерно добавить на DBP эшафот.
Добавьте один миллилитр кальциедетата в нижней части носителя ткани. Аккуратно добавьте четыре миллилитровой культурной среды в блюдо культуры, а затем выйти лист клетки. Поместите клетки в инкубатор на два часа, чтобы дать ему культуру.
Динамическая перфузионная система включает в себя контейнер культуры перфузии, газо обменивающиеся recrement и стеклянную бутылку. Сборки являются динамическими системами перфузии, как показано на рисунке. Добавьте в стеклянную бутылку два медианы культуры гидромилитров.
Вставьте лист клетки в камеру контейнера культуры, добавьте три миллилитров культуры медианы в контейнере, положить динамические системы перфузии в инкубаторы, и начать перекачивать. Откройте контейнер культуры в двупозволенном лежачем. Вынул лист клетки из контейнера культуры и положил его в блюдо культуры.
Используйте один типс, чтобы обездвижить носителя ткани и использовать еще два force, чтобы отделить белое кольцо напряжения от черной базы. Наконец, получить многослойный лист ячейки. DBP эшафот прозрачный.
Sem перепродает показывает, что колледжи захватили и компоненты полностью зарезервированы. Листы клеток могут быть получены и проведены типсами для кратковременного сохранения. Эти листы клеток могут быть переданы в 1,5 миллилитров цилиндрической трубки.
В качестве модели, например, начиная с клеточных показов BMFC'S весьма позитивным для стволовых клеток маркер CD 9O и CD 29. После клеточной конструкции BMFC'S, покидая лист ячейки, остается высоким уровнем расширения CD 90 и CD 29. Строительство многослойной структуры ячейки является критическим шагом протокола.
Время кастрюли требует четырех гидрогеля, когда значение PH меняется от SA к нейтральному, поэтому важно мыть клетку раствором сахарозы, чтобы удалить поверхностные ионы. Кроме того, соотношение объема клеточной подвески и пантигидрогеля не является хорошим другом для построения временной многослойной конструкции. После формирования 3D структуры стволовых клеток, вы увидите, что динамическая система перфузии имеет важное значение для стабилизации многослойной структуры, а также поддержания виабильности стволовых клеток.
Динамическое проникновение медианы культуры смогло облегчить стволовые клетки для того чтобы пролиферировать и экстраполировать смысл клетки внутри multilayered структура также динамические термометры культуры должны быть отрегулированы согласно по-разному типам стволовой клетки.
