Purificação de afinidade de uma proteína marcada com 6X-His usando um sistema de cromatografia líquida de proteína rápida

Neste estudo, pretendemos purificar a endonuclease 1 ou FEN1 do retalho, uma proteína crucial de replicação do DNA usando cromatografia de afinidade. Isso nos permitirá investigar a função do FEN1 na replicação e reparo do DNA em um ambiente in vitro controlado, avançando nossa compreensão de suas funções e papéis biológicos. Vários tipos de cromatografia são usados para purificar proteínas de ligação ao DNA, sendo a mais comum a cromatografia de afinidade.

Dentro da cromatografia de afinidade, a cromatografia de afinidade de metal imobilizado é uma das ferramentas mais fortes para purificar proteínas marcadas com His. Uma vez que a interação entre o His-marcado e o íon metálico, geralmente o níquel ou o cobalto são muito fortes. Dois fatores cruciais para um processo de purificação de proteínas bem-sucedido são o rendimento e a pureza da proteína.

Dependendo do uso pretendido da proteína, o rendimento ou a pureza podem ser preferidos em relação ao outro. Nossas descobertas mostram que a seleção da resina apropriada para a purificação de proteínas marcadas com His pode produzir resultados desejáveis para as aplicações a jusante da proteína.