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Biochemistry

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Nanyang Technological University

Quantificação baseada em imagens de alto rendimento da síntese e distribuição do DNA mitocondrial

Transcrição

Um procedimento para estudar a dinâmica do metabolismo do DNA mitocondrial (mtDNA) em células usando um formato de placa multi-poço e imagens automatizadas de imunofluorescência para detectar e quantificar a síntese e distribuição do mtDNA é descrito. Isso pode ser usado para investigar os efeitos de vários inibidores, estresses celulares e silenciamento gênico no metabolismo do mtDNA.

Capítulos neste vídeo

0:00

Introduction

1:21

Preparation of siRNA Mixture for Mitochondrial DNA Synthesis

2:00

Cell Transfection and 5‐Bromo‐2’‐Deoxyuridine (BrdU) Incorporation in HeLa Cells

3:14

5-Bromo-2'-Deoxyuridine (BrdU) Labeling of Mitochondrial DNA in HeLa Cells

4:51

HeLa Cell Fixation with Hoechst 33342 and Blocking

5:51

Addition of Primary and Secondary Antibodies to the Transfected HeLa Cells to Monitor the mtDNA Distribution

7:49

Quantitative Image Analysis to Measure the mtDNA and Gene Expression Levels in the Transfected HeLa Cells

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