Induzindo lesão hepática aguda em ratos via tetracloreto de carbono (CCl₄) exposição através de um tubo orogástrico

Gostaria de apresentar nosso trabalho sobre lesão hepática aguda induzida em ratos através da exposição ao tetraclorito de carbono através da sonda orogástrica. Selecione ratos adultos machos Sprague-Dawley pesando de 300 a 350 gramas. Fornecer comida de rato e ad libitum de água.

Realize todos os experimentos entre seis am e 12 PM. A comédia de cuidados com animais da Universidade Ben-Gurion do Negev, Israel aprovou todo o procedimento de tratamento e teste usado neste protocolo. Mantenha os ratos à temperatura ambiente de 22 graus Celsius com luzes de 12 horas e ciclos escuros de 12 horas. Cannulate a veia da cauda com um cateter calibre 22.

Coletar amostras de sangue na linha de base. A análise bioquímica sanguínea inclui a medição do soro GOT, GPT e bilirrubina total. O exame das enzimas hepáticas e o nível total de bilirrubina foram realizados no laboratório bioquímico do Soroka Medical Center.

Atenção: a exposição à alta concentração de tetraclorito de carbono, incluindo vapor ou absorção da pele pode afetar o sistema nervoso central, degenerar o fígado e o rim, e exposição prolongada pode levar ao coma ou à morte. Prepare uma solução de 50% de tetraclorito de carbono misturado com azeite de oliva como veículo em uma proporção para um. Induzir a pathotoxicidade in vivo pela administração de tetraclorito de carbono através de uma sonda orogástrica.

Insira uma sonda orogástrica através da cavidade oral do rato. Exponha os ratos a diferentes doses de tetraclorito de carbono. Um mililitro por quilo para lesão hepática aguda leve, dois ponto cinco mililitros por quilo para lesão hepática aguda moderada, ou cinco mililitros por quilo para lesão hepática aguda grave.

Para o grupo falso, exponha os ratos a cinco mililitros por quilo apenas azeite. Coletar amostras de sangue a 24 horas da exposição ao tetraclorito de carbono. A análise bioquímica sanguínea inclui a medição do soro GOT, GPT e bilirrubina total.

Coloque rato morto na placa de dissecação em recombinante dorsal com o abdominal voltado para cima e raspe o abdômen. Usando bisturi, inciso o comprimento total do ventrum do ânus até o queixo. Reflita a pele.

Com o bisturi, inciso a parede abdominal do ânus à cartilagem xifoide para expor as vísceras abdominais. Transfira o fígado para uma placa de petri. Faça uma coloração de hematoxilina e eosina.

Examine as fatias sob ampliação do microscópio de 200 vezes com um comprimento objetivo de 20 milímetros. A seção hepática deve ser classificada por um patologista especializado, cego ao protocolo de tratamento. O escore de zero indica que não há anormalidades hepáticas, um a dois indica lesão hepática leve, três a quatro indica lesão hepática moderada, e cinco a seis indica lesão hepática grave.

Os vários grupos de ratos em diferentes momentos são mostrados no esquema. 24 horas após a indução de lesão hepática aguda, houve um aumento significativo nos níveis de GOT, GPT e bilirrubina total, dependendo do tetraclorito de carbono exposto em comparação com o grupo controle. O valor p foi inferior a zero ponto zero zero um.

Alterações histopatológicas foram observadas após 24 horas em todos os grupos após intoxicação por tetraclorito de carbono em várias doses. A pontuação de classificação histológica em 24 horas entre os três grupos intervencionais para o grupo controle foi significativamente maior. O valor p foi inferior a zero ponto zero cinco.

Nosso grupo de pesquisa apresentou o método comum e físico de lesão hepática aguda induzida em ratos através da exposição ao tetraclorito de carbono através da sonda orogástrica. Este método é usado para investigar a fisiopatologia da lesão hepática aguda e para testar diferente sobre a estratégia protetora. Muito obrigado por sua atenção.