O objetivo geral deste pré-tratamento é gerar camundongos e que os canais TRPV1 sejam dessensibilizados em regiões supraspinais. Este método pode ajudar a responder perguntas-chave no campo neurofarmológico. A principal vantagem dessa técnica é que a dessensibilização trpv1 seletiva supraspinal pode ser induzida de forma bastante simples.
Para iniciar este procedimento, anestesia um rato com sódio pentobarbital intraperitoneal e verifique se há perda de reflexo de retração. Para tratamento subcutâneo, injete RTX a 20 microgramas por mililitro na parte de trás do pescoço a um volume de 0,1 mililitro por 10 gramas de peso corporal. Para o grupo controle, injete o veículo da mesma forma.
Passe uma agulha de calibre 27 descartável através de um tubo de metal para expor a ponta de 3 a 3,5 milímetros da agulha. Em seguida, segure os ossos esquamosais do rato firmemente com os dedos. Mova a agulha lateralmente sobre o couro cabeludo e encontre a sutura sagital enquanto a ponta da agulha está ligada à sutura.
Mova a ponta cerca de um milímetro para a direita, em seguida, mova a ponta rostrally para encontrar a sutura coronal. Depois, insira a agulha devagar e verticalmente. Injete a solução RTX por mais de 10 segundos e segure-a por mais 10 segundos depois.
Posteriormente, retire a agulha lentamente e devolva o rato para sua gaiola doméstica. Uma semana após a injeção de RTX, pelo menos 60 minutos antes do teste, transfira o mouse para a sala de testes. Pelo menos 30 minutos antes do teste, coloque o mouse em uma gaiola de plexiglass para permitir que ele se aclimata ao ambiente.
Em seguida, 20 minutos antes do teste, administre acetaminofeno a 300 miligramas por quilograma ao mouse intraperitoneally. Segure o mouse solto em um pequeno saco de pano e insira uma agulha de calibre 30 no calcanhar da pata traseira direita. Avance a agulha subcutâneamente para perto da almofada de caminhada e injete 20 microliters de solução RTX a 0,05 microgramas por mililitro.
Posteriormente, meça o período de lambida e mordida na região glabrous da pata afetada em cada bloco de cinco minutos. Uma semana após a injeção de RTX, transfira o mouse para a sala de testes. Coloque o mouse em uma gaiola de plexiglass.
Marque as manchas a 1,5 e 2,5 centímetros da base da cauda. Em seguida, segure o mouse livremente em um pequeno saco de pano e aplique pressão nos pontos com uma sonda sem cortes. Observe que a pressão de corte de 250 gramas é imposta para evitar danos teciduais.
Determine a pressão necessária para provocar o comportamento de fuga e calcule o limiar nociceptivo, com uma média da pressão determinada nos dois pontos. Repita os procedimentos a cada 15 minutos. Depois de obter a linha de base, administre acetaminofeno a 300 microgramas por quilograma ao mouse intraperitoneally e, em seguida, repita o teste de pressão da cauda a cada 15 minutos até chegar a 90 minutos.
Estas duas figuras mostram a capacidade de resposta dos camundongos tratados com SC ou ICV à injeção intraplantar de RTX. O comportamento de lambida e mordida de ratos tratados com veículos foi notável nos primeiros 10 minutos. Embora os camundongos pré-tratados de SC não tenham exibido comportamento de lambida e mordedura, os camundongos pré-tratados do ICV normalmente respondiam à injeção plantar de RTX.
Além disso, a administração intraperitoneal de acetaminofeno reduziu o comportamento de lambida e mordeção de camundongos tratados com ICV do veículo, mas não em camundongos tratados com ICV RTX. Este gráfico mostra os efeitos analgésicos do acetaminofeno a 300 microgramas por quilograma no teste de pressão da cauda. O acetaminofeno reduziu a resposta nociceptiva de camundongos pré-tratados do veículo em ambos os testes, mas os efeitos analgésicos do acetaminofeno foram inibidos em camundongos que eram ICV pré-tratados com RTX.
Uma vez dominada, esta técnica de injeção de ICV pode ser aplicada para outras drogas. Não se esqueça que trabalhar com Resiniferatoxina pode ser extremamente perigoso e certifique-se de usar luvas de borracha e óculos para proteção durante o manuseio.
