Este trabalho foi apoiado pela Suíça nacional Science Foundation Grant 150271.

este protocolo experimental foi aprovado pelo veterinário Cantonal, Friburgo e o suíço Federal veterinária Office, Switzerland (FR-2015/58).
 Nota: foram utilizados coelhos NZW masculino com peso entre 2,8 a 3,2 kg. Os animais estavam alojados em condições convencionais (12 h luz e ciclo escuro, fornecida comida e água ad libitum). Antes de desnudamento do balão, os animais foram aclimatados para 1 semana, durante o qual eles foram alimentados com dieta de comida normal. Após 1 semana de aclimatação, coelhos foram trocados para aterogênico dieta consistindo de alto teor de gordura (8,6%) e ácidos graxos saturados com dieta rica em colesterol (1%) 205 mg/kg para a duração inteira de estudo. Lesão de balão na artéria ilíaca esquerda foi realizada 1 semana após o início da dieta e os animais foram sacrificados após 2 semanas ou 4 semanas de lesão balão.
 1. procedimentos pré-operatórios <ol><li>esterilizar todos os instrumentos cirúrgicos antes do uso com um esterilizador de grânulo de vidro ou outro instrumento apropriado.</li>
	<li>Preparar e verificar o conjunto de cateter de balão.
	<ol><li>Anexar um conector luer-lock 1 mL seringa preenchida com solução salina normal para a parte do conector luer-lock do cateter balão. Monitorize cuidadosamente a ausência de ar. Verifique os vazamentos e garantir a inflação do balão apropriado pressionando o êmbolo da seringa.</li>
	</ol></li> <li>Pesar o coelho e ligar o thermopad a 37 ° C.</li>
	<li>Usar uma solução de buprenorfina em uma concentração de 0,3 mg / ml. injetar uma dose de 0,01 mg/kg por via subcutânea.</li>
	<li>ANESTHETIZE o coelho com 5% de isoflurano e 5 L/min O 2 em uma câmara de indução de 10-15 min.</li>
	<li>Coloque o coelho anestesiado sobre a almofada de aquecimento, mantida na plataforma cirúrgica. Coloque o patch e clipes para monitorar a temperatura, respiração e eletrocardiograma.</li>
	<li>Anexar o focinho do coelho para uma máscara facial conectada a uma máquina de anestesia adequada. Manter a anestesia com isoflurano (4,0% com 2,5 L/min O 2). Confirmar anesthetization adequada (indicado por falta de tônus muscular e perda de reflexos de mordaça e transformam).</li>
	<li>Aplicar a pomada oftálmica de ambos os olhos para impedir que as córneas de secagem. Cubra o coelho com uma folha cirúrgica estéril com apenas o membro inferior exposto.</li>
</ol> 2. Protocolo cirúrgico <ol><li>remover o cabelo da zona ventral logo abaixo as articulações de joelho, usando a máquina de cortar cabelo animal.</li>
	<li>Limpe a área com desinfetante apropriado para limpar a pele e remover pelos soltos.</li>
	<li>Localizar a artéria safena e faça uma incisão de pele pequena de cerca de 1,5 cm de comprimento com um bisturi.</li>
	<li>Expor uma pequena porção da artéria safena com pequenas pinças curvas sem danificar a veia femoral e o nervo femoral.</li>
	<li>Coloque dois loops de ligadura solto (seda 5-0) sob a artéria safena e amarre um laço de ligadura em direção a extremidade distal da artéria. Coloque uma pinça microvascular acima a ligadura para parar o fluxo de sangue da artéria ilíaca.</li>
	<li>Aplicar topicamente uma gota de papaverina para dilatar a artéria e prevenir vasoespasmo.</li>
	<li>Levante a artéria safena com a ajuda da ligadura amarrada e fazem uma incisão pequena arteriotomia usando um 24 agulha de calibre.</li>
	<li>Elevar as abas da incisão com pinça fina e inserir lentamente uma veia picareta ou uma guia de agulha no lúmen da artéria.</li>
	<li>Inserir um cateter de embolectomia arterial 2 francês Fogarty a artéria safena. Remover os grampos microvasculares e escolher veia.</li>
	<li>Avançar o cateter até a marca de sexto (20-25 cm) corresponde a uma posição de aproximadamente 2 a 5 cm acima da bifurcação ilíaca.</li>
	<li>Insuflar o balão com soro fisiológico normal de 0,1 mL utilizando uma seringa de 1 mL ou a uma pressão nominal de 6 atm usando um compressor de ar manual regulamentado conforme descrito em 16 , 22.</li>
	<li>Mantenha o cateter de balão com fórceps e arraste volta por 6cm através da ilíaca arterytoward o ponto de inserção, enquanto girar o cateter.</li>
	<li>Desinsuflar o balão puxando o êmbolo da seringa.</li>
	<li>Repita os passos 2.10 a 2.13 três vezes para garantir o completo desnudamento endotelial.</li>
	<li>Remover o cateter e imediatamente amarrar o laço de ligadura logo acima o site arteriotomia para parar o sangramento.</li>
	<li>Aplicar todo anti-séptico adequado em torno da periferia da ferida e limpar afastado os coágulos de sangue. Fechar a incisão na pele com uma sutura de 5-0 e desinfectar o local da cirurgia com solução de iodo-povidona.</li>
	<li>Repetir passos 2.1 a 2.16 sobre o contralateral ilíaca utilizando um cateter novo.</li>
	<li>a pomada oftálmica de olhos um esfregaço.</li>
</ol> 3. Cuidados pós-operatórios <ol><li>administrar sulfadoxine 40 mg/kg e trimetoprim 8 mg/kg ou a qualquer outro antibiótico adequado imediatamente após o procedimento cirúrgico.</li>
	<li>Durante o período de recuperação de anestesia, manter o coelho sobre uma almofada de calor colocada em uma gaiola limpa autoclavada.</li>
	<li>Remover o patch monitoramento e clipes.</li>
	<li>Após a recuperação, retornar os coelhos para jaulas em casa. Injectar por via subcutânea buprenorfina 0,05 - 0,1 mg/kg pós - operatório cada 6-12 h por 48 h. continuar aterogênico dieta por mais duas semanas ou quatro semanas.</li>
</ol> 4. Colheita de tecido e análise da composição da placa <ol><li>depois de duas semanas (para cedo placa fina) ou três semanas de lesão de balão, anestesiar o coelho utilizando isoflurano em uma maneira similar como descrito acima.</li>
	<li>Abrir a cavidade torácica e eutanásia os coelhos por exsanguinação intracardíaca.</li>
	<li>Isolar as artérias ilíacas, conforme descrito em 23.
	<ol><li>Brevemente, abrir o abdômen e expor o retroperitônio. Trace a aorta em direção a bifurcação ilíaca e amarrá-la acima da bifurcação. Retire com cuidado os tecidos circunvizinhos para expor e isolar ambas as artérias ilíacas.</li>
	</ol></li> <li>Dissecar fora de ambas as artérias ilíacas e mergulhe-os em solução salina gelada tamponada de fosfato. Remova os coágulos com a ajuda de pinças. Divida cada artéria ilíaca em 4-6 segmentos para caracterizar a espessura da placa ao longo da artéria.</li>
	<li>Imediatamente incorporar os segmentos arteriais em um molde contendo a temperatura ideal de corte composta, snap-congelamento com nitrogênio líquido e mantê-lo em-70 ° C. preparar 5 µm espessura seções usando um criostato, conforme descrito em 24.</li>
	<li>Executar histologia, imunofluorescência ou imuno-histoquímica mancha para morfometria, placa lipido e conteúdo celular conforme descrito em 10 , 25. 
	Nota: Brevemente, enxágue as seções arteriais com solução salina tamponada fosfato (PBS) e permeabilize usando 0,2% Triton. Enxagúe as seções com PBS e bloquear sites não específicas com albumina de soro bovino 2% por 30 min. Incubar as secções para 1 h a 37 ° C com anti actina α-SM (1: 200) ou anticorpo RAM11 (1: 200). Enxagúe as seções com PBS e incube-os com anticorpo secundário apropriado para 30 min a 37 ° C. Lave novamente com PBS e adicionar Hoechst (5 µ g/mL) por 10 min detectar núcleos.</li>
</ol>

<ol>
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An angiographic, morphometric, and immunocytochemical analysis in the cholesterol-fed New Zealand white rabbit.</a> Arterioscler Thromb. 12, 1267-1273 (1992).</li><li>Khanna, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cholesterol+diet+withdrawal+leads+to+an+initial+plaque+instability+and+subsequent+regression+of+accelerated+iliac+artery+atherosclerosis+in+rabbits.">Cholesterol diet withdrawal leads to an initial plaque instability and subsequent regression of accelerated iliac artery atherosclerosis in rabbits.</a> PLoS One. 8, e77037 (2013).</li><li>Zou, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+resveratrol+on+intimal+hyperplasia+after+endothelial+denudation+in+an+experimental+rabbit+model.">Effect of resveratrol on intimal hyperplasia after endothelial denudation in an experimental rabbit model.</a> Life Sci. 68, 153-163 (2000).</li><li>Li, M., Zhang, Y., Ren, H., Zhang, Y., Zhu, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+clopidogrel+on+the+inflammatory+progression+of+early+atherosclerosis+in+rabbits+model.">Effect of clopidogrel on the inflammatory progression of early atherosclerosis in rabbits model.</a> Atherosclerosis. 194, 348-356 (2007).</li><li>Nakazawa, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+polymer-based+comparator+drug-eluting+stents+using+a+rabbit+model+of+iliac+artery+atherosclerosis.">Evaluation of polymer-based comparator drug-eluting stents using a rabbit model of iliac artery atherosclerosis.</a> Circ Cardiovasc Interv. 4, 38-46 (2011).</li><li>Van Dyck, C. 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J., Bao, S., Celermajer, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optical+coherence+tomography+for+serial+in+vivo+imaging+of+aortic+plaque+in+the+rabbit:+a+preliminary+experience.">Optical coherence tomography for serial in vivo imaging of aortic plaque in the rabbit: a preliminary experience.</a> Open Heart. 2, e000314 (2015).</li><li>Abela, O. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plaque+Rupture+and+Thrombosis:+the+Value+of+the+Atherosclerotic+Rabbit+Model+in+Defining+the+Mechanism.">Plaque Rupture and Thrombosis: the Value of the Atherosclerotic Rabbit Model in Defining the Mechanism.</a> Curr Atheroscler Rep. 18, 29 (2016).</li><li>Yamashita, A., Asada, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+rabbit+model+of+thrombosis+on+atherosclerotic+lesions.">A rabbit model of thrombosis on atherosclerotic lesions.</a> J Biomed Biotechnol. 2011, 424929 (2011).</li></ol>

Os autores declaram não concorrentes interesses financeiros.

O modelo de aterosclerose de artéria ilíaca coelho é amplamente utilizado na investigação de aterosclerose. Com este protocolo os coelhos rapidamente desenvolveram placas mais avançadas e graves em comparação com lesões espontâneas desenvolvidas com apenas dieta rica em colesterol. Importante, os animais se recuperar rapidamente da cirurgia.
O principal estímulo para atherogenesis é os danos mecânicos causados pelo cateter de balão que fere o endotélio e distende o vaso parede26. Este procedimento induz uma resposta de remodela caracteriza-se por uma inflamação com recrutamento de macrófagos e acúmulo de lipídios quando associado com dieta hypercholestorolemic, migração de células de músculo liso vascular e proliferação, matriz reforçada síntese e estabelecimento de um neointima invasiva em um tempo dependente da forma15,16. Inserir o cateter de balão é a parte mais crítica do processo. Cuidado deve ser exercitado para evitar inserir vigorosamente o balão. O uso de periférico artéria safena para acessar a artéria ilíaca comum simplifica a técnica. Artéria ilíaca também pode ser acessada através do corte para baixo conforme descrito anteriormente,27,28da artéria carótida. No entanto, avaliar através da artéria carótida, a artéria ilíaca requer um alto grau de perícia cirúrgica e equipamentos adicionais tais como uma unidade de angiografia. Também está associada com complicações relacionadas ao procedimento como lesão de veia jugular, levando a hemorragia fatal29. Uso de vasodilatador tópica como papaverina ajuda a dilatar os vasos e reduzir a resistência da parede arterial contra o cateter de balão30. O tamanho de pressão e balão de inflação deve ser cuidadosamente considerado como estes têm uma associação direta na formação de neointimal31. Distensão excessiva do balão para um grau mais elevado do que os níveis desejados pode levar a ruptura da parede do vaso. Isso pode resultar em vazamento de sangue e formação de trombos robusto no lúmen e sobre a superfície exterior26.
Os animais devem ser alimentados uma lipídica rica dieta por 1 ou 2 semanas antes da lesão de balão para garantir que uma lesão endotelial ocorre num cenário hipercolesterolêmicos. Ele também ajuda os animais a se adaptar à nova dieta. Embora esta técnica induz placas avançadas em coelhos, a morfologia das placas difere do que os observados em humanos. As lesões humanas espontâneas são restritas à região subendoteliais com uma camada elástica interna intacta32. Aqui, os estudos realizados até 4 semanas mostrou sem núcleos fibróticos. A lesão aterosclerótica permanece semelhante a raia gorda com infiltração de macrófagos substancial.
Muitos modelos de pequenos e grandes animais têm sido utilizados para a compreensão atherogenesis6. O modelo de artéria ilíaca coelho balão-lesão tem sido usado para estudar o efeito de novos agentes terapêuticos, sistemas de entrega de droga de novela, evolução da placa e da imagem latente de32,10,33. Único ou múltiplos injurieshave de balão foi realizada na artéria ilíaca34,35, artéria carótida36,37e aorta10,38. As vantagens do método apresentado são o desenvolvimento da placa de grande volume e espessura, em comparação ao uso de artéria carótida. Além disso, a lata ilíaca contralateral ser usado como um controle e, portanto, reduz a variabilidade de animal para animal,29. A lesão de balão em artérias ilíacas coelho pode ser realizada com segurança e facilmente usando o método descrito aqui. Placa se desenvolve de uma forma dependente do tempo e é homogênea em toda a extensão da artéria. Outros modelos de coelho aterosclerótica também foram desenvolvidos como o Watanabe hereditários hiperlipidêmico (WHHL) modelo, um modelo animal geneticamente modificado com deficiência de receptores de lipoproteínas de baixa densidade. O modelo de lesão de balão também pode ser aplicado a coelho WHLL para produzir lesões em um local definido.
Existem diferenças entre a artéria ilíaca coelho e placas coronárias humanas. Com efeito, estabeleceram-se vários procedimentos alternativos na tentativa de desenvolver lesões ateroscleróticas avançadas e para criar um modelo de ruptura de placa, como observado em seres humanos39. Por exemplo, a formação da placa instável foi induzida, eliminando a colesterol dieta após 8 semanas em coelhos submetidos a lesão de balão16. Outros procedimentos modificados usam disparadores farmacológicos como veneno de víbora de Russell de10 e subsequente balão repetidas lesões40para avaliar o mecanismo de ruptura de placa, hipertensos e trombo o crescimento aterosclerótica navios. Veneno de víbora de Russell s contém proteases que ativam a cascata de coagulação levando à trombose. Resultados de lesões repetidas balão na geração de trombina por placa tecido fator40. Note-se que os resultados de modelos animais, incluindo o modelo de coelho não podem perfeitamente extrapolar para os seres humanos. No entanto, estes modelos podem ser uma ferramenta útil para avaliar e comparar a eficácia de novas intervenções farmacológicas. Cuidado, extrapolações devem ser feitas em relação ao grau de composição hipercolesterolémia e placa para ampliar o conhecimento sobre a etiologia, fisiopatologia e tratamento da aterosclerose humana. O modelo apresentado aqui ajuda a estudar os mecanismos envolvidos na evolução da placa bacteriana e investigar o efeito de novas terapias antiateroscleróticas dirigido para a estabilização da placa/regressão.

Ruptura das placas ateroscleróticas vulneráveis é uma das principais causas de morte no nações industrializadas1. Embora pesquisas nas últimas décadas se desenrolou vários mecanismos moleculares e celulares envolvidos na progressão da placa, continuou ainda são necessários esforços não só para desvendar o complexo mecanismo de progressão da doença, mas também para testar novas terapêuticas aproxima-se. Vários modelos animais têm sido propostos para estudar a aterosclerose. Manipulação genética, ferimentos de endotélio de alimentação ou mecânica de colesterol são as estratégias padrão compartilhadas por modelos mais animais da aterosclerose, incluindo ratos, coelhos ou miniporcos. Entre estes, coelhos NZW são sensíveis à dieta rica em colesterol, enquanto ratos e ratos normais não absorvem significativamente colesterol dietético2,3,4. Coelhos, espontaneamente, desenvolver lesões da aorta ricas em macrófagos com algum componente fibroso quando alimentados com colesterol dieta rica5,6. No entanto, o tempo tempo preparatório de 4-8 meses para induzir aterosclerótica plaquesby alimentação colesterol dieta sozinho6,7 é uma grande desvantagem para a maioria das configurações de experimentais. Na busca para induzir lesões em tempo relativamente curto, uma combinação de colesterol alto dieta e balão prejuízo foi desenvolvida pela Baumgarter e Studer8. O objetivo geral desta técnica é induzir o ateroma composta de células de espuma (semelhantes a raia gorda em seres humanos) em coelhos hipercolesterolêmicos dentro de 2 semanas. A presente técnica descreve o procedimento de ferimento de parede arterial com base no método do Baumgarter utilizando um cateter balão avançado nas artérias ilíacas de coelhos hipercolesterolêmicos NZW.
Em conjunto com uma dieta rica de colesterol, danos que resultem de endotelização balão induzida vão levar a aterosclerose. Lesão de balão acelera a formação de lesões ateroscleróticas e produz placa de tamanho uniforme e distribuição. Espessamento da íntima aumenta ao longo de um período de tempo e célula da íntima infiltração começa dentro de alguns dias após lesão. Listras gordas com macrófagos substanciais começam a aparecer após 7-10 dias de lesão de balão e são representadas como lesão tipo II, de acordo com a classificação pela American Heart Association. Lesão de balão em coelho é frequentemente realizado na aorta para estudar a composição da placa bacteriana. O endotélio neointimal expressa altos níveis da molécula de adesão intercelular. As placas estão associadas com dissecção medial e alterações adventícia. Lesões ateroscleróticas são compostas de lipídios, proliferação células musculares lisas (SMCs), fibras colágenas e células inflamatórias que se acumulam sob o endotélio regenerado e são principalmente tipo II na natureza. A distribuição topológica de placas coelho foi semelhante à relatada na aorta humana 9,10 , em princípio, a aorta é maior no tamanho em comparação com as artérias ilíacas e produziria placa de maior comprimento. No entanto, a grande vantagem de usar a artéria ilíaca como o site da aterosclerose em coelhos é sua acessibilidade, sua similaridade no conteúdo muscular de coronária humana11, lesão uniforme desenvolvimento12, fator tecidual elevada atividade13 e consistente navio dimensão comparável ao humana artéria coronária, permitindo a avaliação dos dispositivos fabricados comercialmente morfométricos e angiográficos pontos de extremidade. Métodos invasivos e não-invasivos têm sido investigados para analisar as placas nas artérias ilíacas de coelho no animal vivo. Relatórios anteriores descrevem o uso de ressonância magnética (MRI) com a ajuda de um senhor de 2,35-tesla sistema 14 além disso, o ultra-som intravascular (USIV) ou cateteres de coerência óptica (OCT) a tomografia podem ser devidamente aplicado à imagem ateroma nas artérias ilíacas coelho. A artéria ilíaca é acessível por ultra-sonografia quando usando uma ecografia de alta resolução e a aorta também pode ser explorada com esta técnica.
Na última década, este modelo de coelho de lesão de balão tem ajudado a entender melhor os mecanismos de progressão de placa15e regressão de placa16. Além disso, o modelo tem sido usado para estudar a influência de novos agentes terapêuticos como estatinas, agentes antiplaquetários padrão, antioxidante agentes17,18 e stents farmacológicos tais como everolimus ou eluidor de Zotarolimus stent19,20 em espessamento neointimal. Este modelo também serviu para investigar a imagem intravascular de fluorescência de infravermelho próximo da imagem latente do cateter21.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>New Zealand White rabbits</td>
			<td>Charles River laboratories,France</td>
			<td>Cre:KBL(NZW)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cholesterol rich diet</td>
			<td>Ssniff spezialdi&#228;ten</td>
			<td>Ssniff EF K High Fat and Cholesterol</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass bead sterilizer-Germinator 500</td>
			<td>VWR, Leicestershire, UK</td>
			<td>101326-488</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fogarty balloon embolectomy catheters, 2 French</td>
			<td>Edwards Lifesciences, Switzerland</td>
			<td>120602F</td>
			<td>For single use only</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Luer Lock Syringe</td>
			<td>Becton, Dickinson and Company, USA</td>
			<td>309628</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermopad Type 226</td>
			<td>Solis, Switzerland AG</td>
			<td>397387</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenorphine- Temgesic</td>
			<td>Reckitt Benckiser AG, Switzerland</td>
			<td>7.68042E+12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Piramal Critical Care, Inc, Bethlehem, PA 18017</td>
			<td>2667-46-7</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anaesthesia machine-combi-vet Base Anesthesia System</td>
			<td>Rothacher Medical GmbH, Switzerland</td>
			<td>CV 30-301-A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cardell touch veterinary vital signs monitor</td>
			<td>Midmark, Ohio, USA</td>
			<td>8013-001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ophthalmic ointment-Humigel</td>
			<td>Virbac, France</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Animal hair clippers</td>
			<td>Aesculap AG, Germany</td>
			<td>GT420</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disinfectant-Betadine solution</td>
			<td>MundipharmaMedicalCompany, Switzerland</td>
			<td>14671-1203</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont #7 Forceps</td>
			<td>FST Germany</td>
			<td>11274-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medium and small microscissors</td>
			<td>Medline International Switzerland S&#224;rl</td>
			<td>UC4337</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microvascular clamps</td>
			<td>FST, Germany</td>
			<td>18051-28</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Papaverine</td>
			<td>ESCA chemicals, Switzerland</td>
			<td>RE 356 803</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vein Pick</td>
			<td>Harvard Apparatus, Cambridge, UK</td>
			<td>72-4169</td>
			<td>For single use only</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Saline</td>
			<td>Laboratorium Dr. G. Bichsel AG, , Switzerland</td>
			<td>1330055</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polysorb 5-0 suture</td>
			<td>Covidien AG, Switzerland</td>
			<td>UL 202</td>
			<td>Monofilament</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sulfadoxine and Trimethoprim-Trimethazol</td>
			<td>Werner Stricker AG, Switzerland</td>
			<td>Swissmedic Nr. 50&#39;361</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antiseptic- Octenisept</td>
			<td>Sch&#252;lke &#38; Mayr AG, Switzerland</td>
			<td>GTIN: 4032651214068</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate Buffered Saline</td>
			<td>Roth</td>
			<td>1058.1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isobutanol-2-Methylbutane</td>
			<td>Sigma-Aldrich, Switzerland</td>
			<td>M32631-1L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Optimum Cutting Temperature compound-Tissue-Tek</td>
			<td>VWR Chemicals, Belgium</td>
			<td>25608-930</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cryostat</td>
			<td>Leica, Glattbrugg, Switzerland</td>
			<td>Leica CM1860 UV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass slide- Superfrost Plus</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>4951PLUS4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mayer&#39;s Haematoxylin</td>
			<td>Sigma-Aldrich, Switzerland</td>
			<td>MHS32-1L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eosin 0.5% aq.</td>
			<td>Sigma-Aldrich, Switzerland</td>
			<td>HT110232-1L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oil Red O</td>
			<td>Sigma-Aldrich, Switzerland</td>
			<td>O0625-25G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#945;-smooth muscle actin antibody</td>
			<td>Abcam, UK.</td>
			<td>ab7817</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Macrophage Clone RAM11 antibody</td>
			<td>DAKO, Switzerland</td>
			<td>M063301</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hoechst</td>
			<td>Abcam, UK.</td>
			<td>ab145596</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat polyclonal Secondary Antibody (Chromeo 546)</td>
			<td>Abcam, UK.</td>
			<td>ab60316</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 488/547</td>
			<td>Abcam, UK.</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycergel Mounting Medium, Aqueous</td>
			<td>DAKO, Switzerland</td>
			<td>C056330</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematoxylin for Movat pentachrome staining</td>
			<td>Sigma-Aldrich, Switzerland</td>
			<td>H3136-25G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ferric chloride for Movat pentachrome staining</td>
			<td>Sigma-Aldrich, Switzerland</td>
			<td>157740-100G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iodine for Movat staining</td>
			<td>Sigma-Aldrich, Switzerland</td>
			<td>207772-100G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium iodide for Movat pentachrome staining</td>
			<td>Sigma-Aldrich, Switzerland</td>
			<td>60400-100G-F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alcian blue for Movat staining</td>
			<td>Sigma-Aldrich, Switzerland</td>
			<td>A5268-10G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Strong Ammonia for Movat pentachrome staining</td>
			<td>Sigma-Aldrich, Switzerland</td>
			<td>320145-500ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brilliant crocein MOO for Movat pentachrome staining</td>
			<td>Sigma-Aldrich, Switzerland</td>
			<td>210757-50G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acid Fuchsin for Movat pentachrome staining</td>
			<td>Sigma-Aldrich, Switzerland</td>
			<td>F8129-50G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Thiosulfate for Movat pentachrome staining</td>
			<td>Sigma-Aldrich, Switzerland</td>
			<td>72049-250G,</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphotungstic acid for Movat pentachrome staining</td>
			<td>Sigma-Aldrich, Switzerland</td>
			<td>79690-100G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Crocin for Movat pentachrome staining</td>
			<td>Sigma-Aldrich, Switzerland</td>
			<td>17304-5G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EUKITT for Movat pentachrome staining</td>
			<td>Sigma-Aldrich, Switzerland</td>
			<td>03989-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

the rabbit model of accelerated atherosclerosis: a methodological perspective of the iliac artery balloon injury

Síndrome Coronariana Aguda resultante da oclusão coronária após ruptura e desenvolvimento da placa aterosclerótica é a principal causa de morte no mundo industrializado. Coelhos Nova Zelândia branco (NZW) são amplamente utilizados como modelo animal para o estudo da aterosclerose. Eles desenvolvem lesões espontâneas quando alimentados com dieta aterogênico; no entanto, isso requer tempo de 4 a 8 meses. Para mais, melhorar e acelerar o atherogenesis, uma combinação de dieta aterogênico e lesão endotelial mecânica é frequentemente empregada. O procedimento apresentado para indução de ateroma em coelhos usa um cateter balão para perturbar o endotélio na artéria ilíaca esquerda de coelhos NZW alimentados com dieta aterogênico. Tais danos mecânicos causados por cateter balão induz uma cadeia de reações inflamatórias, iniciando o acúmulo de lipídios neointimal em uma forma dependente do tempo. Placa aterosclerótica seguindo balão lesão mostrar neointimal aumento do volume com lipídios extensa infiltração, conteúdo de célula de alta de músculo liso e presença de macrófagos derivados de células de espuma. Esta técnica é simples, Reproduzível e produz placa de comprimento controlada dentro da artéria ilíaca. Todo o processo é concluído no prazo de 20-30 min. O procedimento é seguro, com baixa mortalidade e também oferece elevado sucesso na obtenção de lesões da íntima substanciais. O procedimento do cateter balão induzida resulta de lesão arterial em aterosclerose dentro de duas semanas. Este modelo pode ser usado para investigar a patologia da doença, diagnóstico por imagem e avaliar novas estratégias terapêuticas.

Lesão de balão da artéria ilíaca foi realizada com sucesso sem complicação (Figura 1). O tempo operacional total variou de 20 a 30 min para lesões executada apenas uma artéria ilíaca e 35 a 45 min para lesões em ambas as artérias. O coelho recuperado dentro de 1h após a lesão de balão. Todos os animais apareceram saudáveis sem perda significativa de peso. Sem infecção, edema ou trombose arterial foi encontrada. A área da ferida foi normal, além de alguns fibrose leve no local da sutura. Após 4 semanas de alimentação dieta aterogênico, coelhos exibiram hipercolesterolémia de 44 ± 18 mM/l.
Figuras 2A, Figura 2Ee Figura 2I mostrar certa ileso artéria ilíaca (não submetida a lesão de balão) com uma aparência normal. Uma combinação de balão dietresulted de lesão e colesterol em mudanças estruturais da parede do vaso, levando ao desenvolvimento da placa de ateroma em duas semanas (Figura 2 e Figura 3). As artérias ilíacas feridas ilesos e balão para foram isoladas a partir do mesmo animal. A resposta vascular proliferativa para lesão de balão como um evento desencadeante resultou em lipídios extensa infiltração (8.7 ± 1,7% lipídios área) (Figura 2 e Figura 3), músculo liso migração celular e proliferação (Figura 4), bem como recrutamento de macrófagos (Figura 4), levando a um aumento na proporção de espessura-intimal (1,5 ± 0,2) e área de placa (0,8 ± 0,2 mm2), com concomitante diminuição da área de lúmen (1,4 ± 0,2 mm2) (Figura 3) observar a 2 semanas após a lesão de balão. RAM-11 é um anticorpo monoclonal que se destina especificamente contra o citoplasma de macrófagos de coelho. Actina α-SM identifica actina de músculo e reage com células de músculo liso vascular em vasos sanguíneos. Estes anticorpos têm sido anteriormente utilizados para o estudo de macrófagos e células de músculo liso nas lesões da íntima do coelho. Estas mudanças continuaram a evoluir com o tempo e um aumento na proporção de espessura intimal / (2,6 ± 0,2) e luminal explicitas (0,7 ± 0,1 mm2) (Figura 2 e Figura 3) observou-se 4 semanas após a lesão de balão. Esta técnica leva ao desenvolvimento robusto de ateroma que se desenvolve ao longo do tempo e estudou-se após 2 a 4 semanas.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55295/55295fig1.jpg"> 
Figura 1: representação esquemática, ilustrando o cronograma de placa progressão após lesão de balão. <a href="https://ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/55295/55295fig1large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55295/55295fig2.jpg"> 
Figura 2: lesão de balão induzido aterosclerose na artéria ilíaca coelho. Imagens representativas de Movat pentachrome (A-D), hematoxilina-eosina (E-H) e O óleo vermelho (-L) manchadas de seções de un-feridos (A, E, eu), 2 semanas pós lesão do balão (B, F, J) (n = 5) e 4 semanas pós lesão de balão (C, G, K) (n = 3) segmentos de artéria ilíaca da dieta aterogênico alimentados NZW coelhos. Barra de escala de D, H e L é de 100 µm. escala bar para as outras imagens = 500 µm. Labelled na imagem B é o lúmen, íntima, IEL (lâmina elástica interna) e enguia (lâmina elástica externa). Mídia é a área entre o IEL e a enguia. <a href="https://ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/55295/55295fig2large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55295/55295fig3.jpg"> 
Figura 3: Análise morfométrica da placa. A dispersão enredo mostra intimal/relação de espessura, placa, área do lúmen e % O óleo vermelho positivo área nas seções de artéria ilíaca de controle não-lesionado, balão ferido artéria em 2 (n = 5) e 4 semanas (n = 3). Dados são mostrados como média ± DP. * p &#60; 0,05 vs artéria un-lesionado, #p &#60; 0.05 vs 4 semanas pós balão lesão. N.D. denota não detectado. Área da placa é calculada subtraindo-se a área do lúmen da área IEL enquanto óleo vermelho área positiva representa % da área de parede vaso de seção transversal total. <a href="https://ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/55295/55295fig3large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55295/55295fig4.jpg"> 
Figura 4: análise imuno-histoquímica da composição placa. Imagens representativas mostrando actina de músculo liso-α (vermelho) (A-D) e macrófagos, células positivas (RAM 11) (vermelho) (E-F). Painéis de certo mostram as respectivas imagens mescladas com Hoechst (azul) e elastina (verde). Barra de escala = 100 µm. <a href="https://ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/55295/55295fig4large.jpg" target="_blank">clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>

Watch this Scientific Journal Video about The Rabbit Model of Accelerated Atherosclerosis: A Methodological Perspective of the Iliac Artery Balloon Injury at JoVE.com

The Rabbit Model of Accelerated Atherosclerosis: A Methodological Perspective of the Iliac Artery Balloon Injury

Modelos animais de aterosclerose são essenciais para entender o mecanismo e a investigar novos enfoques para evitar o desenvolvimento de placa ou ruptura, das principais causas de morte no mundo industrializado. Este protocolo utiliza uma combinação de lesão de balão e colesterol dieta rica para induzir ateroma na artéria ilíaca coelho.

O modelo de coelho da aterosclerose acelerada: uma perspectiva metodológica da artéria ilíaca balão lesão

Acute coronary syndrome resulting from coronary occlusion following atherosclerotic plaque development and rupture is the leading cause of death in the ...

the-rabbit-model-accelerated-atherosclerosis-methodological

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Medicine

12.0K visualizações.  University of Fribourg. Modelos animais de aterosclerose são essenciais para entender o mecanismo e a investigar novos enfoques para evitar o desenvolvimento de placa ou ruptura, das principais causas de morte no mundo industrializado. Este protocolo utiliza uma combinação de lesão de balão e colesterol dieta rica para induzir ateroma na artéria ilíaca coelho.

Vídeo: The Rabbit Model of Accelerated Atherosclerosis: A Methodological Perspective of the Iliac Artery Balloon Injury

A Murine Model of Stent Implantation in the Carotid Artery for the Study of Restenosis

Despite the considerable progress made in the stent development in the last decades, cardiovascular diseases remain the main cause of death in western countries. Beside the benefits offered by the development of different drug-eluting stents, the coronary revascularization bears also the life-threatening risks of in-stent thrombosis and restenosis. Research on new therapeutic strategies is impaired by the lack of appropriate methods to study stent implantation and restenosis processes. Here, we describe a rapid and accessible procedure of stent implantation in mouse carotid artery, which offers the possibility to study in a convenient way the molecular mechanisms of vessel remodeling and the effects of different drug coatings.

A model of stent implantation in mouse carotid artery is described. Compared to other similar methods, this procedure is very rapid, simple and accessible, offering the possibility to study in a convenient way the vascular wall reaction to different drug-eluting stents and the molecular mechanisms of restenosis.

Um modelo murino de implante de stent na artéria carótida para o Estudo da reestenose

Despite  the considerable progress made in the stent development in the last decades,  cardiovascular diseases remain the main cause of death in western ...

Medicina

A Murine Model of Myocardial Ischemia-reperfusion Injury through Ligation of the Left Anterior Descending Artery

Acute or chronic myocardial infarction (MI) are cardiovascular events resulting in high morbidity and mortality. Establishing the pathological mechanisms at work during MI and developing effective therapeutic approaches requires methodology to reproducibly simulate the clinical incidence and reflect the pathophysiological changes associated with MI. Here, we describe a surgical method to induce MI in mouse models that can be used for short-term ischemia-reperfusion (I/R) injury as well as permanent ligation. The major advantage of this method is to facilitate location of the left anterior descending artery (LAD) to allow for accurate ligation of this artery to induce ischemia in the left ventricle of the mouse heart. Accurate positioning of the ligature on the LAD increases reproducibility of infarct size and thus produces more reliable results. Greater precision in placement of the ligature will improve the standard surgical approaches to simulate MI in mice, thus reducing the number of experimental animals necessary for statistically relevant studies and improving our understanding of the mechanisms producing cardiac dysfunction following MI. This mouse model of MI is also useful for the preclinical testing of treatments targeting myocardial damage following MI.

We introduce a surgical method to induce experimental ischemia/reperfusion (I/R) injury to simulate myocardial infarction (MI) in mouse models that allows for more clarity in positioning of the ligation on the left anterior descending artery (LAD) to increase the reproducibility of MI experiments in mice.

Um modelo murino de isquemia-reperfusão, através da ligadura da artéria Descendente Anterior Esquerda

Acute or chronic myocardial infarction (MI) are cardiovascular events resulting in high morbidity and mortality. Establishing the pathological mechanisms ...

Vascular Balloon Injury and Intraluminal Administration in Rat Carotid Artery

The carotid artery balloon injury model in rats has been well established for over two decades. It remains an important method to study the molecular and cellular mechanisms involved in vascular smooth muscle dedifferentiation, neointima formation and vascular remodeling. Male Sprague-Dawley rats are the most frequently employed animals for this model. Female rats are not preferred as female hormones are protective against vascular diseases and thus introduce a variation into this procedure. The left carotid is typically injured with the right carotid serving as a negative control. Left carotid injury is caused by the inflated balloon that denudes the endothelium and distends the vessel wall. Following injury, potential therapeutic strategies such as the use of pharmacological compounds and either gene or shRNA transfer can be evaluated. Typically for gene or shRNA transfer, the injured section of the vessel lumen is locally transduced for 30 min with viral particles encoding either a protein or shRNA for delivery and expression in the injured vessel wall. Neointimal thickening representing proliferative vascular smooth muscle cells usually peaks at 2 weeks after injury. Vessels are mostly harvested at this time point for cellular and molecular analysis of cell signaling pathways as well as gene and protein expression. Vessels can also be harvested at earlier time points to determine the onset of expression and/or activation of a specific protein or pathway, depending on the experimental aims intended. Vessels can be characterized and evaluated using histological staining, immunohistochemistry, protein/mRNA assays, and activity assays. The intact right carotid artery from the same animal is an ideal internal control. Injury-induced changes in molecular and cellular parameters can be evaluated by comparing the injured artery to the internal right control artery. Likewise, therapeutic modalities can be evaluated by comparing the injured and treated artery to the control injured only artery.

This protocol uses a balloon catheter to cause an intraluminal injury on the rat carotid artery and henceforth elicit neointimal hyperplasia. This is a well-established model for studying the mechanisms of vascular remodeling in response to injury. It is also widely used to determine the validity of potential therapeutic approaches.

Lesão Balloon Vascular e Administração Intraluminal em Rat Carótida

The carotid artery balloon injury model in rats has been well established for over two decades. It remains an important method to study the molecular and ...

A Rat Carotid Balloon Injury Model to Test Anti-vascular Remodeling Therapeutics

The rat carotid balloon injury is a well-established surgical model that has been used to study arterial remodeling and vascular cell proliferation. It is also a valuable model system to test, and to evaluate therapeutics and drugs that negate maladaptive remodeling in the vessel. The injury, or barotrauma, in the vessel lumen caused by an inflated balloon via an inserted catheter induces subsequent neointimal growth, often leading to hyperplasia or thickening of the vessel wall that narrows, or obstructs the lumen. The method described here is sufficiently sensitive, and the results can be obtained in relatively short time (2 weeks after the surgery). The efficacy of the drug or therapeutic against the induced-remodeling can be evaluated either by the post-mortem pathological and histomorphological analysis, or by ultrasound sonography in live animals. In addition, this model system has also been used to determine the therapeutic window or the time course of the administered drug. These studies can leadto the development of a better administrative strategy and a better therapeutic outcome. The procedure described here provides a tool for translational studies that bring drug and therapeutic candidates from bench research to clinical applications.

The rat carotid balloon injury model described below allows researchers to evaluate drugs or therapeutics that negate injury-induced arterial hyperplasia. Detailed pre-surgical preparation, surgical procedure, and post-surgical cares of the animal are described.

A Rat carótida Balão Injury modelo para testar Therapeutics remodela Anti-vasculares

The rat carotid balloon injury is a well-established surgical model that has been used to study arterial remodeling and vascular cell proliferation. It is ...

Induction of Accelerated Atherosclerosis in Mice: The "Wire-Injury" Model

Atherosclerosis is a proliferative fibro-inflammatory disease developing in the arterial wall, inducing a deficient blood flow or a lack of blood flow. Moreover, by rupture of the defective vascular wall, atherosclerosis induces occlusive thrombus formation, which represents the main cause of myocardial infarction or stroke and the most frequent cause of death. Despite the advances in the cardiovascular field, many questions remain unanswered, and additional basic research is essential to improve our understanding of the molecular mechanisms during atherosclerosis and its effects. Due to limited clinical studies, there is a need for representative animal models recreating atherosclerotic conditions such as neointima formation after stent implantation, balloon angioplasty, or endarterectomy. Since the mouse presents many advantages and is the most frequently used model for studying molecular processes, the current study proposes an invasive procedure of endothelial denudation, also known as the wire-injury model, which is representative of the human condition of neointima formation in arteries after revascularization procedures.

This study describes an invasive procedure for the induction of accelerated atherosclerosis in mice. In comparison to other methods using electric- or cryo-induced injury, mechanical-induced injury mimics the human condition of restenosis after revascularization therapies and is ideal for the study of the molecular mechanisms involved.

Indução de Aterosclerose Acelerada em Camundongos: O Modelo de "Lesão por Fio"

Atherosclerosis is a proliferative fibro-inflammatory disease developing in the arterial wall, inducing a deficient blood flow or a lack of blood flow. ...

In Vivo Gene Transfer to the Rabbit Common Carotid Artery Endothelium

The goal of this method is to introduce a transgene into the endothelium of isolated segments of both rabbit common carotid arteries. The method achieves focal endothelial-selective transgenesis, thereby allowing an investigator to determine the biological roles of endothelial-expressed transgenes and to quantify the in vivo transcriptional activity of DNA sequences in large artery endothelial cells. The method uses surgical isolation of rabbit common carotid arteries and an arteriotomy to deliver a transgene-expressing viral vector into the arterial lumen. A short incubation period of the vector in the lumen, with subsequent aspiration of the lumen contents, is sufficient to achieve efficient and durable expression of the transgene in the endothelium, with no detectable transduction or expression outside of the isolated arterial segment. The method allows assessment of the biological activities of transgene products both in normal arteries and in models of human vascular disease, while avoiding systemic effects that could be caused either by targeting gene delivery to other sites (e.g. the liver) or by the alternative approach of delivering genetic constructs to the endothelium by germ line transgenesis. Application of the method is limited by the need for a skilled surgeon and anesthetist, a well-equipped operating room, the costs of purchasing and housing rabbits, and the need for expertise in gene-transfer vector construction and use. Results obtained with this method include: transgene-related alterations in arterial structure, cellularity, extracellular matrix, or vasomotor function; increases or reductions in arterial inflammation; alterations in vascular cell apoptosis; and progression, retardation, or regression of diseases such as intimal hyperplasia or atherosclerosis. The method also allows measurement of the ability of native and synthetic DNA regulatory sequences to alter transgene expression in endothelial cells, providing results that include: levels of transgene mRNA, levels of transgene protein, and levels of transgene enzymatic activity.

In Vivo Gene Transfer to the Rabbit Common Carotid Artery Endothelium

This method is to introduce a transgene into the endothelium of rabbit carotid arteries. Introduction of the transgene allows the assessment of the biological role of the transgene product either in normal arteries or disease models. The method is also useful for measuring activity of DNA regulatory sequences.

Na Vivo Transferência de genes para o endotélio da artéria carótida comum de coelho

The goal of this method is to introduce a transgene into the endothelium of isolated segments of both rabbit common carotid arteries. The method achieves ...

A Rabbit Model of Durable Transgene Expression in Jugular Vein to Common Carotid Artery Interposition Grafts

Vein graft bypass surgery is a common treatment for occlusive arterial disease; however, long-term success is limited by graft failure due to thrombosis, intimal hyperplasia, and atherosclerosis. The goal of this article is to demonstrate a method for placing bilateral venous interposition grafts in a rabbit, then transducing the grafts with a gene transfer vector that achieves durable transgene expression. The method allows the investigation of the biological roles of genes and their protein products in normal vein graft homeostasis. It also allows the testing of transgenes for the activities that could prevent vein graft failure, e.g., whether the expression of a transgene prevents the neointimal growth, reduces the vascular inflammation, or reduces atherosclerosis in rabbits fed with a high-fat diet. During an initial survival surgery, the segments of right and left external jugular vein are excised and placed bilaterally as reversed end-to-side common carotid artery interposition grafts. During a second survival surgery, performed 28 days later, each of the grafts is isolated from the circulation with vascular clips and the lumens are filled (via an arteriotomy) with a solution containing a helper-dependent adenoviral (HDAd) vector. After a 20-min incubation, the vector solution is aspirated, the arteriotomy is repaired, and flow is restored. The veins are harvested at time points dictated by individual experimental protocols. The 28-day delay between the graft placement and the transduction is necessary to ensure the adaptation of the vein graft to the arterial circulation. This adaptation avoids rapid loss of transgene expression that occurs in vein grafts transduced before or immediately after grafting. The method is unique in its ability to achieve durable, stable transgene expression in grafted veins. Compared to other large animal vein graft models, rabbits have advantages of low cost and easy handling. Compared to rodent vein graft models, rabbits have larger and easier-to-manipulate blood vessels that provide abundant tissue for analysis.

This method describes the placement of interposition vein grafts in rabbits, the transduction of the grafts, and the achievement of durable transgene expression. This allows the investigation of physiological and pathological roles of transgenes and their protein products in grafted veins, and testing of gene therapies for vein graft disease.

Um modelo de coelho da expressão do Transgene durável na veia Jugular para enxertos de interposição da artéria carótida comum

Vein graft bypass surgery is a common treatment for occlusive arterial disease; however, long-term success is limited by graft failure due to thrombosis, ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and drugs. It is widely used in many studies on the physiological functions of vascular smooth muscle, the pathogenesis of vascular diseases such as hypertension, and the development of smooth muscle relaxant drugs. The mouse is a widely used model animal with a large pool of disease models and genetically modified strains. We introduced this method to measure the isometric contraction of mouse mesenteric artery in detail. A 1.4-mm segment of mouse mesenteric resistance artery was isolated and mounted on a myograph chamber by passing two steel wires through its lumen. After equilibration and normalization steps, the vessel segment was potentiated by a high-K+ solution twice prior to the contraction assay. As an example of the application of this method in drug development, we measured the relaxant effect of a novel natural substance, neoliensinine, isolated from a Chinese herb, embryos of the lotus seed (Nelumbo nucifera Gaertn.) on mouse mesenteric arteries. The vessel segments mounted on the myograph chamber were stimulated with a high-K+ solution. When the force tension reached a stable sustained phase, cumulative doses of neoliensinine were added to the chamber. We found that neoliensinine had a dose-dependent relaxant effect on smooth muscle contraction, thus suggesting that it bears potential activity against hypertension. In addition, as the vessel segment can survive at least 4 hours after mounting and maintain contractility induced by the high-K+ solution for many times, we suggest that the wire myograph system may be used for the time-consuming process of drug screening.

The wire myograph technique is used to investigate vascular smooth muscle functions and screen new drugs. We report a detailed protocol for measuring the isometric contractility of the mouse mesenteric artery and for screening new relaxants of vascular smooth muscle.

Medição de contratilidade isométrica da artéria mesentérica Mouse usando fio miografia

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

A Rat Carotid Artery Pressure-Controlled Segmental Balloon Injury with Periadventitial Therapeutic Application

Cardiovascular disease remains the leading cause of death and disability worldwide, in part due to atherosclerosis. Atherosclerotic plaque narrows the luminal surface area in arteries thereby reducing adequate blood flow to organs and distal tissues. Clinically, revascularization procedures such as balloon angioplasty with or without stent placement aim to restore blood flow. Although these procedures reestablish blood flow by reducing plaque burden, they damage the vessel wall, which initiates the arterial healing response. The prolonged healing response causes arterial restenosis, or re-narrowing, ultimately limiting the long-term success of these revascularization procedures. Therefore, preclinical animal models are integral for analyzing the pathophysiological mechanisms driving restenosis, and provide the opportunity to test novel therapeutic strategies. Murine models are cheaper and easier to operate on than large animal models. Balloon or wire injury are the two commonly accepted injury modalities used in murine models. Balloon injury models in particular mimic the clinical angioplasty procedure and cause adequate damage to the artery for the development of restenosis. Herein we describe the surgical details for performing and histologically analyzing the modified, pressure-controlled rat carotid artery balloon injury model. Additionally, this protocol highlights how local periadventitial application of therapeutics can be used to inhibit neointimal hyperplasia. Lastly, we present light sheet fluorescence microscopy as a novel approach for imaging and visualizing the arterial injury in three-dimensions.

The rat carotid artery balloon injury mimics the clinical angioplasty procedure performed to restore blood flow in atherosclerotic vessels. This model induces the arterial injury response by distending the arterial wall, and denuding the intimal layer of endothelial cells, ultimately causing remodeling and an intimal hyperplastic response.

Uma lesão de balão segmental controlada por pressão da artéria de rato com aplicação terapêutica periadventicional

Cardiovascular disease remains the leading cause of death and disability worldwide, in part due to atherosclerosis. Atherosclerotic plaque narrows the ...

The Intra-Aortic Balloon Pump

Cardiogenic shock remains one of the most challenging clinical syndromes in modern medicine. Mechanical support is being increasingly used in the management of cardiogenic shock. Intra-aortic balloon pump (IABP) is one of the earliest and most widely used types of mechanical circulatory support. The device acts by external counterpulsation and uses systolic unloading and diastolic augmentation of aortic pressure to improve hemodynamics. Although IABP provides less hemodynamic support when compared with newer mechanical circulatory support devices, it can still be the mechanical support device of choice in appropriate situations because of its relative simplicity of insertion and removal, need for smaller size vascular access and better safety profile. In this review, we discuss the equipment, procedural and technical aspects, hemodynamic effects, indications, evidence, current status and recent advances in the use of IABP in cardiogenic shock.

We describe the steps for the percutaneous implantation of the intra-aortic balloon pump (IABP), a mechanical circulatory support device. It acts by counterpulsation, inflating at the onset of diastole, augmenting diastolic aortic pressure and improving coronary blood flow and systemic perfusion, and deflating before systole, reducing left ventricular afterload.