JoVE Journal

Developmental Biology

Masz pełny dostęp do tej treści za pośrednictwem

Nanyang Technological University

Combining Non-reducing SDS-PAGE Analysis and Chemical Crosslinking to Detect Multimeric Complexes Stabilized by Disulfide Linkages in Mammalian Cells in Culture

Disulfide linkages have long been known to stabilize the structure of many proteins. A simple method to analyze multimeric complexes stabilized by these linkages is through non-reducing SDS-PAGE analysis. Here, this method is illustrated by analyzing the nuclear isoform of dUTPase from the human bone osteosarcoma cell line U-2 OS.

Rozdziały w tym wideo

0:04

Title

0:34

Harvesting Cells After Blocking Free Cysteine Residues Using Iodoacetamide

2:02

Extraction of Protein and Sample Preparation

3:13

In Vivo Formaldehyde Cross-linking of Endogenous Proteins in U-2 OS Cells

4:30

Fractionation of Nuclei

6:11

Extraction of Protein and Sample Preparation

6:51

SDS-PAGE Analysis

7:53

Results: Analyzing Multimeric Complexes Using a Two-step Method of Non-reducing SDS-PAGE Analysis and Formaldehyde Cross-linking

9:04

Conclusion

Powiązane Filmy

Używamy plików cookie, aby ulepszyć Twoje wrażenia z korzystania z naszej witryny.

Kontynuując korzystanie z naszej witryny lub klikając „Kontynuuj”, wyrażasz zgodę na akceptację naszych plików cookie.