이 비디오에서는 연속 혈액 샘플링프로토콜이 제공됩니다. 혈액 방사능은 외탈 동맥 션트를 사용하여 PET/CT와 병행하여 측정됩니다. 이를 통해 PET/CT 데이터의 후속 정량화를 위한 동맥 입력 기능이 생성되고 나중에 정밀한 생체 동체 모델링을 가능하게 합니다.
이 프로토콜의 주요 장점은 재현 가능하고, 최소한의 혈액 손실을 생성하며, 동맥 입력 기능의 시간적 해상도에서 높은 정확도를 용이하게 한다는 것입니다. 혈액의 활동 농도 의 결정에 사용되는 모든 측정 장치를 교차 보정하는 것이 필수적입니다. 절차를 시연하는 것은 실험실의 기술자 인 앤 몰러 (Anne Moller)가 될 것입니다.
12 시간 금식 쥐에 발가락 핀치에 대한 반응의 부족을 확인 한 후, 동물의 수술 측에 다리와 사타구니를 면도하고 추가 소독제로 노출 된 피부를 정화합니다. 동물의 눈에 연고를 바르고, 체온의 지속적인 모니터링 및 유지 보수를 위해 직장 프로브를 배치합니다. 쥐의 사지를 작업 표면에 테이프로 테이프로 지정하고 점막 소독제로 수술 부위를 소독합니다.
사타구니에 약 20밀리미터 절개를 하고 미세한 피부 층을 해부하여 대퇴정맥, 동맥 및 신경을 노출시하십시오. 대퇴 정맥과 동맥 아래에 두 개의 훌륭한 필라멘트를 놓고 말단 필라멘트로 혈관을 장식합니다. 불독 클램프로 용기의 긴장을 유지, 매듭없이 불독 클램프와 선박을 긴장근봉합사 필라멘트를 사용합니다.
거위 동맥류 클램프로 정맥을 2~3밀리미터 의 봉합사로부터 단독으로 차단하고 각막 가위를 사용하여 용기 직경의 1/3절을 만듭니다. 선박 절개는 프로토콜에서 가장 중요한 단계입니다. 각막 가위와 같은 미세 수술 기구를 사용하고 45도 각도로 조심스럽게 선박을 절단하십시오.
멸균 면봉을 사용하여 누출된 혈액을 제거하고 둔한 포셉으로 정맥을 팽창시다. 혈관을 열고, 동맥류 클립까지, 근위 방향으로 정맥에 날카로운 카테터를 삽입합니다. 동맥류 클립을 열고 카테터를 2~3cm 더 밀어 넣습니다.
카테터가 올바르게 배치되면 혈액이 카테터로 흘러 들어갑니다. 두 개의 근위 매듭으로 카테터를 고정합니다. 인슐린 주사기를 사용하여 카테터를 통해 헤파린화식 식염수 100마이크로리터를 플러시하고 흡인하여 카테터의 기능을 확인합니다.
그런 다음 정맥에 대해 설명한 것처럼 카테터를 동맥에 넣고 봉합사로 다리를 닫습니다. 절차를 시연하는 것은 우리의 실험실에서 기술자 인 조안나 포스터 (Joanna Forster)가 될 것입니다. 이미지 수집을 위해 동물을 셔틀 침대 팔레트에 머리를 맞대고 배치하고 셔틀 침대를 확장침대 위치로 이동하여 주사를 맞습니다.
카테터를 션트 시스템에 연결하고 분당 1.52 밀리리터의 유량으로 연동 펌프를 시작하여 션트 시스템을 동물의 피로 채웁니다. 셔틀 침대를 양전자 방출 단층 촬영 또는 PET, 검출 링의 시야 중심으로 이동하고 온라인 혈액 샘플링 시스템을 시작합니다. 그런 다음 PET/계산단층 촬영 또는 CT 워크플로를 시작합니다.
60초 후, T피스를 통해 정맥내 18F-플루오로옥시글루의 약 22메가베크렐 용량의 0.5-1 밀리리터를 주입한다. 약 150 마이크로리터의 헤파린화식 식염수 용액으로 T피스를 플러시하십시오. PET 배출 획득의 경우 시간별 획득 옵션을 3, 600초로 설정하고 연구 동위원소로 F-18을 선택합니다.
350 ~650킬로전자 볼트를 에너지 레벨로 사용하고 3, 438 나노초를 타이밍 창으로 사용하십시오. CT 획득의 경우 획득 옵션에서 감쇠 스캔을 선택하고 프로젝션 설정 필드에서 총 회전반에 대해 180프로젝션을 선택합니다. 시야 및 해상도 설정의 경우 배율로 낮고 275mm 축 스캔 길이와 3, 328 픽셀을 형축 전하 결합 장치 크기로 바인딩에 대해 4 x 4로 선택합니다.
노출 설정 필드에서전류에 대해 500마이크로앰프, 전압에 대한 80킬로볼트, 노출 시간에 대해 180밀리초를 설정합니다. 그런 다음 다음 60분 동안 동적 PET를 획득한 다음 PET 이미징의 끝에서 CT 스캔을 수행합니다. PET 방출 히스토그램의 경우 동적 프레임으로 20프레임 시리즈를 설정하고 지연을 위한 빼기를 선택합니다.
고급 설정 필드에서는 128을 시노그램 너비로, 3개는 스팬으로, 79를 링 차이 및 데드 타임 보정으로 선택합니다. PET 재구성의 경우 2차원 정렬 된 하위 집합 기대 극대화를 사용하여 4 회 반복및 Fourier가 분산 된 소노그램을 적용하고 저장하여 재구성 알고리즘으로 다시 사용하십시오. 그런 다음 매트릭스 크기로 128 x 128을 선택하고 이미지 줌으로 사용하고 프레임에 대해 모두 선택하고 세그먼트에 대해 모두 선택합니다.
수동 혈액 샘플링의 경우 30, 60, 90, 600 및 1, 800 초 이미징 수집을 시작한 후 첫 번째 3 방향 밸브를 엽니다. 추적자 주입 후 30초 후에 EDTA 모세관 혈액 수집 튜브에 동맥 혈액 100 마이크로리터를 수집합니다. 전체 혈액의 활성을 측정하기 위해, 밀리리터 당 킬로베크렐에서 수동 혈액 샘플링의 각 시간 지점에 대한 전체 혈액의 활성의 계산을 허용하기 위해 잘 카운터에 샘플을로드합니다.
온라인 혈액 샘플링의 경우 튜브 가이드를 사용하여 튜브를 검출기에 넣고 혈액 샘플러 소프트웨어를 시작합니다. 획득 인터페이스를 열고 온라인 혈액 샘플링 설정 및 PET/CT의 컴퓨터가 시간 동기화되어 있는지 확인합니다. 추적기를 주입하기 60초 전에 시작 버튼을 눌러 백그라운드 수정을 위한 충분한 데이터를 수집합니다.
측정 후 PMOD 데이터베이스에 저장 버튼을 통해 원시 데이터를 저장합니다. 온라인 혈액 데이터의 교정 및 교정을 위해 교정 인터페이스로 전환하여 부패 보정을 활성화합니다. 18F를 선택하고 이미지 수집 시작 시간을 정의하여 평균 버튼이 백그라운드 보정을 수행할 수 있도록 합니다.
교정을 활성화하고 교정 계수를 입력합니다. 저장 TAC 버튼을 사용하여 수정되고 보정된 혈액 데이터를 저장하고 혈액을 선택합니다. crv 파일입니다.
연속 혈액 샘플링의 시작 부분에서, 방사능 농도의 초기 피크는 온라인 분석에서 트레이서 주입 후 약 5초 부터 관찰될 수 있다. 이 피크 후, 혈액의 활동은 약 15 분에 고원에 도달, 급속 하 게 감소. 수동 혈액 샘플링 데이터에서 검출된 피크는 작고 고원이 쉽게 정의되지 않습니다.
이미지 유래 데이터에서 고원의 피크와 시작점이 명확하게 표시됩니다. 그럼에도 불구하고, 피크의 최대는 연속 혈액 샘플링 데이터에 비해 작습니다. 이 하위 최적 연속 혈액 샘플링에서는 혈액 응고로 인한 샘플링의 처음 3 1/2 분 동안 데이터 수집이 불가능했습니다.
응고를 제거한 후, 튜브 시스템의 흐름이 다시 시작되고 측정이 계속되어 혈액내 최대 방사능을 기록하지 않은 약 4분 만에 피크를 드러냈습니다. 수동 혈액 샘플링 및 이미지 파생 분석은 이 최적 샘플링에서 여전히 가능했습니다, 그러나, 정확한 연속 혈액 샘플링 결과를 위해 관찰된 것과 비교되는 결과를 보여주었습니다. 전체 시술 동안 동물의 복지를 염두에 두고, 권장대로 정확하게 션트 시스템을 준비하고, 튜브의 길이를 줄이려고 노력하십시오.
프로토콜은 새로운 진단 PET 흔적의 변이, 새로운 질병 모델의 특성화 및 전임상 환경에서 새로운 치료법의 치료 반응의 평가를 위해 사용될 수 있다.
