이 작품 국가 기본 연구 프로그램의 중국 (2012CB825504), 국립 자연 과학 재단의 중국 (91232720 및 9163210042), 중국 아카데미의 과학 (CAS) (GJHZ201302 및 QYZDY-남동-SMC015)에 의해 부분적으로 지원 되었다 빌과 멜 린다 게이츠 Y. zhu CAS의 기초 (OPP1119434), 및 100-재능 프로그램.

1. 먹이 챔버 준비
참고: 먹이 챔버 염료 라벨 먹이 분석 결과 대 한 두 부분으로 구성: (표지)로 외부 컨테이너와 내부 (식량)와 컨테이너.
<ol><li>수정 (31.8 m m 내부 직경)와 80 m m의 높이 초파리 배양에 대 한 유리 병에서 외부 컨테이너 (그림 1A, 1 C). 1 %agarose 제대로 먹이 설치 계속 (5 mL)의 층으로 컨테이너의 하단 습도 및 (그림 1B)를 따라 걸을 파리에 대 한 부드러운 기판으로 커버. 컨테이너는 그로 인하여 최소한의 스트레스와 파리에 소동 들고 제어 하지만 자연 분위기를 제공 합니다.<ol>
<li>외부 컨테이너를 준비 합니다. 두 배 증류수, 자주 교 반, 열 50 ml에서 agarose의 0.5 g을 일시 중단 하 고 자력 열 플레이트에 완전히 분해 비등.</li>
		<li>때 약 60 ℃, 1 %agarose 냉각 컨테이너 (그림 1B), 외부 빈에 1 %agarose 5 mL을 전송 하 고 컨테이너는 agarose 패드를 실내 온도에 냉각 될 때까지 열려 있어.</li>
	</ol>
</li>
	<li>염료-표시 된 음식을 준비 합니다. 염료-표시 된 식품의 구성 다른 실험적인 목적에 따라 다릅니다. 여기만 자당 포함 된 염료 표시 된 음식 준비의 예가입니다.<ol>
<li>두 배 증류수, 자주 교 반, 열 50 ml agarose의 0.5 g을 추가 하 고 열 플레이트 자력에 완전히 분해 비등.</li>
		<li>언제 위의 1 %agarose 약 60 ° C에 냉각, 100mm 자당을 얻기 위해 agarose를 자당의 1.71 g을 추가 합니다.</li>
		<li>0.5% (w/v) 염료 라는 음식을 얻기 위해 agarose 솔루션에 파란색 염료 (erioglaucine disodium) 0.25 g을 추가 합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>내부 준비 컨테이너. 컨테이너 안에 빈 평면 수평 표면에 다음 추가 750 µ L 음식의 파란색 염료 표시 된 개별 음식 콘테이너, 적어도 5 분 동안 공고히 하자. 참고: 내부 컨테이너는 13.6 m m의 내부 직경 및 높이 7.5 m m (그림 1A 1 C) 작은 플라스틱 접시. 그것은 염료 라는 음식으로 가득 하 고 외부 컨테이너의 agarose 패드의 가운데에 배치 됩니다.</li>
	<li>준비 된 외부 컨테이너에 컨테이너 내부는 채워진 전송 및 agarose 패드의 중심에 위치. 먹이 챔버 외부 컨테이너의 벽은 응축의 무료 때까지 40 분 동안 실내 온도에 열려 있을 게. 참고: 벽은 물 하락에 연락 하 여 벽에 붙어 되 고에서 파리를 방지 해야 합니다.</li>
	<li>염료-무료 음식 먹이 챔버 준비 (동일한 구성 없이 하지만 염색) 배경 빼기.</li>
</ol>2입니다. 파리의 준비
참고: 성인 여성의 5 ~ 10 일 후 일수로 분석 실험을 먹이 기를 위해 일반적으로 사용 됩니다 파리. 파리의 유전 컨트롤을 포함 하 여 다른 genotypes 준비 하 고 동시에 테스트 하는 것이 좋습니다. (한 먹이 챔버)에서 20 파리 한 데이터 포인트를 생성합니다.
<ol><li>성인 파리 양육 인구 밀도를 고려 하십시오. 일반적으로, 변종에 따라 부모의 파리의 개수와 문화 병의 크기를 변화 하 여 인구 밀도 제어 합니다. 예를 들어, 문화 병 (31.8 m m의 직경)와 80 m m의 높이에 15 남성 및 구획-S의 30 여성을 전송 하 고 1 일 후 제거 성인 파리 산란 암컷 하자.</li>
	<li>Thermogenetic 정품 인증에 대 한 파리를 준비 합니다.<ol>
<li>Gal4/UAS 시스템38 를 사용 하 여 UAS-dTrpA1 다른 GAL4 드라이버 라인 (그림 2B)와 파리 교차점에 의해 다양 한 뉴런에 dTRPA133 를 표현.</li>
		<li>22 ° C, 상대 습도 60%, 그리고 12 h/12 h 빛 어두운 주기의 표준 음식에 성인 파리를 유지.</li>
		<li>시험의 2 일 전에 먹이, 정렬 및 신선한 식품 유리병에 스테레오 현미경 CO2 플라이 패드에 파리를 수집 하 고 유리병 당 20 파리의 밀도 유지.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Optogenetic 활성화를 위한 파리를 준비 합니다.<ol>
<li>Gal4/UAS 시스템38 를 사용 하 여 다른 뉴런에 CsChrimson36 다른 GAL4 드라이버 라인 건너 UAS-CsChrimson 파리에 의해 표현 하.</li>
		<li>Eclosed (24 시간) 이내 파리 새로 수집 하 고 표준 음식 400 µ M 모든-trans-망막을 포함 하는 유리병에 그들을 전송.</li>
		<li>조기 활성화를 방지 하기 위해 포장 알루미늄 호 일 양육 튜브와 다음 원치 않는 가벼운 자극에서 파리를 보호 하기 위해 어두운 상자에 넣어. 25 ° C, 4-6 일 동안 어둠 속에서 60% 습도에서 파리를 유지.</li>
		<li>2 일 전에 먹이 분석 결과 정렬 여성 CO2 플라이 패드 스테레오 현미경의 밑에 난다. 20 파리 한 음식 유리병으로 수집 하 고 먹이 테스트 전에 어둠 속에서 그들을 유지.</li>
		<li>주변광에 의해 발생 하는 효과 피하기 위해 가능한 한 빨리 희미 한 빛 아래에서 모든 작업을 수행 합니다. 작업 영역에서 멀리 떨어져 배치 LED 램프를 사용 하 여, 작업 영역에서 강도 5 µW/c m2입니다. 참고: 굶 어 사용 구획-S 먹이 분석 결과 대 한 긍정적인 컨트롤로 파리. 식품의이 파리를 박탈 하 고 먹이 테스트 전에 24 h에 대 한 1 %agarose 유지 합니다. 이러한 파리의 식품 소비 수준을 하루 변동 평가 도움이 됩니다.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. thermogenetic 활성화
<ol><li>Circadian 리듬 때문에 변이 최소화 하기 위해 Zeitgeber 시간 4-631,32, 주위 하루 중 같은 시간에 모든 먹이 실험을 실시 합니다.</li>
	<li>난방 환경으로 인큐베이터 (또는 온도 조절 히터와 작은 방)을 준비 합니다.</li>
	<li>행동 실험 전에 준비 먹이 실 실험 온도 (30 ℃)에서 온도 먹이 챔버에 상대 유니폼을 보장 하기 위해 2 시간에 대 한 equilibrate.</li>
	<li>먹이 프로세스를 시작 하려면 신중 하 게 전송 20 파리 그들의 가정 유리병에서 데워 먹이 챔버로 부드러운 드려서. 60 분 ( 그림 3A) . 30 ° C에서 먹이 프로세스 계속 참고: 잦은 실이 먹이 행동 저하 인큐베이터 문 개폐와 같은 따라서 한다 최소화.</li>
	<li>30 분 동안 먹이 실-80 ° C (-20 ° C)에서 동결 하 여 60 분에 수 유를 중단. 참고: 동시에 모든 실에 수 유를 중지를 동결 수 있습니다. 파리-80 ° C에서 냉동 두 가지 목적, euthanizing 파리 및 균질 최대 1 주일까지 저장을 위해 제공 합니다.</li>
	<li>온도 제어 그룹에 대 일 분 동안 22 ° C에서 먹이 과정을 시작 하려면 염료 색 음식 챔버를 먹이 실 온에 20 파리를 전송 합니다.</li>
	<li>30 분 동안 실-80 ° C (-20 ° C)에서 동결 하 여 온도 제어 그룹의 먹이 중단.</li>
</ol>4. Optogenetic 활성화
<ol><li>Circadian 리듬 때문에 변이 최소화 하기 위해 Zeitgeber 시간 4-631,32, 주위 하루 중 같은 시간에 모든 먹이 실험을 실시 합니다.</li>
	<li>신중 하 게 전송 20 파리 한 유리병에서 먹이 챔버로 부드러운 두 드려서, 그리고 옆으로 챔버 (그림 4A, 4B) 조명 설치에.<ol>
<li>Optogenetic 조작에 대 한 오렌지 LEDs의 배열을 사용 하 여 (607 nm) 빛 자극, 그리고 수정 먹이 지 원하는 Led 위에 수평 플 렉 시 유리 접시 조명 동안 챔버의 근원으로. (그림 4A, 4B) 습도 60%와 25 ° C에서 인큐베이터 설치를 하십시오.</li>
		<li>자극 하는 동시에 유전자 제어 파리는 본뜬 > CsChrimson 파리, 하지만 다른 먹이 챔버.</li>
	</ol>
</li>
	<li>오렌지 빛으로 다시 조명으로 60 분 동안 먹이 과정을 계속 합니다.<ol>
<li>Optogenetics에 대 한 최적의 조명 농도 실험적으로 결정36. 에 본뜬 > CsChrimson 파리, 2.2 mW/m m2 의 휘도 유도 마비 (운동의 정지) 및 자세 제어의 손실을 따라서, 0.1 mW/m m2 의 중간 강도 사용 하 여 본뜬 자극 > CsChrimson 먹이 테스트 기간 동안 파리.</li>
	</ol>
</li>
	<li>30 분 동안 먹이 실-80 ° C (-20 ° C)에서 동결 하 여 수 유를 중단.</li>
</ol>5. 식품 소비 시각적인 추정
참고: 시각적 득점 방법은 식품 소비량의 반 정량적 평가 제공합니다. 광학 방법으로 객관적 이더라도,이 방법은 그것을 만드는 첫번째 적합을 신속 하 게 추가 테스트에 대 한 후보 유전자 스크린의 라운드 시기 비행 긴장의 많은 수를 통해가 수 있습니다.
<ol><li>수 유 후 anesthetize와 점수는 CO에 파리 스테레오 현미경2 플라이 패드. 볼륨 및 염료 색 음식의 복 부 (그림 2A)에서 강도에 따라 각 비행을 개별 점수를 제공 합니다. 참고: 기준 시각 추정에 대 한: 점수 시스템에 다른 볼륨 및 복 부에 색깔 음식의 농도 해당 하는 음식 섭취 량의 4 레벨.<ol>
<li>점수 0; 감지 염료 색 음식 없이 파리 그 희미 한 (거의 감지) 파란 염료 또는 염료 색 음식을 차지 하는 복 부의 볼륨의 1/3 미만 1의 점수를 제공 합니다.</li>
		<li>점수 2의 점수 복 부의 절반을 차지 하는 강렬한 염료 색 식품으로 이동 합니다.</li>
		<li>그 강렬한 염색 콘텐츠 점령 복 부의 절반 보다 큰 3 (그림 2A)의 점수를 점수.</li>
	</ol>
</li>
	<li>각 실험 조건 (그림 2B)에 다른 점수와 함께 파리의 비율을 계산 합니다.</li>
</ol>6. 색도계 정량화의 식품 소비
<ol><li>후의 수 유, 부 어는 먹이에서 모든 20 파리 종이, 무게의 조각에 챔버 다음 부드러운 브러쉬를 사용 하 여 1.5 mL 튜브에 그들을 전송 합니다. 참고: 감기 챔버에 물 응축 때문에 챔버 벽에 집착 하는 파리를 피하기 위해 같은 시간에-80 ° C 저장에서 챔버의 모든을 하지 마십시오.</li>
	<li>튜브에 PBST의 500 µ L을 추가 하 고 5에 대 한 60 Hz에서 분쇄 밀을 사용 하 여 파리를 균질 s.<ol>
<li>본문 부분의 없습니다 감지 조각 있을 때 충분 한 균질 관찰 하 여 확인 합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>잔해를 13000 rpm에서 30 분 동안 homogenates 튜브를 회전 합니다.</li>
	<li>원심, 후 상쾌한의 100 µ L 96 잘 접시의 전송.</li>
	<li>모든 샘플을 로드 630에서 샘플의 흡 광도 측정 하는 플레이트 리더에 접시를 넣어 nm.</li>
	<li>배경 흡 광도 제거, 파리에서 supernatants의 흡 광도를 상쾌한 블루 음식 먹이 파리에서의 흡 광도에서 염료 없이 음식을 먹이. 참고: 이 단계는 사용 하는 식품의 구성에 따라 선택 사항입니다. (염료) 없이 비행 음식 630에서 흡 광도 생성 하는 때 nm, 그것은 백그라운드를 제거 하려면이 단계를 수행 하는 데 필요한.</li>
</ol>

<ol>
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C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Independent+optical+excitation+of+distinct+neural+populations.">Independent optical excitation of distinct neural populations.</a> Nat Methods. 11 (3), 338-346 (2014).</li><li>Viswanath, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Opposite+thermosensor+in+fruitfly+and+mouse.">Opposite thermosensor in fruitfly and mouse.</a> Nature. 423 (6942), 822-823 (2003).</li><li>Brand, A. 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D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Subset+of+Serotonergic+Neurons+Evokes+Hunger+in+Adult+Drosophila.">A Subset of Serotonergic Neurons Evokes Hunger in Adult Drosophila.</a> Current Biology. 25 (18), 2435-2440 (2015).</li><li>Ro, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serotonin+signaling+mediates+protein+valuation+and+aging.">Serotonin signaling mediates protein valuation and aging.</a> eLife. 5, e16843 (2016).</li></ol>

저자 아무 경쟁 금융 관심사를 선언합니다.

이 보고서는 thermogenetic의 맥락에서 소비 식품의 염료 라벨 먹이 분석의 기술 과정에 초점을 맞추고 먹이 제어 하는 optogenetic 활성화 뉴런을 조작 하 고. 이 간단 하 고 신뢰할 수 있는 프로토콜 제어, 파리의 음식 선호도 측정 하 고 먹이 기반 유전 스크린24통해 먹이 제어 회로에 새로운 플레이어를 식별 하 먹이에 후보 뉴런의 기능을 명료 하 게 하는 데 도움이 됩니다.
염료 라벨 전략은 단기 먹이 행동 조사에서 가능 합니다. 염료, erioglaucine disodium에 녹이 고, 음식 섭취 식품 소비의 중요 한 지표 이다. Deshpande 외. 시연 파란색 염료 자체 카페 분석 결과와 음식 섭취 량 분석 결과17라벨 방사성 측정 때 먹이에 아무런 영향을 보여주었다. 마찬가지로, 우리의 당 결과 (염료 표시 또는 염료 무료 100 m m 자당 솔루션 파리의 다리 자극) 표시는 파리 전시 염료 표시 또는 염료 무료 음식으로 그들의 반응에 큰 차이. 그러나, 염료 초파리에 맛도 인지에 관한 명확한 데이터 여전히 있다.
게다가 중요 한 단계에에서 표시 된 프로토콜을 일반에 특정 주의 테스트할 파리의 상태. 양육 되 고 비과 밀 밀도 유지, 외 파리, 부드럽게 처리 되어야 하 고 먹이 일관 된 결과 생성 하기 위하여 불필요 한 충격 또는 스트레스, 피할.
여기에 제시 된 먹이 패러다임에는 특정 제한이 있습니다. 첫째, 우리의 방법을 계량 음식 소비를 60 분 동안. 같은 날, 오랜 동안 음식 섭취를 평가 하 카페, 같은 다른 메서드는 필요할. 둘째, radioisotopes를 사용 하 여 정량화 방법에 비해, 색도계 방법 이며 덜 민감한 식품 소비 금액은 낮은 때 차이 해결 하기 어렵다. 셋째, 일부 파리 먹이의 시작 후 15 분으로 초기 방전을 시작 하는 것을 고려,이 프로토콜은 실제로 음식 섭취와 배설 인구17의 결과 측정 합니다. 넷째, 여기에 설명 된 음식 섭취 량의 색도계 정량화가 했다 비행 그룹, 하나의 비행의 음식 섭취의 방사성 동위 원소 라벨 등 다른 먹이 분석 실험, MAFE 분석 결과, 또는 FlyPAD에 따라 달라 집니다. 그럼에도 불구 하 고, 간단한, 안정, 표시, 및 높은 처리량 방법 등의 음식 섭취 량의 색도계 정량화의 이점이 선택을 그것 주요 긴장, 다 수의 정량화를 위한 특히 먹이 기반 유전자 화면 및 후속 연구

섭취 하는 음식의 양을 측정 하는 것이 먹이 (기아 상태) 등 내부 요구와 외부 요인 (예: 식품 품질과 palatability)1, 에 두뇌에 의해 컨트롤의 여러 측면을 평가 하기 위한 중요 2 , 3 , 4 , 5 , 6 , 7 , 8 , 9. 최근 몇 년 동안, 초파리 에서 제어를 먹이 기의 신경 기질을 해독의 노력 직접 섭취 하는 음식의 양을 계량 또는 동기 부여를 먹이의 지표로 서 역할을 다 분석 실험의 발전으로 이어질 10 , 11 , 12 , 13 , 14 , 15 , 16.
모 세관 급지대 (카페) 분석 결과12,13 유리 microcapillary에서 액체 식품의 소비 금액을 측정 하기 위해 개발 되었다. 카페 분석 결과 매우 민감하고 재현할 수17 이며 음식 소비, 특히 장기 먹이18측정의 측정을 간소화 합니다. 그러나,이 분석 결과 microcapillary의 끝에 상승 하 고 있는 모든 긴장에 적합 하지 않습니다 거꾸로, 피드 파리를 요구 한다. 또한, 카페 분석 결과 사용 하 여 테스트할 파리 액체 식품에 reared 하기 때문에, 이러한 대사 상태 또는 잠재적인 영양 조건을 양육의 효과 결정 될 남아 있습니다.
코 확장 응답 (%) 분석 결과11,14 식품 상품의 부드러운 접촉으로 코 확장 응답의 주파수를 계산합니다. 분석 결과 평가 하는 우수한 방법으로 입증 당 palatability의 영향 및 음식18,19의 내용을 개별 비행 및 엉덩이의 동기 부여를 먹이. 그러나, 그것의 섭취 양 직접 정량화 아니다.
최근, 반자동 방법, 분석 결과 (MAFE)15, 먹이 매뉴얼 개발 되었다. MAFE에서 하나의 고정된 비행 수동으로 음식을 포함 하는 microcapillary와 함께 먹이입니다. 그 코 확장 반응과 식품 소비를 동시에 모니터링할 수 있습니다, MAFE는 영양 가치와 약리 조작의 효과 평가 적합 합니다. 그러나, 비행을 immobilizing 수 있습니다 부정적인 영향을 행동 성능, 먹이 포함 하 여.
또한, 코를 비행 하 고 활동 검출기 (FlyPAD)10 자동으로 먹이 행동 척도를 개발 되었다. 머신 비전 방법을 사용 하 여, FlyPAD 비행 및 동기 부여를 먹이의 지표로 서 주파수와 코 확장의 기간을 계량 하는 음식 간의 실제 상호 작용을 기록 합니다. FlyPAD는 민감도이 시스템의 견고를 더욱 더 남아 있지만 무료 이동 파리의 먹이 행동을 모니터링 하는 높은 처리량 접근 연구12제공 합니다.
레이블 전략 자주 파리에 음식 섭취를 추정 하는 데 사용 됩니다. 그것은 일반적인 음식 화학 추적기와 라벨, 수 유, 후 음식 섭취 량의 수량을 계산 하기 위해 섭취 한 추적의 양을 측정. 방사성 트레이 서16,17,20,21,22,23,,2425 표 피를 통해 검색 허용 파리 균질 하지 않고 이 방법은 현저 하 게 낮은 다양성 및 높은 감도18, 제공 하 고 음식 섭취 량의 장기 유학 가능. 그러나, 사용 가능한 radioisotopes의 가용성 및 흡 광도 배설의 다른 비율 취해야 한다 고려 사항으로이 분석 결과 사용 하는 경우.
라벨링 및 비 독성 식품과 음식 섭취 량을 추적 한 안전 하 고 간단 하 게 대체2,3,26,,2728이다. 파리는 수용 성 및 비 흡수 염료를 포함 하는 음식을 먹이 후 무 균 그리고 섭취 염료의 금액은 나중에 분 광 광도 계3,,2428,29 사용 하 여 계량 . 라벨 전략 수행 쉽습니다 및 높은 효율성을 제공 하지만 경고와 함께. 음식 섭취 량 섭취 염료에서 추정의 볼륨은 배설 파리17수 유 시작 후 15 분 일찍 시작 되기 때문에 실제 볼륨 보다 작습니다. 또한, 분석 결과 일반적으로 기간 내에 60 분만 단기 먹이 행동24,28의 조사를 위해 적합 하다는 음식 섭취를 평가 합니다. 또한, 유전자 형17,17, 성별 등 여러 내부 및 외부 요인 상태17, 밀도30,32circadian 리듬31,및 식품 품질3 양육 성관계 , 8 , 16, 영향 음식 섭취 량입니다. 따라서, 먹이 기간 특정 실험 조건에 따라 조정 해야 합니다. 음식 섭취 량의 정량화를 촉진, 외 식품 식품 선택2,,1927, 평가 하 고 시각화 카페 분석 결과12에 microcapillary에서 초승달 모양에도 사용 됩니다.
여기, 염료 라벨 방식으로 신경 활동의 결합 프로토콜 조작을 소개합니다. 이 전략 성인 과일 파리24제어를 먹이 기에 우리의 neurogenetic 연구에 유용한 입증 되었습니다. 식품 소비;의 빠른 평가 위한 시각적 득점 메서드 사용 따라서, 시기에 종자의 큰 숫자를 통해 심사에 대 한 유용합니다. 화면에서 후보자는 다음 자세히 객관적이 고 정확한 정량화 추가 연구를 제공 하는 색도계 방법을 사용 하 여 분석 됩니다.
먹이 분석 실험, 게다가 우리는 또한 thermogenetic27,33,34,35 및 optogenetic36 의 메서드 강제로 대상 초파리에서 신경 세포를 활성화 설명 합니다. Thermogenetic 신경 활성화 작업이 간단 하 고 편리한 초파리 와 일시적 수용 체 잠재적인 Ankyrin 1 (dTRPA1)는 신경 흥분을 증가 온도 및 전압 문을 단 양이온 채널 때 주위 온도 23 ° C33,37; 올라가면 그러나, 높은 온도에서 동물 테스트 동작에 악영향을 생성할 수 있습니다. 또 다른 효과적인 방법은 초파리 에서 신경 세포를 활성화 하는 사용 optogenetics CsChrimson36, 빛에 노출 되 면 신경 세포의 흥분 성 증가 channelrhodopsin의 빨간색 이동 변종입니다. Optogenetics 더 높은 시간 해상도 thermogenetics 보다 덜 방해 동작을 제공합니다. 신경 활동의 조작으로 음식 섭취 량의 정량적 측정을 결합 하 여 먹이의 신경 메커니즘을 공부에 대 한 효과적인 접근 방식을 나타냅니다.
우리가 먹이 챔버와 파리의 준비 테스트를 자세히 설명 합니다. 본뜬 Gal4 파리를 사용 하 여 모델24, thermogenetics 및 optogenetics에 의해 활성화 신경 설명 합니다. 염료-표시 된 식품 식품 소비의 정량화의 2 개의 분석 실험 또한 프로토콜에서 설명 합니다.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="942">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:332px;">UAS-CsChrimson</td>
			<td style="width:163px;">Bloomintoon</td>
			<td style="width:176px;">55135</td>
			<td style="width:272px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:332px;">UAS-dTrpA1</td>
			<td style="width:163px;">Bloomintoon</td>
			<td>26263</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">TDC1-GAL4&#160;</td>
			<td style="width:163px;">Bloomintoon</td>
			<td style="width:176px;">9312</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:332px;">TDC2-GAL4</td>
			<td style="width:163px;">Bloomintoon</td>
			<td style="width:176px;">9313</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">sNPF-GAL4</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td style="width:272px;">Provided by Z. Zhao</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">NPF-GAL4</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td style="width:272px;">Provided by Y. Rao</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">TH-GAL4</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td style="width:272px;">Provided by Y. Rao</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">5-HT-GAL4</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td style="width:272px;">Provided by Y. Rao</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">AKH-GAL4</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td style="width:272px;">Provided by Y. Rao</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">dip2-GAL4</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Provided by Y. Rao</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:332px;">Taotie-GAL4</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Provided by J. Carlson</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:332px;">Agarose</td>
			<td>Biowest</td>
			<td style="width:176px;">G-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:332px;">Sucrose</td>
			<td>Sigma</td>
			<td style="width:176px;">S7903</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Erioglaucine disodium salt</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>861146</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">all-trans-retinal&#160;</td>
			<td style="width:163px;">Sigma&#160;</td>
			<td style="width:176px;">R2500</td>
			<td>stored in darkness</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Triton X-100</td>
			<td style="width:163px;">Amresco</td>
			<td>9002-93-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="146">
			<td height="146" style="height:146px;width:332px;">Fly food</td>
			<td style="width:163px;"></td>
			<td style="width:176px;">1 L food contains: 77.7 g corn meal, 32.19 g yeast, 5 g agar, 0.726 g CaCl2, 31.62 g sucrose, 63.2 g glucose, 2 g potassium sorbate, pH&#160;&#160;&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="92">
			<td height="92" style="height:92px;">&#160;1x PBS buffer&#160;</td>
			<td style="width:163px;"></td>
			<td style="width:176px;">1 L 1X PBS contains: 8 g Nacl, 0.2 g Kcl, 1.44 g Na2HPO4, 0.24 g KH2PO4, pH 7.4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:332px;">PBST buffer</td>
			<td style="width:163px;"></td>
			<td colspan="2">1X PBS with 1% Triton X-100</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">&#160;Grinding mill</td>
			<td style="width:163px;">Shang Hai Jing Xin</td>
			<td>Tissuelyser-24</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:332px;">Incubator</td>
			<td style="width:163px;">Ning Bo Jiang Nan</td>
			<td>HWS-80</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Magnetic stirrer with a heat plate</td>
			<td style="width:163px;">Chang Zhou Bo Yuan</td>
			<td style="width:176px;">CJJ 78-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Spectrometer</td>
			<td style="width:163px;">Thorlabs</td>
			<td style="width:176px;">CCS200/M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:332px;">Microplate Spectrophotometer</td>
			<td>Thermo Scientific&#160;</td>
			<td style="width:176px;">Multiskan GO Type: 1510, REF 51119200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Fluorescence stereo microscope&#160;</td>
			<td style="width:163px;">Leica</td>
			<td style="width:176px;">&#160;M205FA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Stereo microscope</td>
			<td style="width:163px;">Leica&#160;</td>
			<td style="width:176px;">S6E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="80">
			<td height="80" style="height:80px;width:332px;">Outside container</td>
			<td>Jiang Su Hai Men</td>
			<td style="width:176px;">glass vial with a diameter of 31.8 mm and a height of 80 mm (inside dimension)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="80">
			<td height="80" style="height:80px;width:332px;">Inside container&#160;</td>
			<td>Beijing Yi Ran machinery factory</td>
			<td style="width:176px;">plastic dish with a diameter of 13.6 mm and a height of 7.5 mm (inside dimension)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:332px;">1.5 mL Eppendorf tubes</td>
			<td style="width:163px;">Hai Men Ning Mong</td>
			<td style="width:176px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">&#160;96 well plate</td>
			<td style="width:163px;">Corning Incorporated</td>
			<td style="width:176px;">&#160;Costar 3599</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:332px;">LEDs</td>
			<td style="width:163px;">Xin Xing Yuan Guangdian</td>
			<td style="width:176px;">607 nm, 3W&#160;</td>
			<td>https://item.taobao.com/item.htm?id=20158878058</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

combining quantitative food-intake assays and forcibly activating neurons to study appetite in drosophila

식품 소비는 생리 적 상태, palatability, 음식, 그리고 문제 명령을 시작 하거나 수 유 중지의 영양 내용을 통합 하는 두뇌의 꽉 제어. 밑에 시기 적절 하 고 적당 한 먹이 제어와 관련 된 생리 적, 심리적 장애의 우리의 이해에 운반의 주요 의미를 먹이의 의사 결정 프로세스 파악 간단 하 고, 양적, 강력한 메서드는 강제로 특정 대상 뉴런의 활동을 증가 하는 등 실험적인 조작 후 동물의 음식 섭취를 측정 하는 데 필요한. 여기, 우리는 성인 초파리에 제어를 먹이 기의 neurogenetic 연구를 촉진 하기 위하여 먹이 분석 염료-라벨-기반으로 도입. 우리가 사용할 수 먹이 분석, 검토 하 고 우리의 방법 thermogenetic 결합 분석 및 염료 표시 된 음식 섭취 량 분석 결과와 먹이 동기를 제어 하는 신경 세포의 optogenetic 조작 설치에서 단계별 설명. 우리는 또한 장점과 독자 적절 한 분석 결과 선택할 수 있도록 다른 먹이 분석 실험에 비해 우리의 방법의 한계를 설명.

Thermogenetic 스크린입니다.
식욕 비정상적으로 증가 하면 생리 적 요구에 높은 음식 섭취 량. 높은 처리량을 디자인 하는이 제도 활용 하는 우리 행동 신경 세포의 유전 핸들을 얻기 위해 기아와 관련 된 화면과 만족 상태 (그림 1). 화면 본뜬 Gal424나왔고. 본뜬 Gal4 뉴런은 강제로 30 ° C에 활성화 될 때는 본뜬 > TrpA1 컨트롤 (그림 2, 그림 3) 보다 식품의 대량 섭취 파리.
시각적으로 식품 소비 점수.
일부 신경 전달 물질 및 neuropeptides 먹이 행동의 규칙에 표시 되어 있기 때문에 우리는 NPF20, sNPF39, octopamine21, 도파민27, 를 포함 하 여 해당 GAL4 라인 테스트 40, 세로토닌41,42, 아 흐35, 그리고 Dilp27,,835. 척도 먹이 반응을, 우리는 시각적으로 검사 하 고 (그림 2A)에 다양 한 양의 감지 염료와 함께 파리를 득점. 본뜬 뉴런의 약 58%의 활성화 후 본뜬 > dTrpA1 파리 전시 강한 먹이 행동, 그리고 이러한 보였다 가벼운 먹이 행동 (그림 2B)의 23%. 반면, 한계 먹이 행동 다른 뉴런을 통해 활성화와 함께 파리에서 관찰 되었다 dTrpA1 (그림 2B).
음식 섭취 량의 색도계 정량화입니다.
음식 섭취 량 높은 정밀도 및 객관성, 계량 음식2,,2728추가 염료에 비행 추출 특정 파장에서의 흡 광도 측정 했습니다. 음식 섭취 량의 볼륨으로 흡 광도 값을 연결할 표준 곡선 샘플 솔루션 (파리, PBST 조직에 대 한 동일한 버퍼)의 흡 광도 측정 하 여 얻은 다른 양의 염료와 혼합). 우리의 결과 보여줍니다, 급성 활성화 본뜬 GAL4 뉴런 TRPA1 극적으로 증가 음식 섭취 같은 테스트 기간 (그림 3B), 유전자 제어 및 온도 제어와 비교 하는 제안으로 본뜬 GAL4 레이블된 신경 성인 초파리의 음식 섭취 량의 조절에 참여.
초파리에서 음식 섭취 량을 홍보 Optogenetic 활성화.
우리는 오렌지 빛36 (그림 4A, 4B)와 조명에 의해 본뜬 뉴런을 활성화 하 UAS-CsChrimson 를 사용. 때 본뜬 > CsChrimson 파리 607에서 LED 조명에 의해 자극 되었다 nm, 그들은 컨트롤 (그림 4C) 보다 훨씬 더 많은 음식을 섭취. 또한, 섭취 한 음식의 양을 자극 빛 (그림 4D)의 농도와 잘 상관 된다. 따라서, dTrpA1와 thermogenetics, 게다가 본뜬 신경에 있는 CsChrimson와 optogenetic 활성화 만족된 파리에서 먹이 동기 또한 촉진합니다.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56900/56900fig1.jpg"> 그림 1 . 성인 파리에서 식욕을 분석 하기 위한 먹이 패러다임. (A) 먹이 챔버 포함 내부 컨테이너 가득 염료 색 음식과 외부 컨테이너 1 %agarose 채워집니다. 왼쪽에서 오른쪽, 내부 컨테이너, 외부 컨테이너, 그리고 완전 한 먹이 챔버. (B) 내부 컨테이너 외부 컨테이너의 하단에 agarose 패드 위에 앉아 있다. (C) 먹이 챔버의 최고 볼 수 있습니다. (D) A 도식 "식욕 화면" 실험을 보여주는 일반 만족된 파리 거의 먹은 음식 (왼쪽된 유리병), 강제로 활성화 하는 동안 먹이 특정 제어 신경 발생 따라서 복 부 (오른쪽 유리병)에 염료 색 음식 전시, 추가 음식 섭취에 만족된 파리. <a href="https://cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56900/56900fig1large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56900/56900fig2v2.jpg"> 그림 2 . 음식 섭취의 시각적 추정. 복 부에 음식 콘텐츠 점수 기준 표시 (A) 표본 이미지. (B) 30 ° c.에 dTrpA1에 의해 활성화 되 고 표시 된 신경을 가진 파리에 점수를 먹이 기의 분포 아니-Gal4: UAS-dTrpA1 (유전자 제어); NPF GAL4: neuropeptide F 긍정적인 뉴런; sNPF GAL4: 짧은 neuropeptide F 긍정적인 뉴런; TDC1-GAL4 및 TDC2 GAL4: octopamine 신경; TH-GAL4: 도파민 뉴런; 5-HT: 세로토닌 뉴런; 아 흐: adipokinetic 호르몬 긍정적인 뉴런; dip2: 인슐린 같은 펩 티 드 2 긍정적인 뉴런; 龍-GAL4: 본뜬 GAL4 레이블 뉴런 (n = 조건 당 120 파리). <a href="https://cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56900/56900fig2v2large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56900/56900fig3.jpg"> 그림 3 . Thermogenetic의 활성화 본뜬 신경 성인 파리에서 식품 소비 증가. (A) 이미지 thermogenetic 활성화 실험의 설정을 보여 줍니다. 30 ° c.에 인큐베이터에서 먹이 테스트 수행 (B) 식품 소비 만족된 파리 색도계 정량화 하 여 30 ° C 또는 1 h. 에 대 한 22 ° C에서 테스트 하나의 비행의 식품 소비에의 한 먹이 챔버에 20 파리의 계산 했다 (n = 6). n.s. 나타냅니다 중요 하지 (p > 0.05); p < 0.001. Tukey의 임시 게시물 테스트 뒤 일방통행 ANOVA는 다중 비교 분석에 사용 되었다. 오차 막대 표시 평균 ± SEM. <a href="https://cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56900/56900fig3large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56900/56900fig4.jpg"> 그림 4 . Optogenetic-활성화 본뜬 뉴런의 강도-종속 방식으로 음식 섭취의 양을 증가. (A, B) Optogenetic 정품 인증에 대 한 설치 프로그램의 2 개의 전망입니다. 먹이 챔버 오렌지 LEDs의 배열을 지원 접시에 옆으로 아래쪽에서 조명 배치 했다. 조명 상자 전면 내부를 보여 제거 되었다 Led. 행동 실험은 25 ° C, 60 %RH 인큐베이터 안에 수행 했다. (C) 표시 genotypes optogenetic 조명 아래 또는 1 시간에 대 한 어둠 속에서 테스트 했을 때의 만족의 음식 소비 (n = 6). (D) 식품 섭취로 만족 본뜬 > CsChrimson 파리 조명 강도 연관 되었다 (n = 6). n.s. 나타냅니다 중요 하지 (p > 0.05); p < 0.001, 일방통행 ANOVA Tukey의 임시 게시물 테스트에 따라 여러 비교, 학생의 t을 분석 하기 위해 사용 되었다-두 그룹 비교 테스트. 오차 막대 표시 평균 ± SEM. <a href="https://cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56900/56900fig4large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>

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Combining Quantitative Food-intake Assays and Forcibly Activating Neurons to Study Appetite in Drosophila

염색 음식 양이 많은 음식 섭취 량 분석 제공 하는 강력한 고 높은 처리량 먹이 동기 평가를 의미 합니다. 결합 식품 소비 분석 결과 thermogenetic 및 optogenetic 스크린은 성인에서 식욕을 기본 신경 회로 조사 하는 강력한 접근 방식을 초파리 melanogaster.

양이 많은 음식 섭취 량 분석을 결합 하 고 강제로 초파리 에서 식욕을 공부 하는 뉴런을 활성화

Food consumption is under the tight control of the brain, which integrates the physiological status, palatability, and nutritional contents of the food, ...

combining-quantitative-food-intake-assays-forcibly-activating-neurons

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Behavior

Combining Quantitative Food-intake Assays and Forcibly Activating Neurons to Study Appetite in Drosophila

8.2K 조회수.  University of Science and Technology of China. 염색 음식 양이 많은 음식 섭취 량 분석 제공 하는 강력한 고 높은 처리량 먹이 동기 평가를 의미 합니다. 결합 식품 소비 분석 결과 thermogenetic 및 optogenetic 스크린은 성인에서 식욕을 기본 신경 회로 조사 하는 강력한 접근 방식을 초파리 melanogaster.

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A Procedure to Study the Effect of Prolonged Food Restriction on Heroin Seeking in Abstinent Rats

In human drug addicts, exposure to drug-associated cues or environments that were previously associated with drug taking can trigger relapse during abstinence. Moreover, various environmental challenges can exacerbate this effect, as well as increase ongoing drug intake.
The procedure we describe here highlights the impact of a common environmental challenge, food restriction, on drug craving that is expressed as an augmentation of drug seeking in abstinent rats.
Rats are implanted with chronic intravenous i.v. catheters, and then trained to press a lever for i.v. heroin over a period of 10-12 days. Following the heroin self-administration phase the rats are removed from the operant conditioning chambers and housed in the animal care facility for a period of at least 14 days. While one group is maintained under unrestricted access to food (sated group), a second group (FDR group) is exposed to a mild food restriction regimen that results in their body weights maintained at 90% of their nonrestricted body weight. On day 14 of food restriction the rats are transferred back to the drug-training environment, and a drug-seeking test is run under extinction conditions (i.e.&#160;lever presses do not result in heroin delivery).
The procedure presented here results in a highly robust augmentation of heroin seeking on test day in the food restricted rats. In addition, compared to the acute food deprivation manipulations we have used before, the current procedure is a more clinically relevant model for the impact of caloric restriction on drug seeking. Moreover, it might be closer to the human condition as the rats are not required to go through an extinction-training phase before the drug-seeking test, which is an integral component of the popular reinstatement procedure.

A procedure that allows a demonstration of robust augmentation of drug seeking in food-restricted rats is described. Following heroin self-administration training, rats go through an abstinence period, in a drug-free environment, during which they are mildly food restricted. Drug seeking is then tested in the drug-associated environment.

헤로인은 절제 쥐의 추구에 장시간 음식 제한의 효과를 연구하기위한 절차

In human drug addicts, exposure to drug-associated cues or environments that were previously associated with drug taking can trigger relapse during ...

연구

행동분석학

Uncovering Beat Deafness: Detecting Rhythm Disorders with Synchronized Finger Tapping and Perceptual Timing Tasks

A set of behavioral tasks for assessing perceptual and sensorimotor timing abilities in the general population (i.e., non-musicians) is presented here with the goal of uncovering rhythm disorders, such as beat deafness. Beat deafness is characterized by poor performance in perceiving durations in auditory rhythmic patterns or poor synchronization of movement with auditory rhythms (e.g., with musical beats). These tasks include the synchronization of finger tapping to the beat of simple and complex auditory stimuli and the detection of rhythmic irregularities (anisochrony detection task) embedded in the same stimuli. These tests, which are easy to administer, include an assessment of both perceptual and sensorimotor timing abilities under different conditions (e.g., beat rates and types of auditory material) and are based on the same auditory stimuli, ranging from a simple metronome to a complex musical excerpt. The analysis of synchronized tapping data is performed with circular statistics, which provide reliable measures of synchronization accuracy (e.g., the difference between the timing of the taps and the timing of the pacing stimuli) and consistency. Circular statistics on tapping data are particularly well-suited for detecting individual differences in the general population. Synchronized tapping and anisochrony detection are sensitive measures for identifying profiles of rhythm disorders and have been used with success to uncover cases of poor synchronization with spared perceptual timing. This systematic assessment of perceptual and sensorimotor timing can be extended to populations of patients with brain damage, neurodegenerative diseases (e.g., Parkinson&#8217;s disease), and developmental disorders (e.g., Attention Deficit Hyperactivity Disorder).

Behavioral tasks that allow for the assessment of perceptual and sensorimotor timing abilities in the general population (i.e., non-musicians) are presented. Synchronization of finger tapping to the beat of an auditory stimuli and detecting rhythmic irregularities provides a means of uncovering rhythm disorders.

비트의 청각 장애를 폭로 : 감지 리듬 장애를 누르면 동기화 손가락 및 지각 타이밍 작업에

A set of behavioral tasks for assessing perceptual and sensorimotor timing abilities in the general population (i.e., non-musicians) is presented here ...

Design and Implementation of an fMRI Study Examining Thought Suppression in Young Women with, and At-risk, for Depression

Ruminative brooding is associated with increased vulnerability to major depression. Individuals who regularly ruminate will often try to reduce the frequency of their negative thoughts by actively suppressing them. We aim to identify the neural correlates underlying thought suppression in at-risk and depressed individuals. Three groups of women were studied; a major depressive disorder group, an at-risk group (having a first degree relative with depression) and controls. Participants performed a mixed block-event fMRI paradigm involving thought suppression, free thought and motor control periods. Participants identified the re-emergence of &#8220;to-be-suppressed&#8221; thoughts (&#8220;popping&#8221; back into conscious awareness) with a button press. During thought suppression the control group showed the greatest activation of the dorsolateral prefrontal cortex, followed by the at-risk, then depressed group. During the re-emergence of intrusive thoughts compared to successful re-suppression of those thoughts, the control group showed the greatest activation of the anterior cingulate cortices, followed by the at-risk, then depressed group. At-risk participants displayed anomalies in the neural regulation of thought suppression resembling the dysregulation found in depressed individuals. The predictive value of these changes in the onset of depression remains to be determined.

We aim to identify the neural correlates underlying sustained and transient thought suppression, and thought re-emergence in controls, at-risk and depressed individuals. Activation was greatest for controls compared to the at-risk and the depressed group in the dorsolateral prefrontal cortex during thought suppression and anterior cingulate cortex during thought re-emergence.

의 fMRI 연구의 설계 및 구현은 젊은 여성 진압 생각하고, 위험에 처한, 우울증에 대한 검사

Ruminative brooding is associated with increased vulnerability to major depression. Individuals who regularly ruminate will often try to reduce the ...

Combining Multiple Data Acquisition Systems to Study Corticospinal Output and Multi-segment Biomechanics

Transcranial magnetic stimulation techniques allow for an in-depth investigation into the neural mechanisms that underpin human behavior. To date, the use of TMS to study human movement, has been limited by the challenges related to precisely timing the delivery of TMS to features of the unfolding movement and, also, by accurately characterizing kinematics and kinetics. To overcome these technical challenges, TMS delivery and acquisition systems should be integrated with an online motion tracking system. The present manuscript details technical innovations that integrate multiple acquisition systems to facilitate and advance the use of TMS to study human movement. Using commercially available software and hardware systems, a step-by-step approach to both the hardware assembly and the software scripts necessary to perform TMS studies triggered by specific features of a movement is provided. The approach is focused on the study of upper limb, planar, multi-joint reaching movements. However, the same integrative system is amenable to a multitude of sophisticated studies of human motor control.

The use of transcranial magnetic stimulation (TMS) to study human motor control requires the integration of data acquisition systems to control TMS delivery and simultaneously record human behavior. The present manuscript provides a detailed methodology for integrating data acquisition systems for the purpose of investigating human movement via TMS.

여러 데이터 수집 시스템을 결합하면 피질 출력 및 멀티 세그먼트 역학을 연구하는

Transcranial magnetic stimulation techniques allow for an in-depth investigation into the neural mechanisms that underpin human behavior. To date, the use ...

Feeding Experimentation Device (FED): Construction and Validation of an Open-source Device for Measuring Food Intake in Rodents

Food intake measurements are essential for many research studies. Here, we provide a detailed description of a novel solution for measuring food intake in mice: the Feeding Experimentation Device (FED). FED is an open-source system that was designed to facilitate flexibility in food intake studies. Due to its compact and battery powered design, FED can be placed within standard home cages or other experimental equipment. Food intake measurements can also be synchronized with other equipment in real-time via FED's transistor-transistor logic (TTL) digital output, or in post-acquisition processing as FED timestamps every event with a real-time clock. When in use, a food pellet sits within FED's food well where it is monitored via an infrared beam. When the pellet is removed by the mouse, FED logs the timestamp onto its internal secure digital (SD) card and dispenses another pellet. FED can run for up to 5 days before it is necessary to charge the battery and refill the pellet hopper, minimizing human interference in data collection. Assembly of FED requires minimal engineering background, and off-the-shelf materials and electronics were prioritized in its construction. We also provide scripts for analysis of food intake and meal patterns. Finally, FED is open-source and all design and construction files are online, to facilitate modifications and improvements by other researchers.

Feeding Experimentation Device FED: Construction and Validation of an Open-source Device for Measuring Food Intake in Rodents

Feeding Experimentation Device (FED) is an open-source device for measuring food intake in mice. FED can also synchronize food intake measurements with other techniques via a real-time digital output. Here, we provide a step-by-step tutorial for the construction, validation, and usage of FED.

설치류에 음식 섭취를 측정하기위한 오픈 소스 장치의 건설 및 검증 : 실험 장치 (FED)를 먹이

Food intake measurements are essential for many research studies. Here, we provide a detailed description of a novel solution for measuring food intake in ...

Application of MultiColor FlpOut Technique to Study High Resolution Single Cell Morphologies and Cell Interactions of Glia in Drosophila

Cells display different morphologies and complex anatomical relationships. How do cells interact with their neighbors? Do the interactions differ between cell types or even within a given type? What kinds of spatial rules do they follow? The answers to such fundamental questions in vivo have been hampered so far by a lack of tools for high resolution single cell labeling. Here, a detailed protocol to target single cells with a MultiColor FlpOut (MCFO) technique is provided. This method relies on three differently tagged reporters (HA, FLAG and V5) under UAS control that are kept silent by a transcriptional terminator flanked by two FRT sites (FRT-stop-FRT). A heat shock pulse induces the expression of a heat shock-induced Flp recombinase, which randomly removes the FRT-stop-FRT cassettes in individual cells: expression occurs only in cells that also express a GAL4 driver. This leads to an array of differently colored cells of a given cell type that allows the visualization of individual cell morphologies at high resolution. As an example, the MCFO technique can be combined with specific glial GAL4 drivers to visualize the morphologies of the different glial subtypes in the adult Drosophila brain.

Application of MultiColor FlpOut Technique to Study High Resolution Single Cell Morphologies and Cell Interactions of Glia in Drosophila

Cells display different morphologies and establish a variety of interactions with their neighbors. This protocol describes how to reveal the morphology of single cells and to investigate cell-cell interaction by using the well-established Gal4/UAS expression system.

높은 해상도 단일 셀 형태학 초파리 에서 명과의 세포 상호 작용을 공부 하 고 다 색 FlpOut 기술의 응용

Cells display different morphologies and complex anatomical relationships. How do cells interact with their neighbors? Do the interactions differ between ...

Reversible Cooling-induced Deactivations to Study Cortical Contributions to Obstacle Memory in the Walking Cat

On complex, naturalistic terrain, sensory information about an environmental obstacle can be used to rapidly adjust locomotor movements for avoidance. For example, in the cat, visual information about an impending obstacle can modulate stepping for avoidance. Locomotor adaptation can also occur independent of vision, as sudden tactile inputs to the leg by an expected obstacle can modify the stepping of all four legs for avoidance. Such complex locomotor coordination involves supraspinal structures, such as the parietal cortex. This protocol describes the use of reversible, cooling-induced cortical deactivation to assess parietal cortex contributions to memory-guided obstacle locomotion in the cat. Small cooling loops, known as cryoloops, are specially shaped to deactivate discrete regions of interest to assess their contributions to an overt behavior. Such methods have been used to elucidate the role of parietal area 5 in memory-guided obstacle avoidance in the cat.

Complex locomotion in naturalistic environments requiring careful coordination of the limbs involves regions of the parietal cortex. The following protocol describes the use of reversible cooling-induced deactivation to demonstrate the role of parietal area 5 in memory-guided obstacle avoidance in the walking cat.

가역 냉각 유도 Deactivations 공부 장애물 메모리 걷는 고양이에 대뇌 피 질의 기여를

On complex, naturalistic terrain, sensory information about an environmental obstacle can be used to rapidly adjust locomotor movements for avoidance. For ...

An Automated Method to Determine the Performance of Drosophila in Response to Temperature Changes in Space and Time

Temperature is a ubiquitous environmental factor that affects how species distribute and behave. Different species of Drosophila fruit flies have specific responses to changing temperatures according to their physiological tolerance and adaptability. Drosophila flies also possess a temperature sensing system that has become fundamental to understanding the neural basis of temperature processing in ectotherms. We present here a temperature-controlled arena that permits fast and precise temperature changes with temporal and spatial control to explore the response of individual flies to changing temperatures. Individual flies are placed in the arena and exposed to pre-programmed temperature challenges, such as uniform gradual increases in temperature to determine reaction norms or spatially distributed temperatures at the same time to determine preferences. Individuals are automatically tracked, allowing the quantification of speed or location preference. This method can be used to rapidly quantify the response over a large range of temperatures to determine temperature performance curves in Drosophila or other insects of similar size. In addition, it can be used for genetic studies to quantify temperature preferences and reactions of mutants or wild-type flies. This method can help uncover the basis of thermal speciation and adaptation, as well as the neural mechanisms behind temperature processing.

An Automated Method to Determine the Performance of Drosophila in Response to Temperature Changes in Space and Time

Here we present a protocol to automatically determine the locomotor performance of Drosophila at changing temperatures using a programmable temperature-controlled arena that produces fast and accurate temperature changes in time and space.

시간과 공간에서 온도 변화에 대 한 응답에서 초파리 의 성능을 결정 하는 자동화 된 방법

Temperature is a ubiquitous environmental factor that affects how species distribute and behave. Different species of Drosophila fruit flies have specific ...

Assessing the Coherence of Parents' Short Narratives Regarding their Child Using the Five-Minute Speech Sample Procedure

Valid and efficient measures for assessing the quality of parent-child relationships are needed to facilitate research and evidence-based practice with parents. This paper focuses on such a method, namely Five-Minute Speech Sample-Coherence (FMSS-Coherence). In this method, a parent is asked to speak for five uninterrupted minutes about her/his child and their relationship. The resulted narrative is coded for coherence, namely the extent to which the parent provides&#160;in the narrative&#160;a clear, consistent, multidimensional and well-supported portrayal of the child. FMSS-Coherence is based on attachment research that shows that the coherence of parents&#8217; narratives is indicative of the quality of the parent-child relationship and child adjustment. It overcomes the limitations of attachment narrative measures which are typically labor intensive. FMSS-Coherence is less nuanced than extant attachment narrative measures. Yet, studies of families from different cultural backgrounds, across different child ages and in the context of typically developing children as well as children with special needs suggest that coherence can be reliably evaluated using the FMSS procedure. Furthermore, parents&#8217; FMSS-Coherence is associated with parenting quality and children&#8217;s socio-emotional adjustment. Thus, it holds promise for researchers and practitioners who seek a relatively time- and cost-effective method for assessing the coherence of parents&#8217; narratives regarding their child.

This paper introduces a method for assessing the coherence of parents' short narratives regarding their child and their relationship using the five-minute speech sample procedure.

5분 음성 샘플 절차를 사용하여 자녀에 관한 부모의 짧은 이야기의 일관성 평가

Valid and efficient measures for assessing the quality of parent-child relationships are needed to facilitate research and evidence-based practice with ...

Concept Development and Use of an Automated Food Intake and Eating Behavior Assessment Method

The vast majority of dietary and eating behavior assessment methods are based on self-reports. They are burdensome and also prone to measurement errors. Recent technological innovations allow for the development of more accurate and precise dietary and eating behavior assessment tools that require less effort for both the user and the researcher. Therefore, a new sensor-based device to assess food intake and eating behavior was developed. The device is a regular dining tray equipped with a video camera and three separate built-in weighing stations. The weighing stations measure the weight of the bowl, plate, and drinking cup continuously over the course of a meal. The video camera positioned to the face records eating behavior characteristics (chews, bites), which are analyzed using artificial intelligence (AI)-based automatic facial expression software. The tray weight and the video data are transported at real-time to a personal computer (PC) using a wireless receiver. The outcomes of interest, such as the amount eaten, eating rate and bite size, can be calculated by subtracting the data of these measures at the timepoints of interest. The information obtained by the current version of the tray can be used for research purposes, an upgraded version of the device would also facilitate the provision of more personalized advice on dietary intake and eating behavior. Contrary to the conventional dietary assessment methods, this dietary assessment device measures food intake directly within a meal and is not dependent on memory or the portion size estimation. Ultimately, this device is therefore suited for daily main meal food intake and eating behavior measures. In the future, this technology based dietary assessment method can be linked to health applications or smart watches to obtain a complete overview of exercise, energy intake, and eating behavior.

This protocol shows and explains a new technology-based dietary assessment method. The method consists of a dining tray with multiple built-in weighing scales and a video camera. The device is unique in the sense that it incorporates automated measures of food and drink intake and eating behavior over the course of a meal.

The vast majority of dietary and eating behavior assessment methods are based on self-reports. They are burdensome and also prone to measurement errors. ...