Name: stenosis of the inferior vena cava: a murine model of deep vein thrombosis
Uploaded: 2017-12-22T13:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 37 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Stenosis of the Inferior Vena Cava: A Murine Model of Deep Vein Thrombosis at JoVE.com

이 작품은 영국 심장 재단 (PG/13/60/30406) 및 버밍엄의 대학에 의해 지원 되었다.

모든 동물 절차는 동물 복지의 윤리적인 검토 기관 및 영국 홈 오피스 (영국, 프로젝트 라이센스 40/3745)에 의해 승인 되었다. 마우스 C57BL/6 배경, 8-12 주 오래 된, 두 남녀의 19-25 g 몸 무게에 사용 됩니다.
1. 동물 마 취
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	<li>유도 챔버에 마우스를 놓고 5% isoflurane 100% 산소의 혼합물에 의해 마 취를 유도 합니다. 0.5 L/분의 유량 기다릴 마우스 완전히 이동 중지 될 때까지 사용 하 고 호흡의 주파수의 드문 된다.</li>
	<li>상공에서 마우스를 제거 하 고 전기 깎기로 복 부를 면도. 복에서 복 부 구멍의 오염을 피하기 위해 가능한 철저 하 게 머리를 제거 합니다.</li>
	<li>부정사 위치에 마우스를 놓고 마우스의 코 마 취 시스템에 연결 하는 콘에 배치 합니다. 2-3% (정확한 % 약간 다를 수 있습니다 동물 동물에서) isoflurane % 감소. 동물 평소 하지만 피하 헐 떡이 고 보다 낮은 되 고 그것의 호흡 속도와 자 고 있는지 확인 합니다. 경우 헐 떡이 고, 0.5 %isoflurane% 감소.
	<ol>
		<li>적절 한 anesthetization를 확인 하 고 부정적인 경우에 수술을 시작 하는 페달 반사를 확인 하십시오. 건조를 방지 하기 위해 눈에 수 의사 연 고를 적용 합니다.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>안티-살 균 솔루션 적용 (1 %Hibitane) 마우스의 복 부 고 외과 사이트 (예를 들어, 원형 패션에 밖으로 안쪽)의 잠재적인 재 오염을 제외 하는 방법에는 꽃 봉 오리는 메 마른 목화를 사용 하 여 영역에. 3 회 반복 한다.</li>
</ol>
2. 응용 IVC 협 및 마우스 복구
참고: 모든 악기 뿐만 자료 (면봉, 거 즈, 식 염 수 등)로 수술 영역을 접하는 살 균 되어야 합니다. 연산자는 수술 전에 스크럽 하 고 멸 균 장갑과 가운을 절차 중에 착용 해야 합니다. 현미경 핸들 살 균 호 일에 포장 되어야 합니다.
<ol>
	<li>수술 전에 및 전체 실험 기간 동안 마우스 방지 통증 치료를 제공 합니다. 예를 들어 buprenorphine 0.1 mg/kg 피하 30 분 전에 수술 하 고 다음 12 시간 마다 동물 안락사 될 때까지 사용 합니다. 혈전 증이 방법에서 개발로 마찬가지로 살 균 염증,는 premedication으로 항 염증 제 약물을 사용 하지 않습니다.</li>
	<li>무 균 드 레이프와 마우스를 커버 하 고 수술의 사이트 노출 드 레이프에 구멍을 만들. 가 위를 사용 하 여 복 부 중간, 흉 골에서 아래로 1.5 c m를 따라 절 개를 확인 합니다. 면봉을 사용 하 여 마우스의 왼쪽을 창 자 exteriorize 하 고 밖으로 건조 하지 않도록을 따뜻한 (37 ℃) 식 염 수에 젖은 멸 균 거 즈와 함께 그들을 커버.</li>
	<li>IVC와 함께 왼쪽된 신장 정 맥 IVC의 융합의 사이트에서 꼬리 방향으로 쪽 지점 (있을 수 있습니다 0, 1 또는 2 그들의) 확인 합니다. 7-0 불활성 Prolene 봉합으로 가능한 IVC 가까이 모든 보이는 측면 지점 선
	<ol>
		<li>하려고 하지는 집게와 측면 지점 오히려 직접 들고 한 손에 집게와 그들을 둘러싼 지방 조직의 그들을 올려 고 다른 손에 집게와 지점 아래 터널을 확인 합니다. 다시 분기를 가까이 하지 마십시오.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>집게와 주변 조직을 잡고, 당겨 최대 IVC 및 긴장 사이 IVC는 대동맥 정확 하 게 는 IVC와 왼쪽된 신장 정 맥 사이의 각도에 작은 지역에서 생산 하는 왼쪽. IVC도 2-3 mm 아래 (꼬리 방향)에서 대동맥을 분리 하는 사실상 불가능 하다는 것을 고려.</li>
	<li>에 당신의 오른손은 IVC와 대동맥 사이의 구멍 집게 팁 분기 움직임을 사용합니다. 명심에서 하십시오 더 많은 운동 했다고, 선박 손상의 더 높은 기회. 이상적으로, 3-5의 움직임의 수를 최소화 하십시오.</li>
	<li>길이 약 2 m의 7-0 불활성 Prolene 봉합의 조각을 준비. IVC 주변에서 연산자의 왼쪽에는 마우스의 복 막 구멍에 그것을 배치 합니다.</li>
	<li>당겨는 IVC와 왼쪽 다시. 팁은 IVC의 다른 쪽에 표시 오른쪽 집게 팁은 IVC와 대동맥 사이의 구멍에 삽입 합니다. (그림 3A) 구멍을 통해 봉합 및 다시 당기기를 가져가 라.</li>
	<li>임시 매듭 봉합을 하지만 그것을 닫지 마십시오. 30g 바늘 ("스페이서") 걸으로 매듭으로 구부려 놓고 지금 (그림 3B) 닫습니다.</li>
	<li>(그림 3C) 스페이서를 제거 합니다.</li>
	<li>창 자는 목화와 함께 복 막 구멍에 다시 버드와 그것에 그들을 동등 하 게 배포를 반환 합니다.</li>
	<li>연속 루프를 사용 하 여 6-0 vicryl 봉합과 복을 닫습니다. 매듭으로 처음과 마지막 루프를 닫습니다.</li>
	<li>가까운 피부 금속 물림 쇠를 사용 하 여입니다.</li>
	<li>따뜻한 (37 ° C)의 0.5 mL 마우스 주입 피하는 유기 체의 액체 균형을 복원 하려면 포도 당 염 분.</li>
	<li>따뜻한 (25 ° C) 챔버 또는 룸에는 개별으로 마우스를 배치 하 고 음식을 넣어 안에 물 젤. 마우스는 (일반적으로, 약 1 h) 완 치 될 때까지 관찰 합니다.</li>
</ol>

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저자는 공개 없다.

여기, 혈액 흐름 왜곡, DVT에 대 한 주요 트리거 요소를 모방한 IVC 협의 프로토콜 제공 됩니다. 48 h 이내 C57BL/6 마우스의 65-100%, 2-6 h6,,823 내 쥐의 25-50%에서 혈전의 개발을 유도 하는 IVC의 협 (Brill, 게시 되지 않은 데이터, 2016). 방법의 주요 한계는 혈전 크기24 (그림 4), 단기 (6 h) 및 장기 (48 h) IVC 협 후 관찰 되는 변화. 이러한 변화에 대 한 이유 (그 같은 조건, 공백, 같은 마 취 등, 사용 하는) 무명 남아 있지만 하나 그 해부학 추측 수 있습니다 마우스 (예를 들어, 너비 IVC, 번호 및 측면 및 후면의 위치 사이 변이 지점)이이 현상을 기반이 됩니다. 혈전 크기에 변화에서 주요 결과를 혈전 증 유행 한 혈전와 쥐의 (%)를 만든다. 혈전 증 유행 우발 테이블 및 피셔의 정확한 테스트를 사용 하 여 비교할 수 있습니다. 실험 중 하나 때 예외가 podoplanin 억제 항 체의 주입 7관찰 후와 같은 혈전 증 발병 률 감소 혈전 크기.
이 방법은 정 맥 혈전 증 개시 공부 때 특히 유용 하다. 그것은 혈관 벽의 혈전 증으로 결국 이어지는 세포의 모집 등에서 초기 이벤트를 조사 하 고 있습니다. 약의 프로 또는 안티 thrombotic 효과 혈전 증 보급 되 고 기본 판독으로이 모델을 사용 하 여 평가할 수 있습니다. 48 h에 대 한 협 6 h 협 prothrombotic 표현 형 경우 사용할 수 있는 반면 안티 thrombotic 형 공개에 적용 됩니다. 혈전과 주변 IVC 벽의 조직학 분석 또한 수행할 수 있습니다.
질문 여부 측면 분기 한다 출혈 또는 특허 왼쪽 열려 남아 있습니다. 한 그룹 측 분기의 결 찰 혈전 크기를 증가 하지 않는다와 IVC 결 찰 사이트에 1.5 m m 보다 더 사이드 지점의 위치는 극적으로 혈전 개발25손상 나타났습니다. 측면 지점 폐쇄 그들에 내 피 손상을 유발 하 고 또한 수술26시간을 증가 수 있습니다. 우리의 손에서 측면 지점 폐쇄의 부족 실질적으로 혈전 증 발병 률 (최저 48 h 협; 후 10-30% 감소 가자 미, 미 출판) 따라서 우리는 모든 보이는 측면 지점 선 고.
이상적으로, 마우스 같은 배경에 하지만 서로 다른 소스에서 약간 다른 혈전 증 유행 있을 수 있습니다 littermate 컨트롤을 사용 해야 합니다. (예, 생화학) 매개 변수에 DVT 자체의 효과 공부 하는 경우 가짜 운영 하는 동물을 사용 해야 합니다. 운영 하는 가짜 쥐 같은 절차를 거쳐야 하지만 IVC 주위 합자 느슨하게 폐쇄와 협 착 증을 생산 하지 않고 거기 왼쪽.
이 프로토콜에서 가장 빈번한 실수 (중요 한 단계) 대동맥과 일반적으로 출혈 귀착되는 약간 낮은 하지만 혈관 사이의 각도로 정확 하지 IVC 분리 하는 노력 이다. 경우는 출혈, 마우스의 좋은 복구 가능성 되 고 실험을 중지 하 고 동물을 안락사 하는 것이 좋습니다. 일반적으로, 쥐 잘 복구, 안에 이동한 실질적으로 무게를 잃지 않습니다. 우리 둘 다 남성과 여성 20 g 위의 쥐를 사용 하는 것이 좋습니다 하 고 싸움 하 고 부상을 피하기 위해 실험의 끝까지 수술 후 개별 장에 동물 (특히 남성)를 유지. 그것은 남성 쥐 암컷27보다 더 큰 혈전 생성 DVT의 또 다른 (전해) 모델에 보고 되었습니다. 데이터의 분석 하지 상당한 차이 혈전 증 유행 남성 및 여성 쥐 (가자 미, 미 출판)을 공개 했다. 따라서, 연구원은 두 남녀의 쥐에 IVC 협 모델을 사용 하 여 실험을 수행 하는 것이 좋습니다.
스테이플 봉합의 몇몇 수 수 배제 하지 특히 긴 실험 (주 그리고 더 이상). 따라서, 마우스 봉합 무결성을 위해 특별히 하루에 적어도 두 번 확인 해야 하 고 케이지 침구에 혈액 자취의 외관에 특별 한 주의 주어져야 한다.
그것은, 다른 동물 모델 처럼는 IVC의 협 인간으로 번역 면에서 한계가 있다 주목 해야한다. 예를 들어 murine IVCs 필요가 없습니다 밸브, 반면 인간의 DVT 정 맥 밸브 내부 개발. 또한, 인간은 혈관에는 중요 한 메커니즘 가속 혈 되 고 근육 펌프와 수직 척추 방향이 있다. 반면, 쥐 혈액 심장에 반환을 지 원하는 근육 펌프의 척추 방향 수평 역할 있다. 이러한 한계는 인간의 질병에 마우스 데이터를 변환할 때 고려 되어야 한다.

깊은 정 맥 혈전 증 (DVT) 깊은 정 맥에 혈전의 개발은 일반적으로 (그러나 뿐만 아니라) 다리에. 폐 색 전 증으로 접속사에 (PE; 정 맥 혈전 색 전 증, VTE로 함께 지정) 그것은 매년 약 900000 미국에서 개발 하 고 심각한 건강 문제와 경제적인 문제1,2를 나타냅니다. PE, DVT, 합병증 발생 한 혈전 초기 위치에서 분리 되 면 호흡기 부족 및 죽음을 일으킬 수 있습니다 폐에 도달. 사망자 VTE 초과 에이즈, 유 방 암, 교통 사고, 결합 된3에서 사망 합니다.
외에 DVT를 일으키는 주요 요인 이유, 알려진 암 등 외상, 이동성 4,5의 부족 이다. 이 수술 (특히 정형 외과), 마비, 장거리 항공편 또는 다른 이유에서 발생할 수 있습니다. 혈관에 혈액의 흐름 근육 펌프에 따라 달라 집니다과 그러므로 정체 혈액에 사지 immobilization 결과 정 맥 밸브에 혈전 증에 이르게 합니다. 여기에 설명 된 방법의 목적은 이러한 혈액 흐름의 왜곡6,7을 정리 하입니다. 열 등 한 베 나 정 맥 (IVC)에서 부분 흐름 제한 조건 인간의 정 맥 밸브에는 혈전의 형성에서 결과 인간의 혈전6구조에 비슷한 만든 모방 합니다. 혈전의 큰 부분 빨간색 이며 적혈구, 섬유 소, 혈소판의 구성 됩니다. 혈전 작은 "흰 부분" "의 선 잔" 인간의 정 맥 혈전에 설명 된 닮는 (그림 1), 혈소판에 풍부 하 게 있다. 혈전의 두 부분 포함 또한 호 중구8, 첫 번째 셀 미래 혈전6,9의 사이트에서 모집 중입니다. 반면 흰 부분에 호 중구 그물8없는 것 빨간 부분에서 중 성구 호 중구 extracellular 함정 (그물), 추방. 마찬가지로 인간의 DVT를 마우스에 혈전 증 동반 된다 높은 플라즈마 D 이합체 수준 (그림 2). 저 분자 무게 헤 파 린 (enoxaparin), 환자에 있는 DVT 예방에 사용 되는 또한 쥐에 혈전 증을 방지 합니다. 이 방법의 중요 한 장점은 인간의 DVT10의 특징은 내 피 노출9의 부재입니다. 이 기능을 사용 하면 IVC 협 보다, 혈전 증의 예를 들어 유도 DVT의 임상으로 더 관련 모델 제 2 철 염화 물, 내 피 노출을 유도 하 고 있는 혈전 혈소판11, 의 우위 하 게 구성 하 여 12,13. IVC는에 완전 한 스테이 시스의 모델은 여러 팀14,,1516선호 합니다. 협, 잔여 흐름, 선박에서 유지 달리 스테이 시스의 응용 프로그램은 완전히 흐름 멈추고 따라서 혈전 증 사이트를 체계적으로 관리 물질의 접근을 제한 한다. 또한, 그것은 혈전 증 협 착 증 및 혈 행에 의해 유도 된 기본 메커니즘은 다른 것 같다: 협 지역의 염증의 개발에 결과 (endothelium, Weibel Palade 본문 내용의 릴리스, 면역 세포의 채용의 활성화와 혈관 벽에 혈소판) 반면에 스테이 시스가 오히려 혈전 증을 일으킬 것 "immunothrombosis"6,,917, 원인 기반, 특히 조직 요소와 다른 응고 및 fibrinolysis 관련 메커니즘18,,1920. 따라서, 협 착 증 및 스테이 시스 모델 비록 그들의 메커니즘을 확실히 겹칠 수 있습니다 정 맥 혈전 개발의 약간 다른 측면을 반영 합니다. DVT21,22 의 전해 IVC 모델 (EIM)만 부분적으로 가려지는 혈관 벽 혈전을 유도 합니다. 따라서, 혈전 성장에 다른 약물의 조직 관리의 효과 테스트 하기 위해 편리 하다. 그러나,이 모델에이 메커니즘의 병 태 생리 관련성을 적어도 명백한 만드는 전기 전류에 의해 IVC 벽 무결성 (바늘의 삽입)의 파열 및 혈전 증의 유도 가정 합니다.

<table><tbody><tr><td>C57BL/6 mice</td><td>Charles River</td><td></td><td>8 - 10 weeks old, bothe genders</td></tr><tr><td>Scissors</td><td>WPI</td><td>15922</td><td></td></tr><tr><td>Scissors</td><td>WPI</td><td>14003</td><td></td></tr><tr><td>Dumont 5/45 forceps</td><td>FST</td><td>11251-35</td><td></td></tr><tr><td>7-0 Prolene suture</td><td>Ethicon</td><td>W8725</td><td></td></tr><tr><td>6-0 Vicryl suture</td><td>Ethicon</td><td>W9981</td><td></td></tr><tr><td>Cotton buds</td><td>Spar</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Millswabs sterile&amp;nbsp;</td><td>Millpledge veterinary&amp;nbsp;</td><td>611950</td><td></td></tr><tr><td>Drapes</td><td>Kruuse</td><td>141765</td><td></td></tr><tr><td>Glucose Saline-Aqupharm3</td><td>Animal Care</td><td>XVD589</td><td></td></tr><tr><td>Clear H&lt;span class=&quot;font6&quot;&gt;&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;&lt;/span&gt;&lt;span class=&quot;font5&quot;&gt;0 HydroGel 98% sterile water&amp;nbsp;&lt;/span&gt;</td><td>Clearh2o</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Buprenorphine</td><td>National Veterinary Supplies</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane vaporizer</td><td>General Anaesthetic Services</td><td></td><td></td></tr><tr><td>IsoFlo 100% W/W inhalation vapour, liquid</td><td>National Veterinary Supplies</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sterilizer Steri350</td><td>Inotech</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Microscope Olympus SZX10</td><td>Olympus</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

stenosis of the inferior vena cava: a murine model of deep vein thrombosis

깊은 정 맥 혈전 증 (DVT) 및 그것의 파괴적인 합병증, 폐 색 전 증, 높은 사망률과 심각한 건강 문제. 혈관에 혈전 형성의 메커니즘은 애매 한 남아 있다. 이동성 (예를 들어, 수술 또는 장거리 비행 후)의 부족은 DVT를 선도 하는 주요 요인 중 하나 이다. 이동성의 부족의 병 태 생리 결과 정 맥 밸브에 혈액 흐름 침체입니다. 여기, 모델은 혈전 증 운전 요인으로 이러한 흐름 소동을 설명 합니다. 이 모델에서 부분 흐름 제한 (협) 열 등 한 베 나 정 맥 (IVC)에서 만들어집니다. IVC 루멘 48 h에 대 한의 약 90%의 폐쇄 혈전 인간 구조적으로 유사한의 개발에 결과. 유사성은: i) 대부분의 혈전 볼륨은 빨간색, 즉, 내 피 단층 iii) 비-걸치기, iv) 높은 플라즈마 D 이합체 수준, 그리고 v) 가능성을 방지 하기 위해 적혈구와 섬유 소, 흰 부분 (잔 줄)의 ii) 존재의 구성 저 분자 무게 헤 파 린에 의해 혈전 증입니다. 혈전과 가변 크기 포함 하는 야생-타입 마우스의 일정 비율 (0-35%)는 혈전을 생성 하지 않을 수 있습니다. 시각적인 관찰 및 측정, 혈전 혈전 개발의 역학을 모니터링 수 있는 초음파 등 비-침략 적 기술에 의해 구상 될 수 있습니다. 점에서 짧은 시간 (1-6 h) intravital 현미경 직접 관찰 하는 이벤트 (예를 들면, 혈관 벽 세포의 모집)에 적용할 수 있습니다 혈전 형성을 앞. 세계의 여러 팀에서이 방법의 사용은 DVT 개시의 기본 메커니즘을 폭로 하 여 그 예방에 대 한 도움이 될 수 있는 잠재적인 대상을 식별 가능 했다.

여기에 IVC 흐름 왜곡에 의해 유도 된 DVT의 모델 설명 되어 있습니다. 유도 IVC에 협 착 증의 왜곡을 시작 및 혈액 흐름의 그리고 후에 (이 경우 48 h) 동안 침체 결과 혈전, 구조적으로 유사한 인간 DVT의 개발에 혈전 (그림 1A). 내부는 IVC 혈전의 존재는 시각적으로 쉽게 감지 (그림 1B). 모델 및 인간의 DVT 사이 중요 한 유사성은 높은 플라즈마 D 이합체 수준 (그림 2). D-이합체 섬유 소 강 직의 제품 이며 혈액의 존재는 활성 thrombotic 과정 것 나왔다.
모델은 그림 3A-C단계 제공 됩니다. IVC는 신중 하 게 노출 하 고는 IVC와 대동맥 사이의 구멍을 만든 봉합 (Prolene 7-0)는 IVC 아래 구멍을 통해 뽑아. 다음는 IVC는 출혈 봉합에 의해 스페이서 (30g 바늘, 그림 3D)에 있는 공백 제거 후. 이 절차는 약 90%에 대 한 허용 특허 나머지 10%를 떠나 IVC 루멘의 폐쇄. 그러면 결국 혈전 증으로 이어지는 혈액 흐름 침체.
그림 4 모델, 가변 혈전 크기의 주요 단점을 보여 줍니다. 이러한 혈전 동일한 실험에서 가져온 모든 동일한 근원, 나이 및 유사한 체중의 야생 타입 남성 쥐에서 수행. 비록 모든 쥐의 혈전 (혈전 증의 유 병 율 100%)을 생산, 그들의 크기는 명확 하 게 넓은 범위에서 변화 한다.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56697/56697fig1.jpg"> 
그림 1: 48 h 제한/협 후 대표적인 혈전. (A) 전형적인 혈전 후 48 h IVC 협. 참고 빨간색 (적혈구 농축)과 화이트 (혈소판 농축) 부품. (왼쪽)와 (B) IVC 또는 (오른쪽)는 혈전 없이. 스케일 바 = 2 m m. <a href="//ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56697/56697fig1large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56697/56697fig2.jpg"> 
그림 2 : IVC 협 응용 프로그램 후 D-이합체 플라즈마 레벨 상승. 마우스는 IVC 협을 받게 했다. 혈액 표시 시간 포인트에서 찍은, 3.8% 나트륨 시트르산, 플라즈마와 안정된 1:9 원심 분리 (2300 x g, 5 분)에 의해 준비 되었다 및 D 이합체 수준 제조업체의 지침에 따라 ELISA 키트에 의해 결정 되었다. 원형 지정 운영 하는 가짜 쥐, 십자가 지정 IVC 협. <a href="//ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56697/56697fig2large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56697/56697fig3.jpg"> 
그림 3: 제한/협 쥐에 있는 DVT의 열 등 한 베 나 정 맥 (IVC) 모델에서 흐름. 모델의 연속 단계 제공 됩니다. (A)는 IVC와 대동맥 사이의 구멍은 하 고는 봉합 주위는 IVC 통해 가져온. (B) 매듭 스페이서 (30g 바늘)에 닫힙니다. (C) 는 공백 제거: 외과 의사 보고 마우스를 닫기 전에 마지막 보기. 노란 점선은 IVC를 정합니다. 어브 왼쪽된 신장 정 맥에 대 한 의미합니다. 스케일 바 = 0.2 m m. (D) 스페이서 (30g 바늘). 스케일 바 = 2 m m. <a href="//ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56697/56697fig3large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56697/56697fig4.jpg"> 
그림 4 . 혈전 크기의 다양성 마우스는 48 h IVC 협을 받게 했다. 제시는 혈전 얻은 동일한 실험에서. 스케일 바 2. <a href="//ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56697/56697fig4large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>

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Stenosis of the Inferior Vena Cava: A Murine Model of Deep Vein Thrombosis

우리가 설명 여기에 열 등 한 베 나 정 맥 협 착 증 깊은 정 맥 혈전 증의 murine 모델. 이 모델이 혈액 흐름 제한, 인 간에 있는 정 맥 혈전 증의 주요 트리거 중 하나.

열 등 한 베 나 정 맥의 협 착 증: 깊은 정 맥 혈전 증의 Murine 모델

Deep vein thrombosis (DVT) and its devastating complication, pulmonary embolism, are a severe health problem with high mortality. Mechanisms of thrombus ...

stenosis-inferior-vena-cava-murine-model-deep-vein

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

23.9K 조회수.  University of Birmingham. 우리가 설명 여기에 열 등 한 베 나 정 맥 협 착 증 깊은 정 맥 혈전 증의 murine 모델. 이 모델이 혈액 흐름 제한, 인 간에 있는 정 맥 혈전 증의 주요 트리거 중 하나.

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Murine Model of CD40-activation of B cells

Research on B cells has shown that CD40 activation improves their antigen presentation capacity. When stimulated with interleukin-4 and CD40 ligand (CD40L), human B cells can be expanded without difficulties from small amounts of peripheral blood within 14 days to very large amounts of highly-pure CD40-B cells (&gt;109 cells per patient) from healthy donors as well as cancer patients1-4. CD40-B cells express important lymph node homing molecules and can attract T cells in vitro5. Furthermore they efficiently take up, process and present antigens to T cells6,7. CD40-B cells were shown to not only prime na&iacute;ve, but also expand memory T cells8,9. Therefore CD40-activated B cells (CD40-B cells) have been studied as an alternative source of immuno-stimulatory antigen-presenting cells (APC) for cell-based immunotherapy1,5,10. In order to further study whether CD40-B cells induce effective T cell responses in vivo and to study the underlying mechanism we established a cell culture system for the generation of murine CD40-activated B cells. Using splenocytes or purified B cells from C57BL/6 mice for CD40-activation, optimal conditions were identified as follows: Starting from splenocytes of C57BL/6 mice (haplotype H-2b) lymphocytes are purified by density gradient centrifugation and co-cultured with HeLa cells expressing recombinant murine CD40 ligand (tmuCD40L HeLa)11. Cells are recultured every 3-4 days and key components such as CD40L, interleukin-4, -Mercaptoethanol and cyclosporin A are replenished. In this protocol we demonstrate how to obtain fully activated murine CD40-B cells (mCD40B) with similar APC-phenotype to human CD40-B cells (Fig 1a,b). CD40-stimulation leads to a rapid outgrowth and expansion of highly pure (&gt;90%) CD19+ B cells within 14 days of cell culture (Fig 1c,d). To avoid contamination with non-transfected cells, expression of the murine CD40 ligand on the transfectants has to be controlled regularly (Fig 2). Murine CD40-activated B cells can be used to study B-cell activation and differentiation as well as to investigate their potential to function as APC in vitro and in vivo. Moreover, they represent a promising tool for establishing therapeutic or preventive vaccination against tumors and will help to answer questions regarding safety and immunogenicity of this approach12.

In this video, we demonstrate the procedure of CD40-activation and expansion of murine B cells from splenocytes of C57BL/6 mice, which can be used as a model antigen-presenting cell (APC) to study induction of immunity.

B 세포의 CD40 - 정품 인증 Murine 모델

Research on B cells has shown that CD40 activation improves their antigen presentation capacity. When stimulated with interleukin-4 and CD40 ligand ...

연구

면역학 및 감염병학

Electrolytic Inferior Vena Cava Model (EIM) of Venous Thrombosis

Animal models serve a vital role in deep venous thrombosis (DVT) research in order to study thrombus formation, thrombus resolution and to test potential therapeutic compounds (1). New compounds to be utilized in the treatment and prevention of DVT are currently being developed. The delivery of potential therapeutic antagonist compounds to an affected thrombosed vein has been problematic. In the context of therapeutic applications, a model that uses partial stasis and consistently generates thrombi within a major vein has been recently established. The Electrolytic Inferior vena cava Model (EIM) is mouse model of DVT that permits thrombus formation in the presence of continuous blood flow. This model allows therapeutic agents to be in contact with the thrombus in a dynamic fashion, and is more sensitive than other models of DVT (1). In addition, this thrombosis model closely simulates clinical situations of thrombus formation and is ideal to study venous endothelial cell activation, leukocyte migration, venous thrombogenesis, and to test therapeutic applications (1). The EIM model is technically simple, easily reproducible, creates consistent thrombi sizes and allows for a large sample (i.e. thrombus and vein wall) which is required for analytical purposes.

Electrolytic Inferior Vena Cava Model EIM of Venous Thrombosis

The electrolytic induction of endothelial activation to the internal surface of the Inferior Vena Cava results in venous type thrombus formation due to endothelial activation and partial blood stasis, two components of Virchow's triad.

정맥 혈전증의 전해 하부 대정 맥 모델 (EIM)

Animal models serve a vital role in deep venous thrombosis (DVT) research in order to study thrombus formation, thrombus resolution and to test potential ...

의학

Mouse Complete Stasis Model of Inferior Vena Cava Thrombosis

Venous thromboembolism (VTE) includes both deep vein thrombosis (DVT) and pulmonary embolism (PE). In the United States (U.S.), the high morbidity and mortality rates make VTE a serious health concern 1-2. After heart disease and stroke, VTE is the third most common vascular disease 3. In the U.S. alone, there is an estimated 900,000 people affected each year, with 300,000 deaths occurring annually 3. A reliable in vivo animal model to study the mechanisms of this disease is necessary.
The advantages of using the mouse complete stasis model of inferior vena cava thrombosis are several. The mouse model allows for the administration of very small volumes of limited availability test agents, reducing costs dramatically. Most promising is the potential for mice with gene knockouts that allow specific inflammatory and coagulation factor functions to be delineated. Current molecular assays allow for the quantitation of vein wall, thrombus, whole blood, and plasma for assays. However, a major concern involving this model is the operative size constraints and the friability of the vessels. Also, due to the small IVC sample weight (mean 0.005 grams) it is necessary to increase animal numbers for accurate statistical analysis for tissue, thrombus, and blood assays such as real-time polymerase chain reaction (RT-PCR), western blot, enzyme-linked immunosorbent (ELISA), zymography, vein wall and thrombus cellular analysis, and whole blood and plasma assays 4-8.
The major disadvantage with the stasis model is that the lack of blood flow inhibits the maximal effect of administered systemic therapeutic agents on the thrombus and vein wall.

The mouse complete stasis model of inferior vena cava thrombosis yields quantifiable amounts of vein wall tissue and thrombus. It has proven useful for evaluating interactions between the vein wall and the occlusive thrombus and in assessing the progression from acute to chronic inflammation.

하부 대정 맥 혈전증의 마우스 완전한 스테이 시스 모델

Venous thromboembolism (VTE) includes both deep vein thrombosis (DVT) and pulmonary embolism (PE).  In the United States (U.S.), the high morbidity and ...

Induction of Graft-versus-host Disease and In Vivo T Cell Monitoring Using an MHC-matched Murine Model

Graft-versus-host disease (GVHD) is the limiting barrier to the broad use of bone marrow transplant as a curative therapy for a variety of hematological deficiencies. GVHD is caused by mature alloreactive T cells present in the bone marrow graft that are infused into the recipient and cause damage to host organs. However, in mice, T cells must be added to the bone marrow inoculum to cause GVHD. Although extensive work has been done to characterize T cell responses post transplant, bioluminescent imaging technology is a non-invasive method to monitor T cell trafficking patterns in vivo. 
Following lethal irradiation, recipient mice are transplanted with bone marrow cells and splenocytes from donor mice. T cell subsets from L2G85.B6 (transgenic mice that constitutively express luciferase) are included in the transplant. By only transplanting certain T cell subsets, one is able to track specific T cell subsets in vivo, and based on their location, develop hypotheses regarding the role of specific T cell subsets in promoting GVHD at various time points. At predetermined intervals post transplant, recipient mice are imaged using a Xenogen IVIS CCD camera. Light intensity can be quantified using Living Image software to generate a pseudo-color image based on photon intensity (red = high intensity, violet = low intensity). 
Between 4-7 days post transplant, recipient mice begin to show clinical signs of GVHD. Cooke et al.1 developed a scoring system to quantitate disease progression based on the recipient mice fur texture, skin integrity, activity, weight loss, and posture. Mice are scored daily, and euthanized when they become moribund. Recipient mice generally become moribund 20-30 days post transplant. 
Murine models are valuable tools for studying the immunology of GVHD. Selectively transplanting particular T cell subsets allows for careful identification of the roles each subset plays. Non-invasively tracking T cell responses in vivo adds another layer of value to murine GVHD models.

Induction of Graft-versus-host Disease and In Vivo T Cell Monitoring Using an MHC-matched Murine Model

Murine bone marrow transplantation is a widely used technique to study immunological mechanisms governing graft-versus-host disease in humans. The ability to monitor T cell trafficking patterns in vivo allows for detailed analysis of the development and perpetuation of T cell responses during graft-versus-host disease.

이식 - 대 - 호스트 질병의 유도 및<em&gt; 생체 내</emMHC 검색 손쥐 모델을 사용&gt; T 셀 모니터링

Graft-versus-host disease (GVHD) is the limiting barrier to the broad use of bone marrow transplant as a curative therapy for a variety of hematological ...

Murine Model of Allergen Induced Asthma

Asthma is a major cause of morbidity and mortality, affecting some 300 million people throughout the world.1 More than 8% of the US population has asthma, with the prevalence increasing.2 As with other diseases, animal models of allergic airway disease greatly facilitate understanding of the underlying pathophysiology, help identify potential therapeutic targets, and allow preclinical testing of possible new therapies. Models of allergic airway disease have been developed in several animal species, but murine models are particularly attractive due to the low cost, ready availability, and well-characterized immune systems of these animals.3 Availability of a variety of transgenic strains further increases the attractiveness of these models.4 Here we describe two murine models of allergic airway disease, both employing ovalbumin as the antigen. Following initial sensitization by intraperitoneal injection, one model delivers the antigen challenge by nebulization, the other by intratracheal delivery. These two models offer complementary advantages, with each mimicking the major features of human asthma.5
The major features of acute asthma include an exaggerated airway response to stimuli such as methacholine (airway hyperresponsiveness; AHR) and eosinophil-rich airway inflammation. These are also prominent effects of allergen challenge in our murine models,5,6 and we describe techniques for measuring them and thus evaluating the effects of experimental manipulation. Specifically, we describe both invasive7 and non-invasive8 techniques for measuring airway hyperresponsiveness as well as methods for assessing infiltration of inflammatory cells into the airways and the lung. Airway inflammatory cells are collected by bronchoalveolar lavage while lung histopathology is used to assess markers of inflammation throughout the organ. These techniques provide powerful tools for studying asthma in ways that would not be possible in humans.

Experimental mouse models of allergic asthma offer new possibilities for studying disease pathogenesis and developing new therapeutics. These models are well suited to measuring factors governing the allergic immune response, airway inflammation, and pulmonary pathophysiology.

알레르기 항원 유도 천식의 Murine 모델

Asthma is a major cause of morbidity and mortality, affecting some 300 million people throughout the world.1 More than 8% of the US population has asthma, ...

Implantation of Inferior Vena Cava Interposition Graft in Mouse Model

Biodegradable scaffolds seeded with bone marrow mononuclear cells (BMCs) are often used for reconstructive surgery to treat congenital cardiac anomalies. The long-term clinical results showed excellent patency rates, however, with significant incidence of stenosis. To investigate the cellular and molecular mechanisms of vascular neotissue formation and prevent stenosis development in tissue engineered vascular grafts (TEVGs), we developed a mouse model of the graft with approximately 1 mm internal diameter. First, the TEVGs were assembled from biodegradable tubular scaffolds fabricated from a polyglycolic acid nonwoven felt mesh coated with &#949;-caprolactone and L-lactide copolymer. The scaffolds were then placed in a lyophilizer, vacuumed for 24 hr, and stored in a desiccator until cell seeding. Second, bone marrow was collected from donor mice and mononuclear cells were isolated by density gradient centrifugation. Third, approximately one million cells were seeded on a scaffold and incubated O/N. Finally, the seeded scaffolds were then implanted as infrarenal vena cava interposition grafts in C57BL/6 mice. The implanted grafts demonstrated excellent patency (&#62;90%) without evidence of thromboembolic complications or aneurysmal formation. This murine model will aid us in understanding and quantifying the cellular and molecular mechanisms of neotissue formation in the TEVG.

To improve our knowledge of cellular and molecular neotissue formation, a murine model of the TEVG was recently developed. The grafts were implanted as infrarenal vena cava interposition grafts in C57BL/6 mice. This model achieves similar results to those achieved in our clinical investigation, but over a far shortened time-course.

마우스 모델에서 하대 정맥 끼어 이식의 주입

Biodegradable scaffolds seeded with bone marrow mononuclear cells (BMCs) are often used for reconstructive surgery to treat congenital cardiac anomalies. ...

혈관 클립을 사용한 마우스 암 모델에서 최적화된 정맥 혈전증 분석

Venous Thrombosis Assay in a Mouse Model of Cancer

This methodology paper highlights the surgical nuances of a rodent model of venous thrombosis, specifically in the context of cancer-associated thrombosis (CAT). Deep venous thrombosis is a common complication in cancer survivors and can be potentially fatal. The current murine venous thrombosis models typically involve a complete or partial mechanical occlusion of the inferior vena cava (IVC) using a suture. This procedure induces a total or partial stasis of blood and endothelial damage, triggering thrombogenesis. The current models have limitations such as higher variability in clot weights, significant mortality rate, and prolonged learning curve. This report introduces surgical refinements using vascular clips to address some of these limitations. Using a syngeneic colon cancer xenograft mouse model, we employed customized vascular clips to ligate the infrarenal vena cava. These clips allow residual lip space similar to a 5-0 polypropylene suture after IVC ligations. Mice with the suture method served as controls. The vascular clip method resulted in a consistent reproducible partial vascular occlusion and greater clot weights with less variability than the suture method. The larger clot weights, greater clot mass, and clot to the IVC luminal surface area were expected due to the higher pressure profile of the vascular clips compared to a 6-0 polypropylene suture. The approach was validated by gray scale ultrasonography, which revealed consistently greater clot mass in the infrarenal vena cava with vascular clips compared to the suture method. These observations were further substantiated with the immunofluorescence staining. This study offers an improved method to generate a venous thrombosis model in mice, which can be employed to deepen the mechanistic understanding of CAT and in translational research such as drug discovery.

저자 스포트라이트: 설치류 모델에서 암 관련 혈전증 연구 발전 

This article aims to present an optimized method for assessing venous thrombosis in a mouse cancer model, using vascular clips to achieve venous ligation. Optimization minimizes variability in thrombosis-related measurements and enhances relevance to human cancer-associated venous thrombosis.

암의 마우스 모델에서 정맥 혈전증 분석

This methodology paper highlights the surgical nuances of a rodent model of venous thrombosis, specifically in the context of cancer-associated thrombosis ...

암 연구학

Deep Vein Thrombosis Induced by Stasis in Mice Monitored by High Frequency Ultrasonography

Venous thrombosis is a common condition affecting 1 - 2% of the population, with an annual incidence of 1 in 500. Venous thrombosis can lead to death through pulmonary embolism or results in the post-thrombotic syndrome, characterized by chronic leg pain, swelling, and ulceration, or in chronic pulmonary hypertension resulting in significant chronic respiratory compromise. This is the most common cardiovascular disease after myocardial infarction and ischemic stroke and is a clinical challenge for all medical disciplines, as it can complicate the course of other disorders such as cancer, systemic disease, surgery, and major trauma.
Experimental models are necessary to study these mechanisms. The stasis model induces consistent thrombus size and a quantifiable amount of thrombus. However, it is necessary to systematically ligate side branches of the inferior vena cava to avoid variability in thrombus sizes and any erroneous data interpretation. We have developed a non-invasive technique to measure thrombus size using ultrasonography. Using this technique, we can assess thrombus development and resolution over time in the same animal. This approach limits the number of mice required for quantification of venous thrombosis consistent with the principle of replacement, reduction, and refinement of animals in research. We have demonstrated that thrombus weight and histological analysis of thrombus size correlate with measurement obtained with ultrasonography. Therefore, the current study describes how to induce deep vein thrombosis in mice using the inferior vena cava stasis model and how to monitor it using high frequency ultrasound.

The present protocol describes the steps to obtain venous thrombosis using a stasis model. In addition, we are using a non-invasive method to measure thrombus formation and resolution over time.

스테이 시스 고주파 초음파에 의해 모니터링 하는 쥐에 의해 유도 된 깊은 정 맥 혈전 증

Venous thrombosis is a common condition affecting 1 - 2% of the population, with an annual incidence of 1 in 500. Venous thrombosis can lead to death ...

열 등 한 베 나 정 맥의 협 착 증: 깊은 정 맥 혈전 증의 Murine 모델

요약

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이 비디오의 챕터

B 세포의 CD40 - 정품 인증 Murine 모델

정맥 혈전증의 전해 하부 대정 맥 모델 (EIM)

하부 대정 맥 혈전증의 마우스 완전한 스테이 시스 모델

이식 - 대 - 호스트 질병의 유도 및

알레르기 항원 유도 천식의 Murine 모델

마우스 모델에서 하대 정맥 끼어 이식의 주입

암의 마우스 모델에서 정맥 혈전증 분석

암의 마우스 모델에서 정맥 혈전증 분석

암의 마우스 모델에서 정맥 혈전증 분석

스테이 시스 고주파 초음파에 의해 모니터링 하는 쥐에 의해 유도 된 깊은 정 맥 혈전 증