이 문서에 있는 multiphoton 이미지를 얻을 수 있도록에 대 한 타 라 Zeric. 두뇌 및 행동, 파 킨 슨 병 및 JPB 기초, R01 MH108186 R01 DA07418에서 지원. F31 친목 1F31MH109293-01A1 S c

동물 관련 된 기준에 따라 수행 하는 모든 절차는 컬럼비아 대학 의료 센터 기관 동물 관리 및 사용 위원회 (IACUC)에 의해 설정 합니다. 안락사는 마 취 제와 마 취에서 자 궁 경부 전위를 통해 수행한 100 mg/kg 및 xylazine 10 mg/kg intraperitoneally 주입. 모든 외 과적 멸 균 방식으로 수행 되었다 (외과 의사 머리 모자, 얼굴 마스크, 멸 균 장갑, 그리고 깨끗 한 일회용 랩 코트 입고 있던) 수술 도구 각각의 사용 사이 압력가 마로 소독 했다.
1. presurgical 단계
<ol><li>고압 무 균을 보장 하기 위해 모든 수술 기구.</li>
	<li>Isoflurane (유도 대 한 4% 및 수술에 대 한 1.5-2%)와 C57bl6 마우스 anesthetize 마 취의 적절 한 깊이 보장 하기 위해 뒷 발가락 마다 10 분을 꼬집어. 발성 이나 뒷 다리 철회 볼 경우 마 취를 증가.</li>
	<li>건조를 방지 하기 위해 눈에 수의 눈 윤 활 유를 적용 합니다.</li>
	<li>3 분 신청 머리 제거 젤 또는 전기 면도기로 면도 하 여 두 피에 머리카락을 제거 합니다.</li>
	<li>장소는가 열 패드 또는 담요 세트 38 ° c를 재순환 하는 보정된 물에 stereotaxic 프레임에서 마우스</li>
	<li>Presurgical 무 통을 제공 하기 위해 피하 buprenorphine (0.1 mg/kg)를 관리 합니다.</li>
	<li>액체 또는 betadine와 70% 에탄올 솜 밀고 주걱을 사용 하 여 세 가지 대체 응용 프로그램으로 두 피를 치료.</li>
	<li>100ml 희석 bupivacaine 50% 식 염 수 국 소 마 취를 제공 하기 위해 두 피 아래에 주입.</li>
</ol>2. 압 전 두개골 창 수술
<ol><li>압력가 마로 소독 멸 균 수술 도구를 사용 하 여 제거 두 피의 1 cm 원 두개골 이상 절단 하 여 원형 패턴에서 수술가 위. 두개골 뼈를 통해과 조직 노출에서 두 피를 들어올립니다.</li>
	<li>집게의 팁을 사용 하 여 모든 나머지과 조직의 분명 노출 된 뼈를 긁어. 이 치과 시멘트 것 이다 떨어지지 않을 나중을 위해 중요 하다.</li>
	<li>가장 낮은 설정에 진동 압 전 수술 단위를 설정 합니다. Note 높은 설정 강렬한 진동으로 인해 혈관을 깰 수 있습니다.</li>
	<li>핸드 피스를 멸 균 순환 팁을 수정 합니다. 참고: 4 m m 원형 팁은 수술에 대 한 적합 합니다. 큰 팁 크기 전체 윈도우 동시에 thinned 수 있습니다으로 수술의 속도에 기여 한다.</li>
	<li>얼음 차가운 인공 뇌 척추 액체 (실제)와 10 mL 주사기를 압 전 핸드 피스를 들고 손을 있습니다.</li>
	<li>1 mL/분의 속도로 두개골에 주사기에서 실제 또는 떨어지는 하 여 두개골을 관개, 두개골 위에 연동 펌프를 사용 하 여 무료로 다른 한편의 사용. 참고: 차가운 실제와 관개는 고주파 진동에서 마찰로 인해 과열을 방지 해야 합니다.</li>
	<li>부드럽게 빛 원형 모션으로 두개골에 진동 외과 팁을 적용 (1 당 3 원 s) 얇은 두개골 준비 (5 ~ 10 분) 수행을 원하는 깊이 뼈 얇은. 참고: 여기, 4 m m 창 했다 20 µ m를 박 형 했다 그. 그러나, 윈도우의 크기는 수술 팁의 크기와 달라 집니다. 뼈의 두께 팁을 적용 하는 두개골에 보낸 시간의 길이에 따라 원하는 깊이를 조정할 수 있습니다.</li>
	<li>부드럽게 handpiece의 각도 조정 하 고 균일 하 게 두개골을 얇은 두개골에 압력을 적용 하는 동안 팁의 각도 변경 합니다.</li>
	<li>뒤에 어떤 얇은 뼈를 남기지 않고 완전 한 뼈 제거를 수행, 균열 창 주변 표시 될 때까지 뼈를 얇은. 기본 dura 손상 없이 집게와 얇은 뼈의 남은 부스러기를 제거 합니다.</li>
	<li>차가운 실제 hemostatic 콜라겐 거품의 1 m m 부분을 담근 다. 집게와 젖은 거품을 누른 얇은 두개골에 배치 합니다. 약 30 얇은 두개골에 앉아서 수 중지 어떤 마이크로 s 개발에서 유혈.</li>
	<li>집게를 사용 하 여 4 m m 유리 coverslip 뼈에 박 형 창 옆으로 놓고.</li>
	<li>작은 플라스틱 또는 나무 주걱을 기울였다 면의 뒷면을 사용 하 여 장소에는 창 잡아 두개골에 치과 아크릴의 약 100 µ L를 적용.</li>
</ol>3. 포스트 수술 케어
<ol><li>수술 기구에서 마우스를 제거 하 고 복구에 대 한가 열에 놓습니다. 그것은 완전 한 의식 (정상적인 이동성, 걸음 걸이, 및 행동 평가) 회복 될 때까지 계속 모니터링 합니다.</li>
	<li>평가 동물 손질, 음식, 그리고 물 소비, 행동 (예: 절 뚝 거리 또는 돌출된 자세)를 지키고 또는 침략을 증가 하는 감소 활동을 포함 하 여 수술 후 통증의 발현에 대 한 일 동안 하루에 두 번. 그것은 완전히 복구 될 때까지 다른 동물의 회사에는 동물을 반환 하지 않습니다.</li>
	<li>Buprenorphine 관리 (0.05-0.1 mg/kg) 3 일 동안 수술 후 진통 8-12 h로 피하. 밀접 하 게 dehiscence, 염증, 그리고 감염의 징후에 대 한 수술을 다음과 같은 윈도우의 영역을 모니터링 합니다. 동물을 반환 하지 않으면 베이스 수 유 및 동작을 손질 가능한 개입 또는 안락사에 관한 수 의사를 참조 하십시오.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Holtmaat, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term,+high-resolution+imaging+in+the+mouse+neocortex+through+a+chronic+cranial+window.">Long-term, high-resolution imaging in the mouse neocortex through a chronic cranial window.</a> Nat Protoc. 4, 1128-1144 (2009).</li><li>Yang, G., Pan, F., Parkhurst, C. N., Grutzendler, J., Gan, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thinned-skull+cranial+window+technique+for+long+term+imaging+of+the+cortex+in+live+mice.">Thinned-skull cranial window technique for long term imaging of the cortex in live mice.</a> Nat protoc. 12, 213-220 (2010).</li><li>Dorand, D. R., Barkauskas, D. S., Evans, T. A., Petrosiute, A., Huang, A. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+intravital+thinned+skull+and+cranial+window+approaches+to+study+CNS+immunobiology+in+the+mouse+cortex.">Comparison of intravital thinned skull and cranial window approaches to study CNS immunobiology in the mouse cortex.</a> Intravital. 3, e29728-1-e29728-8 (2014).</li><li>Drew, P. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+optical+access+through+a+polished+and+reinforced+thinned+skull.">Chronic optical access through a polished and reinforced thinned skull.</a> Nat Methods. 7, 981-984 (2010).</li><li>Wang, J., Zhang, Y., Xu, T. H., Luo, Q. M., Zhu, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+innovative+transparent+cranial+window+based+on+skull+optical+clearing.">An innovative transparent cranial window based on skull optical clearing.</a> Laser Physics Letters. 9, (2012).</li><li>Yang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Skull+Optical+Clearing+Solution+for+Enhancing+Ultrasonic+and+Photoacoustic+Imaging.">Skull Optical Clearing Solution for Enhancing Ultrasonic and Photoacoustic Imaging.</a> IEEE Trans Med Imaging. 35, (2016).</li><li>Vercellotti, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Piezoelectric+surgery+in+implantology:+a+case+report--a+new+piezoelectric+ridge+expansion+technique.">Piezoelectric surgery in implantology: a case report--a new piezoelectric ridge expansion technique.</a> Int J Periodontics Restorative Dent. 4, 358-365 (2000).</li><li>Vercellotti, T., De Paoli, S., Nevins, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+piezoelectric+bony+window+osteotomy+and+sinus+membrane+elevation:+introduction+of+a+new+technique+for+simplification+of+the+sinus+augmentation+procedure.">The piezoelectric bony window osteotomy and sinus membrane elevation: introduction of a new technique for simplification of the sinus augmentation procedure.</a> Int J Periodontics Restorative Dent. 6, 561-567 (2001).</li><li>Vercellotti, T., Podesta, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orthodontic+microsurgery:+a+new+surgically+guided+technique+for+dental+movement.">Orthodontic microsurgery: a new surgically guided technique for dental movement.</a> Int J Periodontics Restorative Dent. 4, 325-331 (2007).</li><li>Stubinger, S., Stricker, A., Berg, B. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Piezoelectric+surgery+in+implant+dentistry.">Piezoelectric surgery in implant dentistry.</a> Clin Cosmet Investig Dent. 7, 115-124 (2015).</li><li>Basheer, S. A., Govind, R. J., Daniel, A., Sam, G., Adarsh, V. J., Rao, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+Study+of+Piezoelectric+and+Rotary+Osteotomy+Technique+for+Third+Molar+Impaction.">Comparative Study of Piezoelectric and Rotary Osteotomy Technique for Third Molar Impaction.</a> J Contemp Dent Pract. 18, 60-64 (2017).</li><li>Pavlikova, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Piezoelectric+surgery+prevents+brain+tissue+damage:+an+experimental+study+on+a+new+rat+model.">Piezoelectric surgery prevents brain tissue damage: an experimental study on a new rat model.</a> Int J Oral Maxillofac Surg. 40, 840-844 (2011).</li></ol>

아무 공개 있다.

수술 수술 끝을 변경 하 여 수정할 수 있습니다. 핸드 피스에 적용할 수 있는 팁을의 많은 다른 크기가 있다. 팁의 모양 또는 크기를 변경 하는 것은 다른 크기의 창 귀 착될 것 이다. 4 m m 팁 이외에 우리는 또한 3 m m 팁을 시도 하 고 그것은 또한 잘 작동을 발견. 얼음으로 관개와도 차가운 실제, 우리는 했다 너무 너무 많은 열을 발생 하 고 선도 손상 기본 dura 뼈 굽기 집중된 진동 때문 (약 0.25 m m)를 좁은 팁으로 좋은 결과를 얻을 수 없습니다. 우리는 다양 한 사용할 수 있습니다, 다른 팁을 시도 하지 않은 그리고 우리 기대 하는 다른 연구소가 다른 팁에 대 한 새로운 응용 프로그램을 찾을 수 있습니다. 수술은 비교적 간단 하 고, 하는 동안 우리는 문제 해결에 필요할 수 있는 몇 가지 단계는 발견. 첫 번째는 진동 팁 가시성을 감소 하 고 뼈 수술의 단계 숱이 동안 뼈 깊이 확인에 어려움을 생산 실제 난 기류를 많이 생산. 우리가 좋습니다 얼마나 얇은 뼈가, 뼈의 측면에 멸 균 면봉을 적용 하 여 두개골과 창 건조 휴식 하기 너무 어렵습니다. 거친 표면 얇은 뼈를 손상 이후 면봉, 창에 직접 적용 되지 않습니다. 깊이 확인 한 후 실제 적용 하 고 수술 계속 합니다. 우리는 또한 그 경질에 손상이 있는 경우에, 그것은 일반적으로 외과 의사는 팁에 너무 많은 압박으로 인해 발견. 핸드 피스를 더 부드럽게 누른 적은 힘이 문제를 해결할 가능성이 것입니다. 외과 의사는 강제로 뼈에 팁을 근 근, 하는 경우 그것은 얇은 뼈에 휴식을 일으킬 하 고 두개골 손상. 마지막으로, 뼈를 숱이 후 기본 dura 나타나면 상처, 진동에서 과도 한 열으로 인해 높습니다. 실제 흐름의 속도 증가이 문제를 해결할 것입니다.
벡터의 주요 제한은입니다 핸드 피스는 뼈를 얇은 수 있습니다 하지만 경질을 통해 모든 뼈를 제거할 수 없습니다. 다이아몬드 코팅된 팁 작은 거친 범프 있다. 두개골 얇은 필요한 마찰 경질을 침식 하 고 모든 뼈를 제거 하는 데 사용 된 경우 출혈이 발생할 것. 따라서, 집게를 사용 하 여 나머지 얇은 레이어를 제거 해야 합니다. 여부 얇은 두개골을 통해 이미징 덜 염증과 microglia 및 반응성 이다 확산을 덜 생산에 지속적인 논쟁이 있지만, 어떤 경우에 남아 있는 아무 뼈와 창 선호, 예를 들어, 제공 하는3 이미징의 더 깊이 .
우리는 쥐에 있는 multiphoton 이미징 두개골 창 준비를 최적화 했습니다. 벡터는, 우리의 지식, 광학 이미징 설치류 두개골 창 수술 압 전 기술의 첫 번째 응용 프로그램. 우리는 쥐에 압 전 수술의 사용 증가 속도의 장점을 공유 하 고 또한 인간7,8,,910에 보고 된 부작용을 감소 발견. 압 전 장치 활용 빠른 수술 (그림 2A) 귀착되 고 고속 회전에 비해 출혈의 적은 부작용 드릴 (그림 2B). 우리 또한 발견, 연구소, 내 위상 쉽게 새로운 외과 두개골 창 수술에 전통적인 접근 보다는 법을 배워야 했다. 속도의 장점과 사용 용이성 외과의 사이 다를 가능성이 있습니다. 얇은 두개골 준비는 일반적으로 페이저 접근 일반적으로 미만 10 분을 요구 하면서 드릴 및 메스2, 뼈를 얇은 30-45 분 필요 합니다.
우리는 위상 준비 windows에 우리가 레이어 4 피라미드 뉴런 adeno 관련 바이러스 칼슘 표시기 JRGECO1a 인코딩 페 했다 모터 피 질에서에서 칼슘 과도 이미지 수 발견 (AAV9. Syn.NES-jRGECO1a.WPRE.SV40). 우리 또한 발견, 메스와 로타리 드릴 준비 얇은 두개골 두개골 창에 비해, 이미징 지역 얇은 두개골 로타리와 함께 준비 하는 동안 더 큰 되었고 메스는 20 µ m 직경2의 영상 창 . 벡터와 함께 우리는 신속 하 게 3-4 m m의 얇은 수 있었다. 포트4보고 이미징 윈도우와 비슷합니다. 이 큰 창 빠른 이미징 얇은 두개골 창 메스와 치과 드릴 준비에 대 한 보고의 혜택을 유지 합니다. 또한, 벡터와 준비 창 즉시 군데 수, 전통 뼈 제거 반대 주 창 최적의 수 전에 치료 해야 windows3군데.
이 기술은 공부 경질 아래 혈관에 혈액의 흐름에 변경 적용할 수 있습니다. 중요 한 미래 연구는 두개골 창의 다른 방법으로 벡터의 immunoreactivity를 비교 하는. 이 경우 벡터 기존의 방법에 비해 적은 염증 생성을 결정 하는 중요 한 것입니다. 여기 문서화 압 전 수술 방법 더 많은 연구소 두개골 windows 수행 하 고 성공적으로 다에서 vivoimaging을 사용 하면 노력 하겠습니다.
실제 일정 한 속도로 관개 되는 handpiece 가장 낮은 설정에 진동으로 설정 되어 있는지 확인 합니다. 실제를 지속적으로 적용 한다 얼음 감기 또는 그것 열 것 이다 고 경질 손상. 우리는 적어도 1 mL/분 주사기를 사용 하거나, 손에서 개최 하거나 내장 관개 보다는 연동 펌프를 사용 하 여 핸드 피스에서의 실제를 적용 해야 합니다 발견. 핸드 피스에서 관개 시스템 실제 너무 강제로 배출 하 고 가시성을 크게 저하 됩니다 너무 많은 난 기류 생산.

두개골 창 수술 다 vivo에서 화상 진 찰에 대 한 설치류를 준비 하는 신경 과학에 있는 중요 한 기술 되었다. 제거 또는 뼈의은 multiphoton 현미경 광학 이미징에 대 한 마우스를 준비 해야 합니다. 이 수술은 완전히 노출 기본 경질1, 뼈의 영역을 제거 하거나 경질2에서 완전 제거 하지 않고 뼈의 영역을 숱이 수행 됩니다. 얇은 두개골 접근 적은 염증과 microglia3 의 활성화를 생산 수 있습니다 하지만 이미지, 작은 이미지 창 크기 (200 µ m)와 제한 된 기간 동안 창 때문에 뼈 자라나2 군데 수의 얕은 깊이 제공 한다 . 광택 및 강화 유리 창 (포트)의 추가 영상 크기 및 영상 기간을 증가 시킬 수 있습니다 하지만4를 수행 하기가 어렵습니다.
모두 현재 수술 얇은 또는 두개골에서 뼈를 제거 하는 고속 회전 드릴을 사용 합니다. 얇은 두개골 기술 또한 더 얇은 뼈2훈련 후 메스를 사용 합니다. 포트 기술은 고속 연마 모래4의 추가 단계를 해야 합니다. 고속 회전 드릴, 공기 구동 터빈 또는 전기 모터는 빠른 속도로 회전 하는 드릴 비트를 발생 합니다. 로타리 드릴 섹션 뼈와 연 조직, 경질을 손상 하 고 혈관을 기본의 위험이 있다. 수술의 성공 여부는 의사의 기술에 따라 달라 집니다. 이 창은 기계 수술 방법으로 준비, 뿐만 아니라 광학 지우고 다른 솔루션으로 두개골의 화학 방법은 개발된5,6되었습니다. 그러나, 압 전 수술 수술의 기계적 방법 이기 때문에, 여기에 우리의 비교 다른 기계적인 방법으로 제한 될 것입니다.
압 전 수술 장치 없이 손상 기본 부드러운 조직, 광물 화 된 뼈를 뜨 초음파 진동을 이용 하 고 따라서 빠르게 얇은 뼈의 큰 지역에 대 한 접근을 제공. 압 전 외과 핸드 피스에서 터빈은 세라믹 디스크의 더미로 대체 하 고 전류를 적용 하는 경우 디스크 초음파 주파수에서 진동. 진동은 뼈 손상 부드러운 조직 없이 조직 형식 간의 차별 하지 않는 회전 훈련 이점을 통해 잘라 코팅된 팁 다이아몬드를 핸드 피스를 통해 전송 됩니다. 압 전 수술 토마 소 Vercellotti에 의해 인간의 사용을 위해 원래 개발 되었다 고 치과에 개선과 cranio-maxilofacial 수술7,,89,10,11 주도하 고 있다 .
압 전 수술 Wistar 쥐에는 뼈를 만드는 데 사용 되었습니다 그리고 자기 공명 영상 (MRI)와 전통적인 치과 드릴12보다 훨씬 적은 피해를 생산 하는 조직학 발견 됐다. 저자 압 전 수술 소프트 뇌 조직 근처 뼈를 제거 하기 위한 안전 했다 결론을 내렸다. 그러나 쥐,, 더 쉽게 손상 된 얇은 경질 있고 그 연구는 만성 광 이미징에 대 한 windows를 준비 하지 않았다. 만성 이미징 혈관이 손상 되지 및 창 아래 혈전 형성 하지 않습니다 필요 합니다. 경질에 손상을 염증으로 인해 창에서 클라우드, 리드 microglia 및 반응성 이다의 확산을 활성화 하 고. 여기 우리가 만들 얇은 두개골과 전체 뼈 제거 두개골 windows 만성 이미징에 대 한 적합 한 마우스에 대 한 압 전 수술을 최적화 했습니다. 우리는 두개골 창 수술 고속 회전 드릴 준비를이 수술 기법을 비교.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Piezosurgery Touch</td>
			<td>Mectron</td>
			<td>5120062</td>
			<td>Piezosurgery GP model has the same settings</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Circular 4mm flat piezosurgery tip (# OT11)</td>
			<td>Mectron</td>
			<td>3370019</td>
			<td>This tip was ideal for our windows but there are many other tips of different sizes availible.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereotax frame</td>
			<td>Kopf</td>
			<td>963</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse adaptor</td>
			<td>Stoelting</td>
			<td>51625</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Peristaltic pump for irrigation.</td>
			<td>Cole-Parmer</td>
			<td>WU-77120-42</td>
			<td>Makes it easier to irrigate and frees up the other hand to provide stability. Irrigation can be performed by hand with a syringe if necessary.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Avitene Ultrafoam</td>
			<td>Bard-Davol</td>
			<td>1050020</td>
			<td>Important to stop any minor bleeding instantly.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C&#38;B Metabond</td>
			<td>Parkell</td>
			<td>S380</td>
			<td>Much stronger than regular dental acrylic.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Artificial cerebro spinal fluid (ACSF)</td>
			<td>Tocris</td>
			<td>3525</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Puralube opthalmic ointment</td>
			<td>Dechra</td>
			<td>17033-211-38</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mice</td>
			<td>JAX</td>
			<td>664</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Prairie Ultima multiphoton microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>JRGECO1a (AAV9.Syn.NES-jRGECO1a.WPRE.SV40)</td>
			<td>UPENN Vector Core</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

piezo high accuracy surgical osteal removal (phasor): a technique for improved cranial window surgery in mice

Multiphoton 현미경 널리 뉴런에 vivo에서화상 진 찰에 대 한 적응 되었습니다. 반복 된 이미징 두개골 창의 주입 또는 반복 되는 두개골의 숱이 필요 합니다. 두개골 창 수술은 일반적으로 고속 회전 드릴으로 수행 하 고 많은 조사자 섬세 한 경질 및 혈관 손상에서 훈련을 방지 하기 위해 도전 찾으십시오. 광범위 한 훈련 및 연습의 기본 조직에 손상 없이 뼈를 제거 하는 데 필요한 이며 따라서 두개골 창 수술 수 어려운, 많은 시간이 소요 되며 생산 조직 손상. 압 전 수술, 악 안 면 및 치과 수술을 위해 광범위 하 게 사용 되는 부드러운 조직 손상 없이 뼈를 제거 하는 초음파 진동을 활용 합니다. Multiphoton 이미징에 대 한 준비에 쥐에 있는 두개골 창 수술을 개선 하기 위해 압 전 수술을 적용 하는 방법을 개발 했습니다. 우리의 실험실 내 비교 방법을 적은 수술 시간이 필요 회전 드릴으로 두개골 창 수술 보다 경 막 출혈 때문에 합병증의 낮은 평균 속도가지고 찾을.

압 전 수술을 계속 하기 전에 두개골에서 잔여 어떤과 제거 합니다. 일단 두개골은 불투명 하 고 부드러운 (그림 1a), 외과 의사는 압 전 수술을 시작할 수 있습니다. 진동 피 팁과 뼈를 제거, 그것은 얼음으로 두개골을 관개 하는 중요 한 찬 실제. 적절 한 관개 하단 1 m m 팁의 실제 (그림 1b)에 빠져들 때 이루어집니다. 적절 한 관개 없이 뼈가 과열 하 고 두뇌를 손상 것입니다. 두개골은 외과 의사에 의해 선택 원하는 깊이에 박 형 되었습니다, 후 거기 일부 잔여 뼈에 있는 혈관에서 출혈이 있을 수 있습니다. 빠르게 모든 출혈 중단, 콜라겐 거품의 작은 1 m m 조각 적용 하려면 윈도우의 영역을 실제에 배어. 콜라겐 약 30 두개골에 게 s (그림 1c). 콜라겐 거품 제거 후 창이 반투명, 경질에서 혈관의 명확한 시각화 수 있도록 표시 됩니다. 경질 상당한 멍이 없이 그대로 될 것입니다. (그림 1의 d)입니다. 경질 나타나면 빨간색과 염증, 수술 하는 동안 팁에 적용 하는 너무 많은 압력에서 깨진된 혈관으로 인해 높습니다. 새 창을 보호 하 고 만성 이미징에 대 한 준비, 유리 coverslip 지역에 배치 되어야 합니다. 제대로 적용 된 유리 coverslip 됩니다 부드럽게 창 위에 앉아서 영역에 손해를 발생 하지 않습니다. 유리 coverslip 창의 전체를 커버 해야 합니다. 유리 coverslip 두개골에 제대로 적용 되, 창 유리에서 반투명 상태로 유지 됩니다. 경질 모든 혈관 여전히 표시 (그림 1e) 됩니다. 치과 아크릴 영구적으로 두개골의 표면에 고착 하 유리 coverslip 주위 적용 되어야 합니다. 유리 coverslip 가장자리 치과 아크릴 (그림 1 층)에 적용 해야 합니다.
우리 압 전 수술은 일반적으로 전통적인 두개골 창 보다 훨씬 빠르게 수술 (그림 2A) 당 약 10-12 분을 복용 발견. 우리는 또한 발견 했다 경질 멍이 출혈 (그림 2B) 눈으로 관찰로 인해 적은 합병증. 적절히 창 대뇌 피 질의 뉴런 vivo에서 형광 표시기의 multiphoton 이미징을 허용할 것 이다. 우리는 계층 4 대뇌 피 질의 뉴런의 셀 시체에 빨간 칼슘 표시기 JRGECO1a 이미지를 선택 (그림 3A-3B). 우리는 벡터를 사용 하 여 준비 하는 창을 통해 이러한 셀 시체에서 칼슘 과도 관찰 수 합니다.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56172/56172fig1.jpg"> 그림 1: 압 전 수술. (한) 후 두개골 제대로 준비가 되었습니다 위상에 대 한. 모든 periosteal 조직, 부드럽고 깨끗 한 표면을 떠나는 제거 되었습니다. (b) 진행 중인 위상의 대표 이미지. 하단의 외과 팁 얼음에 빠져들은 진동의 1 m m 감기 실제. 액체는 1 mL/min의 속도로 두개골에 적용 됩니다. 빛 원형 모션 두개골에 적용 되 고 뼈는 초음파 진동을 통해 박 형. (c) 후 두개골 박 형, 콜라겐 거품 1 m m 원형 조각의 실제 뼈에서 어떤 마이크로 물림을 막으려고 창에 허용 하는 감기에 배어. 반투명 경질 (d) A 성공적인 창 그대로 혈관의 모든 표시 됩니다. 저기 보이는 손상 또는 두뇌의 표면에 멍이. (e) 유리 coverslip 뇌의 표면을 보호 하기 위해 창 위에 배치 됩니다. (f) 치과 아크릴 창 유리 coverslip를 영구적으로 해결 하려면 두개골에 적용 됩니다. 규모는 모든 이미지에 1mm를 바.
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56172/56172fig2.jpg"> 그림 2입니다. 벡터 또는 치과 훈련 성공률의 비교 드릴 수술. 수술 당 (A) 평균 시간 위상에 대 한 치과 드릴 수술 보다 더 낮 았다 (p < 0.05, 두 꼬리 t 테스트) n = 그룹 당 30 수술 및 외과 의사 당 10 수술 평균. (B) 성공적인 수술 (350 X 확대/축소를 설정 하는 목표를 통해 외과 의사의 눈으로 관찰 경질 출혈 또는 보이는 손상으로 정의)의 비율 보다 더 높았다 위상에 대 한 치과 드릴 수술 (n = 30 수술 각 그룹에 대 한 하나 꼬리 z 테스트)입니다. 오차 막대 표시 sd.
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56172/56172fig3.jpg"> 그림 3입니다. Vivo에서 두개골 창을 통해 이미징 다 PHASOR thinned. 과도 빨간 칼슘 표시기 JRGECO1a 관찰 했다 murine 모터 피 질 vivo에서 계층 4 피라미드 뉴런에서 몇 군데는 (A) 칼슘 눈금 막대 = 100 µ m. (B) 같은 창 하지만 레이어 4 모터 코르 텍 스의 다른 지역. Headfixed 마우스 3 m m 창 위상으로 준비 합니다. 눈금 막대 = 30 µ m. 군데 multiphoton 현미경, 40 X 목표, 1040 nm 여기 파장.

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Piezo High Accuracy Surgical Osteal Removal PHASOR: A Technique for Improved Cranial Window Surgery in Mice

압 전 수술 개선 인간의 악 안 면 및 치과 수술을 주도하 고 있다. 우리는 쥐에 두개골 창 수술에 대 한 압 전 수술을 최적화 하기 위해 프로토콜을 개발 했습니다.

압 전 높은 정확도 Osteal 제거 수술 (위상): 쥐에 향상 된 두개골 창 수술 기법

Multiphoton microscopy has been widely adapted for imaging neurons in vivo. Repeated imaging requires implantation of a cranial window or repeated ...

piezo-high-accuracy-surgical-osteal-removal-phasor-technique-for

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Piezo High Accuracy Surgical Osteal Removal (PHASOR): A Technique for Improved Cranial Window Surgery in Mice

10.6K 조회수.  Columbia University Medical Campus. 압 전 수술 개선 인간의 악 안 면 및 치과 수술을 주도하 고 있다. 우리는 쥐에 두개골 창 수술에 대 한 압 전 수술을 최적화 하기 위해 프로토콜을 개발 했습니다.

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A Thin-skull Window Technique for Chronic Two-photon In vivo Imaging of Murine Microglia in Models of Neuroinflammation

Traditionally in neuroscience, in vivo two photon imaging of the murine central nervous system has either involved the use of open-skull1,2 or thinned-skull 3 preparations. While the open-skull technique is very versatile, it is not optimal for studying microglia because it is invasive and can cause microglial activation. Even though the thinned-skull approach is minimally invasive, the repeated re-thinning of skull required for chronic imaging increases the risks of tissue injury and microglial activation and allows for a limited number of imaging sessions. Here we present a chronic thin-skull window method for monitoring murine microglia in vivo over an extended period of time using two-photon microscopy. We demonstrate how to prepare a stable, accessible, thinned-skull cortical window (TSCW) with an apposed glass coverslip that remains translucent over the course of three weeks of intermittent observation. This TSCW preparation is far more immunologically inert with respect to microglial activation than open craniotomy or repeated skull thinning and allows an arbitrary number of imaging sessions during a time period of weeks. We prepare TSCW in CX3CR1 GFP/+ mice 4 to visualize microglia with enhanced green fluorescent protein to &le;150 &mu;m beneath the pial surface. We also show that this preparation can be used in conjunction with stereotactic brain injections of the HIV-1 neurotoxic protein Tat, adjacent to the TSCW, which is capable of inducing durable microgliosis. Therefore, this method is extremely useful for examining changes in microglial morphology and motility over time in the living brain in models of HIV Associated Neurocognitive Disorder (HAND) and other neurodegenerative diseases with a neuroinflammatory component.

A Thin-skull Window Technique for Chronic Two-photon In vivo Imaging of Murine Microglia in Models of Neuroinflammation

We describe a method for repeatedly visualizing murine microglia and circulating monocytes in vivo over hours, days or weeks using transcranial two-photon microscopy. We demonstrate how to prepare a thinned-skull window that allows intermittent observation of quiescent microglia that can be activated by adjacent stereotactic injection of the HIV-1 regulatory protein Tat.

만성 두 광자를위한 박막 해골 창 기법 생체내에서</emNeuroinflammation의 모델 Murine Microglia의> 이미징

Traditionally in neuroscience, in vivo two photon imaging of the murine central nervous system has either involved the use of open-skull1,2 or ...

연구

신경과학

Intravital Microscopy of the Mouse Brain Microcirculation using a Closed Cranial Window

This experimental model was designed to assess the mouse pial microcirculation during acute and chronic, physiological and pathophysiological hemodynamic, inflammatory and metabolic conditions, using in vivo fluorescence microscopy. A closed cranial window is placed over the left parieto-occipital cortex of the mice. Local microcirculation is recorded in real time through the window using epi and fluorescence illumination, and measurements of vessels diameters and red blood cell (RBC) velocities are performed. RBC velocity is measured using real-time cross-correlation and/or fluorescent-labeled erythrocytes. Leukocyte and platelet adherence to pial vessels and assessment of perfusion and vascular leakage are made with the help of fluorescence-labeled markers such as Albumin-FITC and anti-CD45-TxR antibodies. Microcirculation can be repeatedly video-recorded over several days. We used for the first time the close window brain intravital microscopy to study the pial microcirculation to follow dynamic changes during the course of Plasmodium berghei ANKA infection in mice and show that expression of CM is associated with microcirculatory dysfunctions characterized by vasoconstriction, profound decrease in blood flow and eventually vascular collapse.

Intravital microscopy to follow temporal and spatial hemodynamic and inflammatory events in the pial microcirculation.

휴일 두개골 윈도우를 사용하여 마우스 뇌 엑기스의 Intravital 현미경

This experimental model was designed to assess the mouse pial microcirculation during acute and chronic, physiological and pathophysiological hemodynamic, ...

Progressive-ratio Responding for Palatable High-fat and High-sugar Food in Mice

Foods that are rich in fat and sugar significantly contribute to over-eating and escalating rates of obesity. The consumption of palatable foods can produce a rewarding effect that strengthens action-outcome associations and reinforces future behavior directed at obtaining these foods. Increasing evidence that the rewarding effects of energy-dense foods play a profound role in overeating and the development of obesity has heightened interest in studying the genes, molecules and neural circuitry that modulate food reward1,2. The rewarding impact of different stimuli can be studied by measuring the willingness to work to obtain them, such as in operant conditioning tasks3. Operant models of food reward measure acquired and voluntary behavioral responses that are directed at obtaining food. A commonly used measure of reward strength is an operant procedure known as the progressive ratio (PR) schedule of reinforcement.4,5 In the PR task, the subject is required to make an increasing number of operant responses for each successive reward. The pioneering study of Hodos (1961) demonstrated that the number of responses made to obtain the last reward, termed the breakpoint, serves as an index of reward strength4. While operant procedures that measure changes in response rate alone cannot separate changes in reward strength from alterations in performance capacity, the breakpoint derived from the PR schedule is a well-validated measure of the rewarding effects of food. The PR task has been used extensively to assess the rewarding impact of drugs of abuse and food in rats (e.g.,6-8), but to a lesser extent in mice9. The increased use of genetically engineered mice and diet-induced obese mouse models has heightened demands for behavioral measures of food reward in mice. In the present article we detail the materials and procedures used to train mice to respond (lever-press) for a high-fat and high-sugar food pellets on a PR schedule of reinforcement. We show that breakpoint response thresholds increase following acute food deprivation and decrease with peripheral administration of the anorectic hormone leptin and thereby validate the use of this food-operant paradigm in mice.

The present report details the protocol employed to measure the rewarding effects of high-fat food in mice using a progressive ratio operant conditioning task.

프로 그레시브 - 비율 쥐의 Palatable 높은 지방과 높은 설탕 음식에 대한 응답

Foods that are rich in fat and sugar significantly contribute to over-eating and escalating rates of obesity. The consumption of palatable foods can ...

Thinned-skull Cortical Window Technique for In Vivo Optical Coherence Tomography Imaging

Optical coherence tomography (OCT) is a biomedical imaging technique with high spatial-temporal resolution. With its minimally invasive approach OCT has been used extensively in ophthalmology, dermatology, and gastroenterology1-3. Using a thinned-skull cortical window (TSCW), we employ spectral-domain OCT (SD-OCT) modality as a tool to image the cortex in vivo. Commonly, an opened-skull has been used for neuro-imaging as it provides more versatility, however, a TSCW approach is less invasive and is an effective mean for long term imaging in neuropathology studies. Here, we present a method of creating a TSCW in a mouse model for in vivo OCT imaging of the cerebral cortex.

Thinned-skull Cortical Window Technique for In Vivo Optical Coherence Tomography Imaging

We present a method of creating a thinned-skull cortical window (TSCW) in a mouse model for in vivo OCT imaging of the cerebral cortex.

에 얇게 - 두개골 두피 창 기술<em&gt; 생체 내</em&gt; 광 결맞음 단층 촬영 영상

Optical coherence tomography (OCT) is a biomedical imaging technique  with high spatial-temporal resolution. With its minimally invasive approach OCT  has ...

Surgical Method for Virally Mediated Gene Delivery to the Mouse Inner Ear through the Round Window Membrane

Gene therapy, used to achieve functional recovery from sensorineural deafness, promises to grant better understanding of the underlying molecular and genetic mechanisms that contribute to hearing loss. Introduction of vectors into the inner ear must be done in a way that widely distributes the agent throughout the cochlea while minimizing injury to the existing structures. This manuscript describes a post-auricular surgical approach that can be used for mouse cochlear therapy using molecular, pharmacologic, and viral delivery to mice postnatal day 10 and older via the round window membrane (RWM). This surgical approach enables rapid and direct delivery into the scala tympani while minimizing blood loss and avoiding animal mortality. This technique involves negligible or no damage to essential structures of the inner and middle ear as well as neck muscles while wholly preserving hearing. To demonstrate the efficacy of this surgical technique, the vesicular glutamate transporter 3 knockout (VGLUT3 KO) mice will be used as an example of a mouse model of congenital deafness that recovers hearing after delivery of VGLUT3 to the inner ear using an adeno-associated virus (AAV-1).

The described post-auricular surgical approach allows rapid and direct delivery into the mouse cochlear scala tympani while minimizing blood loss and animal mortality. This method can be used for cochlear therapy using molecular, pharmacologic and viral delivery to postnatal mice through the round window membrane.

라운드 창 멤브레인을 통해 마우스 내부 귀에 바이러스로 매개 유전자 전달을위한 수술 방법

Gene therapy, used to achieve functional recovery from sensorineural deafness, promises to grant better understanding of the underlying molecular and ...

Lateral Chronic Cranial Window Preparation Enables In Vivo Observation Following Distal Middle Cerebral Artery Occlusion in Mice

Focal cerebral ischemia (i.e., ischemic stroke) may cause major brain injury, leading to a severe loss of neuronal function and consequently to a host of motor and cognitive disabilities. Its high prevalence poses a serious health burden, as stroke is among the principal causes of long-term disability and death worldwide1. Recovery of neuronal function is, in most cases, only partial. So far, treatment options are very limited, in particular due to the narrow time window for thrombolysis2,3. Determining methods to accelerate recovery from stroke remains a prime medical goal; however, this has been hampered by insufficient mechanistic insights into the recovery process. Experimental stroke researchers frequently employ rodent models of focal cerebral ischemia. Beyond the acute phase, stroke research is increasingly focused on the sub-acute and chronic phase following cerebral ischemia. Most stroke researchers apply permanent or transient occlusion of the MCA in mice or rats. In patients, occlusions of the MCA are among the most frequent causes of ischemic stroke4. Besides proximal occlusion of the MCA using the filament model, surgical occlusion of the distal MCA is probably the most frequently used model in experimental stroke research5. Occlusion of a distal (to the branching of the lenticulo-striate arteries) MCA branch typically spares the striatum and primarily affects the neocortex. Vessel occlusion can be permanent or transient. High reproducibility of lesion volume and very low mortality rates with respect to the long-term outcome are the main advantages of this model. Here, we demonstrate how to perform a chronic cranial window (CW) preparation lateral to the sagittal sinus, and afterwards how to surgically induce a distal stroke underneath the window using a craniotomy approach. This approach can be applied for sequential imaging of acute and chronic changes following ischemia via epi-illuminating, confocal laser scanning, and two-photon intravital microscopy.

Lateral Chronic Cranial Window Preparation Enables In Vivo Observation Following Distal Middle Cerebral Artery Occlusion in Mice

Surgical occlusion of a distal middle cerebral artery branch (MCAo) is a frequently used model in experimental stroke research. This manuscript describes the basic technique of permanent MCAo, combined with the insertion of a lateral cranial window, which offers the opportunity for longitudinal intravital microscopy in mice.

측면 만성 두개골 창 준비 활성화<em&gt; 생체</em&gt; 마우스의 말초 중간 대뇌 동맥 폐색에 따라 관측

Focal cerebral ischemia (i.e., ischemic stroke) may cause major brain injury, leading to a severe loss of neuronal function and consequently to a host of ...

An Improved Method for Collection of Cerebrospinal Fluid from Anesthetized Mice

The cerebrospinal fluid (CSF) is a valuable body fluid for analysis in neuroscience research. It is one of the fluids in closest contact with the central nervous system and thus, can be used to analyze the diseased state of the brain or spinal cord without directly accessing these tissues. However, in mice it is difficult to obtain from the cisterna magna due to its closeness to blood vessels, which often contaminate samples. The area for CSF collection in mice is also difficult to dissect to and often only small samples are obtained (maximum of 5-7 &#181;L or less). This protocol describes in detail a technique that improves on current methods of collection to minimize contamination from blood and allow for the abundant collection of CSF (on average 10-15 &#181;L can be collected). This technique can be used with other dissection methods for tissue collection from mice, as it does not impact any tissues during CSF extraction. Thus, the brain and spinal cord are not affected with this technique and remain intact. With greater CSF sample collection and purity, more analyses can be used with this fluid to further aid neuroscience research and better understand diseases affecting the brain and spinal cord.

This protocol describes an improved technique for the abundant collection of cerebrospinal fluid (CSF) with no contamination from blood. With greater sample collection and purity, more analyses can be performed using CSF to further our understanding of diseases that affect the brain and spinal cord.

마 취 쥐에서 척수의 컬렉션에 대 한 개선된 방법

The cerebrospinal fluid (CSF) is a valuable body fluid for analysis in neuroscience research. It is one of the fluids in closest contact with the central ...

Functional MRI in Conjunction with a Novel MRI-compatible Hand-induced Robotic Device to Evaluate Rehabilitation of Individuals Recovering from Hand Grip Deficits

Functional magnetic resonance imaging (fMRI) is a non-invasive magnetic resonance imaging technique that images brain activation in vivo, using endogenous deoxyhemoglobin as an endogenous contrast agent to detect changes in blood-level-dependent oxygenation (BOLD effect). We combined fMRI with a novel robotic device (MR-compatible hand-induced robotic device [MR_CHIROD]) so that a person in the scanner can execute a controlled motor task, hand-squeezing, which is a very important hand movement to study in neurological motor disease. We employed parallel imaging (generalized auto-calibrating partially parallel acquisitions [GRAPPA]), which allowed higher spatial resolution resulting in increased sensitivity to BOLD. The combination of fMRI with the hand-induced robotic device allowed precise control and monitoring of the task that was executed while a participant was in the scanner; this may prove to be of utility in rehabilitation of hand motor function in patients recovering from neurological deficits (e.g., stroke). Here we outline the protocol for using the current prototype of the MR_CHIROD during an fMRI scan.

We performed functional MRI using a novel MRI-compatible hand-induced robotic device to evaluate its utility for monitoring hand motor function in individuals recovering from neurological deficits.

손 그립 적자에서 회복하는 개인의 재활을 평가하기 위해 새로운 MRI 호환 손 유도 로봇 장치와 함께 기능MRI

Functional magnetic resonance imaging (fMRI) is a non-invasive magnetic resonance imaging technique that images brain activation in vivo, using endogenous ...

A Revised Surgical Approach to Induce Endolymphatic Hydrops in the Guinea Pig

Endolymphatic hydrops is an enlargement of scala media that is most often associated with Meniere&#39;s disease, though the pathophysiologic mechanism(s) remain unclear. In order to adequately study the attributes of endolymphatic hydrops, such as the origins of low-frequency hearing loss, a reliable model is needed. The guinea pig is a&#160;good model because it hears in the low-frequency regions that are putatively affected by endolymphatic hydrops. Previous research has demonstrated that endolymphatic hydrops can be induced surgically via intradural or extradural approaches that involve drilling on the endolymphatic duct and sac. However, whether it was possible to create an endolymphatic hydrops model using an extradural approach that avoided dangerous drilling on the endolymphatic duct and sac was unknown. The objective of this study was to demonstrate a revised extradural approach to induce experimental endolymphatic hydrops at 30 days post-operatively by obliterating the endolymphatic sac and injuring the endolymphatic duct with a fine pick. The sample size consisted of seven guinea pigs. Functional measurements of hearing were made and temporal bones were subsequently harvested for histologic analysis. The approach had a success rate of 86% in achieving endolymphatic hydrops. The risk of cerebrospinal fluid leak was minimal. No perioperative deaths or injuries to the posterior semicircular canal occurred in the sample. The presented method demonstrates a safe and reliable way to induce endolymphatic hydrops at a relatively quick time point of 30 days. The clinical implications are that the presented method provides a reliable model to further explore the origins of low-frequency hearing loss that can be associated endolymphatic hydrops.

This article demonstrates an extradural approach to obliterate the guinea pig endolymphatic sac and injure the endolymphatic duct with a fine pick in order to induce experimental endolymphatic hydrops.

기니 피그에서 내인성 수압을 유도하는 개정 된 외과 접근 법

Endolymphatic hydrops is an enlargement of scala media that is most often associated with Meniere&#39;s disease, though the pathophysiologic mechanism(s) ...

Implantation of a Cranial Window for Repeated In Vivo Imaging in Awake Mice

To fully understand the cellular physiology of neurons and glia in behaving animals, it is necessary to visualize their morphology and record their activity in vivo in behaving mice. This paper describes a method for the implantation of a chronic cranial window to allow for the longitudinal imaging of brain cells in awake, head-restrained mice. In combination with genetic strategies and viral injections, it is possible to label specific cells and regions of interest with structural or physiological markers. This protocol demonstrates how to combine viral injections to label neurons in the vicinity of GCaMP6-expressing astrocytes in the cortex for simultaneous imaging of both cells through a cranial window. Multiphoton imaging of the same cells can be performed for days, weeks, or months in awake, behaving animals. This approach provides researchers with a method for viewing cellular dynamics in real time and can be applied to answer a number of questions in neuroscience.

Implantation of a Cranial Window for Repeated In Vivo Imaging in Awake Mice

Presented here is a protocol for the implantation of a chronic cranial window for the longitudinal imaging of brain cells in awake, head-restrained mice.

깨어있는 마우스 에서 반복되는 생체 내 이미징을위한 두개골 창 이식

To fully understand the cellular physiology of neurons and glia in behaving animals, it is necessary to visualize their morphology and record their ...