이 작품은 학과 생명 공학, 면역학, 뉴델리의 국립 연구소에 인도 정부에서에서 받은 코어 그랜트에 의해 지원 되었다. 박사 Bhattacharjee의 현재 주소는 사단의 위장, 간장 학과 및 영양, 아동 병원 로스 앤젤레스.

이 프로토콜에서 제시 하는 절차는 면역학, 뉴델리의 국립 연구소의 기관 동물 윤리 위원회에 의해 승인 되었습니다. 승인의 직렬 참조 번호는 IAEC #319/13.
참고: 일반 외과 절차20 및 설치류 수술21에 대 한 특정 프로토콜에 우수한 자원 있습니다. 그는 처음으로 동물 수술을 하 고,이 좋습니다 광범위 하 게 연습을 인형에 수술 동물에 작동 하기 전에.
1입니다. 준비
<ol><li>실험, 계속 하기 전에 멸 균 인산 염 버퍼 식 염 수 (PBS) 또는 염 분 준비.</li>
	<li>가 위, 톱니 모양의 집게, 집게를 조직, 면, 면봉, 나일론 스레드, 그리고 다른 마이크로 바늘 홀더 수술 키트를 조립 한다. 압력솥 수술 키트입니다. 특별 한 주의 경우는 면역 손상 끄 덕 취해야 한다. SCID 마우스 프로토콜에 포함 됩니다.</li>
	<li>수술의 끝에 준비에서 완전 한 실험 절차를 수행, 생물 안전에서 캐비닛 클래스 I.</li>
	<li>무게는 끄 덕 임. 수술 하기 전에 오래 된 6-8 주간의 SCID 마우스. 14-18 g 사이 무게 쥐가이 연구에 사용 됩니다.</li>
	<li>헤어 트리머 마우스의 상단 중앙과 증 복 부 영역을 면도. 머리 잘린된 머리카락을 완전히 제거 하려면 주걱으로 크림 지역에 걸쳐 균등 하 게 제거를 적용 합니다. 2-5 분 후 젖은 메 마른 목화의 조각의 도움으로 부드럽게 머리카락을 제거 합니다.</li>
	<li>Isoflurane 챔버에 마우스를 놓고 산소 실린더의 밸브를 잠금 해제 합니다. 4 L/min의 속도로 산소 흐름 및 마 취 유도를 4%에서 isoflurane 증발을 유지 합니다.<ol>
<li>마우스는 부드러운 발가락 곤란 하 여 제대로 anesthetized 되었습니다 확인 하십시오.</li>
	</ol>
</li>
	<li>장소는 biosafety 내부 수술 보드 장. 마우스의 복 부 부분 직면 하 고 마우스의 앞쪽 부분 isoflurane 및 산소 공급 장치에 연결 하는 코 콘 내부 배치는 그런 동물 수술 보드에 놓습니다.</li>
	<li>2%, isoflurane 증발을 감소 하 고 수술을 통해 그것을 유지.</li>
	<li>마우스의 피부를 소독 하 고 절 어 70% 에탄올 소독 면으로 닦아 하 여 소독.</li>
</ol>2. 수술
<ol><li>
부분 Hepatectomy
	<ol>
<li>칼 과정을 바로 운영가 위의 도움으로는 흉 곽에 평행한 수직, 흉 골 바로 아래 피부에 약 1 ㎝의 가로 절 개를 확인 합니다.</li>
		<li>부드럽게 집게 또는 피부와 복 부 근육 층 사이 구별을 무 균 moistened 면 팁 베인된 지역 주변 복 부 근육 층으로 연결 된 피부를 구분 합니다. 건조를 피하기 위해 메 마른 면 팁을 사용 하 여 PBS를 가진 피부 영역을 만끽해 보세요.</li>
		<li>바로 아래에 칼 복 층 가로 절 개를 하 여 원활 하 게 왼쪽된 엽의 영역을 노출. 폭로 하 고 들어 간 좌 엽 두 moistened 면 팁을 사용 합니다.</li>
		<li>컷의 복 부 측에 면화 팁 중 하나를 배치 하 고 격 막에 다른 면 팁을 배치. 부드럽게 팁, 횡 경 막 쪽으로 배치를 누르고 들어 간 좌 엽에 다른 팁으로 슬라이딩 밀어 줄.</li>
		<li>슬립 해제 왼쪽된 엽 통해 루프와 나일론 스레드를 마이크로 포 셉 또는 면 팁의 도움으로 고 hilum 가까이 왼쪽된 엽의 기지를 향해 루프. 부드럽게 왼쪽된 엽의 기지에 나일론 스레드 루프 아래로 밀어.</li>
		<li>미세 바늘 홀더 및 마이크로 집게를 사용 하 여 왼쪽된 엽 위에 나일론 스레드의 두 끝을 묶어. 다른 쪽에 두 개의 추가 노트를 확인 합니다.</li>
		<li>가 위의 도움으로 묶인된 엽 개 해 부. 스레드 가까이 매우 잘라 하지 마십시오. 경우에 절차는 5 분 이상 지속, 계속 복 막 구멍 및 장기 액체 손실로 인해 건조를 피하기 위해 무 균 PBS와 촉촉한.</li>
		<li>연속 봉합을 사용 하 여 4-0 다 봉합 복을 바느질. 그 후, 최대한 빨리 불연속 봉합 하 여 피부를 닫습니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
세포 이식 참고: GFP 표현 hepatocytes 유전자 변형 GFP 마우스에서 고립 되었다 (C57BL/6-Tg (UBC-GFP) 30 Scha/J),이 외에 의해 설명 된 절차에 따라. 22 와 쉔 외. 23 hepatocyte 같은 셀 (NeoHep) 인간의 기원 monocytes24 에서 분화의 이식도 사용 되었다. 그러나, 다른 소스에서 파생 된 세포 프로토콜에도 사용할 수 있습니다.<ol>
<li>약 50 µ L의 Iscove의 수정 Dulbecco의 매체 (IMDM), 0.2 백만 가능한 셀을 일시 중단 하 고 1 mL 인슐린 주사기 30 G 바늘 출장에서 발음. 얼음에 그것을 배치 하 여 주사기 차가운 유지.</li>
		<li>왼쪽된 측면 부분에 수술을 수행 하는 사람을 향해 직면 하는 방식으로 마우스를 놓습니다. 비장 영역을 식별 하 고 transversely 노출 비장을 복 층을 통해 짧은 절 개 뒤 증 지역 근처 피부를 해 부.</li>
		<li>부드럽게 비장 들어올린 두 PBS의 도움으로 구멍 밖에 서 면 팁을 습 하 게 잡고.</li>
		<li>한 손에 두 면 팁으로 신중 하 게 비장을 누른 주사기의 바늘을 비장에 정확 하 게 수직 배치 합니다. 부드럽게 비장을 관통 하 고 바늘을 밀어 안으로 매우 느리게; 바늘 2 m m 보다 더 받아야 하지.</li>
		<li>비장 세포를 주입 하 천천히 주사기의 피스톤을 아래로 밀어. 이식 후 주사기의 바늘을 안정적으로 유지 하 고 천천히 출혈 방지 하려면 비장 또는 셀의 손실에서 그것을 제거 합니다.</li>
		<li>면 팁으로 복 막 구멍으로 비장을 배치 후 연속 4-0 다 봉합으로 봉합 하 여 복 층을 닫습니다. 바느질 같은 봉합으로 불연속으로 피부. 닫는 피부;에 대 한 상처 클립을 사용 하지 마십시오 대신, 4-0 봉합 하 여 그것을 닫습니다. 상처 클립 마우스의 자연 스러운 움직임을 제한 하 고 종종 클립 느슨하게 되 고 신속 하 게 밖으로 나와.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. 수술 치료
<ol><li>피부를 닫은 후 주변을 요오드 솔루션 (betadine) 살 균 면 팁을 사용 하 여 두 봉합 사이트 닦아냅니다.</li>
	<li>600 mg/kg 몸 무게 (일반적으로 염 분/마우스의 100 µ L에서 12 mg cefotaxime) intraperitoneally cefotaxime 항생제의 복용량을 주사 1 mL 주사기를 사용 하 여.</li>
	<li>진통 Meloxicam의 매일 복용량으로 줄 1 mg/kg 몸 무게 (일반적으로 12 µ g Meloxicam의 식 염 수/마우스 100 µ L에서) 동물에 intraperitoneally, 수술 후 최대 3 일 동안.</li>
	<li>수술의 완료 후 isoflurane 가스의 흐름을 중지 하 고 개별적으로 통풍이 장에 다시 마우스를 놓습니다.</li>
</ol>4. euthanization 및 Characterizations
<ol><li>실험적인 종점 (1 일 및 10 일 후 수술) 후 기관 동물 윤리 지침에 따라 마우스를 안락사.</li>
	<li>말기 출혈 눈 터미널 총 puncturing 동물에 의해 혈액을 수집 합니다.</li>
	<li>혈액에서 혈 청을 분리.</li>
</ol>

<ol>
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저자는 공개 없다.

부분 hepatectomy 조사 간 재생에 대 한 설립된 기술 이며 과도 한 hepatectomy AHF 모델을 모방 하기 위해 보고. AHF의 동물 모델 중 특히 쥐, 설치류는 가장 연구 모델입니다. 최대 70 %hepatectomy 쥐에서 간 상해 모델을 얻기 위해 좋은 생존 율25,26보고 되었습니다. 그러나 누드 및 다른 immunodeficient 마우스, 70 %hepatectomy 치명적으로 알려졌다 고 동물2724 시간 안에 죽 었 다.
미첼과 Willenbring28 2/3 부분 hepatectomy 쥐에 대 한 재현 하 고 잘 용납 방법 설명 했다. 에 끄 덕 임. SCID 쥐는 우리는 hepatectomy 총 간 질량의 30%는 왼쪽된 간 엽 절제술까지 제한 되었다 때 100% 생존 율 얻을. 누드 마우스27에 관측에 따라 어떤 추가 hepatectomy 끄 덕에 비율에서 증가 관찰 합니다. SCID 마우스 생존 율의 극적인 저하 이끌어 낸다. 또한, 간 나머지 hepatocytes의 확산 돌출부 게시물 1 일 30% 부분 hepatectomy의 이식 및 engraftment 연구에이 절차의 유틸리티를 확인 했다.
최근 신문에, 아메드 수호 외. 29 intrahepatic 간세포 암 xenografts immunodeficient 마우스에 대 한 절차를 설명 했다. 그들은 다양 한 장기, 비장을 포함 한 고 hepatectomy intrahepatic engraftment를 촉진 하기 위하여 수행에 종양 세포의 식 위한 절차를 나타났습니다.
미첼28 와 아메드29보고 절차에 작은 절 개는 수술에서 선호 일반적으로 훨씬 더 작은 절 개를 함으로써 수정에 대 한 기회가입니다. 증거30 작은 길이 수술 절 개 스트레스 호르몬 코 티 솔과 카 테 콜 아민 등의 덜 분 비 하는 있다. 또한, 우리는 하나의 큰 절 개를 포함 하는 절차 능력의 높은 수준을 요구 하 고는 2 개의 작은 절 개는 데 절차에 비해 더 재현, 어렵다 발견.
이 종이에서 우리는 최소 절 개 하는 데 필요한 간 좌 엽을 노출 하는 절차를 설명 하 고 30 %hepatectomy 수행한 후 또 다른 작은 절 개 비장 세포 이식 했다 폭로 되었다. 이 절차는 전문된 수술 능력을 필요로 하지 않습니다 하 고 5-7 분에 완료 될 수 있다. 또한, 우리 조직학 연구에 의해 입증으로 나머지 간 질량에 어떤 형태 또는 해 부 이상은의 증거를 발견. 또한, 수술 6-8 주 동안 허 혈 이나 괴 사의 부재 했다-오래 된 면역 손상 쥐. 부분 hepatectomy 후 간 상해의 유도 간 효소 AST, ALT, 그리고가-PHOSin 쥐 혈 청의 높은 수준에 의해 확인 된다. Intrasplenic 경로 포털 정 맥 시스템은 다른 정 맥 시스템 보다 간 피 질에 더 높은 접근 가능성 때문에 다른 정 맥 경로 통한 세포 이식에 대 한 선정 되었습니다. 우리 유전자 변형 GFP 마우스에서 격리 hepatocytes의 이식 증명 하 고 NeoHep는 부분적으로 hepatectomized 끄 덕에에서 인간의 원산지 hepatocyte 같은 세포 분화. SCID 동물입니다. 절차는 이식에 사용 되는 세포의 종류를 제한 하지 않습니다.
그러나,이 절차 만들지 않습니다 AHF 상태는 마우스에만 30% 부분 hepatectomy 수행. 이 제한 된 hepatectomy hepatocytes에 나머지, 그로 인하여 engraftment를 이식된 hepatocytes에 대 한 추가적인 기회를 제공 하는 존재를 증식 가능성을 제공 합니다. 그것만 보여줍니다 마이그레이션 및 engraftment hepatocytes, 및 NeoHep의 비장에서 간, 그리고 추가 손상 간 이식 절차에 의해 이루어집니다.
모든 동안,이 절차는 간단 합니다, 그리고 연습 고 쉽게 재현 가능한 결과 얻으려면 마스터. 여러 소스의 세포 (줄기 세포 또는 hepatocyte 같은 셀) 간 부상, 또는 간 재생 연구의 맥락에서 재생 잠재력이 수술으로 쉽게 평가할 수 있습니다.

현재, hepatocyte 이식 데 심한 간 장애 환자 치료에 대 한 전체 장기 이식의 대 안으로 제시 된다. 그것은 전체 장기 이식1환자 다리 수 믿 었 다. Allogenic hepatocytes2뿐만 아니라 xenogenic hepatocytes3 및 줄기 세포4 에서 파생 된 hepatocytes는 또한 되 고 조사 동물 모델에서. 이 컨텍스트, 추적 및 engraftment 받는 사람에서 이식된 세포의 잠재력 급성 간장 장애 (AHF)에 따라 셀 치료에 대 한 중요 한 기준입니다.
조사 hepatocytes 또는 hepatocyte 같은 셀5의 이식, AHF 수술6 또는 약리학7 절차, 뒤에 세포 이식 동물 모델에서 만들어집니다. 약리학 적인 시 약, 많은 hepatotoxins d galactosamine8, 아 세트 아미노 펜9, 사염화 탄소10, thioacetamide11, Concanavalin A12, lipopolysaccharide13 AHF 동물 모델을 , 등., 사용 되었습니다. 이 목록에서 모든 시 약 AHF, 독특한 기능 집합이 생성 하지만 불행히도 아무 단일 시 약 인간의 AHF 모방. 또한, hepatotoxins에 의해 유도 된 AHF는 시간이 오래 걸립니다, 만성 스트레스는 동물을 박 았, 그리고 재현성 결과 얻기 어렵다.
다른 한편으로, 부분 hepatectomy (PHx)의 수술은 기술 종속, 고 재현성 결과 필요한 능력 개발 후 얻을 쉽습니다. 혼자 외 과적으로 AHF을 유도, 간 70% 이상의 절제가 필요; 그러나, 70 %hepatectomy 여전히 engraftment의 확산을 공부 하 고 이용 될 수 있다 보다는 더 적은 셀 간 손상14동안 그들의 치료 용량을 분석 하기 위한 간 이식. Hepatocytes의 이식 복15, 꼬리 정 맥16,17간 정 맥 또는 비장18통해 수행된 게시물 hepatectomy 되었습니다. 현재, 간 정 맥 주입 및 hepatocytes의 intrasplenic 이식으로 재현 하기 쉬운 기본 절차입니다.
이 문서에 우리는 30% 부분 hepatectomy 끄 덕에 대 한 절차를 설명 했습니다. SCID (끄 덕 임. CB17-Prkdcscid/J) 마우스의 왼쪽된 엽 excised입니다. 그것은 이식의 0.2 백만 GFP 표현 마우스 (C57BL/6-Tg (UBC-GFP) 30Scha/J) hepatocytes 인간의 기원 NeoHep19 비장에 옵니다. 이 절차에에서 이식된 세포의 engraftment 이끌어 낸다. 이 절차는 최소한 침략 적 및 최소한 고통 스러운 기술.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1002">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:411px;">Gas Anesthesia System</td>
			<td style="width:255px;">Ugo Basile; Italy</td>
			<td style="width:119px;">211000</td>
			<td style="width:217px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Weighing machine</td>
			<td style="width:255px;">Goldtech ; India</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Local Procurement</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Biological safety cabinet ( Class I)</td>
			<td style="width:255px;">Kartos international;&#160; India</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Local Procurement</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Hair Trimmer</td>
			<td>Panasonic ;&#160; Japan&#160;</td>
			<td style="width:119px;">ER-GY10&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Straight operating scissor with sharp /sharp blades</td>
			<td style="width:255px;">Major Surgicals; India</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Local Procurement</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Forceps with Serrations</td>
			<td style="width:255px;">Major Surgicals; India</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Local Procurement</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Micro needle holders&#160; straight &#38; curved&#160;</td>
			<td>Mercian ;&#160; England&#160;</td>
			<td style="width:119px;">BS-13-8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">1 ml insulin syringe with 30G *5/16 needles&#160;</td>
			<td>Dispo Van; India</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">1 ml syringe with 26 G * 1/2 needle</td>
			<td>BD ; US&#160;</td>
			<td>REF 303060</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Nylon Threads&#160;&#160;</td>
			<td style="width:255px;">Mighty ; India</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>(1-0) Local Procurement</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">MERSUTURES 4-0 Sterilised Surgical Needled Suture</td>
			<td style="width:255px;">Ethicon, Johnson &#38; Johnson, India</td>
			<td style="width:119px;">NW 5047</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">TRUGUT 76 cm 4-0 absorbable surgical suture</td>
			<td>Sutures India Pvt. Ltd; India</td>
			<td>SN 5048</td>
			<td>Sterilised Surgical Needled Suture Catgut Chromic</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:411px;">Cotton Buds</td>
			<td style="width:255px;">Pure Swabs Pvt Ltd ;&#160; India</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Local Procurement</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:411px;">Surgical Tape</td>
			<td style="width:255px;">3M India ; India</td>
			<td style="width:119px;">1530-1</td>
			<td>Micropore Surgical Tape</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:411px;">Microtome</td>
			<td style="width:255px;">Histo-Line Laboratories, Italy</td>
			<td style="width:119px;">MRS3500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Shandon Cryotome E Cryostat</td>
			<td style="width:255px;">Thermo Electron Corporation ; US</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:411px;">Confocal laser scanning microscope</td>
			<td style="width:255px;">Carl Zeiss ; Germany&#160;</td>
			<td style="width:119px;">LSM 510 META</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:411px;">Bright Field Microscope</td>
			<td style="width:255px;">Olympus, Japan</td>
			<td style="width:119px;">LX51</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:411px;">Automated analyser</td>
			<td>Tulip, Alto Santracruz, India</td>
			<td style="width:119px;">Screen Maaster 3000</td>
			<td>Biochemical analyser for liver functional test</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:411px;">Flow Cytometer</td>
			<td style="width:255px;">BD ; US&#160;</td>
			<td style="width:119px;">BD FACSverse</td>
			<td>Assesment of presence of cells post transplantation</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Veet hair removal cream&#160;</td>
			<td>Reckitt Benckiser , India</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">FORANE</td>
			<td style="width:255px;">Abbott ; US</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>isoflurane USP 99.9%&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Taxim</td>
			<td style="width:255px;">AlKem ; India</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>cefotaxime sodium injection</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Povidone-Iodine solution&#160;</td>
			<td style="width:255px;">Win-Medicare;&#160; India</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Betadine</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:411px;">Paraformaldehyde</td>
			<td style="width:255px;">Himedia; India</td>
			<td style="width:119px;">GRM 3660</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:411px;">Iscove&#39;s Modified Dulbecco&#39;s Medium (IMDM)</td>
			<td style="width:255px;">Life technologies, Thermo Fisher scientific ; US</td>
			<td style="width:119px;">12200-036</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:411px;">Sucrose</td>
			<td style="width:255px;">Sigma ; US</td>
			<td style="width:119px;">S0389</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:411px;">Tissue-Tek</td>
			<td style="width:255px;">Sakura; US</td>
			<td>25608-930</td>
			<td>O.C.T compound</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:411px;">DAPI</td>
			<td style="width:255px;">Himedia; India</td>
			<td style="width:119px;">MB 097</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:411px;">anti-Albumin goat Polyclonal</td>
			<td style="width:255px;">Thermo Scientific,Pierce, US</td>
			<td style="width:119px;">PA126081</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:411px;">anti-connexin 32/GJB1 Polyclonal</td>
			<td style="width:255px;">abcam, UK</td>
			<td style="width:119px;">ab64609-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:411px;">antiGFP rabbit polyclonal&#160;</td>
			<td style="width:255px;">Santa Cruz biotechnology; US</td>
			<td style="width:119px;">SC 8334</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:411px;">Alexa Fluor 594 donkey anti-goat</td>
			<td style="width:255px;">&#160;Molecular Probes , Thermo Fisher Scientific ;&#160; US</td>
			<td style="width:119px;">A11058</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:411px;">Alexa Fluor 488 donkey anti-sheep</td>
			<td style="width:255px;">&#160;Molecular Probes , Thermo Fisher Scientific ;&#160; US</td>
			<td style="width:119px;">A11015</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:411px;">Alexa Fluor 594 chicken anti rabbit</td>
			<td style="width:255px;">&#160;Molecular Probes , Thermo Fisher Scientific ;&#160; US</td>
			<td style="width:119px;">A21442</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:411px;">Goat anti rabbit IgG HRP</td>
			<td style="width:255px;">Invitrogen, Thermo Fisher Scientific; US&#160;</td>
			<td>65-6120</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:411px;">anti-Ki67 antibody</td>
			<td style="width:255px;">abcam, UK</td>
			<td style="width:119px;">ab15580</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:411px;">Antigen Unmasking Solution, Citric acid base</td>
			<td style="width:255px;">Vector laboratories, US</td>
			<td style="width:119px;">H-3300</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">ProLong Diamond antifade mountant</td>
			<td style="width:255px;">Life technologies, Thermo Fisher scientific ; US</td>
			<td style="width:119px;">P36966</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:411px;">SGOT (ASAT) KIT</td>
			<td style="width:255px;">Coral Clinical System, India</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:411px;">SGPT (ALAT) KIT</td>
			<td style="width:255px;">Coral Clinical System, India</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:411px;">Alkaline Phosphatase Kit (DEA)</td>
			<td style="width:255px;">Coral Clinical System, India</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:411px;">Hematoxylin Solution, Mayer&#39;s</td>
			<td style="width:255px;">Sigma ; US</td>
			<td style="width:119px;">MHS16</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:411px;">Eosin Y solution, alcoholic</td>
			<td style="width:255px;">Sigma ; US</td>
			<td style="width:119px;">HT110132</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:411px;">DPX Mountant&#160;</td>
			<td style="width:255px;">Sigma ; US</td>
			<td align="right" style="width:119px;">6522</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:411px;">Melonex (Pain Killer)</td>
			<td style="width:255px;">Intas Pharmaceuticals Ltd; India</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Meloxicam injection&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:411px;">DAB enhanced liquid substrate system tetrahydrochloride</td>
			<td style="width:255px;">Sigma ; US</td>
			<td style="width:119px;">D3939</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

intrasplenic transplantation of hepatocytes after partial hepatectomy in nod.scid mice

부분 hepatectomy 간 재생 및 다양 한 병 적인 조건에서 세포 기반 치료제의 효과 공부 하는 다양 하 고 재현할 수 방법입니다. 또한 부분 hepatectomy에 간 쪽으로 가속 neovascularization 및 셀에 의해 증가 engraftment와 이식된 세포의 증식 촉진 한다. 여기, 우리 immunodeficient 끄 덕을 결합 하 여 비만 아닌 당뇨병/심한의 비장에 30 %hepatectomy 이식 세포의 수행에 대 한 간단한 프로토콜을 설명 합니다. SCID (끄 덕 임. CB17-Prkdcscid/J) 마우스.
이 절차에서는 두 개의 작은 절 개 만들어집니다. 첫 번째 절 개 노출 하 고, 간 좌 엽을 resect 하는 것입니다 그리고 또 다른 작은 절 개 비장 세포의 intrasplenic 이식에 대 한 폭로 이루어집니다. 이 절차는 어떤 전문된 외과 기술이 필요 하지 않습니다 그리고 그것은 5-7 분 더 적은 스트레스와 고통, 빠른 복구, 및 더 나은 생존에에서 완료 될 수 있다. 우리 마우스 (유전자 변형 C57BL/6-Tg (UBC-GFP) 30Scha/J), 뿐만 아니라 부분적으로 hepatectomized 끄 덕에에서 인간의 기원 (NeoHep)의 세포 처럼 hepatocyte 표현 녹색 형광 단백질 (GFP)에서 절연 hepatocytes의 이식 설명 했다. SCID 쥐입니다.

30% 부분 hepatectomy 후 hepatocyte 확산: 간 30 %hepatectomy 후 남은 hepatocytes의 확산 immunohistochemical (IHC) 세포 확산 표식 기-67에 대 한 얼룩에 의해 시험 되었다. 하루 게시물 hepatectomy 쥐 했다 안락사, 나머지 간 엽 excised 했다, 및 파라핀 섹션 가져온. 섹션은 뒤에 양 고추냉이 과산화 효소 (HRP) 활용 된 이차 항 체와 라벨 기-67 항 체와 스테인드 했다. 디 아미노 Benzidine (한 덩어리)으로 사용 되었다 기판 HRP에 대 한 갈색 색상의 개발에 대 한 스테인드 셀을 식별 하기 위해. 핵 카운터 되며 물과 20 X 객관적인 현미경 아래에서 본 했다. 그림 1 간 섹션의 대표적인 IHC 이미지를 보여준다. 약 13% 셀 (13.66 ± 0.317, N = 3)의 기-67 했다 30 %hepatectomy 마우스 간에서 hepatocytes의 확산을 용이 하 게 확인 확실.
해부학 연구: 끄 덕 간의 대표 이미지. SCID 마우스, 10 일 게시물 hepatectomy 그림 2에 표시 됩니다. 이 이미지 확인 나머지 간 아무 표시 이상으로 건강 했다.
수술의 첫 번째 시간 동안 이식된 세포의 존재: 이식된 세포의 유도 이식 후 2 시간 GFP 긍정적인 hepatocytes의 존재를 검사 하 여 흐름 cytometric 분석으로 확인 됐다.
단일 셀 서 스 펜 션 삭제 조직의 효소 소화 게시 GFP hepatocytes 이식의 2 시간 후 비장 및 호스트 마우스의 간에서 얻은 했다. 이식된 GFP 긍정적인 세포의 백분율 교류 cytometer를 사용 하 여 추정 되었다. 분산형 게이트 파편과 더블 릿 셀을 제거 하려면 해당 FSC SSC 점 줄거리에서 선정 되었다. 작의의 사분면 게이트 비장 및 간 셀 이식 했다 컨트롤 마우스에서 얻은 세포 정지의 배경 형광 색소 강도 의해 만들어졌습니다. 약 1.7 %GFP 긍정적인 hepatocytes, 비장에 발견 했다 하 고 아무 GFP hepatocytes에서에서 찾아냈다 간 이식 후 2 시간. 대표적인 데이터는 그림 3에 나와 있습니다.
Immunohistochemistry: 수술 10 일 후, 오른쪽 측면 엽, 오른쪽 중간 엽 및 간 왼쪽된 중간 엽 excised 했다 그리고 5 µ m 섹션을 수행한 곳을 알아내는 단면 쥐 했다 안락사. 이 섹션 다음 추적 및 이식된 세포의 engraftment 위해 시험 되었다. 그림 4 는 표현 (패널 A, B및 C); 쥐 hepatocytes GFP를 식별 하기 위해 안티-GFP (빨간색)에 대 한 얼룩 immunohistochemical (IHC)의 대표 이미지 (빨간색), 안티-인간의 알 부 민으로 안티 인간 connexin 32 (녹색), hepatocyte 모양의 셀 (NeoHep) 인간의 원산지를 식별 하 고 ( D, E, F및 G패널). 핵과 4', 6-diamidino-2-phenylindole (DAPI, 블루)는 두 경우 모두 counterstained 했다. 이러한 이미지 패널에 몇 가지 engrafted GFP hepatocytes (패널 A, B및 C)와 NeoHep ( D, E, F및 G패널) 명확 하 게 볼 수 있습니다.
생화학 분석 간 효소를 분 비: 수술 후 간 기능을 확인 하기 위해 다른 간 분 비 효소의 생 화 확 적인 분석은 수행 되었다. 그림 5 에서 막대 그래프 aspartate aminotransferase (AST), 알라닌 aminotransferase (ALT)의 평균 값을 나타냅니다 그리고 건강 한 끄 덕의 혈 청에 있는 알칼리 성 인산 가수분해 효소 (해 봐-포스). SCID 마우스, 그리고 부분적으로 hepatectomized 쥐의 다른 그룹. 그 hepatectomy의 1 일 후 AST, ALT, 그리고 포스가 효소의 수준을 크게 증가, 건강 한 쥐와 비교 하는 그래프에서 분명 하다.
가 포스 수준 높은 게시 비 이식 생쥐에서 10 일 수술 하는 동안 ALT 및 AST 효소 수준 정상으로 복원 되었습니다. 그러나, 모든 3 효소의 수준을 10 일 후 이식된 생쥐에서 정상으로 떨어졌다.
간 조직학 연구: Hepatectomized 및 이식된 생쥐의 간 샘플 추가 수술 후 해부학 적 변화를 공부 하는 조직학 분석에 대 한 처리 되었습니다. 그림 6 스테인드, 수술 없이 건강 한 쥐의 간 섹션 1 일 hematoxylin과 오신 (H와 E)의 이미지 부분 hepatectomy 게시물과 10 일 게시 부분 hepatectomy 및 NeoHep 이식 대표적인 밝은 필드를 보여 줍니다. 이 이미지에서 가벼운 요정 담 즙 증 또는 결합 조직 확산으로 인 한 간 손상 부분 hepatectomy의 1 일 후 관찰 되었다 하 고 아무 이상 10 일 수술 후 관찰 했다.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56018/56018fig1.jpg"> 그림 1 : 기-67 끄 덕의 얼룩의 대표 이미지. SCID 간 섹션 1 일 후 30 %hepatectomy. 절 기-67 항 체와 스테인드 했다, 양 고추냉이 과산화 효소 (HRP) 활용 된 이차 항 체, 그리고 소량 (브라운) HRP 기판으로 사용 되었다 핵 되며 (청색)에 의해 counterstained 했다. 나타내는 화살촉은 기-67 긍정적인 (갈색) 세포의 일부 지적 한다. <a href="//cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56018/56018fig1large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56018/56018fig2.jpg"> 그림 2 : 끄 덕의 간 엽을 생성. 수술 10 일 후 SCID 마우스. A: 꼬리가 엽 (꼬리가 과정), b: 오른쪽 측면 엽, 중간 엽, d: 왼쪽 중간 엽, e: 심장, f: 남은 c: 오른쪽 hepatectomy, 후 왼쪽된 측면 엽과 g: 꼬리가 엽 (젖꼭지 과정)의. <a href="//cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56018/56018fig2large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56018/56018fig3.jpg"> 그림 3 : 비장에는 끄 덕의 간 GFP 긍정적인 마우스 heptatocytes의 비율. SCID 마우스. 상위 패널 셀 이식 했다 나이 일치 컨트롤 마우스의 셀 프로 파일을 보여줍니다. 낮은 패널 hepatectomized 마우스에 GFP hepatocyte 이식의 2 시간 후 셀 프로 파일을 보여줍니다. 음모의 y 축 로그 스케일에 임의의 단위로 측정 GFP (FITC 채널)의 형광 강도 나타냅니다 하 고 x 축 선형 눈금에 임의의 단위로 앞으로 분산형 (FSC)를 나타냅니다. <a href="//cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56018/56018fig3large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56018/56018fig4.jpg"> 그림 4 : 재생성 된 호스트 간에서 마우스 hepatocytes 및 NeoHep을 표현 하는 이식된 GFP의 귀환. 부분적으로 hepatectomized의 간 섹션의 대표 이미지를 끄 덕. SCID 마우스 GFP 긍정적인 마우스 hepatocytes (A-C)와 이식 세포 engraftment를 표시 하 고 귀환. 패널 a: 핵 (파란색: DAPI), 패널 b: 안티-GFP (레드: 알 렉 사 Fluor 594), 패널 c: 결합 된 이미지. 패널 (D-G) 부분적으로 hepatectomized 끄 덕의 간 섹션을 표시합니다. SCID 마우스는 NeoHep에서 이식 했다. 패널 d: 핵 (파란색: DAPI), 패널 e: 인간의 안티 Connexin 32 (녹색: 알 렉 사 Fluor 488), 패널 f: 인간의 안티 알 부 민 (레드: 알 렉 사 Fluor 594)와 패널 g: 결합 된 이미지. <a href="//cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56018/56018fig4large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56018/56018fig5.jpg"> 그림 5 : 다른 간의 생 화 확 적인 분석 쥐 혈 청에서 효소를 분 비. 열 바 다른 효소 (AST/SGOT, ALT/SGPT가 포스)의 평균 값을 나타냅니다. 수술 후 연구의 시간 포인트는 X 축에 표시 됩니다. 컨트롤 그룹에서 나이 일치 끄 덕 했다. SCID 마우스 및 수술 수행 되었다. 평균, N = 3의 표준 오차를 의미 하는 오차 막대와 * p를 나타냅니다 < 0.05, NS p에 비 중요성을 나타냅니다 > 0.05. <a href="//cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56018/56018fig5large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56018/56018fig6.jpg"> 그림 6 : 생쥐 간 조직 단면도의 histopathological 연구. 대표적인 밝은 분야 현미경 이미지 hematoxylin과 오신 (H와 E) 끄 덕의 간 조직 섹션 스테인드. 20 X 렌즈 아래 SCID 쥐입니다. 패널 A 건강 한 끄 덕 임에서 간 섹션을 보여 줍니다. 어떤 수술 없이 같은 나이의 SCID 마우스. 패널 B 간 섹션 1 일 게시물 부분 hepatectomy를 보여줍니다. 이 이미지에서 화살표 머리 온화한 peri billiary 섬유 증 또는 결합 조직 확산 영역을 나타냅니다. 패널 C는 간 섹션 10 일 게시물 부분 hepatectomy와 세포 이식을 보여줍니다. <a href="//cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56018/56018fig6large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>

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Intrasplenic Transplantation of Hepatocytes After Partial Hepatectomy in NOD.SCID Mice

우리는 끄 덕의 부분 hepatectomy (PHx) 및 비장을 통해 세포 이식 수행을 위한 프로토콜을 설명 했습니다. SCID (끄 덕 임. CB17-Prkdcscid/J) 쥐. 이 프로토콜에서 절 개 노출 하 고 셀의 intrasplenic 이식에 대 한 또 다른 절 개에 의해 따라 간 좌 엽 resect 이루어집니다.

끄 덕 임에서 부분 Hepatectomy 후 Hepatocytes의 intrasplenic 이식 SCID 마우스

Partial hepatectomy is a versatile and reproducible method to study liver regeneration and the effect of cell based therapeutics in various pathological ...

intrasplenic-transplantation-hepatocytes-after-partial-hepatectomy

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Medicine

13.9K 조회수.  National Institute of Immunology. 우리는 끄 덕의 부분 hepatectomy (PHx) 및 비장을 통해 세포 이식 수행을 위한 프로토콜을 설명 했습니다. SCID (끄 덕 임. CB17-Prkdcscid/J) 쥐. 이 프로토콜에서 절 개 노출 하 고 셀의 intrasplenic 이식에 대 한 또 다른 절 개에 의해 따라 간 좌 엽 resect 이루어집니다.

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Mammary Transplantation of Stromal Cells and Carcinoma Cells in C57BL/6J Mice

The influence of stromal cells, including fibroblasts on mammary tumor progression has been well documented through the use of mouse models, in particular through transplantation of stromal cells and epithelial cells in the mammary gland of mice. Current transplantation models often involve the use of immunocompromised mice due to the different genetic backgrounds of stromal cells and epithelial cells. Extracellular matrices are often used to embed the two different cell types for consistent cell-cell interactions, but involve the use of Matrigel or rat tail collagen, which are immunogenic substrates. The lack of functional T cells from immunocompromised mice prevents accurate assessment of stromal cells on mammary tumor progression in vivo, with important implications on drug development and efficacy. Moreover, immunocompromised mice are costly, hard to breed and require special care conditions. To overcome these obstacles, we have developed an approach to orthotopically transplant stromal cell and epithelial cells into mice from the same genetic background to induce consistent tumor formation. This system involves harvesting normal, carcinoma associated fibroblasts, PyVmT mammary carcinoma cells and collagen from donor C57BL/6J mice. The cells are then embedded in collagen and transplanted in the inguinal mammary glands of female C57BL/6J mice. Transplantation of PyVmT cells alone form palpable tumors 30-40 days post transplantation. Endpoint analysis at 60 days indicates that co-transplantation with fibroblasts enhances mammary tumor growth compared to PyVmT cells transplanted alone. While cells and matrix from C57BL/6J mice were used in these studies, the isolation of cells and matrix and transplantation approach may be applied towards mice from different genetic backgrounds demonstrating versatility. In summary, this system may be used to investigate molecular interactions between stromal cells and epithelial cells, and overcomes critical limitations in immunocompromised mouse models.

In this report, we demonstrate a system to isolate and culture donor cells from the mouse mammary gland, and orthotopically transplant these cells in recipient mice to analyze stromal: epithelial interactions during mammary tumor development.

C57BL/6J 마우스의 Stromal 셀 및 암종 세포 이식 내유

The influence of stromal cells, including fibroblasts on mammary tumor progression has been well documented through the use of mouse models, in particular ...

연구

의학

Orthotopic Aortic Transplantation in Mice for the Study of Vascular Disease

Vascular procedures involving anastomoses in the mouse are generally thought to be difficult and highly dependent on the skill of the individual surgeon. This is largely true, but there are a number of important principles that can reduce the difficulty of these procedures and enhance reproducibility. Orthotopic aortic transplantation is an excellent procedure in which to learn these principles because it involves only two end-to-end anastomoses, but requires good suturing technique and handling of the vessels for consistent success. This procedure begins with the procurement of a length of abdominal aorta from a donor animal, followed by division of the native aorta in the recipient. The procured aorta is then placed between the divided ends of the recipient aorta and sutured into place using end-to-end anastomoses. To accomplish this objective successfully requires a high degree of concentration, good tools, a steady hand, and an appreciation of how easily the vasculature of a mouse can be damaged, resulting in thrombosis. Learning these important principles is what occupies most of the beginner's time when learning microsurgery in small rodents. Throughout this protocol, we refer to these important points. This model can be used to study vascular disease in a variety of different experimental systems1-8. In the context shown here, it is most often used for the study of post-transplant vascular disease, a common long-term complication of solid organ transplantation in which intimal hyperplasia occurs within the allograft. The primary advantage of the model is that it facilitates quantitative morphometric analyses and the transplanted vessel lies contiguous to the endogenous vessel, which can serve as an additional control9. The technique shown here is most often used for mice weighing 18-25 grams. We have accumulated most of our experience using the C57BL/6J, BALB/cJ, and C3H/HeJ strains.

We describe a technique in which a section of the abdominal aorta from a mouse is transplanted orthotopically to just below the renal arteries in an allogeneic or syngeneic recipient. This technique can be useful in studies in which transplantation of large arteries of uniform size is deemed advantageous.

혈관 질병의 연구에 대한 마우스의 Orthotopic 대동맥 이식

Vascular procedures involving anastomoses in the mouse are generally thought to be difficult and highly dependent on the skill of the individual surgeon. ...

Surgical Procedures for a Rat Model of Partial Orthotopic Liver Transplantation with Hepatic Arterial Reconstruction

Orthotopic liver transplantation (OLT) in rats using a whole or partial graft is an indispensable experimental model for transplantation research, such as studies on graft preservation and ischemia-reperfusion injury 1,2, immunological responses 3,4, hemodynamics 5,6, and small-for-size syndrome 7. The rat OLT is among the most difficult animal models in experimental surgery and demands advanced microsurgical skills that take a long time to learn. Consequently, the use of this model has been limited. Since the reliability and reproducibility of results are key components of the experiments in which such complex animal models are used, it is essential for surgeons who are involved in rat OLT to be trained in well-standardized and sophisticated procedures for this model.
While various techniques and modifications of OLT in rats have been reported 8 since the first model was described by Lee et al. 9 in 1973, the elimination of the hepatic arterial reconstruction 10 and the introduction of the cuff anastomosis technique by Kamada et al. 11 were a major advancement in this model, because they simplified the reconstruction procedures to a great degree. In the model by Kamada et al., the hepatic rearterialization was also eliminated. Since rats could survive without hepatic arterial flow after liver transplantation, there was considerable controversy over the value of hepatic arterialization. However, the physiological superiority of the arterialized model has been increasingly acknowledged, especially in terms of preserving the bile duct system 8,12 and the liver integrity 8,13,14.
In this article, we present detailed surgical procedures for a rat model of OLT with hepatic arterial reconstruction using a 50% partial graft after ex vivo liver resection. The reconstruction procedures for each vessel and the bile duct are performed by the following methods: a 7-0 polypropylene continuous suture for the supra- and infrahepatic vena cava; a cuff technique for the portal vein; and a stent technique for the hepatic artery and the bile duct.

Orthotopic liver transplantation in rats is an indispensable experimental model for biomedical research. Here we present our surgical procedures for orthotopic rat liver transplantation with hepatic arterial reconstruction using a 50% partial graft.

간 간선 재건과 부분 Orthotopic 간 이식의 쥐 모델에 대한 외과 절차

Orthotopic liver transplantation (OLT) in rats using a whole or partial graft is an indispensable experimental model for transplantation research, such as ...

Heterotopic Cervical Heart Transplantation in Mice

The heterotopic cervical heart transplantation in mice is a valuable tool in transplant and cardiovascular research. The cuff technique greatly simplifies this model by avoiding challenging suture anastomoses of small vessels thereby reducing warm ischemia time. In comparison to abdominal graft implantation the cervical model is less invasive and the implanted graft is easily accessible for further follow-up examinations. Anastomoses are performed by pulling the ascending aorta of the graft over the cuff with the recipient&#8217;s common carotid artery and by pulling the main pulmonary artery over the cuff with the external jugular vein. Selection of appropriate cuff size and complete mobilization of the vessels are important for successful revascularization. Ischemia-reperfusion (I/R) injury can be minimized by perfusing the graft with a cardioplegic solution and by hypothermia. In this article, we provide technical details for a simplified and improved cuff technique, which should allow surgeons with basic microsurgical skills to perform the procedure with a high success rate.

The cuff technique shortens and facilitates the model of heterotopic cervical heart transplantation in mice by avoiding technically challenging suture anastomoses of small vessels. The technical details shown in this video paper should allow researches to establish this model in their laboratories.

마우스의 이소성 자궁 심장 이식

The heterotopic cervical heart transplantation in mice is a valuable tool in transplant and cardiovascular research. The cuff technique greatly simplifies ...

Visualization of Vascular and Parenchymal Regeneration after 70% Partial Hepatectomy in Normal Mice

A modified silicone injection procedure was used for visualization of the hepatic vascular tree. This procedure consisted of in-vivo injection of the silicone compound, via a 26 G catheter, into the portal or hepatic vein. After silicone injection, organs were explanted and prepared for ex-vivo micro-CT (&#181;CT) scanning. The silicone injection procedure is technically challenging. Achieving a successful outcome requires extensive microsurgical experience from the surgeon. One of the challenges of this procedure involves determining the adequate perfusion rate for the silicone compound. The perfusion rate for the silicone compound needs to be defined based on the hemodynamic of the vascular system of interest. Inappropriate perfusion rate can lead to an incomplete perfusion, artificial dilation and rupturing of vascular trees.
The 3D reconstruction of the vascular system was based on CT scans and was achieved using preclinical software such as HepaVision. The quality of the reconstructed vascular tree was directly related to the quality of silicone perfusion. Subsequently computed vascular parameters indicative of vascular growth, such as total vascular volume, were calculated based on the vascular reconstructions. Contrasting the vascular tree with silicone allowed for subsequent histological work-up of the specimen after &#181;CT scanning. The specimen can be subjected to serial sectioning, histological analysis and whole slide scanning, and thereafter to 3D reconstruction of the vascular trees based on histological images. This is the prerequisite for the detection of molecular events and their distribution with respect to the vascular tree. This modified silicone injection procedure can also be used to visualize and reconstruct the vascular systems of other organs. This technique has the potential to be extensively applied to studies concerning vascular anatomy and growth in various animal and disease models.

Tools used for visualizing vascular regeneration require methods for contrasting the vascular trees. This film demonstrated a delicate injection technique used to achieve optimal contrasting of the vascular trees and illustrate the potential benefits resulting from a detailed analysis of the resulting specimen using &#181;CT and histological serial sections.

일반 마우스의 70 % 부분 간 절제술 후 혈관 및 실질 재생의 시각화

A modified silicone injection procedure was used for visualization of the hepatic vascular tree. This procedure consisted of in-vivo injection of the ...

Re-Arterialized Rat Partial Liver Transplantation with an in vivo Vessel-Oriented 70% Hepatectomy

Split liver transplantation and living liver donor liver transplantation were developed in the clinic to utilize liver organs in a more efficient manner. To better understand the mechanism behind these surgical procedures, a rat partial liver transplantation (PLTx) model was established for relevant surgical studies. Because of the complexity of the rat PLTx model, a protocol with detailed descriptions is required. An article published previously reported a protocol in which ex vivo hepatectomy was used to achieve 50% rat PLTx. In contrast to this protocol, we introduced a re-arterialized PLTx with an in vivo 70% hepatectomy. An updated vessel-oriented hepatectomy was incorporated into the rat PLTx to refine the microsurgical procedure. The portal veins and hepatic arteries of the left lateral lobe and the median lobe were individually dissected and ligated before removal of the liver parenchyma, thereby decreasing the probability of bleeding in the remnant liver stump. Furthermore, an end-to-side vessel anastomosis between the common hepatic artery and the enlarged proper hepatic artery was introduced to re-arterialize the hepatic artery. By using this end-to-side vessel anastomosis technique, the diameter of the anastomosis was enlarged, thereby decreasing the difficulty of hand suture and maintaining a high rate of anastomotic patency. Moreover, the cuff anastomosis of the infrahepatic vena cava was slightly modified. A section of circumferential liver parenchyma around the vena cava of a recipient was preserved during cuff anastomosis to maintain the three-dimensional shape of the vascular lumen. This section of liver parenchyma was removed after completing the anastomosis. With this modification, the step involving placement of stay sutures was omitted, thereby further shortening the cuff anastomosis time. By using this protocol of rat PLTx, a low liver enzyme level, an intact liver lobular architecture and a high survival rate were achieved after microsurgery.

Re-Arterialized Rat Partial Liver Transplantation with an in vivo Vessel-Oriented 70% Hepatectomy

Here, a protocol involving re-arterialized rat partial liver transplantation is presented. Specifically, 70% liver was resected in vivo by using an updated technique of vessel-oriented hepatectomy. The hepatic artery was reconstructed in an end-to-side manner. The cuff technique was modified to shorten the anastomosis time of the infrahepatic vena cava.

다시는 vivo에서 선박 지향 70% 쥐 부분 간 이식 Arterialized Hepatectomy

Split liver transplantation and living liver donor liver transplantation were developed in the clinic to utilize liver organs in a more efficient manner. ...

Transplantation of Adipose Tissue-Derived Stem Cell Sheet to Reduce Leakage After Partial Colectomy in A Rat Model

Anastomotic leakage is a disastrous complication after colorectal surgery. Although current methods for leakage prevention have different levels of clinical efficacy, they are until now imperfect solutions. Stem cell therapy using ASC sheets could provide a solution to this problem. ASCs are considered as promising candidates for promoting tissue healing because of their trophic and immunomodulatory properties. Here, we provide methods to produce high-density ASC sheets, that are transplanted onto a colorectal anastomosis in a rat model to reduce the leakage. ASCs formed cell sheets in thermo-responsive culture dishes that could be easily detached. On the day of the transplantation, a partial colectomy with a 5-suture colorectal anastomosis was performed. Animals were immediately transplanted with 1 ASC sheet per rat. ASC sheets adhered spontaneously to the anastomosis without any glue, suture, or any biomaterial. Animal groups were sacrificed 3 and 7 days postoperatively. Compared to transplanted animals, the incidence of anastomotic abscesses and leakage was higher in control animals. In our model, the transplantation of ASC sheets after colorectal anastomosis was successful and associated with a lower leakage rate.

The preparation and transplantation of adipose tissue derived stem cell (ASC) sheets onto insufficiently sutured colorectal anastomoses in a rat model is presented. This novel application shows that ASC sheets can reduce colorectal anastomosis leakage.

쥐 모델에 부분 Colectomy 후 누설을 줄이기 위해 지방 조직 유래 줄기 세포의 이식

Anastomotic leakage is a disastrous complication after colorectal surgery. Although current methods for leakage prevention have different levels of ...

Lentiviral Vector-mediated Gene Therapy of Hepatocytes Ex Vivo for Autologous Transplantation in Swine

Gene therapy is an ideal choice to cure many inborn errors of metabolism of the liver. Ex-vivo, lentiviral vectors have been used successfully in the treatment of many hematopoietic diseases in humans, as their use offers stable transgene expression due to the vector&#39;s ability to integrate into the host genome. This method demonstrates the application of ex vivo gene therapy of hepatocytes to a large animal model of hereditary tyrosinemia type I. This process consists of 1) isolation of primary hepatocytes from the autologous donor/recipient animal, 2) ex vivo gene delivery via hepatocyte transduction with a lentiviral vector, and 3) autologous transplant of corrected hepatocytes via portal vein injection. Success of the method generally relies upon efficient and sterile removal of the liver resection, careful handling of the excised specimen for isolation of viable hepatocytes sufficient for re-engrafting, high-percentage transduction of the isolated cells, and aseptic surgical procedures throughout to prevent infection. Technical failure at any of these steps will result in low yield of viable transduced hepatocytes for autologous transplant or infection of the donor/recipient animal. The pig model of human type 1 hereditary tyrosinemia (HT-1) chosen for this approach is uniquely amenable to such a method, as even a small percentage of engraftment of corrected cells will lead to repopulation of the liver with healthy cells based on a powerful selective advantage over native-diseased hepatocytes. Although this growth selection will not be true for all indications, this approach is a foundation for expansion into other indications and allows for manipulation of this environment to address additional diseases, both within the liver and beyond, while controlling for exposure to viral vector and opportunity for off-target toxicity and tumorigenicity.

Lentiviral Vector-mediated Gene Therapy of Hepatocytes Ex Vivo for Autologous Transplantation in Swine

This protocol is intended to describe porcine hepatocyte isolation and ex vivo gene delivery to cure models of metabolic diseases via autologous cell transplantation. Although this particular model enjoys unique advantages that favor successful therapy, the application is a relevant foundation to address additional diseases and indications.

돼지에서 자가 이식 Hepatocytes 전 비보 의 lentiviral 벡터 중재 된 유전자 치료

Gene therapy is an ideal choice to cure many inborn errors of metabolism of the liver. Ex-vivo, lentiviral vectors have been used successfully in the ...

Generation of a Rat Model of Acute Liver Failure by Combining 70% Partial Hepatectomy and Acetaminophen

Acute liver failure (ALF) is a clinical condition caused by various etiologies resulting in the loss of metabolic, biochemical, synthesizing, and detoxifying functions of the liver. In most irreversible liver damage cases, orthotropic liver transplant (OLT) remains the only available treatment. To study the therapeutic potential of a treatment for ALF, its prior testing in an animal model of ALF is essential. In the current study, an ALF model in rats was developed by combining 70% partial hepatectomy (PHx) and injections of acetaminophen (APAP) that provides a therapeutic window of 48 h. The median and left lateral lobes of the liver were removed to excise 70% of the liver mass and APAP was given 24 h postsurgically for 2 days. Survival in ALF-induced animals was found to be severely decreased. The development of ALF was confirmed by altered serum levels of the enzymes alanine amino transferase (ALT), aspartate amino transferase (AST), alkaline phosphatase (ALP); changes in prothrombin time (PT); and assessment of the international normalized ratio (INR). Study of the gene expression profile by qPCR revealed an increase in expression levels of genes involved in apoptosis, inflammation, and in the progression of liver injury. Diffused degeneration of hepatocytes and infiltration of immune cells was observed by histological evaluation. The reversibility of ALF was confirmed by the restoration of survival and serum levels of ALT, AST, and ALP after intrasplenic transplantation of syngeneic healthy rat hepatocytes. This model presents a reliable alternative to the available ALF animal models to study the pathophysiology of ALF as well as to evaluate the potential of a novel therapy for ALF. The use of two different approaches also makes it possible to study the combined effect of physical and drug-induced liver injury. The reproducibility and feasibility of current procedure is an added benefit of the model.

The acute liver failure animal model developed in the current study presents a feasible alternative for the study of potential therapies. The current model employs the combined effect of physical and drug-induced hepatic injury and provides a suitable time window to study the potential of novel therapies.

70% 부분 간 절제술과 아세트아미노펜을 결합하여 급성 간 기능 부전의 쥐 모델 생성

Acute liver failure (ALF) is a clinical condition caused by various etiologies resulting in the loss of metabolic, biochemical, synthesizing, and ...

Reduced Complications after Arterial Reconnection in a Rat Model of Orthotopic Liver Transplantation

The rat orthotopic liver transplantation (OLT) model is a powerful tool to study acute and chronic rejection. However, it is not a complete representation of human liver transplantation due to the absence of arterial reconnection. Described here is a modified transplantation procedure that includes the incorporation of hepatic artery (HA) reconnection, leading to a marked improvement in transplant outcomes. With a mean anhepatic time of 12 min and 14 s, HA reconnection results in improved perfusion of the transplanted liver and an increase in long-term recipient survival from 37.5% to 88.2%. This protocol includes the use of 3D-printed cuffs and holders to connect the portal vein and infrahepatic inferior vena cava. It can be implemented for studying multiple aspects of liver transplantation, from immune response and infection to technical aspects of the procedure. By incorporating a simple and practical method for arterial reconnection using a microvascular technique, this modified rat OLT protocol closely mimics aspects of human liver transplantation and will serve as a valuable and clinically relevant research model.

The goal of this study is to modify the rat orthotopic liver transplant model to better represent human liver transplantation and improve recipient survival. The presented method reestablishes hepatic arterial inflow by connecting the donor liver&#39;s common hepatic artery to the recipient liver&#39;s proper hepatic artery.

직교 간 이식의 쥐 모형에 있는 동맥 재연결 후에 감소된 합병증

The rat orthotopic liver transplantation (OLT) model is a powerful tool to study acute and chronic rejection. However, it is not a complete representation ...