The authors would like to convey their gratitude for the technical support provided by National Synchrotron Radiation Research Center (NSRRC) (Taiwan). The authors are grateful for the financial support provided by the Ministry of Science and Technology of the Republic of China (Taiwan) and the Industrial Technology Research Institute (Taiwan).

주의! 여러 화학 물질 (예, 아크릴 아미드, 1,1- 디클로로 에탄)는 이러한 절차에서 사용은 급성 독성 및 발암 성이다. 사용하기 전에 모든 관련 물질 안전 보건 자료 (MSDS)를 참조하십시오. 실험을 수행 할 때 적절한 안전 관행을 따르십시오. 주 : 달리 언급되지 않는 한, 클래스 100 층류 후드에서 주위 온도에서 모든 절차를 수행한다. 쌍극자를 이용한 SPE의 마이크로 칩 1. 제작 <ol><li> PMMA 마이크로 칩의 제조 주 : 칩의 제조 프로토콜은 다른 곳에 기술 된 것과 유사 하였다 (8). <ol><li> 칩의 네트워크 패턴을 그린다 (도 1 (a)) 제조자의 프로토콜에 따라 컴퓨터 지원 설계 (CAD) 소프트웨어를 사용. </li><li> 메틸 메타 크릴 레이트 (PMMA) 시트를 장착의 작업 테이블 (350mm (L)는 20mm를 (W) × 2mm (H) ×)다음, 레이저 미세 가공 시스템은 PMMA 시트 표면에 레이저 광원을 집중한다. </li><li> 마이크로 머신 시스템의 제어 패널을 통해 CAD 소프트웨어에서 인쇄를 선택하고 45 % (4.5 W), 13 % (99.06 mm 초 -1)로 전원, 속도 및 펜 모드를 설정하고 VECT. 참고 : 채널 기능에 영향을 미치는 등 전력, 속도와 펜 모드 등의 매개 변수는 사전에 조사 하였다. 평가 방법은 복잡 학술 목적없이 도관 시스템에 적응하는 해당 채널을 사용 하였다 위안 다사. 17 대상으로 선택된 파라미터에 의해 제안 된 것과 유사 하였다. 사람들은 자신의 필요에 따라 레이저 가공을위한 또 다른 조건을 선택할 수 있습니다. </li><li> . 제조자의 프로토콜에 따라 레이저 미세 가공 시스템에 의해 그려진 패턴 후 기계 PMMA 시트 인쇄도 1 (b) </강한&gt; 1 (c)에도. 제작 된 마이크로 칩의 레이아웃을 표시 가공 판의 단면의 사진을 표시한다. 레이저 방사선에 노출로 인한 심각한 시력 손상을 피하기 위해 레이저 시스템을 사용하는 경우주의! 안경을 착용한다. 적절한 배기 시스템 때문에 레이저 가공시 가스 / 연기의 생산의 권장합니다. </li><li> 커버 플레이트도 1에 합류 출구위한 시료 투입구, 버퍼 입구 및 하단 플레이트 용출액 입구 및 하나 드릴 세 16분의 1 인치 직경의 액세스 홀 (b). !주의 부상을 방지하기 위해 가공 과정 동안 드릴 비트와 신체 접촉을 피하십시오. 드릴 때 장갑을 착용하는 것은 금지되어 있습니다. </li><li> 10 분 동안 초음파 발진기로 0.1 %를 교반하면서 1-L 비커 (w / v)의 소듐 도데 실 설페이트 (SDS) 용액을 1 L로 가공 된 플레이트를 담근다. </li><li> 승 SDS 솔루션을 교체i 번째의 탈 이온수를 10 분간 초음파 발진기로 교​​반한다. </li><li> 신선한 하나의 잔류 DI H 2 O를 교체 한 후 10 분 동안 초음파 발진기를 통해 교반 DI H 2 O 1 L에 가공 판을 담그지. 그 후, 2 분 동안 질소의 부드러운 흐름과 함께 각 청소 판을 건조. </li><li> 육안으로 두 개의 가공 플레이트를 정렬 한 다음 바인더 클립을 사용하여 두 개의 유리 기판 사이의 두 판을 샌드위치. </li><li> 30 분 동안 105 ° C에서 압축하에 개의 플레이트를 접합. </li><li> 주위 온도에 샌드위치 쿨하고 바인더 클립 및 유리 보드를 제거합니다. </li><li> 접근 구멍 16분의 1 인치 외경 폴리 (에테르 에테르 케톤) (PEEK) 튜브를 삽입하고 두 액성 에폭시 계 접착제로 고정 도관. </li><li> 12 시간 동안 상온에서 접착제를 건조. </li></ol></li><li> PMMA 마이크로 칩의 채널 내부의 수정 <br/&gt; 참고 :. 다음 부분적으로 약간의 수정을 게시 절차를 의미한다 8,18,19 <ol><li> 12 시간 (72 ml의 총 부피 전송) 용 마이크로 칩에 연동 펌프를 통해 1-100 μL 분의 유속을 포화 수산화 나트륨 (NaOH로) 솔루션을 제공한다. </li><li> 잔류 용액을 제거하고 100 ㎕의 분의 유속 DI H 2 O로 채널 내부 린스 - 30 분 (3 ㎖ 총 부피 전달)하는 연동 펌프를 통해 하나. </li><li> H 2 O 잔류 DI를 제거하고 100 ㎕의 분의 유량으로 마이크로 칩으로 0.5 % (v / v)의 질산 (HNO 3) 솔루션을 제공 - 30 분 (3 ㎖ 총 전송 볼륨 연동 펌프를 통해 한 ). </li><li> 잔류 용액을 제거하고 100 ㎕의 분의 유속에서 어두운 마이크로 칩에 아크릴 아미드 용액 (/ V w)의 50 %를 제공 - 1 V8 시간 (48 ml의 총 전송 용량)에 대한 아이오와 연동 펌프. </li><li> 잔류 용액을 제거하고 100 ㎕의 분의 유속 DI H 2 O로 채널 내부 린스 - 30 분 (3 ㎖ 총 부피 전달)하는 연동 펌프를 통해 하나. </li><li> 연동 펌프 잔류 DI의 H 2 O를 제거하는 공기 펌프 및 후 노광되는 추출 채널의 원하는 영역을 허용하는 자체 내장 포토 마스크 마이크로 칩을 커버. 참고 : 자체 내장 된 포토 마스크는 검은 종이로 만들었다 열려있는 창 (94mm (L) 2mm (W) ×)를 포함 원하는 영역을 허용 (114mm (L)는 22mm (W)를 X) 추출 채널의 광에 노출된다. </li><li> Cl 획득 함유 SPE 형성 용액의 조제 <ol><li> 에탄올은 적어도 세 개의 카트리지 볼륨을 한도로 억제 제거 SPE 카트리지 플러시. </li><li> 1,1&#39;- 디클로로 에탄과 카트리지를 세척사용하기 전에 적어도 세 개의 카트리지 볼륨에 이른다. </li><li> 처리 된 카트리지를 통해 1,1&#39;- 디클로로 에탄 1 ㎖에 합격 한 후 알루미늄 호일에 싸서 샘플 유리 병의 일부 (20 ㎖)를 수집합니다. </li><li> 491 ㎕의 1,1&#39;- 디클로로에 12 mg의 2,2&#39;- 아조 비스 이소 부티로 니트릴 (AIBN) 3.18 ㎖의 에탄올을 함유하는 용액에, 100 ml의 유리 병에 1.65 mL의 헥산을 추가한다. </li></ol></li><li> 10 분 (광 강도 ~ 2.65 Mw가 cm 365 nm의 최대 발광 파장을 조사 (UV 365)을 주사기를 주입하여 CL 함유 SPE 형성 용액 (약 200 μL)과 함께 상기 칩 채널을 작성하고, 자외선에 마이크로 칩을 노출 -2). 주의! 적절한 배기 시스템 때문에 UV 조사 동안 오존의 생산의 좋습니다. </li><li> 주사기 인제로 신선한 CL 함유 SPE 형성 용액 (약 200 μL)에 잔류 솔루션을 교체ction는 다시 10 분 동안 365 조사 UV (빛의 세기 ~ 2.65 mW의 형상 관리 -2)에 마이크로 칩을 노출. </li><li> 단계를 반복 1.2.9 18 배. </li><li> 30 분 (3 ㎖ 총 전달 볼륨)에 대한 연동 펌프를 통해 1-100 μL 분의 유속으로 에탄올로 채널 내부를 씻어. 연동 펌프에 잔류 용액을 제거한 후, 이후의 사용을 위해 지퍼가 달린 가방에 제작 된 마이크로 칩을 저장합니다. </li></ol></li></ol> PMMA의 수정 2. 표면 확인 <ol><li> 접촉각 분석 <ol><li> 메틸 메타 크릴 레이트 (PMMA) 시트를 잘라 레이저 미세 가공 시스템 (50mm (L)는 20mm를 X (W) × 2mm (H)) PMMA 기판에 (350mm (L)는 20mm (W) × 2mm (H)를 X) . </li><li> 50ml의 원뿔형 튜브에 NaOH 용액 40ml의 포화의 PMMA 기판을 담그고하고 12 시간 동안 흔들 쉐이커로 얻어진 혼합물을 교반한다. </li><li> 는 P 린스 한 후 잔여 액을 제거하고40 mL의 탈 H 2 O로 MMA 기판 </li><li> 40 ml의 탈 H 2 O의 PMMA 기판을 담그고 후 30 분 동안 흔들 통을 통해 생성 된 혼합물을 교반. </li><li> 잔류 DI H 2 O를 제거 0.5 % (v / v)의 HNO 3 용액 40 ㎖의에서 PMMA 기판을 담그고 후 30 분 동안 흔들 통을 통해 생성 된 혼합물을 교반. </li><li> 잔류 용액을 제거합니다. 50 % (w / v)의 아크릴 아미드 수용액 40 mL를 상기 PMMA 기판을 담그고 후 8 시간 동안 어둠 속에서 요동 진탕 통해 얻어진 혼합물을 교반한다. </li><li> 잔류 용액을 제거하고 40 ml의 탈 H 2 O와 PMMA 기판을 씻어 </li><li> DI H 2 O 40 mL를 상기 PMMA 기판을 담그고 후 30 분 동안 흔들 쉐이커로 얻어진 혼합물을 교반한다. </li><li> 잔류 DI H 2 O를 분리 한 다음 2 분 동안 질소의 부드러운 흐름과 함께 각 PMMA 기판을 건조. </li><li> 의 준비SPE 형성 솔루션 (CL)이 함유 <ol><li> 에탄올은 적어도 세 개의 카트리지 볼륨을 한도로 억제 제거 SPE 카트리지 플러시. </li><li> 1,1&#39;- 디클로로에 사용하기 전에 적어도 세 개의 카트리지 볼륨 한도로 카트리지를 세척. </li><li> 처리 된 카트리지를 통해 1,1&#39;- 디클로로 에탄의 6 ml의를 통과 한 후 알루미늄 호일에 싸서 샘플 유리 병의 일부 (20 ㎖)를 수집합니다. </li><li> 120 mg의 AIBN, 31.8 ml의 에탄올 및 100 ㎖의 유리 병에서 16.5 ML의 헥산을 포함하는 용액에 4.91 ml의 1,1&#39;- 디클로로 에탄을 추가합니다. </li></ol></li><li> 10 분 (빛의 세기 ~ 2.65 mW의 형상 관리 -2) 365 조사 UV하기 위해 기판을 노출 한 후 PMMA 기판의 표면 상 CL 함유 SPE 형성 용액 2 ㎖를 적용합니다. 주의! 적절한 배기 시스템 때문에 UV 조사 동안 오존의 생산의 좋습니다. </li><li> 잔류 SOLU 교체다음이 신선한 CL 함유 SPE 형성 용액 ㎖의와 기 다시 10 분 동안 365 조사 UV (빛의 세기 ~ 2.65 mW의 형상 관리 -2)에 기판을 노출. </li><li> 단계를 반복 2.1.12 18 배. </li><li> 잔류 용액을 제거한 후 50ml의 원뿔형 튜브에 40 ㎖의 에탄올로 PMMA 기판을 헹군다. </li><li> 잔류 용액을 제거하고 40 ml의 탈 H 2 O와 PMMA 기판을 씻어 </li><li> 잔류 DI H 2 O를 분리 한 다음 2 분 동안 질소의 부드러운 흐름과 함께 각 PMMA 기판을 건조. </li><li> PMMA를 기판 상에 5 μL DI H 2 O를 삭제하고 제조자의 프로토콜에 따라 접촉각 측정기로 접촉각을 결정한다. 주 : 각 경우에보고 접촉각을 결정하는 세 반복 측정의 평균을 사용한다. </li></ol></li><li> -Inductively 플라즈마 질량 분석법 (ICP-MS) 분석 &lt;결합 레이저 어블 레이션 (LA)&gt; / 강해 <ol><li> 박격포와 유봉을 통해 PMMA 분말로 PMMA 비드 8g을 갈기. </li><li> 50ml의 원뿔형 튜브에 NaOH 용액 40ml의 포화에서 PMMA 분말 담가하고 12 시간 동안 흔들 쉐이커로 얻어진 혼합물을 교반한다. </li><li> 5 ml의 팁 디지털 피펫에 의해 잔류 용액을 제거하고 40 ml의 탈 H 2 O와 PMMA 분말을 씻어 </li><li> 40 ml의 탈 H 2 O의 PMMA 분말을 담그고 후 30 분 동안 흔들 통을 통해 생성 된 혼합물을 교반. </li><li> 잔류 DI H 2 O를 제거 0.5 % (v / v)의 HNO 3 용액 40 ㎖의에서 PMMA 분말을 담그고 후 30 분 동안 흔들 통을 통해 생성 된 혼합물을 교반. </li><li> 잔류 용액을 제거합니다. 50 % (w / v)의 아크릴 아미드 수용액 40 mL를 상기 PMMA 분말 담가 후 8 시간 동안 어둠 속에서 요동 진탕 통해 얻어진 혼합물을 교반한다. </li><li> 잔류 용액을 제거하고 PMMA 분말 위트를 씻어DI H 2 O의 H 40ml의 </li><li> DI H 2 O 40 mL를 상기 PMMA 분말 담가하고 30 분 동안 진탕 요동 통해 얻어진 혼합물을 교반한다. </li><li> 잔류 DI H 2 O를 제거한 다음 8 시간 동안 60 ° C에서 PMMA 분말을 굽는다. </li><li> Cl 획득 함유 SPE 형성 용액의 조제 <ol><li> 에탄올은 적어도 세 개의 카트리지 볼륨을 한도로 억제 제거 SPE 카트리지 플러시. </li><li> 1,1&#39;- 디클로로에 사용하기 전에 적어도 세 개의 카트리지 볼륨 한도로 카트리지를 세척. </li><li> 처리 된 카트리지를 통해 16 ml의 1,1&#39;- 디클로로에 합격 한 후 알루미늄 호일에 싸서 샘플 병 (20 ㎖)에 분수를 수집합니다. </li><li> 250 ㎖의 유리 병에 360 mg의 AIBN, 95.4 ml의 에탄올 및 49.5 mL의 헥산을 함유하는 용액에 14.73 ml의 1,1- 디클로로에 추가. </li></ol></li><li> A의 CL 함유 SPE 형성 용액 6 mL로 PMMA 분말 믹스50ml의 원뿔형 튜브는 똑같이 24 웰 조직 배양 플레이트의 웰에 여섯 원추형 튜브에서 혼합물을 1 ml의 전송. </li><li> 메틸 메타 크릴 레이트 (PMMA) 보드와 함께 조직 배양 플레이트를 커버하고 10 분 (빛의 세기 ~ 2.65 mW의 형상 관리 -2) 365 조사 UV하기 위해 조직 배양 접시에 노출됩니다. 주의! 적절한 배기 시스템 때문에 UV 조사 동안 오존의 생산의 좋습니다. </li><li> 물론 각각의 신선한 CL 함유 SPE 형성 액 1ml에 잔류 솔루션을 교체 한 후 다시 10 분 동안 365 조사 UV (빛의 세기 ~ 2.65 mW의 형상 관리 -2)하기 위해 조직 배양 접시에 노출됩니다. </li><li> 단계를 반복 2.2.13 18 배. </li><li> 잔류 용액을 제거하고 1 ml의 에탄올로 잘 각각의 PMMA 분말을 씻어. </li><li> 잔류 용액을 제거하고 1 ML의 DI의 H 2 O와 잘 각각의 PMMA 분말을 씻어 </li><li> &lt;잔류 DI H를 제거서브&gt; O이 후 8 시간 동안 60 ° C에서 PMMA 분말을 굽는다. </li><li> 유압 프레스 기계를 통해 펠렛을 건조 분말 (1 g)을 압축 한 후 LA-ICP-MS 시스템에 의해 CL에 대한 신호를 측정한다. 참고 : m에서 CL의 신호 / Z (35)는 이식 된 C-CL 부분에 대한 지표로 선정되었다. 193 나노 레이저 절제 원으로 사용 하였다. 에너지, 플루 언스, 스팟 크기 및 반복 속도는 75 %, 8.85 J의 cm -2, 100 μm의, 5 Hz에서로 설정 하였다. 각 결과에 대한 최소 7 반복 측정이 필요했다. 라-ICP-MS 분석 방법은 다른 곳에 게시 절차를 참조하십시오. (20) </li></ol></li><li> 라만 분광 분석 <ol><li> 2.2.17 단계로 단계 2.2.1에서 프로토콜을 수행합니다. </li><li> 유압 프레스 기계를 통해 펠렛을 건조 분말 (1 g)을 압축 한 다음 라만 분광기로 스펙트럼을. 참고 : 광 여기 원으로 100 mW의 최대 레이저 파워와 780 나노 레이저 라인을 사용합니다. 550에서 900cm까지의 라만 스펙트럼의 영역을 사용 -1 PMMA에 C-CL 부분의 첨부 파일을 조사합니다. </li></ol></li></ol> 다이폴 보조 SPE 반응 3. 특성화 <ol><li> 2.2.17 단계로 단계 2.2.1에서 프로토콜을 수행합니다. </li><li> 20 % 질산 망간 사수화물 (/ V w) (MN (NO 3) 2 4H 2 O) 수용액 5 mL에 0.5 g의 PMMA 분말 담가하고 똑같이 5 ㎖의 40 mM의 말레 산 완충액으로 생성 된 혼합물을 혼합한다. </li><li> 순수한 HNO 3 용액을 사용하여 (8)에 생성 된 혼합물의 pH를 조정 한 다음, 1 시간 동안 흔들 쉐이커를 통해 혼합물을 교반한다. </li><li> 잔류 용액을 제거하고 8 시간 동안 60 ° C에서 PMMA 분말을 굽는다. X 선 absor 알루미늄 호일로 싸서 15 ml의 원추형 튜브 분말 보관ption 가까운 가장자리 구조 (XANES) 분석. 참고 : 망간 K-가장자리 스펙트럼 07A, 국립 싱크로트론 방사선 연구 센터 (NSRRC, 신주, 대만)의 17C1 빔라인을 이용하여 수집 된 XANES. 전자 저장 링 1.5 GeV의 에너지 및 1백~2백mA의 전류로 작동시켰다. 의 Si (111) 이중 결정 단색화 장치는 전력을 15 keV의 1의 에너지가 매우 monochromatized 광자 빔들을 제공하고 해결하기 위해 사용되었다 (E / ΔE) 5,000.The 광자 에너지까지 공지 망간을 이용하여 Mn을 기준으로 보정 하였다 K- 6539.0 eV의에서 가장자리 흡수 변곡점. 제안 된 SPE 반응의 특성화 쌍극자 - 이온 상호 작용을 조사하기 위해 사용 하였다 eV의 6530 내지 6570의 Mn의 K 에지는 영역 XANES 스펙트럼. </li></ol>

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</ol>

The authors have nothing to disclose.

다이폴 보조 SPE 마이크로 칩의 제조를위한 상세한 절차는 상기 제시되었다. 이 섹션에서는, PMMA의 C-CL 잔기 및 미량의 금속 이온을 결정하는 추출 매질로서 사용 된 CL 함유 PMMA의 타당성의 주입에 관한 변형 프로토콜의 유틸리티이다 단계별 평가. 표면 확인 목적으로, 샘플 타입은 분석 기기와의 호환성에 기초하여 선택되었다. 즉, 유사한 과정을 통해 제조 된 시료의 종류는 분석 기기의 요구에 따라 결정 하였다. 예를 들어, 파우더 패킹 형 샘플은 LA-ICP-MS, 라만 분광에 사용 된 반면, 기판 형태의 샘플에서는, 접촉각의 측정을 위해 사용하고, XANES 분석. 우선, 화학 작용기에 의해 무관 후의 변화를 모니터링제안 된 절차 중에 PMMA 표면에 D, 각 단계가 수행 된 결과에 대응하는 제품에 대한 접촉각 분석 (도 2). 도 2에 표시된 바와 같이, 접촉각의 변화가 명확히 표면 변화는 변형 과정에서 발생 이전 결과를보고와 일치 하였다 최종 산물 측정 하였다 80.3 ° ± 0.43 °의 접촉각 것으로 나타났다. 21 또한, 변성 PMMA의 C-CL 잔기의 존재는 LA-ICP-MS 분석을 통해 확인 하였다. 네이티브 PMMA를 절제에 의해 얻어진 결과와 비교하면, CL에 대해서는 다른 신호는 C-CL 부분에 변성 PMMA를 절제하여 expectably 관찰되었다 (도 3 (a)). 라만 스펙트럼은 더 PMMA에 C-CL 부분의 첨부 파일을 검증 수집 하였다. Figu에 도시 된 바와 같이3 (b)에 재의 사염화탄소 2 비대칭 신축 진동과 관련된 두 개의 특성 피크가 682cm -1 718cm -1 수정 된 PMMA의 스펙트럼에서 관찰 하였다 윌리스 등에 의해보고 된 결과에 있다는 점에서 합리적으로 잘 일치 . 22, 헨드라 외. (23) 즉, PMMA에 C-CL 잔기의 부착이 성공적으로 변형 후에 달성 될 수있다. 더욱이, 본 연구에서 제안 된 인출기구를 명확히 상기 XANES 분석을 사용 하였다. 도 4에 나타낸 바와 같이, 고도 전성 C-CL 부분과 양으로 하전 된 금속 이온 사이의 상호 작용에 의해, Mn 2+ 이온 처리 한 변성 PMMA에 대응 한 XANES 스펙트럼에서 지배적 흡수 에지의 존재를 확인할 수 있었다. 따라서, 쌍극 정전기 상호 작용을 실제로 TR위한 온칩 추출에인가 될에이스 금속은 분석한다. 대만에서 두 하천에서 수집 물 샘플에 대한 자세한 분석 결과는 다른 곳에서 설명 하였다. (16) 우리가 알고있는 한,이 미량 금속 이온의 결정을위한 온 - 칩 SPE 반응에 획기적인 작업 전략을 활용하려는 첫 번째 시도하고, 현상 장치가 다른 온 칩 SPE 기술과 비교하여 현저하게 내구성이라고 (즉, 160 개 이상의 분석 작품)의 추출 효율의 관점에서 현저한 저하없이 달성 될 수있다. 이러한 취출기구는 주로 높은 전성 C-CL 부분과 양으로 하전 된 금속 이온 사이의 상호 작용에 의존하고 있기 때문에 그러나, 제안 된 기술은 지금까지 음전하 종의 추출에 부적당 할 것으로 예상되었다.

환경 관리 및 오염 방지의 관점에서, 심각한 오염이나 독성 문제가 전 세계적으로 우려의 원인이 금속을 추적. 원시 샘플에서 예상치 못한 공존 화학 종은 종종 흔적 금액에 존재하는 분석의 정확한 결정을 방해하기 때문에 시료 전처리 기술이 광범위하게, 처리 및 칩 기반 플랫폼을 통해 실제 샘플을 분석하는 성공의 열쇠로 접수 된 온 - 칩 적절한 샘플링 정리 동시에 수행 될 분석 농축 허용이 기술은 복잡 염 매트릭스에서 금속 이온의 분리를위한 매우 유용하기 때문이다. 가능한 방법 중 하나는 온 - 칩 고체 상 추출 (SPE)가 미량 금속 분석 특히 인기가있다. 2,3 미량 금속의 결정에 사용되는 온 - 칩 SPE 기술의 발전은 꾸준히 발전하고있다. 초기에, t그 칩을 수지 충전 SPE 단위를 구성하는 마이크로 채널로 시판되는 수지를 로딩하여 준비 하였다 SPE. 4-7이 때때로 수지 보존 가능한 형태로 금속 이온의 변환을 가능하도록 유도 할 수있는 분석 물이 필요했다. (4) 다른 방법 칩 기반 SPE 장치의 제조를위한 단순 표면 개질 후의 미량 금속의 회수를위한 SPE 흡수제 등의 칩 채널을 활용한다. (8) 최근, 자성 나노 입자 (MNPS) 및 특정 화학 물질의 혼입을 포함 신흥 경향을 보이면서 금속 이온을 효율적으로 보존 할 수있는 관능기를 포함 할 것이다. 상업적 수지는 대조적으로, MNPS는 예들이 외부 자기장 (T)의 도움으로 미세 유로에 충전 된 후에 γ 메르 캅토 프로필 트리 메 톡시 실란 (γ-MPTS) 9 아미노 벤질 에틸렌 디아민 테트라 아세트산 (ABEDTA) 10 화합물 수정O 금속 이온의 선택적 추출을 달성한다. 온칩 SPE 기술의 개발에 상당한 진전이 목격되었지만,보고 된 기술들은 전형적으로 이온 교환 또는 킬레이트 하나에 기초하여 기능한다. 이와 같은 기술의 사용은 컨디셔닝, 세정 또는 재생과 연관된, 분석 성능을 유지하기 위해 포함 불가피 동작 절차를 필요로한다는 단점이있다. 불행히도, 추가적인 동작 절차에 대한 요구는 각각의 분석에 필요한 시간을 늘릴뿐만 아니라, 높은 빈 값과 재생 불가능한 결과를 일으키는 위험. 11 따라서, 온칩 SPE 기술에 대한 전략을 작동 대안 미량 금속 분석을 위해 필수적이다. 1993 년 12 와트 Chehimi 금속 이온이 고분자 물질을 향해 유지하는 경향이 있고, 분석의 가장 효율적 클로로 (CL)에 보유 -containi 것으로NG 중합체 물질 나트륨 이온을 제외한, 폴리 염화 비닐 (PVC). 따라서, 2002 년, Eboatu 등. (13) 또한 PVC로 솔루션의 일부 독성 금속의 격리 보도했다. 이 분석 농축 염화칼슘 행렬 제거를위한 우수한 특성을 나타내 고분자 재료 CL을 포함하는 것을 지시하기 때문에, CL 함유 SPE 기능을 가진 칩 - 기반 장치가 판정하기위한 신규 온칩 SPE 기술의 개발을위한 매력적인 전략 여겨졌다 금속 이온을 추적. 이러한 가공의 용이성, 원하는 화학적 / 기계적 특성 및 광학적 투명도와 같은 고려 재료 특징은, 14, 15이 연구는 마이크로 디바이스를 제조하기 위해 폴리 (메틸 메타 크릴 레이트) (PMMA)를 이용했다. 그리고, CL 함유 SPE 기능 미량 금속 이온을 판정하기위한 신규 온칩 SPE 기술의 개발을 위해 제작 된 소자에 주입 하였다. 16 아르 자형emarkably, 채널 내부의 높은 전기 음성 C-CL 부분과 양으로 하전 된 금속 이온의 쌍극자 - 이온 상호 작용에 대한 혁신적인 추출기구의 의존도로 이어지는 일반적인 온칩 SPE 절차 동안 취해진 조치를 회피하는 것을 가능하게 과량의 시약의 사용 또는 추가의 단계에 의한 노동에 의한 오염 하나의 극적인 감소. 이 기여에서 제공하는 프로토콜은 자신의 작품에 대한 다이폴 안테나를 이용한 SPE 마이크로 칩을 제조하는 다양한 배경을 가진 연구자를 가능하게 할 것이다. 제작 된 마이크로 칩에 대한 자세한 특성화 절차도 설명되어 있습니다.

<table><tbody><tr><td>AutoCAD</td><td>Autodesk</td><td>N/A</td><td>http://www.autodesk.com/education/free-software/autocad</td></tr><tr><td>Poly(methyl methacrylate) (PMMA) sheet</td><td>Kun Quan Engineering Plastics</td><td>N/A</td><td>350 mm (L) x 20 mm (W) x 2 mm (H). The glass transition temperature (Tg) of PMMA sheets is ranged from 102&amp;ndash;110 &amp;deg;C. The UV transmittance of the PMMA at 365 nm is 91.2%.</td></tr><tr><td>Micromachining system</td><td>Laser Life</td><td>LES-10</td><td>Maximum laser power: 10 W. Maximium engraving speed: 762 mm sec&lt;sup&gt;&amp;minus;1&lt;/sup&gt;.</td></tr><tr><td>High-resolution optical microscope</td><td>Ching Hsing Computer-Tech</td><td>FS-230</td><td></td></tr><tr><td>Power Image Analysis system (PIA)</td><td>Ching Hsing Computer-Tech</td><td>PIA V16.1</td><td></td></tr><tr><td>Multi drilling machines</td><td>N/A</td><td>LT-848</td><td></td></tr><tr><td>Deionized water (D. I. H&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;O)</td><td>Millipore</td><td>Milli-Q Integral 5 System</td><td></td></tr><tr><td>Sodium dodecyl sulfate (SDS)</td><td>J. T. Baker</td><td>4095-04</td><td></td></tr><tr><td>Ultrasound oscillator</td><td>Elma</td><td>Transsonic Digital</td><td></td></tr><tr><td>Glass board</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>160 mm (L) x 35 mm (W) x 2 mm (H); fragile</td></tr><tr><td>Binder clip</td><td>SDI</td><td>0234T-1</td><td>http://stationery.sdi.com.tw/product_detail.php?Key=322&amp;amp;cID=55&amp;amp;uID=6</td></tr><tr><td>Precision oven</td><td>Yeong Shin</td><td>DK-45</td><td></td></tr><tr><td>Poly(etheretherketone) (PEEK) tube</td><td>VICI</td><td>JR-T-6002 (0.5 mm i.d.); JR-T-6001 (0.25 mm i.d.)</td><td></td></tr><tr><td>Polymer tubing&amp;nbsp; cutter</td><td>Upchurch Scientific</td><td>A-327</td><td></td></tr><tr><td>Two-component epoxy-based adhesive</td><td>Richwang</td><td>N/A</td><td>Skin irritative. The major components are an epoxy resin and a hardener.</td></tr><tr><td>Peristaltic pump</td><td>Gilson</td><td>Minipuls 3</td><td></td></tr><tr><td>Peristaltic tube</td><td>Gilson</td><td>F117934</td><td></td></tr><tr><td>Sodium hydroxide (NaOH)</td><td>Sigma&amp;ndash;Aldrich</td><td>30620</td><td></td></tr><tr><td>Nitric acid (HNO&lt;sub&gt;3&lt;/sub&gt;)</td><td>J. T. Baker</td><td>959834</td><td></td></tr><tr><td>Acrylamide (prop-2-enamide, C&lt;sub&gt;3&lt;/sub&gt;H&lt;sub&gt;5&lt;/sub&gt;NO)</td><td>Sigma&amp;ndash;Aldrich</td><td>A8887</td><td>Acutely toxic and carcinogenic</td></tr><tr><td>In-house-built photomask</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>The in-house-built photomask was made of a black paper (114 mm (L) &amp;times; 22 mm (W)) that contained an open window (94 mm (L) &amp;times; 2 mm (W)) allowing the desired region</td></tr><tr><td>1,1-Dichloroethylene</td><td>Sigma&amp;ndash;Aldrich</td><td>163032</td><td>Acutely toxic and carcinogenic</td></tr><tr><td>Cartridge</td><td>Dikma</td><td>ProElut AL-B&amp;nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>2,2-Azobisisobutyronitrile (AIBN, C&lt;sub&gt;8&lt;/sub&gt;H&lt;sub&gt;12&lt;/sub&gt;N&lt;sub&gt;4&lt;/sub&gt;)</td><td>Showa Chemical&amp;nbsp;</td><td>0159-2130</td><td></td></tr><tr><td>Ethanol</td><td>Sigma&amp;ndash;Aldrich</td><td>32221</td><td></td></tr><tr><td>Hexanes (C&lt;sub&gt;6&lt;/sub&gt;H&lt;sub&gt;14&lt;/sub&gt;)</td><td>Millinckrodt Chemical</td><td>5189-08</td><td></td></tr><tr><td>In-house-built irradiation system</td><td>Great Lighting (UV-A lamp)</td><td>N/A</td><td>An opaque box with an UV-A lamp (40 W, maximum emission at 365 nm)</td></tr><tr><td>Glass vial</td><td>Yeong Shin</td><td>132300019</td><td>Fragile</td></tr><tr><td>Aluminum foil</td><td>Diamond</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Conical tubes with screw caps</td><td>labcon</td><td>3181-345-008 (50 mL); 3131-345-008 (15 mL)</td><td></td></tr><tr><td>Rocking shaker</td><td>TKS</td><td>RS-01</td><td></td></tr><tr><td>Contact angle meter</td><td>First Ten Angstroms</td><td>FTA 125</td><td></td></tr><tr><td>PMMA bead</td><td>Scientific Polymer Products</td><td>037A</td><td></td></tr><tr><td>Mortar and pestle, agate&amp;nbsp;</td><td>Yeong Shin</td><td>139000004</td><td>Fragile</td></tr><tr><td>Tissue culture plate</td><td>AdvanGene Life Science Plasticware</td><td>AGC-CP-24S-50EA</td><td>24-Well, non-treated, sterilized</td></tr><tr><td>Hydraulic press</td><td>Panchum</td><td>Press-200</td><td></td></tr><tr><td>Laser ablation</td><td>New Wave Research</td><td>NWR193</td><td></td></tr><tr><td>Inductively coupled plasma-mass spectrometer</td><td>Agilent Technologies</td><td>Agilent 7500a</td><td></td></tr><tr><td>Glass bottle</td><td>DURAN</td><td>21801245 (100 mL); 21801365 (250 mL)</td><td></td></tr><tr><td>Dispersive Raman spectrometer</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>Nicolet Almega XR</td><td></td></tr><tr><td>Manganese nitrate tetrahydrate (Mn(NO&lt;sub&gt;3&lt;/sub&gt;)&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;&amp;times;4H&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;O)</td><td>Sigma&amp;ndash;Aldrich</td><td>63547</td><td></td></tr><tr><td>Maleic acid disodium salt hydrate (C&lt;sub&gt;4&lt;/sub&gt;H&lt;sub&gt;4&lt;/sub&gt;Na&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;O&lt;sub&gt;5&lt;/sub&gt;)</td><td>Sigma&amp;ndash;Aldrich</td><td>M9009</td><td></td></tr><tr><td>X-ray absorption near edge structure (XANES)&amp;nbsp;</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>The Mn K-edge XANES analyses were conducted at 07A and 17C1 beamlines of the National Synchrotron Radiation Research Center (NSRRC) in Taiwan.</td></tr></tbody></table>

fabrication of a dipole-assisted solid phase extraction microchip for trace metal analysis in water samples

이 논문은 물 시료에서 미량 금속 분석에 사용할 수있는 다이폴 안테나를 이용한 고체상 추출 (SPE) 마이크로 칩에 대한 제조 프로토콜을 설명합니다. 칩 기반 SPE 기술의 발전에 대한 간략한 개요가 제공된다. 이은 특정 고분자 재료에 대한 소개와 SPE에서의 역할옵니다. 혁신적인 다이폴 보조 SPE 기술을 개발하기 위해, SPE 기능을 함유 염소 (CL)은 폴리 메틸 메타 크릴 레이트 (PMMA)는 마이크로 칩에 주입 하였다. 여기서 접촉각 분석, 라만 분광 분석, 레이저 어블 레이션 - 유도 결합 플라즈마 질량 분석 등 다양한 분석 기법 (LA-ICP-MS) 분석에 C-CL 부분의 주입 프로토콜의 유용성을 확인하기 위해 사용 된 PMMA. X 선 흡수 모서리 근처 구조의 해석 결과 (XANES) 분석도 dipole- 덕분에 추출 매체로 사용되는 CL 함유 PMMA의 타당성을 입증고도 전성 C-CL 부분과 양으로 하전 된 금속 이온과 이온의 상호 작용.

도 2는 PMMA 마이크로 칩의 채널 변경 과정에서 발생하는 반응을 나타낸다. 접촉각 분석 제안 과정에서 표면의 변화를 모니터링 하였다. LA-ICP-MS 시스템 및 분산 라만 분광기는 C-CL의 성공적인 수정을 확인하기 위해 채용 한 것은 PMMA 기판 상에 형성 부분 (도 3 (a), (b)). 제안 다이폴 보조 SPE 반응은 XANES 분석 (도 4)에 의해 특성화되었다. <img alt="그림 1" src="/files/ftp_upload/53500/53500fig1.jpg" /> 도 1 PMMA 마이크로 칩. (a) 제조 된 마이크로 칩을위한 패턴 파일의 스냅 샷. (b) 제조 된 마이크로 칩의 레이아웃 : S는, E 및 B는 시료, 용리액 및 버피위한 도입 포트를 나타낸다FER 솔루션, 각각; O는 출구를 나타냅니다. 검은 원은 각 드릴 액세스 구멍을 나타냅니다. 샘플 완충 용액의 도입을 위해 사용되는 채널들 모두가 추출 채널과 30 °의 각도를 형성. 합류 콘센트 샘플 완충 용액의 흐름의 수렴 점까지의 거리로 정의 된 유효 추출 채널의 길이는 94 mm였다. (c) 기계 가공 된 플레이트의 단면 사진. 참고로 재현. (16) 화학의 왕립 학회의 허가에 의해. <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/53500/53500fig1large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a> <img alt="그림 2" src="/files/ftp_upload/53500/53500fig2.jpg" /> PMMA 마이크로 칩의 채널 변경 그림 2. 계획. 삽입 된 photographs 시퀀스의 결과물에 해당하는 접촉 각도를 나타낸다. 접촉각은 물 방울의 화상을 사용하여 측정 하였다. 세 반복 측정의 평균이 각각의 경우에보고 된 접촉각을 결정하기 위해 사용되었다. 참고로 재현. (16) 화학의 왕립 학회의 허가에 의해. <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/53500/53500fig2large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a> <img alt="그림 3" src="/files/ftp_upload/53500/53500fig3.jpg" /> PMMA 수정 그림 3. 표면 확인. (A) (CL)에 대한 신호는 C-CL 부분에 수정 된 PMMA와 PMMA를 모두 절제하여 얻을 수 있습니다. 삽입 된 각 신호에 대응 얻는 박리 위치를 나타낸다. (b)는 고유의 라만 스펙트럼과 PMMA를 수정했습니다. 참고로 재현. 의 허가 16화학의 왕립 학회는. <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/53500/53500fig3large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a> <img alt="그림 4" src="/files/ftp_upload/53500/53500fig4.jpg" /> 그림 4. 망간 K-가장자리 망간 2+ 이온으로 처리 PMMA 수정 및 수정 된 PMMA의 스펙트럼을 XANES. 수정 된 PMMA의 스펙트럼은 빨간 선으로 표시 하였다. 흡수 스펙트럼을 보여 수정 PMMA의 높은 전기 음성 C-CL 부분과 망간 2+ 이온 사이의 상호 작용은 파란색 선으로 표시 하였다. 참고로 재현. (16) 화학의 왕립 학회의 허가에 의해. <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/53500/53500fig4large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>

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Fabrication of a Dipole-assisted Solid Phase Extraction Microchip for Trace Metal Analysis in Water Samples

The fabrication protocol of a dipole-assisted solid phase extraction microchip for the trace metal analysis is presented.

물 샘플에서 추적 금속 분석을위한 쌍극자를 이용한 고체 단계 추출 마이크로 칩의 제작

This paper describes a fabrication protocol for a dipole-assisted solid phase extraction (SPE) microchip available for trace metal analysis in water ...

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비디오: Fabrication of a Dipole-assisted Solid Phase Extraction Microchip for Trace Metal Analysis in Water Samples

Fabrication of Electrochemical-DNA Biosensors for the Reagentless Detection of Nucleic Acids, Proteins and Small Molecules

As medicine is currently practiced, doctors send specimens to a central laboratory for testing and thus must wait hours or days to 
receive the results. Many patients would be better served by rapid, bedside tests. To this end our laboratory and others have developed a versatile, reagentless 
biosensor platform that supports the quantitative, reagentless, electrochemical detection of nucleic acids (DNA, RNA), proteins (including antibodies) and small 
molecules analytes directly in unprocessed clinical and environmental samples. In this video, we demonstrate the preparation and use of several biosensors in this 
"E-DNA" class. In particular, we fabricate and demonstrate sensors for the detection of a target DNA sequence in a polymerase chain reaction mixture, an HIV-specific antibody and the drug cocaine. The preparation procedure requires only three hours of hands-on effort followed by an overnight incubation, and their use requires only minutes.

"E-DNA" sensors, reagentless, electrochemical biosensors that perform well even when challenged directly in blood and other complex matrices, have been adapted to the detection of a wide range of nucleic acid, protein and small molecule analytes. Here we present a general procedure for the fabrication and use of such sensors.

핵산, 단백질과 작은 분자의 Reagentless 감지를위한 전기 -의 DNA Biosensors의 제작

As medicine is currently practiced, doctors send specimens to a central laboratory for testing and thus must wait hours or days to 
receive the results. ...

연구

생체공학

A Simple Method for Automated Solid Phase Extraction of Water Samples for Immunological Analysis of Small Pollutants

A new method for solid phase extraction (SPE) of environmental water samples is proposed. The developed prototype is cost-efficient and user friendly, and enables to perform rapid, automated and simple SPE. The pre-concentrated solution is compatible with analysis by immunoassay, with a low organic solvent content. A method is described for the extraction and pre-concentration of natural hormone 17&#946;-estradiol in 100 ml water samples. Reverse phase SPE is performed with octadecyl-silica sorbent and elution is done with 200 &#181;l of methanol 50% v/v. Eluent is diluted by adding di-water to lower the amount of methanol. After preparing manually the SPE column, the overall procedure is performed automatically within 1 hr. At the end of the process, estradiol concentration is measured by using a commercial enzyme-linked immune-sorbent assay (ELISA). 100-fold pre-concentration is achieved and the methanol content in only 10% v/v. Full recoveries of the molecule are achieved with 1 ng/L spiked de-ionized and synthetic sea water samples.

A protocol for the extraction and pre-concentration of estradiol from water samples by using an automated and miniaturized system is presented.

작은 오염 물질의 면역 학적 분석을위한 물 샘플의 자동화 된 고체상 추출을위한 간단한 방법

A new method for solid phase extraction (SPE) of environmental water samples is proposed. The developed prototype is cost-efficient and user friendly, and ...

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Clean Sampling and Analysis of River and Estuarine Waters for Trace Metal Studies

Most of the trace metal concentrations in ambient waters obtained a few decades ago have been considered unreliable owing to the lack of contamination control. Developments of some techniques aiming to reduce trace metal contamination in the last couple of decades have resulted in concentrations reported now being orders of magnitude lower than those in the past. These low concentrations often necessitate preconcentration of water samples prior to instrumental analysis of samples. Since contamination can appear in all phases of trace metal analyses, including sample collection (and during preparation of sampling containers), storage and handling, pretreatments, and instrumental analysis, specific care needs to be taken in order to reduce contamination levels at all steps. The effort to develop and utilize "clean techniques" in trace metal studies allows scientists to investigate trace metal distributions and chemical and biological behavior in greater details. This advancement also provides the required accuracy and precision of trace metal data allowing for environmental conditions to be related to trace metal concentrations in aquatic environments.
This protocol that is presented here details needed materials for sample preparation, sample collection, sample pretreatment including preconcentration, and instrumental analysis. By reducing contamination throughout all phases mentioned above for trace metal analysis, much lower detection limits and thus accuracy can be achieved. The effectiveness of "clean techniques" is further demonstrated using low field blanks and good recoveries for standard reference material. The data quality that can be obtained thus enables the assessment of trace metal distributions and their relationships to environmental parameters.

Special care using "clean techniques" is required to properly collect and process water samples for trace metal studies in aquatic environments. A protocol for sampling, processing, and analytical procedures with the aim of obtaining reliable environmental monitoring data and results with high sensitivity for detailed trace metal studies is presented.

클린 샘플링 및 추적 금속 연구 강 하구 바다의 분석

Most of the trace metal concentrations in ambient waters obtained a few decades ago have been considered unreliable owing to the lack of contamination ...

Detection and Recovery of Palladium, Gold and Cobalt Metals from the Urban Mine Using Novel Sensors/Adsorbents Designated with Nanoscale Wagon-wheel-shaped Pores

Developing low-cost, efficient processes for recovering and recycling palladium, gold and cobalt metals from urban mine remains a significant challenge in industrialized countries. Here, the development of optical mesosensors/adsorbents (MSAs) for efficient recognition and selective recovery of Pd(II), Au(III), and Co(II) from urban mine was achieved. A simple, general method for preparing MSAs based on using high-order mesoporous monolithic scaffolds was described. Hierarchical cubic Ia3d wagon-wheel-shaped MSAs were fabricated by anchoring chelating agents (colorants) into three-dimensional pores and micrometric particle surfaces of the mesoporous monolithic scaffolds. Findings show, for the first time, evidence of controlled optical recognition of Pd(II), Au(III), and Co(II) ions and a highly selective system for recovery of Pd(II) ions (up to ~95%) in ores and industrial wastes. Furthermore, the controlled assessment processes described herein involve evaluation of intrinsic properties (e.g., visual signal change, long-term stability, adsorption efficiency, extraordinary sensitivity, selectivity, and reusability); thus, expensive, sophisticated instruments are not required. Results show evidence that MSAs will attract worldwide attention as a promising technological means of recovering and recycling palladium, gold and cobalt metals.

Because of the importance and extensive use of palladium, gold and cobalt metals in high-technology equipment, their recovery and recycling constitute an important industrial challenge. The metal recovery system described herein is a simple, low-cost means for the effective detection, removal, and recovery of these metals from the urban mine.

감지 및 팔라듐의 복구, 도시 광산에서 금과 코발트 금속은 나노 수레 바퀴 모양의 기공 지정 소설 센서 / 흡착제를 사용하여

Developing low-cost, efficient processes for recovering and recycling palladium, gold and cobalt metals from urban mine remains a significant challenge in ...

공학

Fabrication of the Thermoplastic Microfluidic Channels

In our lab, we have successfully isolated nucleic acids directly from microliter and submicroliter volumes of human blood, urine and stool using polymer/nanoparticle composite microscale lysis and solid phase extraction columns. The recovered samples are concentrated, small volume samples that are PCRable, without any additional cleanup. Here, we demonstrate how to fabricate thermoplastic microfluidic chips using hot embossing and heat sealing. Then, we demonstrate how to use in situ light directed surface grafting and polymerization through the sealed chip to form the composite solid phase columns. We demonstrate grafting and polymerization of a carbon nanotube/polymer composite column for bacterial cell lysis. We then show the lysis process followed by solid phase extraction of nucleic acids from the sample on chip using a silica/polymer composite column. The attached protocols contain detailed instructions on how to make both lysis and solid phase extraction columns.

Here we demonstrate how to fabricate thermoplastic microfluidic chips using hot embossing and heat sealing. Then we demonstrate how to use in situ light directed surface grafting and polymerization through the sealed chip to form the composite solid phase columns.

열가 소성 Microfluidic 채널 제작

In our lab, we have successfully isolated nucleic acids directly from microliter and submicroliter volumes of human blood, urine and stool using ...

생물학

Proofreading and DNA Repair Assay Using Single Nucleotide Extension and MALDI-TOF Mass Spectrometry Analysis

The maintenance of the genome and its faithful replication is paramount for conserving genetic information. To assess high fidelity replication, we have developed a simple non-labeled and non-radio-isotopic method using a matrix-assisted laser desorption ionization with time-of-flight (MALDI-TOF) mass spectrometry (MS) analysis for a proofreading study. Here, a DNA polymerase [e.g., the Klenow fragment (KF) of Escherichia coli DNA polymerase I (pol I) in this study] in the presence of all four dideoxyribonucleotide triphosphates is used to process a mismatched primer-template duplex. The mismatched primer is then proofread/extended and subjected to MALDI-TOF MS. The products are distinguished by the mass change of the primer down to single nucleotide variations. Importantly, a proofreading can also be determined for internal single mismatches, albeit at different efficiencies. Mismatches located at 2-4-nucleotides (nt) from the 3' end were efficiently proofread by pol I, and a mismatch at 5 nt from the primer terminus showed only a partial correction. No proofreading occurred for internal mismatches located at 6 - 9 nt from the primer 3' end. This method can also be applied to DNA repair assays (e.g., assessing a base-lesion repair of substrates for the endo V repair pathway). Primers containing 3' penultimate deoxyinosine (dI) lesions could be corrected by pol I. Indeed, penultimate T-I, G-I, and A-I substrates had their last 2 dI-containing nucleotides excised by pol I before adding a correct ddN 5'-monophosphate (ddNMP) while penultimate C-I mismatches were tolerated by pol I, allowing the primer to be extended without repair, demonstrating the sensitivity and resolution of the MS assay to measure DNA repair.

A non-labeled, non-radio-isotopic method for DNA polymerase proofreading and a DNA repair assay was developed by using high-resolution MALDI-TOF mass spectrometry and a single nucleotide extension strategy. The assay proved to be very specific, simple, rapid, and easy to perform for proofreading and repair patches shorter than 9-nucleotides.

교정 및 DNA 복구 분석 결과 단일 뉴클레오티드 확장 및 TOF MALDI 질량 분석 분석을 사용 하 여

The maintenance of the genome and its faithful replication is paramount for conserving genetic information. To assess high fidelity replication, we have ...

생화학

A Microfluidic Chip for the Versatile Chemical Analysis of Single Cells

We present a microfluidic device that enables the quantitative determination of intracellular biomolecules in multiple single cells in parallel. For this purpose, the cells are passively trapped in the middle of a microchamber. Upon activation of the control layer, the cell is isolated from the surrounding volume in a small chamber. The surrounding volume can then be exchanged without affecting the isolated cell. However, upon short opening and closing of the chamber, the solution in the chamber can be replaced within a few hundred milliseconds. Due to the reversibility of the chambers, the cells can be exposed to different solutions sequentially in a highly controllable fashion, e.g. for incubation, washing, and finally, cell lysis. The tightly sealed microchambers enable the retention of the lysate, minimize and control the dilution after cell lysis. Since lysis and analysis occur at the same location, high sensitivity is retained because no further dilution or loss of the analytes occurs during transport. The microchamber design therefore enables the reliable and reproducible analysis of very small copy numbers of intracellular molecules (attomoles, zeptomoles) released from individual cells. Furthermore, many microchambers can be arranged in an array format, allowing the analysis of many cells at once, given that suitable optical instruments are used for monitoring. We have already used the platform for proof-of-concept studies to analyze intracellular proteins, enzymes, cofactors and second messengers in either relative or absolute quantifiable manner.

In this article we present a microfluidic chip for single cell analysis. It allows the quantification of intracellular proteins, enzymes, cofactors, and second messengers by means of fluorescent assays or immunoassays.&#160;

단일 세포의 다목적 화학 분석을위한 미세 유체 칩

We present a microfluidic device that enables the quantitative determination of intracellular biomolecules in multiple single cells in parallel. For this ...

A Microfluidic-based Electrochemical Biochip for Label-free DNA Hybridization Analysis

Miniaturization of analytical benchtop procedures into the micro-scale provides significant advantages in regards to reaction time, cost, and integration of pre-processing steps. Utilizing these devices towards the analysis of DNA hybridization events is important because it offers a technology for real time assessment of biomarkers at the point-of-care for various diseases. However, when the device footprint decreases the dominance of various physical phenomena increases. These phenomena influence the fabrication precision and operation reliability of the device. Therefore, there is a great need to accurately fabricate and operate these devices in a reproducible manner in order to improve the overall performance. Here, we describe the protocols and the methods used for the fabrication and the operation of a microfluidic-based electrochemical biochip for accurate analysis of DNA hybridization events. The biochip is composed of two parts: a microfluidic chip with three parallel micro-channels made of polydimethylsiloxane (PDMS), and a 3 x 3 arrayed electrochemical micro-chip. The DNA hybridization events are detected using electrochemical impedance spectroscopy (EIS) analysis. The EIS analysis enables monitoring variations of the properties of the electrochemical system that are dominant at these length scales. With the ability to monitor changes of both charge transfer and diffusional resistance with the biosensor, we demonstrate the selectivity to complementary ssDNA targets, a calculated detection limit of 3.8 nM, and a 13% cross-reactivity with other non-complementary ssDNA following 20 min&#160;of incubation. This methodology can improve the performance of miniaturized devices by elucidating on the behavior of diffusion at the micro-scale regime and by enabling the study of DNA hybridization events.

We present a microfluidic-based electrochemical biochip for DNA hybridization detection. Following ssDNA probe functionalization, the specificity, sensitivity, and detection limit are studied with complementary and non-complementary ssDNA targets. Results illustrate the influence of the DNA hybridization events on the electrochemical system, with a detection limit of 3.8 nM.

라벨없는 DNA의 혼성화 분석 용 미세 유체 기반 전기 바이오칩

Miniaturization of analytical benchtop procedures into the micro-scale provides significant advantages in regards to reaction time, cost, and integration ...

A Microfluidic Chip for ICPMS Sample Introduction

This protocol discusses the fabrication and usage of a disposable low cost microfluidic chip as sample introduction system for inductively coupled plasma mass spectrometry (ICPMS). The chip produces monodisperse aqueous sample droplets in perfluorohexane (PFH). Size and frequency of the aqueous droplets can be varied in the range of 40 to 60 &#181;m and from 90 to 7,000&#160;Hz, respectively. The droplets are ejected from the chip with a second flow of PFH and remain intact during the ejection. A custom-built desolvation system removes the PFH and transports the droplets into the ICPMS. Here, very stable signals with a narrow intensity distribution can be measured, showing the monodispersity of the droplets. We show that the introduction system can be used to quantitatively determine iron in single bovine red blood cells. In the future, the capabilities of the introduction device can easily be extended by the integration of additional microfluidic modules.

We present a discrete droplet sample introduction system for inductively coupled plasma mass spectrometry (ICPMS). It is based on a cheap and disposable microfluidic chip that generates highly monodisperse droplets in a size range of 40&#8722;60 &#181;m at frequencies from 90 to 7,000 Hz.

ICPMS 샘플 소개를위한 미세 유체 칩

This protocol discusses the fabrication and usage of a disposable low cost microfluidic chip as sample introduction system for inductively coupled plasma ...

Fast Enzymatic Processing of Proteins for MS Detection with a Flow-through Microreactor

The vast majority of mass spectrometry (MS)-based protein analysis methods involve an enzymatic digestion step prior to detection, typically with trypsin. This step is necessary for the generation of small molecular weight peptides, generally with MW &#60; 3,000-4,000 Da, that fall within the effective scan range of mass spectrometry instrumentation. Conventional protocols involve O/N enzymatic digestion at 37 &#186;C. Recent advances have led to the development of a variety of strategies, typically involving the use of a microreactor with immobilized enzymes or of a range of complementary physical processes that reduce the time necessary for proteolytic digestion to a few minutes (e.g., microwave or high-pressure). In this work, we describe a simple and cost-effective approach that can be implemented in any laboratory for achieving fast enzymatic digestion of a protein. The protein (or protein mixture) is adsorbed on C18-bonded reversed-phase high performance liquid chromatography (HPLC) silica particles preloaded in a capillary column, and trypsin in aqueous buffer is infused over the particles for a short period of time. To enable on-line MS detection, the tryptic peptides are eluted with a solvent system with increased organic content directly in the MS ion source. This approach avoids the use of high-priced immobilized enzyme particles and does not necessitate any aid for completing the process. Protein digestion and complete sample analysis can be accomplished in less than ~3 min and ~30 min, respectively.

A quick protocol for proteolytic digestion with an in-house built flow-through tryptic microreactor coupled to an electrospray ionization (ESI) mass spectrometer is presented. The fabrication of the microreactor, the experimental setup and the data acquisition process are described.

플로우를 통해 마이크로 반응기와 MS 검출을위한 단백질의 빠른 효소 처리

The vast majority of mass spectrometry (MS)-based protein analysis methods involve an enzymatic digestion step prior to detection, typically with trypsin. ...