This work was supported by the Auburn University fund FOP 101002-139294-2050.

全ての実験手順は、オーバーン大学のIACUC、オーバーン、アラバマ州によって承認されました。 文化メディア、食器や細菌培養の作製<ol><li>栄養寒天プレート上で一晩増殖させた枯草菌 BSB3文化の単一コロニー、フラスコに栄養培地の10ミリリットルを接種します。 </li><li>バクト栄養ブロス、8グラム1.2％（v）の硫酸マグネシウム4×7H 2 O、10ミリリットル/ワット;寒天、15;（v）の塩化カリウム、10ミリリットル/ wの10％：リットル当たり（19培地胞子形成の500ミリリットルを作りますg）を、20分間121°Cのオートクレーブ。 50°Cのに冷却し、以下の滅菌溶液を追加することを許可する：1 MのCa（NO 3）2、1ミリリットルを、 0.01 MのMnCl 2、1ミリリットル。 1 mMのは4、1ミリリットルをのFeSO。 </li><li>室温で20分間40°Cのに準備された培地を冷却し、滅菌キャビネットに20の滅菌ペトリ皿のそれぞれに25ミリリットルを注ぎます。媒体は一晩固化してみましょう。 </li><li> Bの一晩培養物0.5ミリリットルを広めますacillusサブチリスBSB3ペトリ皿中の培地の表面上に。 90％の胞子形成するまで、5日間37°Cの時に文化をインキュベートします。高解像度の顕微鏡による位相明るい胞子を明らかにしました。 </li><li>プレートに無菌のリン酸緩衝生理食塩水（PBS）を1ml添加​​し、無菌細胞スプレッダーを用いて表面から細菌を掻き取ることによって収穫細菌。必要になるまで冷蔵庫にサスペンションを保管してください。 </li><li> 37 O℃で24時間- 18のためのインキュベーションに続いて胞子形成培地プレート上の細菌懸濁液の適切な希釈（10 -5〜10 -6）の0.1ミリリットルをメッキすることにより細菌の生存能力を確認</li><li>コロニーカウンターを用いて、プレート上の細菌コロニーをカウントし、テストした懸濁液中の細菌の力価を計算します。最終濃度が1×10 8 CFU / PBS中のmlの細菌懸濁液を準備します。 </li></ol> 2.動物<ol><li> 300グラム - 32オスのSprague-Dawleyラット（250を使用します）。標準のペレット餌と水に自由にアクセスできる特定の病原体を含まない条件下で動物を維持します。平均温度（21±1 O℃）、湿度（50±5％）と12時間の明暗サイクルを確立します。 </li></ol> 3.実験計画<ol><li>順化の2日後、強制経口投与11により、動物の治療を開始します。強制経口投与針で注射器を使用してください。 Bで16匹のラットを扱いますズブチリス BSB3懸濁液（ラット当たり1ミリリットル）2日間一日二回（ 枯草菌群 ）。 PBSで16匹のラットの治療（ラット当たり1ミリリットル）一日二回2日間（PBS群）（図1）。 </li><li>グループ1-コントロール（PBS /ストレス無し）、グループ2位B.：処理後、各グループ（グループ当たり8匹のラット）を細分化枯草菌 （ 枯草菌 /ストレスなし）、グループ、3-ストレス（PBS /熱ストレス）とグループの4- B.枯草菌 +ストレス（ 枯草菌 /熱ストレス）。 </li><li> ELECを使用して、各ラットの直腸温度を測定デジタル温度計をTRONIC。 25分間室温でグループ1と2のラットを保管してください。 25分間、45 O Cと相対湿度55％での人工気象室に入れグループ3と4の動物を。 </li><li>その後、電子デジタル体温計を使用して、すべてのグループ内の各ラットの直腸温度を測定します。 4時間室温ですべての動物を配置します。 </li><li>密閉可能な麻酔ジャー中 - （4％2）とラットを深く（つま先のピンチへの応答の欠如）を麻酔されるまで観察イソフルランでラットを麻酔。ギロチンで迅速な断頭によりラットを安楽死させます。 </li><li>血清を取得し、すぐに顕微鏡検査のためのピペットを用いて血液のサンプル（各ラットから7μl）を取るために非発熱性のチューブに非発熱性ピペットで- （16ミリリットル15）各ラット20からトランク血液を採取します。 </li><li>凝固を可能にするために、少なくとも30分間、冷蔵庫で血液を試験管に入れてください。 20°Cの時の遠心分離管、7,000×gで10分間、迅速にピペットで血清を除去。一定分量の血清をアッセイまで-20 O Cで50μlのボリュームとストアに各ラットから得られました。 </li></ol> 4.手術手順<ol><li>カット/電気ハサミでカーカスの下の腹部と胸部からすべての毛皮をトリミング。滅菌キャビネットにカーカスを配置し、70％アルコールでカーカスの毛を剃っ表面を処理。 </li><li>腹部の正中切開を作成するために、滅菌メスを使用してください。滅菌ピンセットを用いて、各ラットから肝臓、腸間膜リンパ節、脾臓、および小腸を削除します。 </li></ol>細菌転移の5分析<ol><li>予め秤量した滅菌チューブに肝臓、腸間膜リンパ節および脾臓の各サンプルを置き、重量を量ります。サンプルとチューブの重量と空のチューブの重量の差として試料の重量を計算します。 </li><li> 1:10希釈液を得るためにチューブに無菌PBSを加える（w / v）のサンプルとhomoge均一な懸濁液21を得るために、滅菌ガラス組織ホモジナイザーで各サンプルをnize。 </li><li>滅菌PBSで各サンプルの連続希釈（10 -1〜10 -4）を作成します。プレートヘミン（0.005グラム/ L）とビタミンK1（0.01グラム/ L）プレートとマッコンキーの表面および5％血液寒天とブルセラ血液寒天上に各組織のすべての希釈の0.1ミリリットル。 </li><li> 37°Cの 22で嫌気性条件下マッコンキー、5％血液寒天プレート好気的およびブルセラ血液寒天プレートをインキュベートします。 </li><li> 24時間後に好気性細菌のコロニー、およびコロニーカウンターを用いて、インキュベーションの48時間後の嫌気性細菌のコロニーを数えます。組織のグラムでのコロニー形成単位（CFU）の数として結果を表しています。 </li></ol> 6.組織学的解析<ol><li> （ - 4.2 4.1ステップ）、外科的処置によって、各ラットから小腸サンプルを削除します。ブアン固定液、パラフィン中に埋め込み、内のサンプルを修正しました。標準的な手順23を使用して、ヘマトキシリンおよびエオシンで6μmのセクションおよび染色切片を作製。 </li><li>各サンプル（倍率100X）24で腸絨毛と総粘膜の厚さの高さを測定するための高解像度の顕微鏡システムを使用してください。各ラットからの4つのサンプルを分析し、各試料中の少なくとも20の測定を行います。マイクロメートルで結果を表現します。 </li></ol> 7.サイトカインアッセイ<ol><li> IL-1βのための商業用ラットのELISAキットを使用します。 IL-6。 TNF-α;製造業者のプロトコールに従って血清中のサイトカインのレベルを測定するためのINF-γ、およびIL-10。 </li><li>関連するキットの標準を使用してアッセイしたサンプルの各セットのための標準曲線を生成します。適切な標準曲線と実験データを比較することにより、各サンプル中のサイトカインのレベルを定義します。 </li></ol> 8.リポ多糖アッセイ<ol><li>に従ってラットLPS ELISAキットを用いて血清中のLPSのレベルを分析製造業者のプロトコル。標準曲線の値で得られた値と比較することにより試料中のLPSの濃度を推定します。 </li></ol>血液の9高解像度光学顕微鏡<ol><li>以前に25,26説明した顕微鏡システムを使用してください。ライブ画像を記録する顕微鏡システムの基本とビデオカメラとコンピュータ25として防振プラットフォームを使用します。以前に27を説明したようにリチャードソンのスライドを使用してテスト画像を調整します。 </li><li>スライドガラス、カバーガラス、写真上の各ラットから新たに採取した血液の7μLを置 ​​き、各サンプル（倍率1,700X）で72×53.3ミクロン2の10の画像フレームを記録します。 </li><li>リアルタイムで高解像度の直視光学像を提供するソフトウェアを使用して、小胞の濃度を測定します。各実験条件28のための20の画像フレームの最小値を調べます。 </li></ol> 10. STATISチック<ol><li>平均と標準偏差としてすべての値を表現します。統計分析とグラフ描画を実行します。 2標本t検定を用いた結果を分析し、統計的有意性を定義するために0.05で有意水準を設定します。 </li></ol>

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M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prebiotics+and+Probiotics:+Their+Role+in+the+Management+of+Gastrointestinal+Disorders+in+Adults.">Prebiotics and Probiotics: Their Role in the Management of Gastrointestinal Disorders in Adults.</a> Nutr Clin Pract. 27, 195-200 (2012).</li><li>Gore, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Treatment+and+secondary+prevention+effects+of+the+probiotics+Lactobacillus+paracasei+or+Bifidobacterium+lactis+on+early+infant+eczema:+randomized+controlled+trial+with+follow-up+until+age+3+years.">Treatment and secondary prevention effects of the probiotics Lactobacillus paracasei or Bifidobacterium lactis on early infant eczema: randomized controlled trial with follow-up until age 3 years.</a> Clin Exp Allergy. 42, 112-122 (2012).</li><li>Gomes, A. 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M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Test+slides:+Diatoms+to+divisions-What+are+you+looking+at.">Test slides: Diatoms to divisions-What are you looking at.</a> Proc Roy Microsc Soc. 22, 3-9 (1988).</li><li>Moore, T., Sorokulova, I., Pustovyy, O., Globa, L., Vodyanoy, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microscopic+evaluation+of+vesicles+shed+by+rat+erythrocytes+at+elevated+temperatures.">Microscopic evaluation of vesicles shed by rat erythrocytes at elevated temperatures.</a> J Therm Biol. 38, 487-492 (2013).</li><li>Leon, L. R., Helwig, B. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heat+stroke:+Role+of+the+systemic+inflammatory+response.">Heat stroke: Role of the systemic inflammatory response.</a> J. Appl. Physiol. 109, 1980-1988 (2010).</li><li>Kumar, Y., Chawla, A., Tatu, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heat+Shock+Protein+70+as+a+Biomarker+of+Heat+Stress+in+a+Simulated+Hot+Cockpit.">Heat Shock Protein 70 as a Biomarker of Heat Stress in a Simulated Hot Cockpit.</a> Aviat Space Env Med. 74 (7), 711-716 (2007).</li></ol>

著者は、彼らが競合する金融利害関係を持たないことを宣言します。

深刻な健康状態29内の高温の結果への暴露。予防と熱ストレスに関連する合併症の早期発見は極めて重要30です。 提示されたプロトコルは、熱ストレスの有害作用の防止のための様々なアプローチの有効性を評価するために使用することができます。 このプロトコル内の重要なステップは次のとおり熱処理手順（45°Cの 、25分）。エンテロトキシンによる汚染を防止するために、血液の収集および処理の間に非発熱性の材料の使用。凍結融解の繰り返しを避けるために、-20 O Cに血清のアリコートを保持します。および細菌転移の解析中に、滅菌手順を以下に示します。プロトコルは、熱ストレスの副作用の防止のための細菌とラットの経口治療のために設立されました。投与および他の化合物の他の経路については、このプロトコルを修正することができます。 TRの例について、時間熱ストレス前eatmentを延ばすことができます。経口投与、直腸投与に変更することができる。 枯草菌は、高温への曝露の前に、動物の経口治療による熱応力合併症の予防のために使用しました。熱応力の合併症を治療するために、このプロトコルは、熱への暴露後の動物の治療のための細菌の使用によって、改変することができます。 これは、体温の上昇は、赤血球の小胞の増加したことが示され、これは完全にB.で前処理することによって防止されましたサブチリス菌 。したがって、熱への暴露時に、血液中の小胞の濃度の増加は、熱ストレスのレベルを示し、赤血球の安定性や熱に対する耐性の診断の証拠を提供してもよいです。また、熱ストレス合併症に対する予防治療の有効性評価のために非常に有用かつ迅速なテストです。誘導O熱ストレスのマーカーとしてのFの熱ショックタンパク質は、先30を議論したが、この方法は時間がかかり、ストレスを加熱するために応答をリアルタイムで診断するために使用することができません。 熱ストレスの悪影響の防止のための提示のアプローチは単純で、費用効果的であり、追加の機器や特別な設備を必要としません。この作品の今後のアプリケーションは、熱ストレスの合併症に対する保護のメカニズムを理解し、この保護のための新しい手順を特徴づけるのに役立ちます。激しい屋外身体活動29中に熱中症のリスクがある人のグループ-このメソッドは、道路の労働者、軍人、アスリートのために重要です。提案されたアプローチは1つが熱ストレスのレベルを調べるために、極端な条件で働く人々の健康を守るために様々な方法を評価することができます。

Different stressors affect human and animal health. Temperature is one of the most stressful factors, causing chronic, acute and even lethal illnesses1. Changes in intestinal morphology and a loss of gut barrier integrity after heat stress were documented in many cases2,3. This protective barrier is responsible for defense against translocation of gut bacteria and their toxins, in particular lipopolysaccharides (LPS), from the lumen to the internal circulation4,5. Stability of the gut microbiota significantly influences intestinal barrier function, the immune response of the host, and tolerance to stress conditions6. Thus, modulation of the intestinal microbiota can provide a novel approach for prevention of stress-related adverse effects. 
Beneficial bacteria have been used as a promising strategy to modify the gut microbiota for successful management of various clinical conditions, such as diarrhea, inflammatory bowel disease, atopic dermatitis, metabolic disorders7-10. Probiotic effects of beneficial bacteria include production of essential metabolites to support intestinal health, stimulation of the immune system, promotion of lactose tolerance, restoration of epithelial dysfunction. Probiotics were effective in prevention of the stress-related complications in vitro and in animal models11,12. 
Researchers have given more attention to Bacillus bacteria as probiotics because these bacteria support intestinal homeostasis13 and have beneficial effects on the host14. Our previous data demonstrated high efficacy of Bacillus probiotics against pathogens in vitro15,16 and in clinical trials17,18. Here, we aim to evaluate the preventive effect of B. subtilis BSB3 strain against complications after heat stress.

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<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td rowspan="2">Phosphate buffered saline (PBS)</td>
			<td>Sigma-Aldrich,&#160;St. Louis, MO</td>
			<td rowspan="2">P4417</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethyl Alcohol&#160;</td>
			<td>Pharmco products Inc. Brookfield, CT, USA&#160;</td>
			<td>64-17-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agar</td>
			<td>VWR</td>
			<td>97064-334</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MacConkey agar plates</td>
			<td>VWR</td>
			<td>470180-742</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5% blood agar plates</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89405-024</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brucella blood with Hemin, and Vitamin K, 
			&#160;plates</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89405-032</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bouin&#8217;s Fixative</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences, Hatfield, PA, USA</td>
			<td>15990</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IL-10 Rat ELISA kit</td>
			<td>Invitrogen, Camarillo, CA, USA</td>
			<td>KRC0101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IL-1beta Rat ELISA Kit</td>
			<td>Invitrogen, Camarillo, CA, USA</td>
			<td>KRC0011</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IL-6 Rat ELISA Kit</td>
			<td>Invitrogen, Camarillo, CA, USA</td>
			<td>KRC0061</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>INF-gamma Rat ELISA Kit</td>
			<td>Invitrogen, Camarillo, CA, USA</td>
			<td>KRC4021</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TNF-alpha Rat ELISA Kit</td>
			<td>Invitrogen, Camarillo, CA, USA</td>
			<td>KRC3011</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rat LPS ELISA Kit</td>
			<td>NeoBioLab, MA, USA</td>
			<td>RL0275</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Environmental Chamber 6020-1</td>
			<td>Caron, Marietta, OH, USA</td>
			<td>6020-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td rowspan="2">Centrifuge&#160;</td>
			<td rowspan="2">Beckman Coulter, Indianapolis, IN, USA</td>
			<td>Optima L-90K</td>
			<td rowspan="2"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultra Centrifuge</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Light microscope optical system</td>
			<td>CitoViva Technology Inc., Auburn, AL</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Colony counter</td>
			<td>Fisher Scientific , Pittsburgh, PA, USA</td>
			<td>RE-3325</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Freezer</td>
			<td>Haier, Brooklyn, NY, USA</td>
			<td>HCMO50LA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultra microplate reader</td>
			<td>Bio-Tek Instrument, Winooski, VT, USA</td>
			<td>ELx 808</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Auto Strip Washer</td>
			<td>Bio-Tek Instrument, Winooski, VT, USA</td>
			<td>ELx50</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipettes</td>
			<td>Gilson, Pipetman, France</td>
			<td>P100, P200, P1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C24 Incubator Shaker</td>
			<td>New Brunswick Scientific, Enfield, CT, USA</td>
			<td>Classic C24</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rocking Shaker&#160;</td>
			<td>Reliable Scientific, Inc., Nesbit, MS, USA</td>
			<td>55</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dishes</td>
			<td>Fisher Scientific, Pittsburgh, PA, USA</td>
			<td>875713</td>
			<td>100mmX15mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SterilGard III Advance</td>
			<td>The Baker Company, Sanford, ME, USA</td>
			<td>SG403</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Culture Growing Flasks</td>
			<td>Corning Incorporated, Corning, NY, USA</td>
			<td>4995</td>
			<td>PYREX 250mL Erlenmeyer flasks</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Optical Spectrometer Genesys 20</td>
			<td>Thermo Scientific, Waltham, MA, USA.</td>
			<td>4001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sony DXC-33 Video camera</td>
			<td>Sony</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Richardson test slide</td>
			<td>Electron Microscopy Science, Hatfield, PA, USA</td>
			<td>80303</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Millipore water purification system</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>Direct-Q</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Image-Pro Plus software</td>
			<td>Media Cybernetics, MD, USA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triple Beam Balance</td>
			<td>OHAUS Corporation, Parsippany, NJ, USA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td rowspan="3">Tissue Homogenizer, Dounce</td>
			<td rowspan="3">VWR</td>
			<td rowspan="3">71000-518</td>
			<td rowspan="3"></td>
		</tr>
		<tr>
		</tr>
		<tr>
		</tr>
	</tbody>
</table>

prevention of heat stress adverse effects in rats by bacillus subtilis strain

この研究は、熱ストレスに関連する合併症に対するバチルス・ズブチリス株の保護効果を評価するために設計しました。 32個のSprague-Dawleyラットをこの研究で使用しました。動物は、経口Bとの 2日間、1日2回処理しました。 サブチリス BSB3株またはPBS。最後の処置後の翌日、各グループを分割し、2つの実験群（PBS及び枯草菌で処理したものと処理したもの）25分間、45°Cのに置きました。 2つの対照群は、室温で25分間滞在しました。全てのラットを安楽死させ、別のパラメータは、すべての群で分析しました。熱ストレスの悪影響が絨毛の高さと腸上皮における総粘膜の厚さの減少により登録されています。内腔からの細菌の転。赤血球および血液中のリポ多糖（LPS）レベルの上昇の小胞形成を増加させました。治療の予防効果は、事前によって評価されますこれらの副作用の発明。プロトコルは、熱ストレスの合併症の予防のための細菌とラットの経口治療のために設立されたが、このプロトコルは、他の投与経路のために、異なる化合物の分析のために修正して使用することができます。

熱ストレス前後とすぐに動物の平均体温は、それぞれ36.7±0.07 O Cと40.3±0.17°Cの 、（P &lt;0.05）でした。熱への暴露ラット（群3）は、絨毛の高さおよび全粘膜の厚さ（図2、図3）の有意な阻害をもたらしました。ストレス前BSB3株の経口投与は、熱の有害な影響から腸を保護しました。 腸からの細菌のトランスロケーションは、腸間膜リンパ節（MLN）、各ラットの肝臓および脾臓の細菌学的分析により決定しました。 1.7×10 3±4.6×10 2 CFU / g組織（図4）の濃度の細菌培養をPBSで前処理し、熱（グループ3）にさらさのみMLNから単離され、ラットの肝臓でした。対照ラット（グループ1、2）からと熱ストレスを受けた動物からの全ての試験されたサンプル滅菌したBSB3株（グループ4）を受けました。いいえ細菌は脾臓サンプルから単離されませんでした。 IL-1βの変更はありません。 IL-6、TNF-αは、INF-Γのサイトカインレベルは、熱ストレスを受けたラットに登録されました。 IL-10及びLPSレベルの熱暴露有意な上昇の前にPBSで処置した動物の血清中に見出された（グループ3） - （ 図5、図6）。 B.による前処理枯草菌 BSB3（グループ4）は、熱ストレスを受けた動物の血清中のIL-10及びLPSの上昇を防止しました。 （1.4±0.2）から無料で小胞の濃度の有意な増加は（3.8±0.3）に10 6×μlの10 6小胞-1（P &lt;0.001）は、熱ストレスの前にPBSを受けたラットの血液中に見出された（図7を × 、8）。 BSB3で前処理した動物の群では無料の小胞の数に変化は後方に見られませんでしたER熱暴露（図7）。 <img alt="図1" src="/files/ftp_upload/54122/54122fig1.jpg" /> 図1.研究デザイン。ラットの二つのグループ（各グループの16匹のラット）Bと強制経口投与によって治療されましたズブチリス BSB3（ 枯草菌群 ）または一日二回PBS（PBS群）を持ちます。 3日目に、各グループは、各グループ内の8匹のラットによって細分されました。群3および4からのラットを25分間、45°Cのに置きました。対照動物（グループ1および2）を室温で維持した。 <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/54122/54122fig1large.jpg" target="_blank">この図の拡大版をご覧になるにはこちらをクリックしてください。</a> <img alt="図2" src="/files/ftp_upload/54122/54122fig2.jpg" /> ラットにおける図2腸絨毛の高さ（A）の測定と粘膜の厚さ（B）ラットをPBSで前処理または枯草菌 BSB3は45°Cの （ストレス）または室温（コントロール）に暴露しました。各群は、8匹のラットから成りました。各試料の各パラメータの二十の測定値を採取しました。値は、平均値と標準偏差として提示されています。結果は統計的有意性を定義するには有意水準0.05での2標本t検定を用いて分析した。 <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/54122/54122fig2large.jpg" target="_blank">この図の拡大版をご覧になるにはこちらをクリックしてください。</a> <img alt="図3" src="/files/ftp_upload/54122/54122fig3.jpg" /> ヘマトキシリン及びエオシンラットで腸粘膜染色の 図3. 組織学的画像は、PBSまたはBで前処理しましたサブチリス BSB3と45°Cの （ストレス）または室温（コントロール）にさらさA. PBS /ノーストレス; B. PBS /熱ストレス; C。B.枯草菌 /ノーストレス; D. B.サブチリス /熱ストレス。絨毛高さは、矢印で示されています。 200μmでバー。 <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/54122/54122fig3large.jpg" target="_blank">この図の拡大版をご覧になるにはこちらをクリックしてください。</a> <img alt="図4" src="/files/ftp_upload/54122/54122fig4.jpg" /> ラットの組織中の細菌の 図4. 総数。ラットPBSまたはBで前処理サブチリス BSB3は、45°Cの （ストレス）または室温（コントロール）に暴露しました。各群は、8匹のラットから成りました。腸間膜リンパ節、肝臓、および脾臓を無菌的に、各ラットから取り出し均質化し、好気性および嫌気性細菌を回収するために、寒天培地上にプレーティングしました。転位細菌（好気性および嫌気性）の総数は、組織のグラムあたりのコロニー形成単位（CFU）として提示されます。値は以下のように提示されています<html>平均値と標準偏差。 <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/54122/54122fig4large.jpg" target="_blank">この図の拡大版をご覧になるにはこちらをクリックしてください。</a> <img alt="図5" src="/files/ftp_upload/54122/54122fig5.jpg" /> ラットの血清中のIL-10の 図5 レベルラット PBSまたはBで前処理サブチリス BSB3は、45°Cの （ストレス）または室温（コントロール）に暴露しました。各群は、8匹のラットから成りました。血清を各ラットから得られ、商業ラットELISAキットで分析しました。値は、平均値と標準偏差として提示されています。結果は統計的有意性を定義するには有意水準0.05での2標本t検定を用いて分析した。 <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/54122/54122fig5large.jpg" target="_blank">この図の拡大版をご覧になるにはこちらをクリックしてください。</a> 1 &quot;&gt;：&quot; =キープtogether.within-ページFO」10トン<img alt="図6" src="/files/ftp_upload/54122/54122fig6.jpg" /> ラットの血清中の 図6 のLPS濃度ラット PBSまたはBで前処理サブチリス BSB3は、45°Cの （ストレス）または室温（コントロール）に暴露しました。各群は、8匹のラットから成りました。血清を各ラットから得られ、商業ラットELISAキットで分析しました。値は、平均値と標準偏差として提示されています。結果は統計的有意性を定義するには有意水準0.05での2標本t検定を用いて分析した。 <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/54122/54122fig6large.jpg" target="_blank">この図の拡大版をご覧になるにはこちらをクリックしてください。</a> <img alt="図7" src="/files/ftp_upload/54122/54122fig7.jpg" /> ラットの血液中の小胞の 図7. 数。ラット前処理されましたPBSまたはBとサブチリス BSB3は、45°Cの （ストレス）または室温（コントロール）に暴露しました。新たに採取した血液の小滴（7μl）を各サンプル（倍率1,700X）に10画像フレームを、スライドガラス上に載置されたカバーガラスを、撮影して記録しました。小胞の濃度をリアルタイムで高解像度の直視光学像を提供するソフトウェアを使用して測定しました。二十の画像フレームは、各実験条件について調べました。値は、平均値と標準偏差として提示されています。結果は統計的有意性を定義するには有意水準0.05での2標本t検定を用いて分析した。 <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/54122/54122fig7large.jpg" target="_blank">この図の拡大版をご覧になるにはこちらをクリックしてください。</a> <img alt="図8" src="/files/ftp_upload/54122/54122fig8.jpg" /> Veとの 図8. 増加熱ストレス後の血中sicles濃度。室温（A）または45°Cの （B）への曝露の前にPBSで前処理したラットの血液のビデオ画像。新たに採取した血液の小滴（7μl）を各サンプル（倍率1,700X）に10画像フレームを、スライドガラス上に載置されたカバーガラスを、撮影して記録しました。小胞はV.バー6ミクロンとして示されている。 <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/54122/54122fig8large.jpg" target="_blank">この図の拡大版をご覧になるにはこちらをクリックしてください。</a>

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Prevention of Heat Stress Adverse Effects in Rats by Bacillus subtilis Strain

We described a protocol for prevention of heat stress effects in rats by oral pre-treatment with beneficial bacteria. This protocol can be modified and used for various routes of administration and for analysis of different compounds.

熱の予防によりラットに悪影響をストレス<em&gt;枯草菌</em&gt;ひずみ

This study was designed to evaluate the protective effect of the Bacillus subtilis strain against complications related to heat stress. Thirty-two ...

prevention-heat-stress-adverse-effects-rats-bacillus-subtilis

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Prevention of Heat Stress Adverse Effects in Rats by Bacillus subtilis Strain

7.4K ビュー.  Auburn University. We described a protocol for prevention of heat stress effects in rats by oral pre-treatment with beneficial bacteria. This protocol can be modified and used for various routes of administration and for analysis of different compounds.

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Orthotopic Hind-Limb Transplantation in Rats

Composite tissue allotransplantation (CTA) now represents a valid therapeutic option after the loss of a hand, forearm or digits and has become a novel therapeutic entity in reconstructive surgery. However, long term high-dose multi-drug immunosuppressive therapy is required to ensure graft survival, bearing the risk of serious side effects which halters broader application. Further progression in this field may depend on better understanding of basic immunology and ischemia reperfusion injury in composite tissue grafts.
To date, orthotopic hind limb transplantation in rats has been the preferred rodent model for reconstructive transplantation (RT), however, it is an extremely demanding procedure that requires extraordinary microsurgical skills for reattachment of vasculature, bones, muscles and nerves.
We have introduced the vascular cuff anastomosis technique to this model, providing a rapid and reliable approach to rat hind limb transplantation. This technique simplifies and shortens the surgical procedure and enables surgeons with basic microsurgical experience to successfully perform the operation with high survival and low complication rates. The technique seems to be well suited for immunological as well as ischemia reperfusion injury (IRI) studies.

Here we describe the orthotopic rat hind-limb transplantation procedure, which seems to be the gold standard in vivo model for composite tissue allotransplantation research.

ラット同所性後肢移植

Composite tissue allotransplantation (CTA) now represents a valid therapeutic option after the loss of a hand, forearm or digits and has become a novel ...

免疫・感染学

Live Cell Imaging of Bacillus subtilis and Streptococcus pneumoniae using Automated Time-lapse Microscopy

During the last few years scientists became increasingly aware that average data obtained from microbial population based experiments are not representative of the behavior, status or phenotype of single cells. Due to this new insight the number of single cell studies rises continuously (for recent reviews see 1,2,3). However, many of the single cell techniques applied do not allow monitoring the development and behavior of one specific single cell in time (e.g. flow cytometry or standard microscopy).
Here, we provide a detailed description of a microscopy method used in several recent studies 4, 5, 6, 7, which allows following and recording (fluorescence of) individual bacterial cells of Bacillus subtilis and Streptococcus pneumoniae through growth and division for many generations. The resulting movies can be used to construct phylogenetic lineage trees by tracing back the history of a single cell within a population that originated from one common ancestor. This time-lapse fluorescence microscopy method cannot only be used to investigate growth, division and differentiation of individual cells, but also to analyze the effect of cell history and ancestry on specific cellular behavior. Furthermore, time-lapse microscopy is ideally suited to examine gene expression dynamics and protein localization during the bacterial cell cycle. The method explains how to prepare the bacterial cells and construct the microscope slide to enable the outgrowth of single cells into a microcolony. In short, single cells are spotted on a semi-solid surface consisting of growth medium supplemented with agarose on which they grow and divide under a fluorescence microscope within a temperature controlled environmental chamber. Images are captured at specific intervals and are later analyzed using the open source software ImageJ.

Live Cell Imaging of Bacillus subtilis and Streptococcus pneumoniae using Automated Time-lapse Microscopy

This protocol provides a step-by-step procedure to monitor single cell behavior of different bacteria in time using automated fluorescence time-lapse microscopy. Furthermore, we provide guidelines how to analyze the microscopy images.

の生細胞イメージング枯草菌と肺炎球菌自動タイムラプス顕微鏡を使用して

During the last few years scientists became increasingly aware that average data obtained from microbial population based experiments are not ...

Introducing Shear Stress in the Study of Bacterial Adhesion

During bacterial infections a sequence of interactions occur between the pathogen and its host. Bacterial adhesion to the host cell surface is often the initial and determining step of the pathogenesis. Although experimentally adhesion is mostly studied in static conditions adhesion actually takes place in the presence of flowing liquid. First encounters between bacteria and their host often occur at the mucosal level, mouth, lung, gut, eye, etc. where mucus flows along the surface of epithelial cells. Later in infection, pathogens occasionally access the blood circulation causing life-threatening illnesses such as septicemia, sepsis and meningitis. A defining feature of these infections is the ability of these pathogens to interact with endothelial cells in presence of circulating blood. The presence of flowing liquid, mucus or blood for instance, determines adhesion because it generates a mechanical force on the pathogen. To characterize the effect of flowing liquid one usually refers to the notion of shear stress, which is the tangential force exerted per unit area by a fluid moving near a stationary wall, expressed in dynes/cm2. Intensities of shear stress vary widely according to the different vessels type, size, organ, location etc. (0-100 dynes/cm2). Circulation in capillaries can reach very low shear stress values and even temporarily stop during periods ranging between a few seconds to several minutes 1. On the other end of the spectrum shear stress in arterioles can reach 100 dynes/cm2 2. The impact of shear stress on different biological processes has been clearly demonstrated as for instance during the interaction of leukocytes with the endothelium 3. To take into account this mechanical parameter in the process of bacterial adhesion we took advantage of an experimental procedure based on the use of a disposable flow chamber 4. Host cells are grown in the flow chamber and fluorescent bacteria are introduced in the flow controlled by a syringe pump. We initially focused our investigations on the bacterial pathogen Neisseria meningitidis, a Gram-negative bacterium responsible for septicemia and meningitis. The procedure described here allowed us to study the impact of shear stress on the ability of the bacteria to: adhere to cells 1, to proliferate on the cell surface 5and to detach to colonize new sites 6 (Figure 1). Complementary technical information can be found in reference 7. Shear stress values presented here were chosen based on our previous experience1 and to represent values found in the literature. The protocol should be applicable to a wide range of pathogens with specific adjustments depending on the objectives of the study.

During the infection process, a key step is the adhesion of pathogens with host cells. In most instances this adhesion step occurs in the presence of mechanical stress generated by flowing liquid. We describe a technique that introduces shear stress as an important parameter in the study of bacterial adhesion.

細菌付着の研究ではせん断応力を導入する

During bacterial infections a sequence of interactions occur between the pathogen and its host. Bacterial adhesion to the host cell surface is often the ...

Single-cell Analysis of Bacillus subtilis Biofilms Using Fluorescence Microscopy and Flow Cytometry

Biofilm formation is a general attribute to almost all bacteria 1-6. When bacteria form biofilms, cells are encased in extracellular matrix that is mostly constituted by proteins and exopolysaccharides, among other factors 7-10. The microbial community encased within the biofilm often shows the differentiation of distinct subpopulation of specialized cells 11-17. These subpopulations coexist and often show spatial and temporal organization within the biofilm 18-21.
Biofilm formation in the model organism Bacillus subtilis requires the differentiation of distinct subpopulations of specialized cells. Among them, the subpopulation of matrix producers, responsible to produce and secrete the extracellular matrix of the biofilm is essential for biofilm formation 11,19. Hence, differentiation of matrix producers is a hallmark of biofilm formation in B. subtilis.
We have used fluorescent reporters to visualize and quantify the subpopulation of matrix producers in biofilms of B. subtilis 15,19,22-24. Concretely, we have observed that the subpopulation of matrix producers differentiates in response to the presence of self-produced extracellular signal surfactin 25. Interestingly, surfactin is produced by a subpopulation of specialized cells different from the subpopulation of matrix producers 15.
We have detailed in this report the technical approach necessary to visualize and quantify the subpopulation of matrix producers and surfactin producers within the biofilms of B. subtilis. To do this, fluorescent reporters of genes required for matrix production and surfactin production are inserted into the chromosome of B. subtilis. Reporters are expressed only in a subpopulation of specialized cells. Then, the subpopulations can be monitored using fluorescence microscopy and flow cytometry (See Fig 1).
The fact that different subpopulations of specialized cells coexist within multicellular communities of bacteria gives us a different perspective about the regulation of gene expression in prokaryotes. This protocol addresses this phenomenon experimentally and it can be easily adapted to any other working model, to elucidate the molecular mechanisms underlying phenotypic heterogeneity within a microbial community.

Single-cell Analysis of Bacillus subtilis Biofilms Using Fluorescence Microscopy and Flow Cytometry

Microbial biofilms are generally constituted by distinct subpopulations of specialized cells. Single-cell analysis of these subpopulations requires the use of fluorescent reporters. Here we describe a protocol to visualize and monitor several subpopulationswithin B. subtilis biofilms using fluorescence microscopy and flow cytometry.

の単一細胞解析枯草菌</em蛍光顕微鏡とフローサイトメトリーを用いて>バイオフィルム

Biofilm formation is a general attribute to almost all bacteria 1-6. When bacteria form biofilms, cells are encased in extracellular matrix that is mostly ...

Flow Cytometric Analysis of Particle-bound Bet v 1 Allergen in PM10

Flow cytometry is a method widely used to quantify suspended solids such as cells or bacteria in a size range from 0.5 to several tens of micrometers in diameter. In addition to a characterization of forward and sideward scatter properties, it enables the use of fluorescent labeled markers like antibodies to detect respective structures. Using indirect antibody staining, flow cytometry is employed here to quantify birch pollen allergen (precisely Bet v 1)-loaded particles of 0.5 to 10 &#181;m in diameter in inhalable particulate matter (PM10, particle size &#8804;10 &#181;m in diameter). PM10 particles may act as carriers of adsorbed allergens possibly transporting them to the lower respiratory tract, where they could trigger allergic reactions.
So far the allergen content of PM10 has been studied by means of enzyme linked immunosorbent assays (ELISAs) and scanning electron microscopy. ELISA measures the dissolved and not the particle-bound allergen. Compared to scanning electron microscopy, which can visualize allergen-loaded particles, flow cytometry may additionally quantify them. As allergen content of ambient air can deviate from birch pollen count, allergic symptoms might perhaps correlate better with allergen exposure than with pollen count. In conjunction with clinical data, the presented method offers the opportunity to test in future experiments whether allergic reactions to birch pollen antigens are associated with the Bet v 1 allergen content of PM10 particles &#62;0.5 &#181;m.

Here, we present a protocol to quantify allergen-loaded particles by flow cytometry. Ambient particulate matter particles may act as carriers of adsorbed allergens. We show here that flow cytometry, a method widely used to characterize suspended solids &#62;0.5 &#181;m in diameter, can be used to measure these allergen-loaded particles.

PM10における粒子結合のBet V 1アレルゲンのフローサイトメトリー分析

Flow cytometry is a method widely used to quantify suspended solids such as cells or bacteria in a size range from 0.5 to several tens of micrometers in ...

Visualizing the Effects of Sputum on Biofilm Development Using a Chambered Coverglass Model

Biofilms consist of groups of bacteria encased in a self-secreted matrix. They play an important role in industrial contamination as well as in the development and persistence of many health related infections. One of the most well described and studied biofilms in human disease occurs in chronic pulmonary infection of cystic fibrosis patients. When studying biofilms in the context of the host, many factors can impact biofilm formation and development. In order to identify how host factors may affect biofilm formation and development, we used a static chambered coverglass method to grow biofilms in the presence of host-derived factors in the form of sputum supernatants. Bacteria are seeded into chambers and exposed to sputum filtrates. Following 48 hr of growth, biofilms are stained with a commercial biofilm viability kit prior to confocal microscopy and analysis. Following image acquisition, biofilm properties can be assessed using different software platforms. This method allows us to visualize key properties of biofilm growth in presence of different substances including antibiotics.

This protocol describes the visualization of biofilm development following exposure to host-factors using a slide chamber model. This model allows for direct visualization of biofilm development as well as analysis of biofilm parameters using computer software programs.

チェンカバーガラスモデルを用いたバイオフィルム開発に関する痰の効果を可視化

Biofilms consist of groups of bacteria encased in a self-secreted matrix. They play an important role in industrial contamination as well as in the ...

Effects of Exposure of Formaldehyde to a Rat Model of Atopic Dermatitis Induced by Neonatal Capsaicin Treatment

Atopic dermatitis is chronically relapsing pruritic eczema and prevails around the world especially in developed countries. Complex interactions between genetic and environmental factors are known to play an important role in the pathophysiology of atopic dermatitis. However, we still lack a detailed picture of the pathogenesis of this disease. Thus, it is of importance to develop appropriate animal models for elucidating the progression of atopic dermatitis. Moreover, investigating the effect of environmental factors such as air pollutants on atopic dermatitis expands understanding of the disease. Here, we describe a method for inducing atopic dermatitis in rats with neonatal capsaicin treatment and a protocol for exposure of a constant concentration of formaldehyde to rats to reveal effects on the development of atopic dermatitis in infantile and adolescent periods. These protocols have been successfully applied to several experiments and can be used for other substances.

We describe here methods for neonatal capsaicin treatment to induce atopic dermatitis in rats and exposure of vaporized formaldehyde to investigate the effects of formaldehyde inhalation on atopic dermatitis.

新生児カプサイシン処置によるアトピー性皮膚炎のモデルラットにホルムアルデヒドの暴露の影響

Atopic dermatitis is chronically relapsing pruritic eczema and prevails around the world especially in developed countries. Complex interactions between ...

Measuring Influenza Neutralizing Antibody Responses to A(H3N2) Viruses in Human Sera by Microneutralization Assays Using MDCK-SIAT1 Cells

Neutralizing antibodies against hemagglutinin (HA) of influenza viruses are considered the main immune mechanism that correlates with protection for influenza infections. Microneutralization (MN) assays are often used to measure neutralizing antibody responses in human sera after influenza vaccination or infection. Madine Darby Canine Kidney (MDCK) cells are the commonly used cell substrate for MN assays. However, currently circulating 3C.2a and 3C.3a A(H3N2) influenza viruses have acquired altered receptor binding specificity. The MDCK-SIAT1 cell line with increased &#945;-2,6 sialic galactose moieties on the surface has proven to provide improved infectivity and more faithful replications than conventional MDCK cells for these contemporary A(H3N2) viruses. Here, we describe a MN assay using MDCK-SIAT1 cells that has been optimized to quantify neutralizing antibody titers to these contemporary A(H3N2) viruses. In this protocol, heat inactivated sera containing neutralizing antibodies are first serially diluted, then incubated with 100 TCID50/well of influenza A(H3N2) viruses to allow antibodies in the sera to bind to the viruses. MDCK-SIAT1 cells are then added to the virus-antibody mixture, and incubated for 18 - 20 h at 37 &#176;C, 5% CO2 to allow A(H3N2) viruses to infect MDCK-SIAT1 cells. After overnight incubation, plates are fixed and the amount of virus in each well is quantified by an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) using anti-influenza A nucleoprotein (NP) monoclonal antibodies. Neutralizing antibody titer is defined as the reciprocal of the highest serum dilution that provides &#8805;50% inhibition of virus infectivity.

Measuring Influenza Neutralizing Antibody Responses to AH3N2 Viruses in Human Sera by Microneutralization Assays Using MDCK-SIAT1 Cells

Influenza neutralizing antibodies correlate with protection of influenza infections. Microneutralization assays measure neutralizing antibodies in human sera and are often used for influenza human serology. We describe a microneutralization assay using MDCK-SIAT1 cells to measure neutralizing antibody titers to contemporary 3C.2a and 3C.3a A(H3N2) viruses following influenza vaccination or infection.

試金を使用して SIAT1 MDCK 細胞のインフルエンザ a (h3n2) ウイルス中和によるひと血清中の抗体を中和することを測定

Neutralizing antibodies against hemagglutinin (HA) of influenza viruses are considered the main immune mechanism that correlates with protection for ...

Isolation of Salmonella typhimurium-containing Phagosomes from Macrophages

Salmonella typhimurium is a facultative intracellular bacterium that causes gastroenteritis in humans. After invasion of the lamina propria, S. typhimurium bacteria are quickly detected and phagocytized by macrophages, and contained in vesicles known as phagosomes in order to be degraded. Isolation of S. typhimurium-containing phagosomes have been widely used to study how S. typhimurium infection alters the process of phagosome maturation to prevent bacterial degradation. Classically, the isolation of bacteria-containing phagosomes has been performed by sucrose gradient centrifugation. However, this process is time-consuming, and requires specialized equipment and a certain degree of dexterity. Described here is a simple and quick method for the isolation of S. typhimurium-containing phagosomes from macrophages by coating the bacteria with biotin-streptavidin-conjugated magnetic beads. Phagosomes obtained by this method can be suspended in any buffer of choice, allowing the utilization of isolated phagosomes for a broad range of assays, such as protein, metabolite, and lipid analysis. In summary, this method for the isolation of S. typhimurium-containing phagosomes is specific, efficient, rapid, requires minimum equipment, and is more versatile than the classical method of isolation by sucrose gradient-ultracentrifugation.

Isolation of Salmonella typhimurium-containing Phagosomes from Macrophages

We describe here a simple and quick method for the isolation of Salmonella typhimurium-containing phagosomes from macrophages by coating the bacteria with biotin and streptavidin.

サルモネラの分離-大食細胞のファゴゾームを含む

Salmonella typhimurium is a facultative intracellular bacterium that causes gastroenteritis in humans. After invasion of the lamina propria, S. ...

Assessment of the Cytotoxic and Immunomodulatory Effects of Substances in Human Precision-cut Lung Slices

Respiratory diseases in their broad diversity need appropriate model systems to understand the underlying mechanisms and enable development of new therapeutics. Additionally, registration of new substances requires appropriate risk assessment with adequate testing systems to avoid the risk of individuals being harmed, for example, in the working environment. Such risk assessments are usually conducted in animal studies. In view of the 3Rs principle and public skepticism against animal experiments, human alternative methods, such as precision-cut lung slices (PCLS), have been evolving. The present paper describes the ex vivo technique of human PCLS to study the immunomodulatory potential of low-molecular-weight substances, such as ammonium hexachloroplatinate (HClPt). Measured endpoints include viability and local respiratory inflammation, marked by altered secretion of cytokines and chemokines. Pro-inflammatory cytokines, tumor necrosis factor alpha (TNF-&#945;), and interleukin 1 alpha (IL-1&#945;) were significantly increased in human PCLS after exposure to a sub-toxic concentration of HClPt. Even though the technique of PCLS has been substantially optimized over the past decades, its applicability for the testing of immunomodulation is still in development. Therefore, the results presented here are preliminary, even though they show the potential of human PCLS as a valuable tool in respiratory research.

In view of the 3Rs principle, respiratory models as alternatives to animal studies are evolving. Especially for risk assessment of respiratory substances, there is a lack of appropriate assays. Here, we describe the use of human precision-cut lung slices for the assessment of airborne substances.

熱の予防によりラットに悪影響をストレス

要約

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ラット同所性後肢移植

の生細胞イメージング枯草菌と肺炎球菌自動タイムラプス顕微鏡を使用して

細菌付着の研究ではせん断応力を導入する

の単一細胞解析枯草菌バイオフィルム

PM10における粒子結合のBet V 1アレルゲンのフローサイトメトリー分析

チェンカバーガラスモデルを用いたバイオフィルム開発に関する痰の効果を可視化

新生児カプサイシン処置によるアトピー性皮膚炎のモデルラットにホルムアルデヒドの暴露の影響

試金を使用して SIAT1 MDCK 細胞のインフルエンザ a (h3n2) ウイルス中和によるひと血清中の抗体を中和することを測定

サルモネラの分離-大食細胞のファゴゾームを含む

細胞毒性の評価と肺癌精密カットスライスで物質の免疫調節効果

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新生児カプサイシン処置によるアトピー性皮膚炎のモデルラットにホルムアルデヒドの暴露の影響

試金を使用して SIAT1 MDCK 細胞のインフルエンザ a (h3n2) ウイルス中和によるひと血清中の抗体を中和することを測定

サルモネラの分離-大食細胞のファゴゾームを含む

細胞毒性の評価と肺癌精密カット スライスで物質の免疫調節効果

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