We thank Rachelle Kanippayoor for her help in identifying the new wild-type strain as being of the melanogaster species. R.W.F, O.F. and A.F.S were responsible for research design; R.W.F, M.N. and O.F. performed the experiments. R.W.F, M.N., O.F. and A.F.S. analyzed the data; R.W.F., I.S.M. and A.F.S. wrote the manuscript. 
This work was supported by PSC-CUNY research awards, jointly funded by The Professional Staff Congress and The City University of New York to A.F.S.; by internal funding from Western University to A.F.S. and I.S.M.; by a training support from the National Alliance for Hispanic Health&#8217;s Alliance/Merck Ciencia (Science) Hispanic Scholars Program and a University Fellowship from the Yale Graduate School of Arts and Sciences to R.W.F.

社内で作成1.機器および試薬（他のためのマテリアルのリストを参照してください） <ol><li>フライ作業を実行するために、ショウジョウバエ冷たい麻酔装置を準備します。 <ol><li>小さなプラスチックの箱（10.2センチ幅12.7センチ）、ピペットチップボックスの一般的に、トップカバー（3.8センチメートル深い10.2センチ幅12.7センチ）を覆うように多孔質ポリエチレンシートをカット。 </li><li>砕いた氷の箱を埋める、多孔性ポリエチレンシートでカバーしています。 </li></ol></li><li> T-迷路装置を準備します。以前に詳細28-31に記載された装置を適応させる。 </li><li> 32は説明したように、フライアスピレーターを準備します。 </li><li>ストレスなくテストバイアルの内外ハエを変位させる走光性応答装置を準備します。 <ol><li> 29,33に記載されているように、向流装置を使用してください。 </li></ol></li></ol> NOTE：28によって記載されるようにT字型迷路はまた、他の目的に使用することができる。 <ol start="5"><li> HOMを確認してくださいogeneous照明条件は：白ベンチカバーで覆われたベンチに実験を行い、ホワイトボードの前に。 注：これらの実験のために、使用されるフライ株はショウジョウバエた野生型をキイロ ：カントン-S、オレゴン州とサマルカンドは、私たちの研究室のストックから34を飛ぶ。エルウッドハエはロングアイランド、ニューヨーク、米国で、ハンチントンのエルウッド周辺に秋2011年に収集した。 </li></ol> 2.実験前にハエの準備実験を行う前に1〜2日： <ol><li> 12時間の明/暗サイクルで25℃における標準コーンミール寒天 - 糖蜜 - 酵母媒体上のハエを維持します。 </li><li>実験を行うことに1〜2日前に風邪麻酔下のレスポンダハエを収集<ol><li>彼らは漏斗を用いて、50ミリリットルファルコンチューブに提起されている中でボトルからハエを転送します。 </li><li>に、氷のレベルの下のハエでファルコンチューブを置きます絶縁されたアイスバケット。 </li><li>冷却するで-4℃、砕いた氷と冷たい麻酔装置を配置します。 </li><li>ハエは寒さ昏睡を入力するための5分待ちます。 </li><li>冷たい麻酔装置の多孔質ポリエチレンシート上にハエを転送します。 </li><li>冷たい麻酔装置上​​のレスポンダハエを収集します。 RTで、実体顕微鏡下で、女性のハエから3-7日歳の男性を分離し、40のグループでこれらのハエを維持する。 </li></ol></li><li>実験を行うことに1〜2日前にエミッタハエを収集します。 <ol><li>静かにカントン-S混在セックスはその数をコントロールし、口の吸引器を使用して、彼らのボトルから飛ぶ集める。 </li><li>彼らはエミッタであるように、60〜100のグループでこれらのハエを維持します。 </li><li>データ点は、必要に応じて発光体のように多くのサンプルを準備します。 </li></ol></li><li>冷たい麻酔のいずれかの交絡影響を最小化するために、応答者およびエミッタの収集後の回復の少なくとも夜を許可する行動に、口アスピレーターコレクション。 </li><li>少なくとも1日実験前に、新鮮な空気に置き換えられるように袋に入れて古くなったプラスチック製の香りの空気を可能にするために、テスト用バイアルの袋を開きます。 </li></ol>実験を行う前に、2時間。 <ol start="6"><li>でも光で、実験が行われる室内の温度は約23-25​​℃であることを確認し、30％の上記の湿度。 </li><li>これらのハエが飢えていないことを確実にするために生鮮食品バイアルに応答者およびエミッタショウジョウバエを転送します。 </li><li>ショウジョウバエは、実験が実行される上のベンチに、2時間の環境に適応してみましょう。 </li></ol> 3.ソーシャル回避実験を行うこと<ol><li> Zeitgeber時間ZT5とZT9間午後3〜4時間の範囲で、一日の同じ時刻に、それぞれの実験を行います。 </li><li>ドキドキパッド上でT-迷路を置き、およびtので、ネジクリップを締め彼はエレベーター安定している。 </li><li>新鮮な試験バイアルにレスポンダハエを転送します。 T-迷路の上部に、レスポンダハエを含むこのバイアルをスナップ。 </li><li> T-迷路装置を傾斜し、ショウジョウバエがエレベーターに落ちるようにドキドキマットの上をタップします。 </li><li>ハエは、T-迷路の上部と下部の間にあるので、ダウンエレベーターの上部に移動しますが、選択点以上のエレベーターを維持するために注意を払う - 逃げるのハエを防ぐために。 </li><li> DSO（以前にハエによって占有されたDSOのないバイアルを生成するために、第5節を参照）のバイアルを取得します。 <ol><li>応答者のハエは、この新しい環境に適応しているが、試験バイアルにエミッタハエを配置。 </li><li>ミバエが逃げないように、バイアルを閉じるために綿の部分を置きます。 </li><li> 15秒間ボルテックスを5秒間ボルテックスからバイアルを取り外し、次のように機械的にミニ渦にこのバイアルを攪拌する。 55秒の合計3回繰り返します。 </li><li>レム食品バイアルに転送することによって - - エミッタOVE新鮮なバイアルから飛ぶとすぐにT-迷路装置の両側のいずれかにこのDSO満たされたバイアルを置く。 </li><li>それぞれの新しい目でDSO埋めバイアルの配置の側面を交互に。 </li></ol></li><li> T-迷路の反対側に新鮮な試験バイアルを置きます。 </li><li>ショウジョウバエは、新鮮な試験バイアルとDSOで試験バイアルの間で選択することができるように、完全にダウンしてエレベーターを持参し、タイマーを開始。 </li><li>特に断りのない限り、ハエは、1分間、新鮮なバイアルとDSOバイアルのいずれかを選択しましょう​​。 </li><li> 1分後、新鮮なバイアル、DSOバイアル、およびエレベーターの中で立ち往生ものでハエを分離するためにエレベーターを上に移動。 </li><li>各バイアルにハエの数をカウントし、エレベーターで。 </li><li>各遺伝子型/条件のためにこれを繰り返します。 </li></ol> 4.ソーシャル回避データの分析<ol><li>各ジュノのための各バイアルにミバエの数を数えYPE、およびスプレッドシートにデータを転送。 </li><li>表計算プログラムを使用して、DSOのないバイアル中のハエの数からDSOバイアルにハエの数を減算し、その後、ハエの総数で割ることによって、各遺伝子型のための性能指数（PI）を計算する。 </li><li>結果の分析のための統計解析ソフトを用いてPIは「手段の比較。 <ol><li>理想的には、各実験のための2-3内部反復、および3つの独立した繰り返しの準備、別のボトルで、異なる日に行わまたは30を横切る。 </li><li>データが正規分布に従うように、ガウス分布の統計的検定を使用してください。 </li><li> 1効果をテストするとき（ すなわち 、密度- 図2）、コントロールにそれぞれの結果を比較するために、（列ごと）の多重比較のための試験後、または単純なt検定で、一方向ANOVAを使用しています。 </li><li>グループ実験が行われた場合、条件および性別（空のバイアルの両方をテストし、強調Dの未強調したハエ。ジェンダー影響- 図1）は 、双方向ANOVAを使用して。 </li></ol></li></ol> 5.以前はストレスのないハエによって占有バイアルの生成 - その代わりに3.5から3.6の実行<ol><li>コントロールとして、強調されていないハエが占有するバイアルを準備する走光性を使用してください。 </li><li>試験バイアルにハエを転送し、反対の場所で新鮮な空のバイアルで、向流装置にはめ込みます。 </li><li> 15 W蛍光クール白色光の前で直接遠位バイアルで水平に装置を置き、そして黒の布でカバーしています。 </li><li>ハエが優しく新鮮なバイアルに移動しましょう​​。これには数分かかることがあります。ハエのほとんどは遠位バイアル中の光に向かって歩いていると、1分間のタイマーを起動します。 </li><li>静かに、黒い布を削除する光の位置を切り替えて、黒い布で回復し、ハエが試験バイアルを残すことができます。 </li><li>その時、私3.2から3.5のように選択肢実験をnitiate。 3.6と3.7をスキップします。 </li><li>他の側からの試験バイアルを空いたハエを分離するために、装置のスライダを移動します。 </li><li> 3.7のように、選択肢の実験のためにすぐにT-迷路に空いた試験バイアルを使用してください。 </li></ol>

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E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+decline+in+behavioral+performance+of+Drosophila+melanogaster+with+age.">Differential decline in behavioral performance of Drosophila melanogaster with age.</a> Mechanisms of Ageing and Development. , 127-647 (2006).</li></ol>

The authors declare that they have no competing financial interests.

このプロトコルは、社会的な回避アッセイのための詳細な手順を説明します。カントン-Sのみが飛んでいるバイアルを避けることができます以前に機械的に強調されてきた、と応答者のその性別と数は、その社会的な回避性能には影響しません。しかし、応答者の遺伝的背景に大きな影響を有する。 以下では正常にこの実験を実施するためのいくつかの重要なステップです：1）常に実験前にハエの2時間を転送し、その環境を乱さないことを確認してください。 2）概日リズムと運​​動および活動レベルのことが可能で変動にリンク性能のばらつきを低減するために、理想的Zeitgeber時間ZT5（光の発症後の時間）ZT9の間、一日の同じ時間に常に実験を行う。実験を行うとき3）温度と湿度の条件を注意してください。 30パーセント以上の23-25​​℃で、湿度周辺の温度は最高です。 4）ではないからdを確認してくださいT-迷路装置isturbハエの判定時間の間に、 5）少なくとも24時間、それらを使用する前に、新鮮なバイアルを空気に確認してください。 6）実験中は常にT迷路の片側に嗜好を回避するために、T迷路装置における試験バイアルの位置を変更することが重要である。追加のテストはこれを確認するために行われる必要があるが、経験的にそれはDSOは5分未満で「ストレス」バイアルをエスケープしているようです。対照的に、ハエが強調された後、1時間までのDSOを放出することができると思われる。 プロトコルに考慮しなければならないいくつかの考慮事項があります。ハエの年齢および社会的な回避との相関関係は現在不明である。そのため、加齢に関連した行動の変化は、その年齢37の前に表示されないように、25℃でせいぜい2週齢のハエで実験を行うことをお勧めします。ハエ（混合男女を収容されたが）のような実験のために収集され交尾DSO発光がハエの交配状況の影響を受けてどのようにそれは不明である。 DSO回避の行動出力は性別によって影響されていないが、基本的な脳回路は、性的二型であってもよく、それは男性と女性のハエを混在させることはないことをお勧めします。最後に、エミッタハエの数の減少は、おそらく、放出された合計DSOの減少にリンク回避の減少につながる。しかし、十分なDSOは、堅牢で再現性の回避につながる、まだわずか10ハエに存在している。 60秒から30秒へレスポンダハエの判定時間の減少は、またカントン-SハエのためのPIの減少をもたらす。これは、カントン-Sよりも良好に飛ぶする条件または変異を区別するためのツールと​​して使用することができる。したがって、現在の状態で、社会的回避アッセイはDSO回避上の遺伝子と環境の効果を試験するために行動パラダイムとして使用することができる。テクニックをマスターした後、今後の手順は、撮影することができDSO回避と最適に動作するように社会的な回避検定を取得するために使用されなければならないエミッタハエの正確な数のための理想的な決定時間を組み込むために。 レスポンダが悪い歩行を持っている場合、テスト変異体に生じるであろう制限が発生する可能性があります。実験的にはそのような貧しい運動に対抗することがこれらの変異体のための長い選択肢時間を決定する。同様に、CO 2の検出を妨げる感覚欠損に飛ぶ- DSO ​​の主要な構成要素、またはDSOの他の未知のコンポーネントは、このアッセイで試験することができないだろう。 この応答の定量化を可能にする他のアッセイは現在ありません。それはCO 2が DSO 19の構成要素であることが示されたが、他の信号成分だけでなく、他の強調個人を避けるために行われる選択に関与する神経伝達物質は、まだ決定されていない。同様に、機構はflieを駆動するDSOを放出するのは知られていない。このアッセイは、現在、変異体、または環境治療の社会的および全体的な行動のプロフィールを決定するための追加的なベンチトップの診断アッセイとして使用することができる。例えば、当業者は、強調ハエの社会的回避する、 すなわち 、最も近い隣人23までの距離を社会空間の定量化を比較し、対比することができる。どちらの行動が他の個人の存在に対応し、かつ近接する、またはそれらを避けるために決定をする必要があります。これらは、脳回路と関係する神経伝達物質を分析するための非常にシンプルで強力な方法です。これらの行動パラダイムはまた、スクリーニングの目的に使用する大きな可能性を有している。

この方法の目的は、容易に求愛と侵略から独立したキイロショウジョウバエにおける単純な社会的行動の新たな側面を定量化することである。 社会的相互作用は、社会の中の個人の適切な発達と健康に重要であるだけでなく、全体としての社会集団の機能性。これらの相互作用の複雑性の高い大規模なサンプルサイズおよび社会的行動の遺伝的及び神経塩基はまだよく理解されて動作の簡略化を可能にするシステムが必要となる。 キイロショウジョウバエの遺伝子を同定するために使用できる強力な遺伝モデルである社会的相互作用の神経基盤。実際、D.キイロは、複雑な社会的行動のレパートリーを持ち、社会のいくつかの直接測定は、すでに1-7行われている。しかしながら、これらの努力のほとんどは、aggresのような比較的複雑な社会的行動に焦点を当ててきたSIVEの相互作用3,6、求愛3,8-12のさまざまな側面、そしてどのように社会的な経験は、学習、または概日リズム13-17のような他の行動に影響を与えます。また、これらのアッセイの多くは、結果として生じるデータの存在量を分析するためにビデオトラッキングとコンピュータソフトウェアを使用して、ハエの群の複雑な相互作用のパターンを分析に依存する。このような分析は非常に貴重であり、そのようなグループ7のフライフライ相互作用の動的などの重要な新しい洞察をもたらす。一つの制限は、しかしながら、一般社会にこれらのアッセイの到達不能などの認識の基礎となるメカニズムの限られた知識である。つまり、一人の個人と他者によるその認識による信号の放射の基礎はまだよく理解されている18。 D.：これとは対照的に、個人が離れてストレスをハエによって放出された信号から移動するシンプルな行動、社会的な回避を呈するもハエメランストレス匂いやDSO 19 ogaster。ハイスループットアッセイでは、この動作は、他のハエ、または社会的回避19によって放射されるストレスシグナルの回避のように定量化することができる。ハエをT迷路装置に入れ、DSOを含むバイアルを回避する選択肢を与えられている。このアッセイを用いて、CO 2は、DSOの成分、および2 19を切開したCOに応答するのに必要な神経回路の一部であることが示された。 ここに提示され、社会的回避アッセイは、概念的に、複雑な振る舞い20を解剖するために、研究者の世代を有効にシーモア·ベンザーの研究室で開発されたシンプルな行動アッセイに似ています。社会的回避の分析は、社会的行動のより広範な研究を可能にする、T迷路アッセイを用いてコスト効率よく行うことができる。例えば、このアッセイを使用して、我々は最近実証自閉症の異なる遺伝的リスクは、社会的なB内の対照的な効果を有することehaviorアッセイ。自閉症の候補遺伝子についての変異体- 21,22 neurobeachin - （他の場所で23を参照）の両方の社会的空間に存在する欠陥および社会的な回避24。異常なドーパミン作動性シグナル伝達はまた、ヒト25,26における自閉症の病因に役割を果たすことが提案されている。 neurobeachinで得られた結果とは対照的に、社会的空間を直接VMAT 27のこれらのレベルと相関したが、社会的回避のパフォーマンスは、ドーパミン作動性細胞ショウジョウバエ胞性モノアミン輸送体（VMAT）の増加または減少したレベルによって影響されなかったことを見出した。 neurobeachinとVMATで得られた対照的な結果は、反社会的行動の様々な形態を識別するため、異なる基礎となる神経回路網が他の応答を調節する可能性を強調する。

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Stereo Zoom Microscope&#160;</td>
			<td>Nikon&#160;&#160;</td>
			<td>SMZ-645</td>
			<td>Any other standard scope for fly handling would work</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small paint brushes&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>for pushing flies</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Porous Polyethylene, 12&#34; x 12&#34; Sheet</td>
			<td>Flystuff - Genesee</td>
			<td>46-100</td>
			<td>http://www.flystuff.com/ProductInfo.php?productID=46-100 
			Porous Plastic sheet for the cold anesthesia box</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mini-Alarm Timer/Stopwatch</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;Sharpie pens</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adhesive Tape</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mini vortex</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>14-955-151&#160;</td>
			<td>http://www.fishersci.com/ecomm/servlet/itemdetail 
			For mechanical agitation of the flies - any vortex would work.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning Life Sciences DL No.:352017, Falcon test tube; round bottom; disposable; no closure, 14mL;&#160; 17 x 100mm</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>14-959-8 &#160;&#160;</td>
			<td>http://www.fishersci.com/ecomm/servlet/itemdetail?storeId=10652&#38;langId=-1&#38;catalogId=29104&#38;productId=2771811&#38;distype=0&#38;highlightProductsItemsFlag=Y&#38;fromSearch=1&#38;searchType=PROD&#38;hasPromo=0 
			These snap in place in the in-house made T-maze and counter-current apparatus (see text)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>cotton balls</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>to close the vials after the experiment.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>trifold board and white bench cover</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>to provide a white background, and a homogeneous light.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>white bench cover</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pounding pad</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any mouse pad works.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>large black cloth</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>to cover the counter-current apparatus in phototaxis response.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>cool-white light&#160;</td>
			<td>Home Depot</td>
			<td>1000516563</td>
			<td>http://www.homedepot.ca/product/illume-26-fluorescent-plug-in-linear/911423 
			any similar linear light with fluorescent light bulb cool-white at 13-15W would work</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

straightforward assay for quantification of social avoidance in drosophila melanogaster

Drosophila melanogaster is an emerging model to study different aspects of social interactions. For example, flies avoid areas previously occupied by stressed conspecifics due to an odorant released during stress known as the Drosophila stress odorant (dSO). Through the use of the T-maze apparatus, one can quantify the avoidance of the dSO by responder flies in a very affordable and robust assay. Conditions necessary to obtain a strong performance are presented here. A stressful experience is necessary for the flies to emit dSO, as well as enough emitter flies to cause a robust avoidance response to the presence of dSO. Genetic background, but not their group size, strongly altered the avoidance of the dSO by the responder flies. Canton-S and Elwood display a higher performance in avoiding the dSO than Oregon and Samarkand strains. This behavioral assay will allow identification of mechanisms underlying this social behavior, and the assessment of the influence of genes and environmental conditions on both emission and avoidance of the dSO. Such an assay can be included in batteries of simple diagnostic tests used to identify social deficiencies of mutants or environmental conditions of interest.

ソーシャル回避アッセイは、他のハエによって放出されるストレスシグナル（DSO）を認識するキイロショウジョウバエの能力を定量化する堅牢な試験であるため、社会的相互作用の一つの側面を評価する。このアッセイは、一般に、2つの異なるオプションの選択にハエを提示するT字型迷路、として知られている種々の行動アッセイで使用される装置を用いて行われる-左または右19,28-31。この場合、ハエはDSOを避けるれる効率は、性能指数（PI）を計算し、比較することにより定​​量される。 100のPIは全てハエがDSOを避けたことを示すゼロのPIは、50-50配布またはまったく回避を示している。 -100のPIは全てハエがDSOバイアル中に入ったことを示すことになる。 ハエは、機械的に撹拌ハエによって放出されたDSO、および1新鮮（DSOフリー）バイアルを含むバイアルされています。代表的な結果は、ここに提示strengtを強調このアッセイの時間だけでなく、最良の結果を得るために必要ないくつかの公知の条件。 DSOの回避は、性別固有のものではありませんが、ハエがストレスさに依存します。レスポンダハエの性別は、DSOの彼らの回避（ 図1）には影響しません。しかし、そのバイアルの回避を引き出すために試験バイアルを占領したのはハエには十分ではない、ハエが強調されていなければなりません-この場合は、機械的に（ 図1）に攪拌。ハエが入って走光性を使用してストレスなくバイアルを終了した場合、何ハエが試験バイアルを占領していない、またはしていた場合、応答者は、以前に19に報告したようにプリファレンスを誘発しない。 図1は、既知の結果を再現しているが、それはまた、最適以下の条件で得られたデータの種類の一例である。唯一の2から5内部反復、および独立した臨床試験では、エラーバーは範囲を表す。しかし、重要なが異なるがある以前に19報告されているように、以前に、ストレスをハエと非ストレスハエまたは空が占有するバイアル間レンス。この文脈において、ハエはまだ回避の強いPIを表示する。これは、アッセイのロバスト性を強調している。さらに、2つの新鮮なバイアル間の選択のためのPIは、（雌（p &lt;0.05）であること、およびプールされた性別のp &lt;0.01のために、0とは異なる）は負である。これは、T字型迷路の片側の選好、またはサンプルサイズが小さいことに起因するバイアスを示している。この制限は、提示され、その後の実験で行われた試験バイアル、内部反復してT字型迷路上に配置されている側を交互に対抗できる。 DSOに応じて、セックスの効果の欠如にもかかわらず、対応者は、可能な交絡の影響を防ぐために、性別によって分離した。例えば、36シグナリング嗅覚に関与する遺伝子に影響を与えるものなどの性特異的効果を有する可能性の突然変異の場合には。以下representati<html>結果は男性の応答、および混合性別エミッターに焦点VEの。 DSOの回避は、試験した応答者ハエの数とは無関係です。 以前の実験19は、ほとんどのハエが新鮮DSOフリーのバイアルを好んことを示す、40カントン-S高PIを示した社会的な回避を、テストに飛ぶの標準を使用してきた。レスポンダのPIのグループサイズの効果を試験するために、10〜80ハエの範囲は、 図2に示すように、アッセイした。二つの独立した試験やトライアルごとに3つの内部反復の最小を行った。コントロール（40レスポンダハエ）の性能指標に応答ハエの異なる数のそれぞれのPIを比較した場合、t検定は、統計的有意性を示さなかった。このように、応答者のハエの数はDSO回避のPIと変異が変異体は少数で利用可能であっても、テストすることができます回避に与える影響には影響しません。 ENT &quot;&gt;エミッタの高い数はDSOの高い回避にリードを飛ぶ。 エミッタハエの数はDSOとその回避に影響を与えている程度を判定するために、我々はまた、ストレスをハエの量の効果を試験した。過去の実験19、及びこのプロトコルでは、70カントン-Sハエの標準を使用している。私たちは現在、160のエミッタハエ（ 図3）に10をテストした。 80以上のエミッタと回避の増加はないが回避のパフォーマンスは、エミッタの数に直接関連している。興味深いことに、かなりの回避がまだのみ10ハエを強調して検出した。再び、これは、一度にいくつかのハエの発光能力を試験することを可能にする。 遺伝的背景は、DSO回避性能に影響を与えます。 キイロショウジョウバエは遺伝学的研究のための強力なモデル生物である。したがって、アッセイdiscrするために使用することができるかどうかを決定することが重要であった異なる遺伝的背景をiminate。四つの異なる野生型の応答は、カントン-Sによって放射されたDSOのそれらの回避（ 図4）に対して、（カントン-S、オレゴン-R、サマルカンドとエルウッド）を測定した。カントン-Sとエルウッドは、オレゴンとサマルカンドた（p &lt;0.05）に比べて高いPIを持っている。これらの結果は、DSOの回避の基礎となる遺伝的要素があることを実証し、このアッセイは、この遺伝的影響の研究を実行する権限を持っていること。 選択時間の長さは、パフォーマンスに影響を与える。 図1、図2、図3及び4に示す代表的なデータのセットはまた、避けるバイアルを決定するために応答者に与えられた時間の長さの効果を示す。カントン-S応答は、それらの好適なバイアルを選択するために30〜45秒が与えられたとき、それらは典型的にはPIの周りの性能に到達= 55（ 図2、それぞれPI男性= 57±2;および52±11）。 60秒が与えられたとき、図4（PI = 77±6.5）に見られるように、その性能は、高い。 <img alt="図1" src="/files/ftp_upload/52011/52011fig1highres.jpg" /> DSOの図1.回避は、性別固有のものではありませんが、ハエがストレスさに依存します。バーグラフは、バイアルに攪拌ハエ（DSO）が残したストレス臭の回避のPIの平均±範囲を表す。男性（赤）、および女性（オレンジ色）が一緒に（茶色）を試験した後、実験後に計数した。ハエは関係なく、性別（二元配置ANOVA）の、同様に行う。しかし、彼らは唯一、P &lt;0.05、Tukeyの多重比較ポストを入力し、走光性によるバイアルを終了すると強調されていなかったハエハエが以前に強調しておいたでDSO充填バイアル（機械的に撹拌）、およびいないバイアル（回避テスト）、または新鮮なバイアルた（p &lt;0.001、Tukeyの多重比較ポストテスト）。でさらに、そこに、新鮮なバイアル及び非ストレスハエ条件の間には統計的な差はなかったバイアスにもかかわらず、新鮮なバイアル実験 - N = 2-5（n = 3の新鮮な40混浴は45秒の選択時間で、各ハエで複製するバイアル、n = 2）の強調ハエバイアル非ストレスファイルバイアルはn = 5。 <img alt="図2" src="/files/ftp_upload/52011/52011fig2highres.jpg" /> DSOの図2.回避は、試験したハエの数とは無関係である。代表的なデータは、T-迷路におけるカントン-Sレ ​​スポンダハエの数はDSOの社会的な回避には影響を与えないことを示している。レスポンダハエは新鮮なバイアルとDSOを含むバイアルとの間で決定する30秒を与えられた（n =裁判あたり2-6内部の複製、1-2トライアル、条件ごとに5データポイントの最小値は、棒グラフは平均±SEM表す） <img alt="図3" src="/files/ftp_upload/52011/52011fig3highres.jpg" /> <strong&gt;発光体の図3の増加数は、DSO回避を増加につながる。代表的なデータは、カントン-Sエミッタハエの数をDSOに影響を与え、70エミッタは青色の輪郭とその回避赤色の（増加シェードは、エミッタハエの数の増加を示すことを示している）。 70発光体と比較した場合、10エミッタを含ままたは空気のみバイアル性能（一方向ANOVA pは= 0.0001、ダネットの多重比較事後検定）で有意な差を示した。 40レスポンダハエは1分を与えられた。新鮮なバイアルとDSOを含むバイアルとの間で決定する（N =裁判につき3内部の反復、3つの独立した試験で、棒グラフは、平均±SEM平均を表す） <img alt="図4" src="/files/ftp_upload/52011/52011fig4highres.jpg" /> 図4.選択時間とショウジョウバエの遺伝的背景は、DSOへの応答に影響を与える。カントン-Sとエルウッド遺伝子型はオレゴン州とサマよりDSOの強い回避を表示rkand（カントン-Sと比較してp &lt;0.05 *、t検定）。レスポンダハエは1分を与えられた。新鮮なバイアルとDSOを含むバイアルとの間で決定する（N =裁判あたり4-5内部の反復、2つの独立した試験では、棒グラフは平均±SEM表す）

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Straightforward Assay for Quantification of Social Avoidance in Drosophila melanogaster

Here, we present a protocol to quantify the avoidance of stressed individuals. This paradigm is powerful yet user-friendly and can be used to assess the influence of genes and environment on one kind of social interaction in Drosophila melanogaster.

社会回避での定量化のための簡単​​なアッセイ<em&gt;キイロショウジョウバエ</em

Drosophila melanogaster is an emerging model to study different aspects of social interactions. For example, flies avoid areas previously occupied by ...

straightforward-assay-for-quantification-social-avoidance-drosophila

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Straightforward Assay for Quantification of Social Avoidance in Drosophila melanogaster

11.2K ビュー.  Yale University. Here, we present a protocol to quantify the avoidance of stressed individuals. This paradigm is powerful yet user-friendly and can be used to assess the influence of genes and environment on one kind of social interaction in Drosophila melanogaster.

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Combining Behavioral Endocrinology and Experimental Economics: Testosterone and Social Decision Making

Behavioral endocrinological research in humans as well as in animals suggests that testosterone plays a key role in social interactions. Studies in rodents have shown a direct link between testosterone and aggressive behavior1 and folk wisdom adapts these findings to humans, suggesting that testosterone induces antisocial, egoistic or even aggressive behavior2. However, many researchers doubt a direct testosterone-aggression link in humans, arguing instead that testosterone is primarily involved in status-related behavior3,4. As a high status can also be achieved by aggressive and antisocial means it can be difficult to distinguish between anti-social and status seeking behavior.
We therefore set up an experimental environment, in which status can only be achieved by prosocial means. In a double-blind and placebo-controlled experiment, we administered a single sublingual dose of 0.5 mg of testosterone (with a hydroxypropyl-&beta;-cyclodextrin carrier) to 121 women and investigated their social interaction behavior in an economic bargaining paradigm. Real monetary incentives are at stake in this paradigm; every player A receives a certain amount of money and has to make an offer to another player B on how to share the money. If B accepts, she gets what was offered and player A keeps the rest. If B refuses the offer, nobody gets anything. A status seeking player A is expected to avoid being rejected by behaving in a prosocial way, i.e. by making higher offers.
The results show that if expectations about the hormone are controlled for, testosterone administration leads to a significant increase in fair bargaining offers compared to placebo. The role of expectations is reflected in the fact that subjects who report that they believe to have received testosterone make lower offers than those who say they believe that they were treated with a placebo. These findings suggest that the experimental economics approach is sensitive for detecting neurobiological effects as subtle as those achieved by administration of hormones. Moreover, the findings point towards the importance of both psychosocial as well as neuroendocrine factors in determining the influence of testosterone on human social behavior.

The procedure described in this protocol shows that testosterone administration and folk beliefs about testosterone may be associated with directly opposed social behaviors.

行動内分泌学と実験経済学を組み合わせること：テストステロンと社会的意思決定

Behavioral endocrinological research in humans as well as in animals suggests that testosterone plays a key role in social interactions. Studies in ...

神経科学

Optogenetic Stimulation of Escape Behavior in Drosophila melanogaster

A growing number of genetically encoded tools are becoming available that allow non-invasive manipulation of the neural activity of specific neurons in Drosophila melanogaster1. Chief among these are optogenetic tools, which enable the activation or silencing of specific neurons in the intact and freely moving animal using bright light. Channelrhodopsin (ChR2) is a light-activated cation channel that, when activated by blue light, causes depolarization of neurons that express it. ChR2 has been effective for identifying neurons critical for specific behaviors, such as CO2 avoidance, proboscis extension and giant-fiber mediated startle response2-4. However, as the intense light sources used to stimulate ChR2 also stimulate photoreceptors, these optogenetic techniques have not previously been used in the visual system. Here, we combine an optogenetic approach with a mutation that impairs phototransduction to demonstrate that activation of a cluster of loom-sensitive neurons in the fly's optic lobe, Foma-1 neurons, can drive an escape behavior used to avoid collision. We used a null allele of a critical component of the phototransduction cascade, phospholipase C-&beta;, encoded by the norpA gene, to render the flies blind and also use the Gal4-UAS transcriptional activator system to drive expression of ChR2 in the Foma-1 neurons. Individual flies are placed on a small platform surrounded by blue LEDs. When the LEDs are illuminated, the flies quickly take-off into flight, in a manner similar to visually driven loom-escape behavior. We believe that this technique can be easily adapted to examine other behaviors in freely moving flies.

Optogenetic Stimulation of Escape Behavior in Drosophila melanogaster

Genetically encoded optogenetic tools enable noninvasive manipulation of specific neurons in the Drosophila brain. Such tools can identify neurons whose activation is sufficient to elicit or suppress particular behaviors. Here we present a method for activating Channelrhodopsin2 that is expressed in targeted neurons in freely walking flies.

で逃避行動のOptogenetic刺激<em&gt;キイロショウジョウバエ</em

A  growing number of genetically encoded tools are becoming available that allow non-invasive  manipulation of the neural activity of specific neurons in ...

Determination of the Spontaneous Locomotor Activity in Drosophila melanogaster

Drosophila melanogaster has been used as an excellent model organism to study environmental and genetic manipulations that affect behavior. One such behavior is spontaneous locomotor activity. Here we describe our protocol that utilizes Drosophila population monitors and a tracking system that allows continuous monitoring of the spontaneous locomotor activity of flies for several days at a time. This method is simple, reliable, and objective and can be used to examine the effects of aging, sex, changes in caloric content of food, addition of drugs, or genetic manipulations that mimic human diseases.

Determination of the Spontaneous Locomotor Activity in Drosophila melanogaster

Drosophila melanogaster are useful in studying genetic or environmental manipulations that affect behaviors such as spontaneous locomotor activity.&#160; Here we describe a protocol that utilizes monitors with infrared beams and data analysis software to quantify spontaneous locomotor activity.&#160;

における自発運動量の測定<em&gt;キイロショウジョウバエ</em

Drosophila melanogaster has been used as an excellent model organism to study environmental and genetic manipulations that affect behavior. One such ...

Conditions Affecting Social Space in Drosophila melanogaster

The social space assay described here can be used to quantify social interactions of Drosophila melanogaster &#8212; or other small insects &#8212; in a straightforward manner. As we previously demonstrated 1, in a two-dimensional chamber, we first force the flies to form a tight group, subsequently allowing them to take their preferred distance from each other. After the flies have settled, we measure the distance to the closest neighbor (or social space), processing a static picture with free online software (ImageJ). The analysis of the distance to the closest neighbor allows researchers to determine the effects of genetic and environmental factors on social interaction, while controlling for potential confounding factors. Diverse factors such as climbing ability, time of day, sex, and number of flies, can modify social spacing of flies. We thus propose a series of experimental controls to mitigate these confounding effects. This assay can be used for at least two purposes. First, researchers can determine how their favorite environmental shift (such as isolation, temperature, stress or toxins) will impact social spacing 1,2. Second, researchers can dissect the genetic and neural underpinnings of this basic form of social behavior 1,3. Specifically, we used it as a diagnostic tool to study the role of orthologous genes thought to be involved in social behavior in other organisms, such as candidate genes for autism in humans 4.

Conditions Affecting Social Space in Drosophila melanogaster

The effect of genes and environment on social space of Drosophila melanogaster can be quantified through a powerful but straightforward analytical paradigm. We show here different factors that can affect this social space, and thus need to be taken into consideration when designing experiments in this paradigm.

で社会空間に影響を与える条件<em&gt;キイロショウジョウバエ</em

The social space assay described here can be used to quantify social interactions of Drosophila melanogaster &#8212; or other small insects &#8212; in a ...

High-resolution Quantification of Odor-guided Behavior in Drosophila melanogaster Using the Flywalk Paradigm

In their natural environment, insects such as the vinegar fly Drosophila melanogaster are bombarded with a huge amount of chemically distinct odorants. To complicate matters even further, the odors detected by the insect nervous system usually are not single compounds but mixtures whose composition and concentration ratios vary. This leads to an almost infinite amount of different olfactory stimuli which have to be evaluated by the nervous system.
To understand which aspects of an odor stimulus determine its evaluation by the fly, it is therefore desirable to efficiently examine odor-guided behavior towards many odorants and odor mixtures. To directly correlate behavior to neuronal activity, behavior should be quantified in a comparable time frame and under identical stimulus conditions as in neurophysiological experiments. However, many currently used olfactory bioassays in Drosophila neuroethology are rather specialized either towards efficiency or towards resolution.
Flywalk, an automated odor delivery and tracking system, bridges the gap between efficiency and resolution. It allows the determination of exactly when an odor packet stimulated a freely walking fly, and to determine the animal&#180;s dynamic behavioral reaction.

High-resolution Quantification of Odor-guided Behavior in Drosophila melanogaster Using the Flywalk Paradigm

The automated tracking system Flywalk is used for high-resolution quantification of odor-guided behavior in Drosophila melanogaster.

臭気誘導挙動の高分解能定量<em&gt;キイロショウジョウバエ</em&gt;使用<em&gt; Flywalk</em&gt;パラダイム

In their natural environment, insects such as the vinegar fly Drosophila melanogaster are bombarded with a huge amount of chemically distinct odorants. To ...

A Behavioral Assay for Mechanosensation of MARCM-based Clones in Drosophila melanogaster

Because of the structural and functional homology to the hair cells of the mammalian inner ear, the neurons that innervate the Drosophila external sense organs provide an excellent model system for the study of mechanosensation. This protocol describes a simple touch behavior in fruit flies which can be used to identify mutations that interfere with mechanosensation. The tactile stimulation of a macrochaete bristle on the thorax of flies elicits a grooming reflex from either the first or third leg. Mutations that interfere with mechanotransduction (such as NOMPC), or with other aspects of the reflex arc, can inhibit the grooming response. A traditional screen of adult behaviors would have missed mutants that have essential roles during development. Instead, this protocol combines the touch screen with mosaic analysis with a repressible cell marker (MARCM) to allow for only limited regions of homozygous mutant cells to be generated and marked by the expression of green fluorescent protein (GFP). By testing MARCM clones for abnormal behavioral responses, it is possible to screen a collection of lethal p-element mutations to search for new genes involved in mechanosensation that would have been missed by more traditional methods.

A Behavioral Assay for Mechanosensation of MARCM-based Clones in Drosophila melanogaster

In order to identify novel mutations affecting mechanosensation, we designed an assay that measures the behavioral response to tactile stimulation of fly bristles in mutant clones generated by the MARCM method. The combination of techniques allows for the identification of mechanosensitive mutations that would otherwise be lethal.

でMARCMベースのクローンのMechanosensationための行動アッセイ<em&gt;キイロショウジョウバエ</em

Because of the structural and functional homology to the hair cells of the mammalian inner ear, the neurons that innervate the Drosophila external sense ...

High Throughput Assay to Examine Egg-Laying Preferences of Individual Drosophila melanogaster

Recently, egg-laying preference of Drosophila has emerged as a genetically tractable model to study the neural basis of simple decision-making processes. When selecting sites to deposit their eggs, female flies are capable of ranking the relative attractiveness of their options and choosing the &#34;greater of two goods.&#34; However, most egg-laying preference assays are not practical if one wants to take a systematic genetic screening approach to search for the circuit basis underlying this simple decision-making process, as they are population-based and laborious to set up. To increase the throughput of studying of egg-laying preferences of single females, we developed custom chambers that each can simultaneously assay egg-laying preferences of up to thirty individual flies as well as a protocol that ensures each female has a high egg-laying rate (so that their preference is readily discernable and more convincing). Our approach is simple to execute and produces very consistent results. Additionally, these chambers can be equipped with different attachments to allow video recording the egg-laying animals and to deliver light for optogenetics studies. This article provides the blueprints for fabricating these chambers and the procedure for preparing the flies to be assayed in these chambers.

High Throughput Assay to Examine Egg-Laying Preferences of Individual Drosophila melanogaster

This protocol describes a high throughput assay for testing egg-laying preferences of Drosophila melanogaster at single-animal resolution. This assay provides a simple, efficient, and scalable platform to identify genes and circuit components that control a simple decision-making process.

個々の産卵環境を調べるために、ハイスループットアッセイ<em&gt;キイロショウジョウバエ</em

Recently, egg-laying preference of Drosophila has emerged as a genetically tractable model to study the neural basis of simple decision-making processes. ...

Foraging Path-length Protocol for Drosophila melanogaster Larvae

The Drosophila melanogaster larval path-length phenotype is an established measure used to study the genetic and environmental contributions to behavioral variation. The larval path-length assay was developed to measure individual differences in foraging behavior that were later linked to the foraging gene. Larval path-length is an easily scored trait that facilitates the collection of large sample sizes, at minimal cost, for genetic screens. Here we provide a detailed description of the current protocol for the larval path-length assay first used by Sokolowski. The protocol details how to reproducibly handle test animals, perform the behavioral assay and analyze the data. An example of how the assay can be used to measure behavioral plasticity in response to environmental change, by manipulating feeding environment prior to performing the assay, is also provided. Finally, appropriate test design as well as environmental factors that can modify larval path-length such as food quality, developmental age and day effects are discussed.

Foraging Path-length Protocol for Drosophila melanogaster Larvae

We provide a detailed protocol for a Drosophila melanogaster foraging path-length assay. We discuss the preparation and handling of test animals, how to perform the assay and analyze the data.

パスの長さのプロトコルを採餌<em&gt;キイロショウジョウバエ</em&gt;幼虫

The Drosophila melanogaster larval path-length phenotype is an established measure used to study the genetic and environmental contributions to behavioral ...

The CApillary FEeder Assay Measures Food Intake in Drosophila melanogaster

For most animals, feeding is an essential behavior for securing survival, and it influences development, locomotion, health and reproduction. Ingestion of the right type and quantity of food therefore has a major influence on quality of life. Research on feeding behavior focuses on the underlying processes that ensure actual feeding and unravels the role of factors regulating internal energy homeostasis and the neuronal bases of decision-making. The model organism Drosophila melanogaster, with its great variety of genetically traceable tools for labeling and manipulating single neurons, allows mapping of neuronal networks and identification of molecular signaling cascades involved in the regulation of food intake. This report demonstrates the CApillary FEeder assay (CAFE) and shows how to measure food intake in a group of flies for time spans ranging from hours to days. This easy-to-use assay consists of glass capillaries filled with liquid food that flies can freely access and feed on. Food consumption in the assay is accurately determined using simple measurement tools. Herein we describe step-by-step the method from setup to successful execution of the CAFE assay, and provide practical examples to analyze the food intake of a group of flies under controlled conditions. The reader is guided through possible limitations of the assay, and advantages and disadvantages of the method compared to other feeding assays in D. melanogaster are evaluated.

The CApillary FEeder Assay Measures Food Intake in Drosophila melanogaster

The CApillary FEeder (CAFE) assay is a simple, budget-friendly, highly reliable method for investigating mechanisms underlying food intake. Used with the highly versatile genetic model organism Drosophila melanogaster, it provides a powerful means of gaining new insights into regulatory mechanisms of food intake.

キャピラリーフィーダーアッセイにおいて食物摂取を測定します<em&gt;キイロショウジョウバエ</em

For most animals, feeding is an essential behavior for securing survival, and it influences development, locomotion, health and reproduction. Ingestion of ...

Quantification of Drosophila Grooming Behavior

Drosophila grooming behavior is a complex multi-step locomotor program that requires coordinated movement of both forelegs and hindlegs. Here we present a grooming assay protocol and novel chamber design that is cost-efficient and scalable for either small or large-scale studies of Drosophila grooming. Flies are dusted all over their body with Brilliant Yellow dye and given time to remove the dye from their bodies within the chamber. Flies are then deposited in a set volume of ethanol to solubilize the dye. The relative spectral absorbance of dye-ethanol samples for groomed versus ungroomed animals are measured and recorded. The protocol yields quantitative data of dye accumulation for individual flies, which can be easily averaged and compared across samples. This allows experimental designs to easily evaluate grooming ability for mutant animal studies or circuit manipulations. This efficient procedure is both versatile and scalable. We show work-flow of the protocol and comparative data between WT animals and mutant animals for the Drosophila type I Dopamine Receptor (DopR).

This protocol describes a scalable individual grooming assay technique in Drosophila that yields robust, quantitative data to measure grooming behavior. The method is based on comparing the difference in dye accumulation on the bodies of un-groomed versus groomed animals over a set period of time.

ショウジョウバエのグルーミング行動の定量

Drosophila grooming behavior is a complex multi-step locomotor program that requires coordinated movement of both forelegs and hindlegs. Here we present a ...

社会回避での定量化のための簡単​​なアッセイ

社会回避での定量化のための簡単なアッセイ