宣言する資金調達はありません。

説明したように骨格筋の手順は、アパラチア州立大学施設内倫理委員会のガイドラインに従っています。 注：チームは、オペレータ（博士または生検技術において訓練されたMD）、及び少なくとも1つからなるが、理想的には、三つ以上の技術者。オペレータが実施し、骨格筋生検処置のあらゆる側面を監督する責任があります。ワン技術者（技術者＃1）は、すぐに筋肉抽出のすべての面でオペレータを支援する責任があります。これは、「非滅菌手」であると、滅菌シリンジで吸引を適用することを含む。第二技術者は（技術者＃2）被験者の不安を最小限にする処置中に被写体とマッサージを被検者の反対の足との会話を行っています。第三の技術者（技術者＃3）は、骨格筋サンプルを処理し、処理するための責任があります。ダウンストリーム分析対策はどのように多くのADDITを指示ional技術は、骨格筋試料を調製/処理するために必要とされる。 1件名の準備<ol><li>収集、準備、および筋生検の手順（ 表1）に指定された材料を整理します。除染とベルイストローム針（外側カニューレと内側トロカール）と、標準的な方法16に従って、プランジャーを殺菌。 </li><li>件名の同意書を確認します。アパラチア州立大学で使用されるフ​​ォームを参加の同意の骨格筋生検部分はオンラインサプリメント1に設けられている。 <ol><li>手順の可能性のあるリスク、皮膚の準備、麻酔剤の適用、典型的な感覚を中心とした筋生検手順の一般的な側面についての主題に相談してください。慎重にフォームを参加の同意を読み、研究デザインや手順が理解されていることを確認するために、それに署名するために対象を指示します。 </li></ol></li><li> sのことを確認してくださいubjectは「___カイン」タイプの薬（ 例えば 、リドカイン）にアレルギーではありません。 </li><li>露出した太ももで埋めテーブルの上に仰向けに位置するように、被写体を指示します。被験者の足の下にプラスチック製のバッキングを持つ2使い捨て吸収性アンダーパッドを配置します。このように短縮された位置に外側広筋を配置し、かかとの下に小さなタオルロール、膝が完全に引き出されていること（上昇〜1センチ）でゆったりと脚を配置します。 </li><li>オペレータは、生検部位を可視化することができるように、瞬間的に露出した大腿筋を収縮させる対象を指示しています。注：広だけ大腿筋膜（illiotibialバンド）、膝蓋骨の上部と大転子7との間の距離の約3分の1に前方れる生検部位をヘイケボタル。 </li><li>ちょうど下のオペレータマーク（〜0.5センチメートル）細かい点油性マジックで切開部位を持っている。 </li><li>オペレータは、PINCによるおおよその皮下脂肪の厚さを決定したことがあります皮下脂肪を興。 </li><li>演算子を持って、技術者は、石鹸とぬるま湯で手を洗い、使い捨て手袋を着用。 </li><li>オペレータは（バリカンを介して）生検部位の周囲の領域から〜15センチメートル×15センチの毛を取り除く必要があります。注：生検部位から髪をクリッピングすると、手順の間に開閉の際に切開部になってから髪を防ぎ、脱毛は（3.4参照）、テープ閉鎖や皮膚との間のより良好な接触を可能にします。 </li><li>オペレータが（ヨウ素/貝類にアレルギー被験者に対するポビドンヨードまたはグルコン酸クロルヘキシジンとして）、局所消毒薬で予備浸漬綿棒で領域を殺菌する必要があります。中央に開始し、クリップされた領域の外側の縁に向かって同心円状に働く。最低でも、新しい予備浸漬綿棒でさらに2回するたびに繰り返します。 </li></ol> 2生検手順<ol><li>オペレータは、使い捨ての手袋を外し、石鹸とぬるま湯で手を洗って、無菌の外科GLを着用したことがあり無菌技術を使用してoves。 </li><li>技術者＃1は、オペレータに、滅菌有窓ドレープを提示しています。無菌技術を使用して、演算子を持って、無菌領域を維持するために生検部位の上ドレープを置く。 </li><li>技術者＃1現在のオペレータ無菌技術を維持しながら、21G針を取り付けた5ミリリットルの注射器を持っている。アルコール綿でリドカインバイアルの上部を清掃してください。 <ol><li>オペレータはすぐにリドカイン5ミリリットルを撤回したことがあり。シリンジから21Gの針を外し、シャープコンテナに針を捨てる。 </li><li>無菌技術を維持しながら、技術者＃1現在1-½インチ25 G針を有するオペレータを持っている。注射器の上にオペレータの代わりに1 - ½インチの針を持って、シリンジから気泡を排出する。 </li></ol></li><li>切開部位での技術者＃1のスプレー塩化エチル（〜を皮膚上に消えないインクマーク0.5cm上）したことがあり、皮膚がに表示されるまで「湯通し」 <ol><li>ハオペレータは、真皮に皮膚にほぼ水平に針を挿入し、針を吸引した後、直径「ブレブ」2〜4ミリメートルを生成するためにリドカインの〜100μlで潜入VEの。 <ol><li>針が血管内に配置されていないことを確認する（わずかシリンジのプランジャーを撤回）オペレータが、針を吸引したことがあり。血液が注射器に表示された場合は、針を撤回シャープコンテナに廃棄して、2.3からやり直します。 </li><li> 、オペレータの事前の皮下組織に針を持っている針を吸引した後、ブレブを形成するために、リドカインの約1 mlの組織に浸潤。ブレブが収まった後、筋膜に表面的な停止、縦に切開部位にリドカイン仕掛け注射器の1½インチの針を挿入します。注：対象は、（ハチ刺されに類似）リドカインの最初の注射の際のわずかな瞬間的な刺すような感覚を感じることがあります。 </li></ol></li><li> operatていることを確認してくださいそれが筋毒性の17〜19であるためか、lidocoineで筋肉に浸透していません。 </li><li>オペレータ吸引の針を持ち、太ももから針を抜き出しながらゆっくりリドカインの残りの4ミリリットルを注入。注射部位の上に滅菌ガーゼを置き、局所麻酔が有効になるときに、被写体がリラックスすることができます。 </li></ol></li><li>無菌技術を維持しながら、2〜3分後、オペレータ用メス技師＃1に存在しています。 <ol><li>オペレータが軽く領域が麻酔されていることを確認するために外科用メスの先端で生検部位をプローブ持つ。必要な場合には、2.4.1.2を参照して、切開部位にリドカインの別の3〜4ミリリットルを注入。 </li></ol></li><li>オペレータは、大腿骨に皮膚や皮下組織（〜インクマーク上記2〜3ミリメートル）平行なストレート1cmの切開を作成してもらってください。 <ol><li>オペレータは筋肉への筋膜を通して切開を作るために、より深いメスを挿入しています。各方向に1回これを行います<html> 。注：対象は、筋肉への手術用メスの刃をカットした場合、より深いカットとズキズキする痛みや圧力を感じることがあります。 </li><li>技術者＃2が会話の中で、被写体を従事し、反対側の足をマッサージしています。 </li></ol></li><li>オペレータの場所に切開生検サイト上の滅菌ガーゼのリベラルな量を持っているし、出血を減らすために切開に直接圧力をかける。 <ol><li>技術者＃1は、使い捨ての60mLシリンジおよび30cmの延長チューブ（ 図1）への3ウェイ金属活栓に接続しています。 </li><li>技術者＃1は延長チューブの自由端へ先細プラスチックチューブコネクタの一端を接続し、しっかりとの〜15〜18ミリメートルと200μlのピペットチップの大端部にテーパー状のプラスチックチューブコネクタのもう一方の端を挿入したことがあり先端を切断。 </li></ol></li></ol>.jpgの &quot;幅=&quot; 500 &quot;/&gt; 図1。ベルイストローム針。 （A）バーグストロム針（5mm以下）は（a）の外側カニューレと、（b）内側のトロカールから構成され、関連する構成要素は、（c）は、プランジャー、（d）は15〜18ミリメートルカットオフ〜200μlのピペットチップを含む、（e）はプラスチックコネクター、（f）は、3ウェイ金属活栓、（g）の30cmの延長チューブ、および（h）の使い捨ての60mLシリンジをテーパ。（B）バーグストロム針（5mm以下）と関連する構成要素が組み立て。（ C）ベルイストローム針の内部トロカール（5mm）を撤回約1cmの外側カニューレのウィンドウが開きます。 <ol start="9"><li>出血がおさまった後、技術者は＃1は滅菌オートクレーブポーチを開いており、無菌技術を維持しながら、オペレータに5mmの生検針と内側トロカール（ 図1）を提示。 <ol><li>オペレータは、アライメントとスライド動作を確認して、針（外側カニューレと内側トロカール）を構築しました。 </li> &lt;/オール&gt; </li><li>オペレータがしっかりと回転し、内側トロカールを防ぐために、両手で針アセンブリ（外側カニューレと内側トロカール）を保持できます。技術者は＃1がしっかりと若干の下向きのねじり運動に生検針の内側トロカール部分の上部にカットピペットチップを挿入したことがあります。その技術者＃1は、オペレータまたは生検針だけピペット先端に接触しないことを確認してください。 </li><li>オペレータは、切開を通して組織内に生検針を導入しました。生検針の先端で筋膜（取得した「感触」）の切開の位置を確認します。針が筋肉内に前進するだけで筋膜を過ぎて針を進め、その後、床に向かって下向きの角度に針を。注：被験者は筋膜を通して切開生検針の先端で配置され、針が筋肉内に前進さのようないくつかの軽度の不快感（ 例えば 、「深い圧」、または軽度のけいれん感覚）を発生することがあります。 <ol> &lt;李&gt;は、技術者＃2オペレータは筋肉に針を進めている間に自分の太ももの筋肉を収縮させる「リラックス」に滞在していないために件名に指示を持っている。 </li></ol></li><li>生検針位置になると、使い捨ての60mL注射器を開くためにオペレータ信号技術＃1を有している。 <ol><li>技術者＃1を持って速やかに生検針内吸引を作成するために40〜50 ccのマークに開放使い捨て60ミリリットルの注射器を引っ張る。 </li><li>オペレータは、筋肉内、外側トロカールの位置を維持しながら、外側カニューレのウィンドウを開くために行わ約1cmの内側套管針を引き出している。オペレータが迅速に（クリップ）をカットし、筋肉のサンプルを収集するために、内側トロカールを閉じています。吸引を解放するために、オペレータ信号技術＃1を持っている。 </li><li>技術者は＃1は、吸引を解放するために部屋に活栓を開いたことがあります。 </li><li>オペレータは、生検針90°回転し、プロセスを繰り返してきた。必要な場合は、オペレーターrepeaを持っている（4クリップの合計）3倍の回転手順をトン。 </li></ol></li><li>太ももから生検針を除去しながら、オペレータは、筋膜や皮膚を挟まないように注意しながら、滅菌ガーゼで切開部位に直接対抗圧力を加えることがあります。かなりの抵抗が感じている場合は、内側トロカールにねじり動作を適用しながら、再カット。 </li><li>太ももから生検針を除去すると、オペレータが視覚的に組織の適切な量を採取した場合に推定するために、外側カニューレの内腔を検査に戻って1cmにインナートロカールを引っ張っている。 <ol><li>オペレータの手に＃1を技術者に生検針を持っている。無菌技術を維持するためには、その技術者＃1が唯一の針ではなく、オペレータに触れるようにします。技術者＃1手の＃3を技術者に生検針を持っている。 </li></ol></li><li>技術者＃3生検針から組織を除去する必要があります。 <ol><li>技術者＃3は、プランジャ（ 図1）と先端の細いピンセットを使用していすべての筋肉組織が内部トロカールおよび外側カニューレから除去されることを確実にする。 </li><li>技術者＃3を迅速に筋組織の十分な量が収集されたことを確認し、氷冷した解剖ブロック上にサンプルを配置するためにサンプルを秤量持つ。 </li></ol></li><li>技術者＃3をお持ち注意深く筋肉サンプルから見える結合組織および脂肪を解剖。技術者は第3位は、下流の分析によれば、ストレージのための筋肉のサンプルを調製しました。例えば、すぐにクリオバイアル内のサンプルを配置し、液体窒素中で凍結スナップ、RNaseインヒビターとクリオバイアルなどで組織学、または場所をマウントし、凍結</li><li>必要に応じて、無菌技術を維持しながら、第二の滅菌生検針を使用して手順を繰り返します。 </li></ol> 3閉鎖<ol><li>オペレータは、滅菌ガーゼ、10〜15分間アイスパックで生検部位に直接圧力をかけたことがあります。 </li><li>止血が達成されると、オペレータは、使用アルコール広報を持っている切開の周囲の領域からの乾燥血液を除去するために、EPパッド。 </li><li>技術者＃1は、オペレータへの局所外科用接着剤及びアプリケータのチューブを提示しています。オペレータがアプリケーターチップやチューブの上部に触れることなく外科用接着剤とアプリの管を組み立てています。 </li><li>オペレータは、もう一方の手で乾燥切開の上に外科用接着剤の単一層を適用しながら切開を片手で閉じている引っ張る。接着剤が硬化（〜90秒）した後、切開したテープclosuresperpendicularを適用します。あるいは、2つの滅菌4-0縫合糸で切開を閉じます。 </li><li>オペレータは、切開部位に3-4 2 &quot;×2&quot;非滅菌ガーゼパッドを配置することによって、直接圧力を適用し、自己接着性接着剤ラップで固定している。 </li><li>オペレータは、以下の1から4日間、適切な創傷ケア、正常と異常反応、および行動指針に被写体口頭や書面での指示を提供したことがあります（オンラインのsuを参照してくださいpplement 2）。 </li></ol>

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The authors have no conflicts of interest.

このビデオでは、ASUヒューマンパフォーマンス研究所で使用され、骨格筋生検手順のステップバイステップの概要を示します。この手順は、小さな変更を加えて、過去13年の間に約1,600筋肉生​​検を採取するために使用されている。筋生検サンプルは、重要な研究の発見につながる、スポーツ栄養ベースの調査では、重要なデータを提供してきた。 修正されたベルイストローム、骨格筋生検法を行う場合に注意が必要な多くの重要な技術がある。何よりもまず、生検チームは手順のすべての段階で厳格な無菌操作を維持しなければならない。切開部位[1.4]を配置するとき、それは外側広筋は、収縮した時に、生検時にリラックスした状態であろうよりも前方と近位であることに留意することが重要である。研究手順は同じ太ももから追加の生検が必要な場合は、最初の切開部位は、わずかにdisですでなければなりません三分の一ポイント[1.4]のTAL;後続の各生検は、前の1 2-3センチの近位である。ゲージおおよその皮下脂肪の厚さ[1.6]は筋膜への表面的な組織の量、ステップ2.3.2、2.4.1、2.6、2.6.1のための重要な決定を推定するためにオペレータを支援し、2.11.The演算子は、に学ばなければならない皮下組織および筋膜[2.4.1]の間の抵抗値の変化を感知する。局所麻酔薬を投与する場合、この意味は、[2.4.2] 17-19局所麻酔薬を筋毒性のために骨格筋組織の直接暴露を最小にしながら十分に皮下組織に浸透するようにオペレータを可能にすることによって、筋生検の品質を保証します。皮下組織を切断すると、抵抗値の変化の感覚は筋膜[2.6]の深さの指示をオペレータに提供します。オペレータは、外科用メスは、皮膚切開の相対位置に対してどの程度深いの精神的なメモを作成してください筋膜内の[2.6.1]。これは、筋膜切開のためにプロービング操作者によって費やされる時間の量を減少させ、生検針のウィンドウが完全に筋肉内にあるかどうかを決定する際にオペレータを支援する。外側カニューレのウィンドウ全体（ 図1）は 、筋筋膜内になければなりません。非常に希薄な被験者で、これは容易に目視で確認されるが、これはかなりの皮下組織を有する被験者に確保することはより困難である。注射器が開いた引っ張られたとき技術者＃1が適用される吸引の程度を測定するために学ばなければならない[2.12.1]。低吸引ピペット先端生検針接合や筋肉への生検針の不完全な浸透の弱い労働組合を示す可能性があります。両方のシナリオは、再生検では筋組織の十分な量を達成するために必要になる可能性を高める。吸引bがある場合に経験して、技術者＃1はまた、フェルト耐性の程度に基づいて、クリッピングされた組織の量を推定する必要があり適用eing。この情報は、オペレータに中継されるべきである。同様に、オペレータは、内側のトロカール[2.12.2]を閉じる際に行われ、カットの「感触」をもとにクリップされた組織の量を推定することができる。技術者＃1は、注射器[2.12.2]で吸引を作成した後、作業者は急速に筋肉をクリップしなければなりません。最大吸引の時点で筋肉組織をクリッピングすると、組織の収率を改善する。生検針の単一パスで複数のクリップの方法は、組織に十分な量の研究のために得られることを保証するのに役立ち、生検針が筋膜切開を通って筋肉に挿入される回数を減少させることによって、被験者の不快感を最小限に抑え[ 2.12.4]。滅菌ガーゼ[2.13]でカウンタ圧力をかけるために彼らのフリーハンドを使用しながら、オペレータが遅い、ねじり動作を切開部から生検針を削除する必要があります。これは、取得から生検針のウィンドウを防ぐことができます筋膜および皮膚内の「ハングアップ」cisions。針を抜き出しながら抵抗感が筋肉を通じて不完全なカットを指示することができる。不完全なカットが疑われる場合、オペレータは、生検針を取り外す停止し、内側のトロカール4-5ミリ開くことによって、残りの繊維を再切断し、内側のトロカールが閉じているように、わずかなねじり動作を適用する必要があります。最終的に、生検針を除去した後、10〜15分間切開部位に冷湿布を適用し、一部の対象は、止血[3.1]を達成するために、より長い時間を必要とし得る。止血が達成された後、慎重にアルコールプレップパッドと切開の周囲をきれいにし、外科用接着剤[3.2-3.4]を適用する前に、皮膚が乾燥してみましょう。これらの技術は、皮膚に付着した皮膚切開を閉じるために外科用接着剤を使用することの利点と絆創膏の有効性を最大化します。外科用接着剤は、テープ閉鎖および縫合糸を上回るいくつかの利点を有する。被験者は、proceの直後に時間激しく行使することができます切開部から出血することなくdure。外科用接着剤は、除去を必要とせず、潜在的な感染に対する物理的なバリアを提供し、瘢痕化を最小限に抑えます。 筋生検手順は、比較的安全な、低侵襲性であり、そして外来処置として、生物医学研究の設定で実行されてもよい。ほとんどの被験者は生活の正常な日常活動を行う能力にはほとんど変化を報告している。プロシージャから腫れ痛みとは完全に5〜7日以内に解決されます。ほとんどの有害事象は、ASUヒューマンパフォーマンスラボラトリー（約2 1,600のうち、両方ともローカルの皮膚感染症であった）で行われた研究に関与して被験者から報告されている。この発生率は、他の公表された報告に似ています。ベルイストロームは自然に再吸収さ筋肉内血腫の3非常に低い発生率、および動脈出血を止めるための外科的介入を必要とする5,000以上の生検のうち1例のみを報告した。ヘンssey ら 、ベルイストロームの技術変更された吸引を使用して、83のうち2生検は、痛みや不快感のために、被験者の日常的な活動の破壊をもたらしたことを報告した。これらのイベントの一つは、斑状出血によるものであり、両方のイベントは7日以内に解決6。 Tarnopolsky ら 。吸引修正されたベルイストローム技術に非常に低い合併症率（大人と子供7の13914生検のうち22合併症）を報告。合併症は、生検（5例）に局所的な皮膚感染症（8例）、動脈出血（2例）、斑状出血/血腫（2例）、痛み&gt; 3日間（5例）持続し、小面積ローカルしびれ遠位に含まれ7。 変更されたストローム筋生検技術は、最小限の時間的制約を課すことながら試験中に収集したデータの品質を上昇させる。切開部位は前もって準備されるときの手順は、急速に単一のPASを完了することができ3-4クリップのsは、通常、組織の100から200ミリグラムをもたらし、複数の生検は、単一のセッション中に被験者から撮影することができます。この手法で収集筋肉サンプルは、炎症および酸化ストレスファイバータイピング、筋肉損傷、燃料基板店、ミトコンドリア生合成および呼吸、酵素活性、代謝産物のシフト、タンパク質合成、遺伝子発現を含むアウトカム指標、広範囲のために使用することができる、および多数の他のもの。 外側広筋から筋生検標本を得ることは、他の候補の筋肉（例えば、上腕二頭筋、三角筋、腓腹筋、前脛骨筋、上腕三頭およびヒラメ筋）を上回る利点を提供しています。外側広筋は、最も一般的にサンプリングされた筋肉、および規範的な組織学的、生化学の広範な量であり、分子生物学のデータは、その調査結果と観測値を比較するために、研究者や臨床医のために存在する。 INCI外側広筋の第二に、地域排出は比較的大きい面積を重ね主要な血管や神経を持たない作られる。このように、与えられたテストセッション中に同じ筋肉内に複数の切開部は、遺伝子発現24における外傷による変化を防ぐために、各2〜3センチメートル離れて、なされるべきである。個別の切開部を介して同じ筋肉から複数の生検を得ることは、明らかに運動24,25のストレスに対する応答性遺伝子の転写応答を変更しません。第二の生検は、数時間後に24と同じ切開部を通って取られたときしかし、特定の遺伝子の発現が影響を受ける可能性がある。最後に、被験者は筋生検は、外側広筋から得られた場合には少し不快感、運動の2-3時間に従事することができます。多くの被験者は軽度挫傷に生検後の不快感を比較します。これは少し主題負担3,8,11,26で得られる運動後のサンプルに前を可能にします。 要約すると、メソッドの変更されたストローム技術を用いて、ヒト骨格筋生検サンプルを抽出することについて説明した。この筋生検手順は比較的安全であり、複数の下流の細胞および分子アッセイのための十分な骨格筋組織を持つ研究者を提供しています。手順は半ば、研究者が予め取得することができ、迅速に完了することができ、運動後（または他の介入）生検サンプル。

経皮もしくは「セミオープン」生検技術は、ヒトの患者および研究対象から骨格筋組織試料を得るために使用される。デュシェンヌ型（1806-1875）は、経皮的生検1を通して生きている被験者からの骨格筋を得るために、トロカールで針を構築することが第一としてクレジットされている。 1960年代、ベルイストロームはデュシェンヌ2-4によって説明したのと同様の経皮的生検針を導入しました。 20年後、Evans ら 5はベルイストローム針の切削トロカールを通して吸引を適用することによって、技術を修正した。この修飾は、5倍6,7に組織3-の収率を高めることができ、臨床および生物医学的研究の設定に用いられる。この技術は持ち、筋疾患の診断と骨格筋の構造と機能の理解を促進していきます。 経皮的筋生検技術はstraightfoです順方向。無菌操作を厳守して、正しく実行すると、関連するリスクは最小限に抑えられています。筋生検手順は、研究プロジェクトのための治験ツールとしてみなされている。いくつかの学術機関が技術を実行するために、ボード認定医師を必要とする筋肉生検などを取得するために、直接医師の監督で、博士で訓練学部の研究者を可能にします。 ASU生検チームが成功し、過去13年間8-15中に1,600以上の筋肉生検を行った。このビデオの目的は、ヒト対象の外側広筋から骨格筋組織試料を得るために変更されたストローム針経皮筋生検技術5を記述することである。

<table><tbody><tr><td>Bergstr&amp;ouml;m biopsy needle, 5 x 100 mm</td><td>Stille Surgical Inc.</td><td>119-29187-50</td><td>1 ea</td></tr><tr><td>Durasorb blue pad</td><td>Fisher</td><td>22-031-340</td><td>case of 300</td></tr><tr><td>Prep razor disposable</td><td>Moore Medical</td><td>89760</td><td>1 ea</td></tr><tr><td>Shave cream</td><td>Moore Medical</td><td>92869</td><td>1 can</td></tr><tr><td>Alcohol swab</td><td>Moore Medical</td><td>98721</td><td>box/200</td></tr><tr><td>Povidone-iodine swabsticks (3 pack)</td><td>Moore Medical</td><td>90691</td><td>pack of 50</td></tr><tr><td>Face masks</td><td>Fisher</td><td>19-039-690</td><td>case of 50</td></tr><tr><td>Sterile gloves; sz 6.5</td><td>Moore Medical</td><td>68128</td><td>box of 50 pairs</td></tr><tr><td>Sterile gloves; sz 7.0</td><td>Moore Medical</td><td>68129</td><td>box of 50 pairs</td></tr><tr><td>Sterile gloves; sz 8.5</td><td>Moore Medical</td><td>68132</td><td>box of 50 pairs</td></tr><tr><td>Fenestrated towel drape</td><td>Moore Medical</td><td>92712</td><td>case of 50</td></tr><tr><td>Lidocaine (1% HCl, w/o Epi)</td><td>Dealmed</td><td>427902</td><td>30 cc vial</td></tr><tr><td>Ethyl chloride spray</td><td>Dealmed</td><td>386020</td><td>3.5 fl. Oz. bottle</td></tr><tr><td>5 ml syringe w/ 21 G needle</td><td>Fisher</td><td>14-827-48</td><td>case of 100</td></tr><tr><td>25 G 5/8&quot; needle</td><td>Fisher</td><td>14-826AA</td><td>case of 100</td></tr><tr><td>25 G 1 1/2&quot; needle</td><td>Fisher</td><td>14-826-49</td><td>case of 100</td></tr><tr><td>Single-use scalpels w/ #11 blade</td><td>Fisher</td><td>0-8927-5B</td><td>box of 20</td></tr><tr><td>60 ml Syringe</td><td>Fisher</td><td>13-689-8</td><td>case of 40</td></tr><tr><td>~30 inch extension tubing</td><td>Fisher</td><td>14-169-7A</td><td>roll of 50 ft</td></tr><tr><td>Metal stopcock</td><td>Fisher</td><td>01-290-38</td><td>each</td></tr><tr><td>Polypropylene tubing connector w/ tapered ends, 3.2 to 5.5 mm</td><td>Fisher</td><td>15-315-28A</td><td>case of 100</td></tr><tr><td>Yellow pipette tips (1-200 &amp;micro;l)</td><td>Fisher</td><td>02-681-2</td><td>cut off ~15-18 mm of the tip</td></tr><tr><td>Topical surgical adhesive</td><td>Medline</td><td>MSC091076</td><td>case of 36 tubes</td></tr><tr><td>Topical surgical adhesive</td><td>Medline</td><td>MSC091076Z</td><td>box of 6 tubes</td></tr><tr><td>Butterfly stitches (adhesive strips) 1/2&quot; x 4&quot; (6 per pack)</td><td>Moore Medical</td><td>93050</td><td>box/300</td></tr><tr><td>Bandadge, Strip, 3/4 x 3 in.</td><td>Fisher</td><td>19-027-202</td><td>pack of 100</td></tr><tr><td>Adhesive bandage (5 m rolls)</td><td>Fisher</td><td>19-027-768</td><td>case of 36</td></tr><tr><td>1&quot; paper surgical tape</td><td>Fisher</td><td>19-027-761</td><td>case of 12</td></tr><tr><td>Sutures (4-0 reverse cutting, FS2)</td><td>Moore Medical</td><td>82926</td><td>box of 36</td></tr><tr><td>4 x 4 Sterile gauze pads</td><td>Moore Medical</td><td>66949</td><td>pkg/50</td></tr><tr><td>2 x 2 Non-sterile gauze pads</td><td>Moore Medical</td><td>37336</td><td>pkg/200</td></tr><tr><td>3 x 4 Non-adherent pads</td><td>Moore Medical</td><td>74389</td><td>bx/100</td></tr><tr><td>Autoclave bags 3.5 x 9</td><td>Moore Medical</td><td>40390</td><td>box of 200</td></tr><tr><td>Autoclave bags 5.25 x 10</td><td>Moore Medical</td><td>40391</td><td>box of 200</td></tr><tr><td>Autoclave indicator tape</td><td>Moore Medical</td><td>31608</td><td>box of 250</td></tr><tr><td>Lab coats&amp;mdash;small</td><td>Fisher</td><td>23-900-520A&amp;nbsp;</td><td>10/pk</td></tr><tr><td>Lab coats&amp;mdash;medium</td><td>Fisher</td><td>23-900-520B&amp;nbsp;</td><td>10/pk</td></tr><tr><td>Lab coats&amp;mdash;large</td><td>Fisher</td><td>23-900-520C&amp;nbsp;</td><td>10/pk</td></tr><tr><td>Germicidal Disposable Cloth Wipes</td><td>Moore Medical</td><td>62879</td><td>Can/160</td></tr></tbody></table>

human skeletal muscle biopsy procedures using the modified bergstr&#246;m technique

経皮的生検技術は、骨格筋組織サンプルを収集するために、研究者や臨床医が可能になる。技術は安全で非常に効果的である。このビデオは、ヒト対象の外側広筋から骨格筋組織試料を得るために変更されたストローム針を用いて、経皮的生検技術が記載されている。ベルイストローム針は、先端側の小さな開口部（ &#39;窓&#39;）を有する外側カニューレと遠位端の切断刃を有する内側トロカールで構成されています。局所麻酔および無菌条件下では、針は、皮膚、皮下組織、および筋膜の切開部を通って骨格筋に進められる。次に、吸引力が内トロカールに適用され、外側のトロカールは、骨格筋組織を吸引外側カニューレの窓内に引き込まれ、内部トロカールが急速に閉鎖され、したがって、骨格筋組織試料を切断またはクリッピングされ、引き戻され。針を90°回転さ60;別のカットが行われた。このプロセスを3回以上繰り返してもよい。この複数の切断技術は、一般的に健康な被験者に100〜200 mg以上のサンプルを生成し、中に、運動やその他の介入の試合後に、直前に行うことができます。切開部位の生検後のドレッシング後、被験者は通常、すぐに日常生活の活動を再開し、完全に48〜72時間以内に活発な身体活動に参加することができます。対象は、筋膜の切開部を通って筋肉のヘルニアのリスクを減らすために48時間激しい抵抗運動を避ける必要があります。

筋生検手順上記のように、研究者は、迅速かつ一貫して骨格筋組織サンプルを収集することができる。健康的、思いやりがある被験者での典型的な収量は、3〜4つのクリップが付いているシングルパスで200 mg以上である。手順は、切開の準備のために費やされているそのほとんどが15〜20分を要する。運動系の研究では、筋肉サンプルは、多くの場合、回復中に収集された1つまたは2つのサンプルを用いて、前後運動をとっている。運動前の太ももが手続きのために準備されている間、この設計では、運動後（対側）太ももの毛がクリップされ、切開部位は、細かい点油性マジックで事前にマークされています。そうすることで筋生検は20時、または長時間の運動の試合後に8〜10分で撮影することができます。運動の短い期間（ 例えば 、30分以下）を調査する際に別の方法として、切開（複数可）は、運動前に作ら滅菌包帯で覆って固定しますことができます生検サンプルは、運動の試合が終了した後（10秒21から4分22）を迅速に取り出すことができるように、このようにして、サージカルテープで編。手順の相対的な速さは時に、運動の試合後に、前の細胞および分子の事象を捕捉するために、栄養介入の相互作用効果をテストするために研究者を可能にします。 ASU人間のパフォーマンス研究所では、筋組織生検試料からのデータを利用して、いくつかのスポーツ栄養ベースの論文を発表しています。 ASUの研究グループから作られた重要な科学的発見は、次のとおりです。 IL-1βの遺伝子発現は、IL-6、IL-8、およびTNF-αは、実行中の3時間後に、経験豊富な持久力運動選手から得た骨格筋組織において増加する。炭水化物摂取量（60グラム/時間）は、骨格筋グリコーゲンの枯渇8（ 図2）には影響を有しないにもかかわらず、IL-6およびIL-8のmRNAレベルを減衰する。 = &quot;jove_content&quot;&gt; 2時間集中的な筋力トレーニングの試合は、IL-6、IL-8、IL-1βのための筋肉組織のサイトカインmRNAを上昇し、30経験豊富な重量挙げ選手におけるTNF-α（すなわち、上昇次の実行と同じサイトカイン） 。筋肉組織のmRNA発現の増加が大きかったが、血漿サイトカインレベルの増加に対応せず。炭水化物摂取が筋肉組織のサイトカインmRNA発現9の変化のパターンに影響を及ぼさなかった。 15訓練されたサイクリストによる炭水化物の摂取は、プラセボと比較して血漿中のIL-6を弱めたが、IL-8、サイクリング11の2.5時間後、TNF-αmRNA発現を筋肉組織グリコーゲンの枯渇またはIL-6に影響を及ぼさなかった。 ケルセチン（3週間1,000 mg /日）、筋肉組織、NF-κB、COX-2、IL-1β、IL-6、IL-8、またはTNF-αのmRNAにおける運動誘発性の増加を変化させなかった40訓練されたサイクリストによる摂取発現は、プラセボ15と比較した。 jove_contentは&quot;&gt;マウス23で発見されたものとは対照的に、2週間1,000 mg /日のケルセチンは26訓練を受けていないヒト被験者13内のミトコンドリア生合成のマーカーに対する、ささやかな、しかし重要でない効果を持っていた。 <img alt="図2" fo:content-width="2in" src="/files/ftp_upload/51812/51812fig2highres.jpg" width="300" /> ヒト骨格筋組織生検から得られた図2のデータ。無作為化、プラセボ対照では、クロスオーバー試験オス持久力アスリートた（n = 16）70％VO 2MAXで3時間、トレッドミル上で実行され、6％の炭水化物飲料またはプラセボを摂取し1リットル/時間8の割合で飲料。骨格筋組織生検は、直ちに氷冷した解剖ブロック上に配置され前後運動を、採取し、そして目に見える結合組織と脂肪を注意深く除去した。生検サンプルは、その後、液体窒素中で凍結させ、クライオバイアルに入れ、保存した-8<html>分析まで0℃。（A）炭水化物の摂取は、骨格筋グリコーゲン枯渇た（p = 0.246、交互作用効果）に影響しませんでした。しかし、炭水化物の摂取は、それぞれ（B）骨格筋組織のインターロイキン（IL）-6 mRNAレベル、及び（C）骨格筋組織IL-8 mRNAレベルた（p = 0.071およびp = 0.063、交互作用効果の増加を減衰させる傾向があった）8。 <table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" fo:keep-together.within-page="always" width="511"><tbody><tr height="42"><td height="42" style="height:42px;width:355px;"> アイテム </td><td style="width:156px;"> 生検あたりの数量 </td></tr><tr height="21"><td height="21" style="height:21px;">非滅菌手袋、 </td><td> 3 </td></tr><tr height="21"><td height="21" style="height:21px;">青パッドDurasorb </td><td> 2 </td></tr><tr height="21">; &quot;&gt;フェイスマスク</td><td> 1 </td></tr><tr height="21"><td height="21" style="height:21px;">準備かみそり、使い捨て</td><td> 1 </td></tr><tr height="21"><td height="21" style="height:21px;">シェーブクリーム</td><td>部分的な缶</td></tr><tr height="21"><td height="21" style="height:21px;">油性マジック/消えないマーカー</td><td>再利用可能な</td></tr><tr height="21"><td height="21" style="height:21px;">ベタジンSwabsticks（3パック） </td><td> 1 </td></tr><tr height="21"><td height="21" style="height:21px;">滅菌手術用手袋（サイズによって異なる） </td><td> 1 </td></tr><tr height="21"><td height="21" style="height:21px;">有窓タオルドレープ</td><td> 1 </td></tr><tr height="21"><td height="21" style="height:21px;">塩化エチルを噴霧</td><td> 0.1 </td></tr><tr height="21"><td height="21" style="height:21px;">リドカイン（/ oのエピW 1％） </td><td> 5ccの</td></tr><tr height="21"><td height="21" styル= &quot;高さ：21px;&quot;&gt; 5 mlシリンジ、21G針のw / </td><td> 1 </td></tr><tr height="21"><td height="21" style="height:21px;"> 25 G 5/8「針</td><td> 1 </td></tr><tr height="21"><td height="21" style="height:21px;"> 25 G 1 1月2日「針</td><td> 1 </td></tr><tr height="21"><td height="21" style="height:21px;">使い捨てメス/＃11ブレード付</td><td> 1 </td></tr><tr height="21"><td height="21" style="height:21px;">滅菌4×4ガーゼパッド</td><td> 4 </td></tr><tr height="21"><td height="21" style="height:21px;">パッケージ化された滅菌ベルイストロームの生検針</td><td> 1 </td></tr><tr height="21"><td height="21" style="height:21px;"> 60ミリリットルシリンジ</td><td> 1 </td></tr><tr height="21"><td height="21" style="height:21px;">延長チューブ</td><td> 〜75センチメートル</td></tr><tr height="21"><td height="21" style="height:21px;">金属活栓</td><td> 1 </td></tr><tr height="21"><td heighT = &quot;21&quot;スタイル= &quot;高さ：21px;&quot;&gt;プラスチックコネクタ</td><td> 1 </td></tr><tr height="21"><td height="21" style="height:21px;">黄色（1-200μl）をピペットチップをカット</td><td> 1 </td></tr><tr height="21"><td height="21" style="height:21px;">アルコール綿棒</td><td> 5-10 </td></tr><tr height="21"><td height="21" style="height:21px;"> Octylseal、液体縫合</td><td> 1 </td></tr><tr height="21"><td height="21" style="height:21px;">殺菌ストリップ2 &quot;×4&quot; </td><td> 1 </td></tr><tr height="21"><td height="21" style="height:21px;">包帯</td><td> 1 </td></tr><tr height="21"><td height="21" style="height:21px;">非滅菌2×2（または4×4）ガーゼパッド</td><td> 2（または1） </td></tr><tr height="21"><td height="21" style="height:21px;">粘着包帯（5メートルロール） </td><td> 0.25 </td></tr><tr height="21"><td height="21" style="height:21px;">粘着包帯を確保する紙テープ</td><td> 〜30センチメートル</td></tr&gt; </tbody></table> 表1。筋生検物質一覧。

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Human Skeletal Muscle Biopsy Procedures Using the Modified Bergstr&#246;m Technique

The purpose of this video is to present the modified Bergstr&#246;m skeletal muscle biopsy technique on human subjects.

変更されたベルイストローム法を用いたヒト骨格筋生検手順

The percutaneous biopsy technique enables researchers and clinicians to collect skeletal muscle tissue samples. The technique is safe and highly ...

human-skeletal-muscle-biopsy-procedures-using-modified-bergstrm

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Medicine

39.8K ビュー.  Appalacian State University. The purpose of this video is to present the modified Bergström skeletal muscle biopsy technique on human subjects. 

ビデオ: Human Skeletal Muscle Biopsy Procedures Using the Modified Bergström Technique

Isolation and Quantitative Immunocytochemical Characterization of Primary Myogenic Cells and Fibroblasts from Human Skeletal Muscle

The repair and regeneration of skeletal muscle requires the action of satellite cells, which are the resident muscle stem cells. These can be isolated from human muscle biopsy samples using enzymatic digestion and their myogenic properties studied in culture. Quantitatively, the two main adherent cell types obtained from enzymatic digestion are: (i) the satellite cells (termed myogenic cells or muscle precursor cells), identified initially as CD56+ and later as CD56+/desmin+ cells and (ii) muscle-derived fibroblasts, identified as CD56&#8211; and TE-7+. Fibroblasts proliferate very efficiently in culture and in mixed cell populations these cells may overrun myogenic cells to dominate the culture. The isolation and purification of different cell types from human muscle is thus an important methodological consideration when trying to investigate the innate behavior of either cell type in culture. Here we describe a system of sorting based on the gentle enzymatic digestion of cells using collagenase and dispase followed by magnetic activated cell sorting (MACS) which gives both a high purity (&#62;95% myogenic cells) and good yield (~2.8 x 106 &#177; 8.87 x 105 cells/g tissue after 7 days in vitro) for experiments in culture. This approach is based on incubating the mixed muscle-derived cell population with magnetic microbeads beads conjugated to an antibody against CD56 and then passing cells though a magnetic field. CD56+ cells bound to microbeads are retained by the field whereas CD56&#8211; cells pass unimpeded through the column. Cell suspensions from any stage of the sorting process can be plated and cultured. Following a given intervention, cell morphology, and the expression and localization of proteins including nuclear transcription factors can be quantified using immunofluorescent labeling with specific antibodies and an image processing and analysis package.

The main adherent cell types derived from human muscle are myogenic cells and fibroblasts. Here, cell populations are enriched using magnetic-activated cell sorting based on the CD56 antigen. Subsequent immunolabelling with specific antibodies and use of image analysis techniques allows quantification of cytoplasmic and nuclear characteristics in individual cells.

ヒト骨格筋からの一次筋原細胞および線維芽細胞の単離および定量的免疫組織化学的特性評価

The repair and regeneration of skeletal muscle requires the action of satellite cells, which are the resident muscle stem cells. These can be isolated ...

発生生物学

Myo-mechanical Analysis of Isolated Skeletal Muscle

To assess the in vivo effects of therapeutic interventions for the treatment of muscle disease 1,2,3, quantitative methods are needed that measure force generation and fatigability in treated muscle. We describe a detailed approach to evaluating myo-mechanical properties in freshly explanted hindlimb muscle from the mouse. We describe the atraumatic harvest of mouse extensor digitorum longus muscle, mounting the muscle in a muscle strip myograph (Model 820MS; Danish Myo Technology), and the measurement of maximal twitch and tetanic tension, contraction time, and half-relaxation time, using a square pulse stimulator (Model S48; Grass Technologies). Using these measurements, we demonstrate the calculation of specific twitch and tetanic tension normalized to muscle cross-sectional area, the twitch-to-tetanic tension ratio, the force-frequency relationship curve and the low frequency fatigue curve 4. This analysis provides a method for quantitative comparison between therapeutic interventions in mouse models of muscle disease 1,2,3,5, as well as comparison of the effects of genetic modification on muscle function 6,7,8,9.

To assess the in vivo effects of therapeutic interventions for muscle disease, methods are needed to quantitate force generation and fatigability in treated muscle. We detail an approach to evaluating myo-mechanical properties in explanted mouse hindlimb muscle. This analysis provides a robust approach to quantitating the effects of genetic modification on muscle function, as well as comparison of therapies in mouse models of muscle disease.

単離骨格筋のミオ - 機械的分析

To assess the in vivo effects of therapeutic interventions for the treatment of muscle disease 1,2,3, quantitative methods are needed that measure force ...

医学

X-ray Diffraction of Intact Murine Skeletal Muscle as a Tool for Studying the Structural Basis of Muscle Disease

Transgenic mouse models have been important tools for studying the relationship of genotype to phenotype for human diseases including those of skeletal muscle. Mouse skeletal muscle has been shown to produce high quality X-ray diffraction patterns on third generation synchrotron beamlines providing an opportunity to link changes at the level of the genotype to functional phenotypes in health and disease by determining the structural consequences of genetic changes. We present detailed protocols for preparation of specimens, collecting the X-ray patterns and extracting relevant structural parameters from the X-ray patterns that may help guide experimenters wishing to perform such experiments for themselves.

We present detailed protocols for performing small-angle X-ray diffraction experiments using intact mouse skeletal muscles. With the wide availability of transgenic mouse models for human diseases, this experimental platform can form a useful test bed for elucidating the structural basis of genetic muscle diseases

筋肉疾患の構造的基礎を研究するためのツールとしての無傷のマウス骨格筋のX線回折

Transgenic mouse models have been important tools for studying the relationship of genotype to phenotype for human diseases including those of skeletal ...

Isolation, Culture, Characterization, and Differentiation of Human Muscle Progenitor Cells from the Skeletal Muscle Biopsy Procedure

The use of primary human tissue and cells is ideal for the investigation of biological and physiological processes such as the skeletal muscle regenerative process. There are recognized challenges to working with human primary adult stem cells, particularly human muscle progenitor cells (hMPCs) derived from skeletal muscle biopsies, including low cell yield from collected tissue and a large degree of donor heterogeneity of growth and death parameters among cultures. While incorporating heterogeneity into experimental design requires a larger sample size to detect significant effects, it also allows us to identify mechanisms that underlie variability in hMPC&#160;expansion capacity, and thus allows us to better understand heterogeneity in skeletal muscle regeneration. Novel mechanisms that distinguish the expansion capacity of cultures have the potential to lead to the development of therapies to improve skeletal muscle regeneration.

We present techniques for isolating, culturing, characterizing, and differentiating human primary muscle progenitor cells (hMPCs) obtained from skeletal muscle biopsy tissue. hMPCs obtained and characterized through these methods can be used to subsequently address research questions related to human myogenesis and skeletal muscle regeneration.

骨格筋生検手順からのヒト筋前駆細胞の単離、培養、特徴付け、分化

The use of primary human tissue and cells is ideal for the investigation of biological and physiological processes such as the skeletal muscle ...

Performing Human Skeletal Muscle Xenografts in Immunodeficient Mice

Treatment effects observed in animal studies often fail to be recapitulated in clinical trials. While this problem is multifaceted, one reason for this failure is the use of inadequate laboratory models. It is challenging to model complex human diseases in traditional laboratory organisms, but this issue can be circumvented through the study of human xenografts. The surgical method we describe here allows for the creation of human skeletal muscle xenografts, which can be used to model muscle disease and to carry out preclinical therapeutic testing. Under an Institutional Review Board (IRB)-approved protocol, skeletal muscle specimens are acquired from patients and then transplanted into NOD-Rag1null IL2r&gamma;null (NRG) host mice. These mice are ideal hosts for transplantation studies due to their inability to make mature lymphocytes and are thus unable to develop cell-mediated and humoral adaptive immune responses. Host mice are anaesthetized with isoflurane, and the mouse tibialis anterior and extensor digitorum longus muscles are removed. A piece of human muscle is then placed in the empty tibial compartment and sutured to the proximal and distal tendons of the peroneus longus muscle. The xenografted muscle is spontaneously vascularized and innervated by the mouse host, resulting in robustly regenerated human muscle that can serve as a model for preclinical studies.

Complex human diseases can be challenging to model in traditional laboratory model systems. Here, we describe a surgical approach to model human muscle disease through the transplantation of human skeletal muscle biopsies into immunodeficient mice.

免疫不全マウスにおけるヒト骨格筋異種移植片の実行

Treatment effects observed in animal studies often fail to be recapitulated in clinical trials. While this problem is multifaceted, one reason for this ...

Quantification of Subcellular Glycogen Distribution in Skeletal Muscle Fibers using Transmission Electron Microscopy

With the use of transmission electron microscopy, high-resolution images of fixed samples containing individual muscle fibers can be obtained. This enables quantifications of ultrastructural aspects such as volume fractions, surface area to volume ratios, morphometry, and physical contact sites of different subcellular structures. In the 1970s, a protocol for enhanced staining of glycogen in cells was developed and paved the way for a string of studies on the subcellular localization of glycogen and glycogen particle size using transmission electron microscopy. While most analyses interpret glycogen as if it is homogeneously distributed within the muscle fibers, providing only a single value (e.g., an average concentration), transmission electron microscopy has revealed that glycogen is stored as discrete glycogen particles located in distinct subcellular compartments. Here, the step-by-step protocol from tissue collection to the quantitative determination of the volume fraction and particle diameter of glycogen in the distinct subcellular compartments of individual skeletal muscle fibers is described. Considerations on how to 1) collect and stain tissue specimens, 2) perform image analyses and data handling, 3) evaluate the precision of estimates, 4) discriminate between muscle fiber types, and 5) methodological pitfalls and limitations are included.

A modified post-fixation procedure increases the contrast of glycogen particles in tissue. This paper provides a step-by-step protocol describing how to handle the tissue, conduct the imaging, and use stereological methods to obtain unbiased and quantitative data on fiber type-specific subcellular glycogen distribution in skeletal muscle.

透過型電子顕微鏡による骨格筋線維の細胞内グリコーゲン分布の定量化

With the use of transmission electron microscopy, high-resolution images of fixed samples containing individual muscle fibers can be obtained. This ...

生化学

Preparation and Respirometric Assessment of Mitochondria Isolated from Skeletal Muscle Tissue Obtained by Percutaneous Needle Biopsy

Respirometric profiling of isolated mitochondria is commonly used to investigate electron transport chain function. We describe a method for obtaining samples of human Vastus lateralis, isolating mitochondria from minimal amounts of skeletal muscle tissue, and plate based respirometric profiling using an extracellular flux (XF) analyzer. Comparison of respirometric profiles obtained using 1.0, 2.5 and 5.0 &#956;g of mitochondria indicate that 1.0 &#956;g is sufficient to measure respiration and that 5.0 &#956;g provides most consistent results based on comparison of standard errors. Western blot analysis of isolated mitochondria for mitochondrial marker COX IV and non-mitochondrial tissue marker GAPDH indicate that there is limited non-mitochondrial contamination using this protocol. The ability to study mitochondrial respirometry in as little as 20 mg of muscle tissue allows users to utilize individual biopsies for multiple study endpoints in clinical research projects.

Methods for biopsy of Vastus lateralis, preparation of purified mitochondria, and respirometric profiling are described. The use of small muscle volume makes this technique suitable for clinical research applications.

経皮針生検によって得られた骨格筋組織から単離されたミトコンドリアの調製と呼吸計測評価

Respirometric profiling of isolated mitochondria is commonly used to investigate electron transport chain function. We describe a method for obtaining ...

MyDoBID- 筋線維の種類を効率的に特定するための新しい技術

Fiber Type Identification of Human Skeletal Muscle

The technique described here can be used to identify specific myosin heavy chain (MHC) isoforms in segments of individual muscle fibers using dot blotting, hereafter referred to as Myosin heavy chain detection by Dot Blotting for IDentification of muscle fiber type (MyDoBID). This protocol describes the process of freeze-drying human skeletal muscle and isolating segments of single muscle fibers. Using MyDoBID, type I and II fibers are classified with MHCI- and IIa-specific antibodies, respectively. Classified fibers are then combined into fiber type-specific samples for each biopsy.
The total protein in each sample is determined by Sodium Dodecyl-Sulfate Polyacrylamide Gel Electrophoresis (SDS-PAGE) and UV-activated gel technology. The fiber type of samples is validated using western blotting. The importance of performing protein loading normalization to enhance target protein detection across multiple western blots is also described. The benefits of consolidating classified fibers into fiber type-specific samples compared to single-fiber western blots, include sample versatility, increased sample throughput, shorter time investment, and cost-saving measures, all while retaining valuable fiber type-specific information that is frequently overlooked using homogenized muscle samples. The purpose of the protocol is to achieve accurate and efficient identification of type I and type II fibers isolated from freeze-dried human skeletal muscle samples.
These individual fibers are subsequently combined to create type I and type II fiber type-specific samples. Furthermore, the protocol is extended to include the identification of type IIx fibers, using Actin as a marker for fibers that were negative for MHCI and MHCIIa, which are confirmed as IIx fibers by western blotting. Each fiber type-specific sample is then used to quantify the expression of various target proteins using western blotting techniques.

著者スポットライト:MyDoBID技術を使用した骨格筋線維タイプの謎の解読 

This protocol demonstrates single-fiber isolation from freeze-dried human skeletal muscle and fiber-type classification according to Myosin heavy chain (MHC) isoform using the dot blotting technique. Identified MHC I and II fiber samples can then be further analyzed for fiber type-specific differences in protein expression using western blotting.

変更されたベルイストローム法を用いたヒト骨格筋生検手順

要約

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ヒト骨格筋からの一次筋原細胞および線維芽細胞の単離および定量的免疫組織化学的特性評価

単離骨格筋のミオ - 機械的分析

筋肉疾患の構造的基礎を研究するためのツールとしての無傷のマウス骨格筋のX線回折

骨格筋生検手順からのヒト筋前駆細胞の単離、培養、特徴付け、分化

免疫不全マウスにおけるヒト骨格筋異種移植片の実行

透過型電子顕微鏡による骨格筋線維の細胞内グリコーゲン分布の定量化

経皮針生検によって得られた骨格筋組織から単離されたミトコンドリアの調製と呼吸計測評価

ヒト骨格筋の線維型同定

ヒト骨格筋の線維型同定

ヒト骨格筋の線維型同定