この仕事は健康（NIH）AI091759とクローン病とアメリカのウィリアム·アンド·シェルビーModellファミリー財団研究賞（MNまで）の大腸炎財団の国民の協会によってサポートされていました。住血吸虫感染マウスは、NIAID住血吸虫リソースセンター（NIAID契約N01 A130026）によって供給された。

1。 マンソン住血吸虫卵を浄化する<ol><li> 住血吸虫のライフサイクル8の感染段階である住血吸虫セルカリア、とスイス-Websterマウスに感染します。また、NIAID住血吸虫症リソースセンター（から住血吸虫感染マウスを得る<a href="http://www.schisto-resource.org/" target="_blank">http://www.schisto-resource.org/~~V</a> ）。その時点で、卵は肝臓内に存在し、後述するように（ 図を参照してください。1）を回復することができ、感染後6から7週間のマウスにしておきます。 </li><li> CO 2でマウスを安楽死させると、70％エタノールでぬれた。背中の上にマウスを置きます。皮膚の基礎となる腹膜を切り取るために鈍い鉗子とハサミを使用しています。消費税​​肝臓、胸郭と横隔膜の下にある。 </li><li>細かく肝臓をミンチし、PBSでコラゲナーゼ/ディスパーゼ（0.5 mg / mL）は、ペニシリン（100 U / mL）およびストレプトマイシン（100μg/ mL）を構成される消化液、肝臓あたり20 mLを追加します。 mixtを置く50mLのファルコンチューブにUREと37°Cシェーカーで一晩インキュベートする。 </li><li> 400 XG / 3分/ 20℃で混合物を遠心分離優しく余分な液体を捨て、PBSでチューブを記入してください。再び遠心分離し、PBS洗浄を繰り返します。最後の遠心分離、25mLのPBSでペレットを再懸濁し以下。 </li><li>細かいふるい（目の細かいふるいを通して混合物をプッシュするために10mLのシリンジを使用して混合物を渡すことによって、続いて標準的なキッチンの金属ストレーナー（ガラスビーカーを介してマッシュ肝臓片に50 mLのシリンジプランジャを使用）を介して再懸濁したペレットを痛める第2のガラスビーカー）。 </li><li> 50mLのファルコンチューブに緊張した混合物を入れてください。 400 XG / 5で遠心分/ 20℃ペレットを失うことなく、上清を注意深く注ぐ。 3 mLのPBSでペレットを再懸濁します。 </li><li>オーバーレイは、20％パーコール、8 mLのパーコールおよび32 mLの0.25Mスクロース（FW ​​= 342.3ので、8.56グラムsucrose/100 mLのH 2 0）を40mLの勾配の上に静かに混ぜる。 </li><li> 10分/ 800 XG / 20℃遠心オフピペットdは、肝細胞のゼラチン最上層を破棄します。ピペットの下部にある卵ペレットを除去し、15mlファルコンチューブに入れられます。 </li><li> 10 mLのPBS / 1mMのEDTA / 1 mMのEGTAを使用して遠心分離設定の洗浄ペレット3X：3分/ 30 XG / 20℃ 500μLのPBSに再懸濁します。 </li><li> 10分/ 800 XG / 20℃：新しい25％パーコール遠心機の設定を使用して10 mLの濃度勾配（2.5 mLをパーコールと7.5mLの0.25Mスクロース）上にオーバーレイミックス</li><li>遠心分離の設定を使用して10mLのPBSで3倍の洗浄：3分/ 30 XG / 20℃ </li><li>最後の10 mLの洗浄では、卵をカウントするために100μLを削除します。卵はすぐに解決する、ファルコンチューブはサンプルを削除する前に十分に混合する必要がありますので。 900μLのPBSに100μLのサンプルを希釈する。ミックスの100μLを解剖顕微鏡（10倍希釈）を使用して、顕微鏡スライド上に液滴としてカウントする必要があります。ワイドボアピペットチップを使用する必要があります。 </li><li> PBSで50,000卵​​/ mLで卵を再懸濁します。卵は-80℃で数ヶ月間保存され、一回またはTWIC解凍することができます使用のためのe。ご使用になる前に、卵が（ 図1を参照 ）が無傷であることを確認するために顕微鏡下で検査します。 </li></ol> 2。 S.と腹腔内感作マンソンの卵：0日<ol><li> 5mLのsnapcapチューブに5000μlのPBS eggs/100で卵を準備します。注射のために、必要以上に50％以上の卵を推定する。 </li><li>マウス当たりの卵懸濁液100μLを23ゲージ針3/4inch、1 mLシリンジをロードします。卵は、落ち着くので、使用直前に卵で針をロードします。 </li><li>前に、各注射に卵を混ぜて、マウス当たりの懸濁液を腹腔内に100μLを注入する前後にロックシリンジ。 </li></ol> 3。 S.と眼窩静脈チャレンジマンソンの卵：14日<ol><li> 5000 eggs/100μLで上記のように卵を準備します。 </li><li> （4％）イソフルラン、またはキシラジン（10 mg / kg体重）とケタミン（120 mg / kg）を腹腔内で特殊なチャンバー内でマウスを麻酔。 anestの深さhesiaは、足蹠のピンチとは物理的な応答を確保しないで決定されます。 </li><li>卵を1 mLのシリンジと23ゲージ針3/4inchの読み込みに続いて、角度に下向きに面取り90°の角度で針を曲げるために鉗子を使用しています。気泡が存在しないことを確認してください。 </li><li>一方の側にマウスを置きます。目が突出、鼻に45°の角度で眼球の後ろに容器に100μLを注入しますので、皮膚を引き戻します。 </li><li>針を撤回し、出血を制御するために軽い圧力を適用します。 </li></ol>これらの手順のすべてが慎重に行わなければならない、彼らは麻酔から回復するまでマウスを監視する必要があります。これらのプロトコルは、ペンシルベニア州制度動物ケアの大学によって承認され、委員会（IACUC）を使用していた。 4。実験的な収穫：22日目<ol><li> CO 2を持つマウスを安楽死させる。 </li><li>ぬれた70％エタノールでマウス、および背面の場所。 </li><li>鈍ゲストフォースドバイを使用して、EPSは、マウスの腹部を把握し、皮膚に小さな切開を行います。慎重にはさみで皮膚を除去し、胸郭と腹膜を公開します。 </li><li>腹膜を開き、カットします。パスツールピペットを用いて血液を回復するために腹部大動脈を切断します。氷上で保管してください。 </li><li>ダイアフラムを公開するために肝臓を下に移動します。横隔膜をカットし細かいハサミを使用しています。慎重に肺組織を露出させ胸郭を開いてカット。 </li><li>微細な鉗子で肺をドレイン摘除リンパ節を回復します。これらは胸腺9のいずれかの側に、胸郭の下に隠れています。 1mLの滅菌媒体中で氷上店（DMEM、10％熱不活化ウシ胎児血清を補充し、100 U / mlペニシリン、100μg/ mlのストレプトマイシン、2mMのL-グルタミン、50μM2 - メルカプトエタノール、Invitrogen社からのすべての使用可能）。 </li><li> BALを回復し、組織学的分析のために肺を膨らませるために、気管内挿管を実行する必要があります。側に唾液腺を移動することにより気管を露出し、placi気管の下NG細かい鉗子。細かいハサミを使用して、気管の中央に穴をあけて、肺にチューブを挿入します。手術のスレッドと接続することによってチューブを固定します。 </li><li>チューブにPBSで満たされた1 mLのシリンジを接続し、1 mLのPBSで肺を膨らませる。慎重にシリンジで洗浄BALを取得します。氷上で保管してください。 </li><li>チューブにPBSで満たされた1 mLのシリンジに4％パラホルムアルデヒド（PFA）を添付して肺を膨らませる。 </li><li>チューブを外し、PFAの漏洩を防ぐため手術のスレッドを締めます。 </li><li>慎重に5 mLの4％PFAで50mLのファルコンチューブに肺組織と場所を分析する。 </li></ol> 5。回収した組織の準備<ol><li> 血清：血液凝固のために30分〜2時間氷上で以下のストレージ、血清を遠心分離（13000×gで/ 10分/ 4℃）により血液から回収される。血清は-20℃で保存されており、サイトカインのELISA または Sに使用することができますマンソン卵抗原特異的IgGアイソタイプELISA法<sup&gt; 6、10。 </li><li> リンパ節：単一細胞懸濁液を調製し、細胞数は免疫応答の大きさを評価するために使用されています。 Th2細胞の偏光を調べるために、細胞がSで再刺激されている72時間マンソン卵抗原。 Intracellarサイトカイン染色、フローサイトメトリーにより検討することができ、上清を回収し、-20℃で保存できますTh2サイトカインのELISA（IL-4、IL-5、IL-13）6 C。 </li><li> BAL：細胞は（400 XG / 5分/ 4℃）でペレット化しています。 BAL液はELISA法によるTh2サイ​​トカインの分析のために回収し、-20℃で保存されています。 BAL細胞数は気道炎症の読み出しとして使用されています。 Diffquik染色に続いて10,000-100,000細胞（500回転/ 5分/ 4°C）のCytocentrifuge製剤は、炎症性浸潤物4の列挙、6が可能になります。また、BAL細胞はフローサイトメトリー6で調べることができます。 </li><li> 肺組織：肺組織はSTORです。一晩4℃のED固定組織はパラフィン包埋し、切片と組織学的および免疫蛍光分析のためのスライドにマウントされています。 </li></ol> 6。代表的な結果このプロトコルの詳細は、（i）in vivoでの使用のためのマンソン住血吸虫卵 （ 図1）、（II）増感し、これらの卵を持つマウスに挑戦し、精製、および（iii）肺の炎症反応の検査のために臓器を回復する準備をするために必要なすべての手順を実行します。 in vivoモデルこれは、再現性、強力なTh2の肺の炎症反応を駆動します。これは、BAL細胞数とcytocentrifuge製剤（ 図2）によって可視化した気道炎症と好酸球増加によって示されている。 H＆E染色肺セクションは、卵誘発性肉芽腫（ 図3a）を調べ、肺切片の免疫蛍光染色は、代わりに活性化マクロファージや抵抗などのTh2サイトカイン誘導性遺伝子の可視化を可能にすることができます錫のような分子（RELM）α（ 図3b）。抗原特異的CD4 Th2サイトカイン応答は、IL-5、IL-4および抗原刺激摘除リンパ節細胞（ 図4）のIL-13 ELISAによって検査されます。 <img alt="図1" src="/files/ftp_upload/3905/3905fig1.jpg" /> 図1はマンソン住血吸虫卵の注入モデル代表高S.mansoni卵負担の特性肉芽腫肝臓の画像、およびS.mansoniの卵が示されている- 。平均サイズ（L）（W）は50μmから120μmの。 <img alt="図2" src="/files/ftp_upload/3905/3905fig2.jpg" /> 図2。S.マンソンの卵注入、気道の炎症を駆動します。A.ナイーブ（N）またはS.mansoni（SM）卵注入したマウスからのBAL細胞数（×5）。 * P &lt;0.05。 BAL細胞のBのCytocentrifugeの準備。マック、マクロファージ、EOの好酸球、リンパ液、リンパ球。バーは10μm。 <img alt="図3" src="/files/ftp_upload/3905/3905fig3.jpg" /> 図3肺肉芽腫の可視化とS.mansoni卵を囲む代わりに活性化マクロファージ。A. Smの卵（黒い矢印）を取り囲む肺肉芽腫は、H＆E染色肺切片で可視化した。 RELMαのためにB.免疫染色（緑）、マンノース受容体（赤）およびDAPI（青）の自家蛍光のSm卵（黒い矢印）周囲の肉芽腫で交互に活性化マクロファージ（白矢印）を明らかにする。バーは50μm。 <img alt="図4" src="/files/ftp_upload/3905/3905fig4.jpg" /> 図4。S.mansoni卵抗原特異的Th2サイトカイン応答。卵注入ナイーブ（N） や Smマウスから摘除リンパ節細胞の排水が SMで刺激した&lt;/ IL-4の上清のELISA、IL-5およびIL-13に続く72時間のem&gt;卵抗原、。スケール、ng / mLで。* P &lt;0.05。

<ol>
	<li>World Health Organization. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prevention+and+control+of+schistosomiasis+and+soil-transmitted+helminthiasis:+report+of+a+WHO+expert+committee.">Prevention and control of schistosomiasis and soil-transmitted helminthiasis: report of a WHO expert committee.</a> WHO Technical Report Series 912. , (2002).</li><li>Pearce, E. J., MacDonald, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+immunobiology+of+schistosomiasis.">The immunobiology of schistosomiasis.</a> Nat. Rev. Immunol. 2, 499-511 (2002).</li><li>Sandler, N. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+gene+expression+profiles+during+acute+pathogen-induced+pulmonary+inflammation+reveal+divergent+roles+for+Th1+and+th2+responses+in+tissue+repair.">Global gene expression profiles during acute pathogen-induced pulmonary inflammation reveal divergent roles for Th1 and th2 responses in tissue repair.</a> J. Immunol. 171, 3655-3667 (2003).</li><li>Perrigoue, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IL-31-IL-31R+interactions+negatively+regulate+type+2+inflammation+in+the+lung.">IL-31-IL-31R interactions negatively regulate type 2 inflammation in the lung.</a> J. Exp. Med. 204, 481-487 (2007).</li><li>Sandor, M., Weinstock, J. V., Wynn, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Granulomas+in+schistosome+and+mycobacterial+infections:+a+model+of+local+immune+responses.">Granulomas in schistosome and mycobacterial infections: a model of local immune responses.</a> Trends Immunol. 24, 44-52 (2003).</li><li>Nair, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alternatively+activated+macrophage-derived+RELM-{alpha}+is+a+negative+regulator+of+type+2+inflammation+in+the+lung.">Alternatively activated macrophage-derived RELM-{alpha} is a negative regulator of type 2 inflammation in the lung.</a> J. Exp. Med. 206, 937-952 (2009).</li><li>Dalton, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+method+for+the+isolation+of+schistosome+eggs+and+miracidia+free+of+contaminating+host+tissues.">A method for the isolation of schistosome eggs and miracidia free of contaminating host tissues.</a> Parasitology. 115, 29-32 (1997).</li><li>Lewis, F. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Large-scale+laboratory+maintenance+of+Schistosoma+mansoni,+with+observations+on+three+schistosome/snail+host+combinations.">Large-scale laboratory maintenance of Schistosoma mansoni, with observations on three schistosome/snail host combinations.</a> J. Parasitol. 72, 813-829 (1986).</li><li>Tilney, N. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patterns+of+lymphatic+drainage+in+the+adult+laboratory+rat.">Patterns of lymphatic drainage in the adult laboratory rat.</a> J. Anat. 109 (Pt. 3), 369-383 (1971).</li><li>Lewis, F., Coligan, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Schistosomiasis.">Schistosomiasis.</a> Current protocols in immunology. Chapter 19, Unit 19 (2001).</li><li>Kaplan, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Th2+cells+are+required+for+the+Schistosoma+mansoni+egg-induced+granulomatous+response.">Th2 cells are required for the Schistosoma mansoni egg-induced granulomatous response.</a> J. Immunol. 160, 1850-1856 (1998).</li><li>Wynn, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibrotic+disease+and+the+T(H)1/T(H)2+paradigm.">Fibrotic disease and the T(H)1/T(H)2 paradigm.</a> Nat. Rev. Immunol. 4, 583-594 (2004).</li><li>Cheever, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Variation+of+hepatic+fibrosis+and+granuloma+size+among+mouse+strains+infected+with+Schistosoma+mansoni.">Variation of hepatic fibrosis and granuloma size among mouse strains infected with Schistosoma mansoni.</a> Am. J. Trop. Med. Hyg. 37, 85-97 (1987).</li></ol>

利害の衝突が宣言されません。

ここでは、2型肺の炎症を誘導するマンソン住血吸虫卵を採用したモデルが記載されています。このモデルの特徴は、強力なTh2免疫応答は、気道の炎症や肺の肉芽腫形成が含まれています。これらのパラメータはCD4 Th2細胞応答を11に依存しているので、これはTh2細胞応答に関するタンパク質固有または系統特異的欠失の影響を調べるために有用なモデルである。ここでは読み出しは、抗原特異的Th2サイ​​トカインの定量は、気道内細胞浸潤の分析、および肺肉芽腫のサイズが含まれます。を測定することができる追加のパラメータは、卵誘発性線維症12です。これは、血管、気道、および肉芽腫内（6に示すように）周囲の発生したコラーゲン沈着の可視化を可能にするマッソントリクローム、卵注入肺切片を染色することによって測定されます。 ただしこの機能実装オールは、Sを採用マンソンの卵、このモデルの一つの制限は、Sを再現しないということです感染セルカリアをマウスに感染させることによって行われるマンソン感染、。しかし、このモデルの利点は、設定するための利便性であり、研究者の感染のリスクが存在しないこと。精製後、卵は便利凍結し、数ヶ月後に使用することができます。一度解凍し、卵は感染性ではないため、ライブ、卵、または感染セルカリアよりも容易に扱うことができます。注射のために卵を準備するとき、人は卵が顕微鏡下で検査によって無傷であることを確認する必要があります。取り扱う際には卵の中断を最小限に抑えるために、ワイドボアピペットチップと針を使用する必要がありますし、必要なときだけ卵のピペッティング。卵は急速に解決するので、カウントまたは注入する前に穏やかなロッキングによって再懸濁することも重要です。 精製された卵は凍結することができますが、感染した肝臓が処理する必要がありますすぐに卵の成功した精製を行った。感染症の重症度、および肝臓に存在する卵の数はマウス系統に依存しているので、卵の回収と卵の収量の時間ポイントが使用したマウスに依存して異なります。ここでスイスウェブスターの雌を使用し、1万から2万卵/肝臓の生成のために6〜7週感染後に屠殺した。便利なリファレンスとして、チーバーら。いくつかのマウス系統13の詳細肝臓の卵の負担を。 卵注入は、死亡を誘発しない。しかし、卵の準備が（のようなプロトコルで詳述）徹底的に洗浄されていない場合、マウスでは、過麻酔場合屈するか、または卵の注入は、重度の出血が発生した場合。眼窩注射の代わりに、卵の尾静脈注射である。これはまた、強力な卵誘発肺の炎症反応3の結果。これらの手順のすべてが慎重に行わなければならない、彼らは麻酔から回復するまでマウスを監視する必要があります。 S.の結論で、このプロトコルの詳細注入マンソンは、肺の炎症とTh2細胞応答の誘導のために卵、寄生虫誘発性炎症、喘息、アレルギー性および線維性疾患の研究に適用されます。

<table border="1"><tbody><tr><td> 試薬 </td><td> サイズ/説明 </td><td> 会社 </td><td> カタログ＃ </td></tr><tr><td>コラゲナーゼ/ディスパーゼ</td><td> 500 mgの</td><td>ロシュ·ダイアグノスティックス</td><td> 11 097 113 001 </td></tr><tr><td>差分Quikのヘマ3染色</td><td>パック</td><td>フィッシャー·サイエンティフィック（株）LLC </td><td> 122から911 </td></tr><tr><td> DMEM </td><td>液体</td><td>ギブコ</td><td> 11965 </td></tr><tr><td>ファルコン50mLを</td><td>パック</td><td>ファルコン</td><td> 352070 </td></tr><tr><td> Intramedic PEチューブ</td><td> 0.58ミリメートル</td><td>ベクトン·ディッキンソン·アンド·カンパニー</td><td> 427410 </td></tr><tr><td>イソフルレン</td><td> 250 mLの</td><td>アボットアニマルヘルス</td><td> 52600405 </td></tr><tr><td>ケタミン</td><td> 100 mg / mLの</td><td>フォートドッジ、アニマルヘルス</TD&gt; <td> N / A </td></tr><tr><td>マンノース受容体抗体</td><td>ビオチン</td><td> ABD Serotec </td><td> MCA2235B </td></tr><tr><td>金属製のストレーナー</td><td>標準のキッチンストレーナー</td><td>ターゲット</td><td>ラウレンティス</td></tr><tr><td>パラホルムアルデヒド</td><td> 16パーセント</td><td>電子Microsc。科学</td><td> 15710 </td></tr><tr><td>ペニシリン/ストレプトマイシン</td><td> 100倍</td><td>ギブコ</td><td> 15070 </td></tr><tr><td>パーコール</td><td> 1リットル</td><td> GEヘルスケアバイオサイエンス社</td><td> 17 0891 01 </td></tr><tr><td> RELMα抗体</td><td> 50μgの</td><td> Peprotech社製</td><td> 500-P214 </td></tr><tr><td>手術のスレッド</td><td> 2.0 USP 100ヤード</td><td>手術の専門株式会社</td><td> SP118 </td></tr><tr><td>注射針</td><td> 23グラム、3/4インチ</td><td> BDバキュテイナラボ。 MED。 </td><td>305143 </td></tr><tr><td>米国標準試験ふるい</td><td> 150μm以下、0.0059 &quot; </td><td> WSタイラー社</td><td> ASTME-11仕様。 100号</td></tr><tr><td>キシラジン</td><td> 20 mg / mLの</td><td>バトラー</td><td> N / A </td></tr></tbody></table>

using eggs from schistosoma mansoni as an in vivo model of helminth-induced lung inflammation

住血吸虫の寄生虫は1世界中で推定200万人に感染する血液吸虫です。 住血吸虫 、肝線維症と脾腫を含む重篤な病態、慢性感染症ではなく、寄生虫自体は2よりも寄生虫の卵に対する免疫応答によって引き起こされます。寄生虫の卵IL-4の産生によって特徴づけTh2応答を誘導し、IL-5およびIL-13、マクロファージおよび好酸球の動員の代替活性化。ここでは、寄生虫に固有の肺におけるTh2サイトカイン応答および所属リンパ節、卵を周囲の肺肉芽腫の形成、気道の炎症を調べるためのモデルとしてマンソン住血吸虫卵の注入を説明します。 腹腔内感作および静脈内チャレンジ、S.以下マンソンの卵は、それらが肺実質内に閉じ込められている肺動脈を経由して肺に運ばれる肉芽腫でリンパ球、好酸球と交互に活性化マクロファージ3-6の構成。気管支肺胞スペースで肉芽腫形成、炎症に関連付けられている、所属リンパ節およびCD4の拡大は、T細胞の活性化を観察することができる。ここでは詳細は、感染した肝臓（7から変更された）から、 マンソン住血吸虫卵を分離したマウスを感作し、挑戦し、分析のための臓器（気管支肺胞洗浄（BAL）、肺と所属リンパ節）を回復するためのプロトコルです。我々はまた、追加の免疫学的分析のための代表的な組織学的および免疫学的データとの提案が含まれています。 全体的に、このメソッドは、in vivoモデル寄生虫感染症、線維症、アレルギー性炎症や喘息を含むTh2の炎症性疾患の研究に広く適用可能である肺に寄生虫によって誘発される免疫応答を調査するために用意されています。標準の研究のためのこのモデルの利点肺のE 2炎症が肺の中の強力なTh2の炎症反応の再現性と所属リンパ節、卵を周囲の肉芽腫の組織学的検査によって炎症の評価の容易さ、および寄生虫の長期貯蔵の可能性を含む卵。

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Using Eggs from Schistosoma mansoni as an In vivo Model of Helminth-induced Lung Inflammation

マンソン住血吸虫の卵は、Tヘルパー2型（Th2型）免疫応答、寄生虫感染症、喘息とアレルギー性炎症の特性の強力な刺激剤である。このプロトコルはS.を利用卵の周りの肺肉芽腫形成、好酸球とマクロファージの代替活性化により特徴付けられる肺のCD4 Th2サイトカインによって誘導される炎症反応を生成するために、 マンソンの卵注入。

から卵を使用して、<em&gt;マンソン住血吸虫</em&gt;として<emインビボ&gt;</em蠕虫によって誘発される肺の炎症の&gt;モデル

Schistosoma parasites are blood flukes that infect an estimated 200 million people worldwide 1. In chronic infection with Schistosoma, the severe ...

using-eggs-from-schistosoma-mansoni-as-an-vivo-model-helminth-induced

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Using Eggs from Schistosoma mansoni as an In vivo Model of Helminth-induced Lung Inflammation

13.7K ビュー.  University of Pennsylvania. マンソン住血吸虫の卵は、Tヘルパー2型（Th2型）免疫応答、寄生虫感染症、喘息とアレルギー性炎症の特性の強力な刺激剤である。このプロトコルはS.を利用卵の周りの肺肉芽腫形成、好酸球とマクロファージの代替活性化により特徴付けられる肺のCD4 Th2サイトカインによって誘導される炎症反応を生成するために、 マンソンの卵注?...

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Trichuris muris Infection: A Model of Type 2 Immunity and Inflammation in the Gut

Trichuris muris is a natural pathogen of mice and is biologically and antigenically similar to species of Trichuris that 
infect humans and livestock1. Infective eggs are given by oral gavage, hatch in the distal small intestine, invade the intestinal epithelial cells (IECs) 
that line the crypts of the cecum and proximal colon and upon maturation the worms release eggs into the environment1. This model is a powerful tool to 
examine factors that control CD4+ T helper (Th) cell activation as well as changes in the intestinal epithelium. The immune response that occurs in 
resistant inbred strains, such as C57BL/6 and BALB/c, is characterized by Th2 polarized cytokines (IL-4, IL-5 and IL-13) and expulsion of worms while Th1-associated 
cytokines (IL-12, IL-18, IFN-&gamma;) promote chronic infections in genetically susceptible AKR/J mice2-6. Th2 cytokines promote physiological changes in 
the intestinal microenvironment including rapid turnover of IECs, goblet cell differentiation, recruitment and changes in epithelial permeability and smooth muscle 
contraction, all of which have been implicated in worm expulsion7-15. Here we detail a protocol for propagating Trichuris muris eggs which can 
be used in subsequent experiments. We also provide a sample experimental harvest with suggestions for post-infection analysis. Overall, this protocol will provide 
researchers with the basic tools to perform a Trichuris muris mouse infection model which can be used to address questions pertaining to Th proclivity in 
the gastrointestinal tract as well as immune effector functions of IECs.

Trichuris muris Infection: A Model of Type 2 Immunity and Inflammation in the Gut

Trichuris muris infection is an intestinal model of Th2 immunity where resistant mice generate a protective Th2 response and susceptible mice generate a pathological Th1 response.

ネズミ鞭虫感染症：腸内のタイプ2免疫と炎症のモデル

Trichuris muris is a natural pathogen of mice and is biologically and antigenically similar to species of Trichuris that 
infect humans and livestock1. ...

免疫・感染学

Cercarial Transformation and in vitro Cultivation of Schistosoma mansoni Schistosomules

Schistosome parasites are the causative agents of schistosomiasis, a chronically debilitating disease that affects over 200 million people globally and ranks second to malaria among parasitic diseases in terms of public health and socio-economic impact (1-4). Schistosome parasites are trematode worms with a complex life cycle interchanging between a parasitic life in molluscan and mammalian hosts with intervening free-swimming stages. Briefly, free-swimming cercariae infect a mammalian host by penetrating the skin with the aid of secreted proteases, during which time the cercariae lose their tails, transforming into schistosomules. The schistosomules must now evade the host immune system, develop a gut for digestion of red blood cells, and migrate though the lungs and portal circulation en route to their final destination in the hepatic portal system and eventually the mesenteric veins (for S. mansoni) where male and female worms pair and mate, producing hundreds of eggs daily. Some of the eggs are excreted from the body into fresh water, where the eggs hatch into free-swimming miracidia (5-10). The miracidia infect specific snail species and transform into mother and daughter sporocysts, which in turn, produce infective cercariae, completing the life cycle. Unfortunately, the entire schistosome life cycle cannot be cultured in vitro, but infective cercariae can be transformed into schistosomules, and the schistosomules can be cultured for weeks for the analysis of schistosome development in vitro or microarray analysis. In this protocol, we provide a visual description of cercarial transformation and in vitro culturing of schistosomules. We shed infectious cercariae from the snail host Biomphalaria glabrata and manually transform them into schistosomules by detaching their tails using an emulsifying double-ended needle. The in vitro cercarial transformation and schistosomules culture techniques described avoid the use of a mammalian host, which simplifies visualization of schistosomes and facilitates the collection of the parasite for experimental analysis. in vitro transformation and culturing techniques of schistosomes have been done for years (11, 12), but no visual protocols have been developed that are available to the entire community.

Cercarial Transformation and in vitro Cultivation of Schistosoma mansoni Schistosomules

We describe an in vitro method for culturing schistosomula of the flatworm parasite Schistosoma mansoni, via the harvesting and transformation of infective cercariae from the fresh water snail intermediate host Biomphalaria glabrata.

セルカリア変換と in vitroで</emの>栽培マンソン住血吸虫 Schistosomules

Schistosome parasites are the causative agents of schistosomiasis, a chronically debilitating disease that affects over 200 million people globally and ...

Mass Isolation and In Vitro Cultivation of Intramolluscan Stages of the Human Blood Fluke Schistosoma Mansoni

Human blood flukes, Schistosoma spp., have a complex life cycle that involves asexual and sexual developmental phases within a snail intermediate and mammalian final host, respectively. The ability to isolate and sustain the different life cycle stages under in vitro culture conditions has greatly facilitated investigations of the cellular, biochemical and molecular mechanisms regulating parasite growth, development and host interactions. Transmission of schistosomiasis requires asexual reproduction and development of multiple larval stages within the snail host; from the infective miracidium, through primary and secondary sporocysts, to the final cercarial stage that is infective to humans. In this paper we present a step-by-step protocol for mass hatching and isolation of Schistosoma mansoni miracidia from eggs obtained from livers of infected mice, and their subsequent introduction into in vitro culture. It is anticipated that the detailed protocol will encourage new researchers to engage in and broaden this important field of schistosome research.

Mass Isolation and In Vitro Cultivation of Intramolluscan Stages of the Human Blood Fluke Schistosoma Mansoni

This article describes a protocol for the large-scale axenic isolation and collection of free-swimming miracidia of the human blood fluke Schistosoma mansoni and their subsequent processing for introduction into in vitro culture.

質量分離と人間住血吸虫マンソン住血吸虫の Intramolluscan の段階の体外培養

Human blood flukes, Schistosoma spp., have a complex life cycle that involves asexual and sexual developmental phases within a snail intermediate and ...

発生生物学

An Experimental Model to Study Tuberculosis-Malaria Coinfection upon Natural Transmission of Mycobacterium tuberculosis and Plasmodium berghei

Coinfections naturally occur due to the geographic overlap of distinct types of pathogenic organisms. Concurrent infections most likely modulate the respective immune response to each single pathogen and may thereby affect pathogenesis and disease outcome. Coinfected patients may also respond differentially to anti-infective interventions. Coinfection between tuberculosis as caused by mycobacteria and the malaria parasite Plasmodium, both of which are coendemic in many parts of sub-Saharan Africa, has not been studied in detail. In order to approach the challenging but scientifically and clinically highly relevant question how malaria-tuberculosis coinfection modulate host immunity and the course of each disease, we established an experimental mouse model that allows us to dissect the elicited immune responses to both pathogens in the coinfected host. Of note, in order to most precisely mimic naturally acquired human infections, we perform experimental infections of mice with both pathogens by their natural routes of infection, i.e. aerosol and mosquito bite, respectively.

An Experimental Model to Study Tuberculosis-Malaria Coinfection upon Natural Transmission of Mycobacterium tuberculosis and Plasmodium berghei

Tuberculosis and malaria are two of the most prevalent infections in humans and major causes of morbidity and mortality in impoverished populations in the tropics. We established an experimental model system to study outcome of malaria-tuberculosis coinfection in mice after challenge with both pathogens via their natural route of infection.

自然送信時に結核マラリア重複感染を研究する実験モデル結核菌とマラリアベルゲイ</i

Coinfections naturally occur due to the geographic overlap of distinct types of pathogenic organisms. Concurrent infections most likely modulate the ...

Modeling Mucosal Candidiasis in Larval Zebrafish by Swimbladder Injection

Early defense against mucosal pathogens consists of both an epithelial barrier and innate immune cells. The immunocompetency of both, and their intercommunication, are paramount for the protection against infections. The interactions of epithelial and innate immune cells with a pathogen are best investigated in vivo, where complex behavior unfolds over time and space. However, existing models do not allow for easy spatio-temporal imaging of the battle with pathogens at the mucosal level.
The model developed here creates a mucosal infection by direct injection of the fungal pathogen, Candida albicans, into the swimbladder of juvenile zebrafish. The resulting infection enables high-resolution imaging of epithelial and innate immune cell behavior throughout the development of mucosal disease. The versatility of this method allows for interrogation of the host to probe the detailed sequence of immune events leading to phagocyte recruitment and to examine the roles of particular cell types and molecular pathways in protection. In addition, the behavior of the pathogen as a function of immune attack can be imaged simultaneously by using fluorescent protein-expressing C. albicans. Increased spatial resolution of the host-pathogen interaction is also possible using the described rapid swimbladder dissection technique.
The mucosal infection model described here is straightforward and highly reproducible, making it a valuable tool for the study of mucosal candidiasis. This system may also be broadly translatable to other mucosal pathogens such as mycobacterial, bacterial or viral microbes that normally infect through epithelial surfaces.

In vivo spatio-temporal interactions of pathogen and immune defenses at the mucosal level are not easily imaged in existing vertebrate hosts. The method presented here describes a versatile platform to study mucosal candidiasis in live vertebrates using the swimbladder of the juvenile zebrafish as an infection site.

浮袋注入による幼虫ゼブラフィッシュにおける粘膜カンジダ症のモデル化

Early defense against mucosal pathogens consists of both an epithelial barrier and innate immune cells. The immunocompetency of both, and their ...

Studying Microbial Communities In Vivo: A Model of Host-mediated Interaction Between Candida Albicans and Pseudomonas Aeruginosa in the Airways

Studying host-pathogen interaction enables us to understand the underlying mechanisms of the pathogenicity during microbial infection. The prognosis of the host depends on the involvement of an adapted immune response against the pathogen1. Immune response is complex and results from interaction of the pathogens and several immune or non-immune cellular types2. In vitro studies cannot characterise these interactions and focus on cell-pathogen interactions. Moreover, in the airway3, particularly in patients with suppurative chronic lung disease or in mechanically ventilated patients, polymicrobial communities are present and complicate host-pathogen interaction. Pseudomonas aeruginosa and Candida albicans are both problem pathogens4, frequently isolated from tracheobronchial samples, and associated to severe infections, especially in intensive care unit5. Microbial interactions have been reported between these pathogens in vitro but the clinical impact of these interactions remains unclear6. To study the interactions between C. albicans and P. aeruginosa, a murine model of C. albicans airways colonization, followed by a P. aeruginosa-mediated acute lung infection was performed.

Studying Microbial Communities In Vivo: A Model of Host-mediated Interaction Between Candida Albicans and Pseudomonas Aeruginosa in the Airways

While in vitro study of host-pathogen interactions allow the characterization of specific immune responses, in vivo models are required to observe the effects of complex responses. Using Candida albicans exposure followed by Pseudomonas aeruginosa-mediated lung infection, we established a murine model of microbial interactions involved in ventilator-associated pneumonia pathogenicity.

微生物群集を学びます<em&gt;インビボ</em&gt;：ホスト間の媒介の相互作用のモデル<em&gt;カンジダ</em&gt;と<em&gt;緑膿菌</em&gt;航空で

Studying host-pathogen interaction enables us to understand the underlying mechanisms of the pathogenicity during microbial infection. The prognosis of ...

In Vivo Tracking of Edema Development and Microvascular Pathology in a Model of Experimental Cerebral Malaria Using Magnetic Resonance Imaging

Cerebral malaria is a sign of severe malarial disease and is often a harbinger of death. While aggressive management can be life-saving, the detection of cerebral malaria can be difficult. We present an experimental mouse model of cerebral malaria that shares multiple features of the human disease, including edema and microvascular pathology. Using magnetic resonance imaging (MRI), we can detect and track the blood-brain barrier disruption, edema development, and subsequent brain swelling. We describe multiple MRI techniques that can visualize these pertinent pathological changes. Thus, we show that MRI represents a valuable tool to visualize and track pathological changes, such as edema, brain swelling, and microvascular pathology, in vivo.

In Vivo Tracking of Edema Development and Microvascular Pathology in a Model of Experimental Cerebral Malaria Using Magnetic Resonance Imaging

We describe a mouse model of experimental cerebral malaria and show how inflammatory and microvascular pathology can be tracked in vivo using magnetic resonance imaging.

磁気共鳴映像法を用いた実験的大脳マラリアモデルにおける浮腫発生と微小血管病変のin vivo追跡

Cerebral malaria is a sign of severe malarial disease and is often a harbinger of death. While aggressive management can be life-saving, the detection of ...

医学

Advanced Imaging of Lung Homing Human Lymphocytes in an Experimental In Vivo Model of Allergic Inflammation Based on Light-sheet Microscopy

Overwhelming tissue accumulation of highly activated immune cells represents a hallmark of various chronic inflammatory diseases and emerged as an attractive therapeutic target in the clinical management of affected patients. In order to further optimize strategies aiming at therapeutic regulation of pathologically imbalanced tissue infiltration of pro-inflammatory immune cells, it will be of particular importance to achieve improved insights into disease- and organ-specific homing properties of peripheral lymphocytes. The here described experimental protocol allows to monitor lung accumulation of fluorescently labeled and adoptively transferred human lymphocytes in the context of papain-induced pulmonary inflammation. In contrast to standard in vitro assays frequently used for the analysis of immune cell migration and chemotaxis, the now introduced in vivo setting takes into account lung-specific aspects of tissue organization and the influence of the complex inflammatory scenario taking place in the living murine organism. Moreover, three-dimensional cross-sectional light-sheet fluorescence microscopic imaging does not only provide quantitative data on infiltrating immune cells, but also depicts the pattern of immune cell localization within the inflamed lung. Overall, we are able to introduce an innovative technique of high value for immunological research in the field of chronic inflammatory lung diseases, which can be easily applied by following the provided step-by-step protocol.

The here introduced protocol allows characterization of the lung homing capacity of primary human lymphocytes under in vivo inflammatory conditions. Pulmonary infiltration of adoptively transferred human immune cells in a mouse model of allergic inflammation can be imaged and quantified by light-sheet fluorescence microscopy of chemically cleared lung tissue.

In Vivo 光シート顕微鏡観察に基づくアレルギー性炎症の実験的肺ホーミング ヒトリンパ球のイメージング高度な

Overwhelming tissue accumulation of highly activated immune cells represents a hallmark of various chronic inflammatory diseases and emerged as an ...

Studying Inherited Immunity in a Caenorhabditis elegans Model of Microsporidia Infection

Inherited immunity describes how some animals can pass on the "memory" of a previous infection to their offspring. This can boost pathogen resistance in their progeny and promote survival. While inherited immunity has been reported in many invertebrates, the mechanisms underlying this epigenetic phenomenon are largely unknown. The infection of Caenorhabditis elegans by the natural microsporidian pathogen Nematocida parisii results in the worms producing offspring that are robustly resistant to microsporidia. The present protocol describes the study of intergenerational immunity in the simple and genetically tractable N. parisii -C. elegans infection model. The current article describes methods for infecting C. elegans and generating immune-primed offspring. Methods are also given for assaying resistance to microsporidia infection by staining for microsporidia and visualizing infection by microscopy. In particular, inherited immunity prevents host cell invasion by microsporidia, and fluorescence in situ hybridization (FISH) can be used to quantify invasion events. The relative amount of microsporidia spores produced in the immune-primed offspring can be quantified by staining the spores with a chitin-binding dye. To date, these methods have shed light on the kinetics and pathogen specificity of inherited immunity, as well as the molecular mechanisms underlying it. These techniques, alongside the extensive tools available for C. elegans research, will enable important discoveries in the field of inherited immunity.

Studying Inherited Immunity in a Caenorhabditis elegans Model of Microsporidia Infection

The infection of Caenorhabditis elegans by the microsporidian parasite Nematocida parisii enables the worms to produce offspring that are highly resistant to the same pathogen. This is an example of inherited immunity, a poorly understood epigenetic phenomenon. The present protocol describes the study of inherited immunity in a genetically tractable worm&#160;model.

微胞子虫感染症の カエノラブディティス・エレガンス モデルにおける遺伝性免疫の研究

Inherited immunity describes how some animals can pass on the "memory" of a previous infection to their offspring. This can boost pathogen resistance in ...

A Strategy for the Study of IL-9-Producing Lymphoid Cells in the Nippostrongylus brasiliensis Infection Model

IL-9 is a pleiotropic cytokine associated with various processes, including antitumor immunity, induction of allergic pathologies, and the immune response against helminth infections, where it plays an important role in the expulsion of the parasite. In a murine model of Nippostrongylus brasiliensis infection, IL-9 is produced mainly by CD4+ T lymphocytes and innate lymphoid cells found in the lung, small intestine, and draining lymph nodes. Given the technical difficulties involved in the intracellular staining of IL-9, as well as the complexity of isolating hematopoietic cells from the small intestine upon infection, there is a pressing need for a comprehensive but straightforward protocol to analyze the expression of IL-9 in different lymphoid and non-lymphoid tissues in this model. The protocol described here outlines the kinetics of IL-9 produced by CD4+ T cells and innate lymphoid cells in the lung and small intestine, the main organs targeted by N. brasiliensis, as well as in the mediastinal and mesenteric lymph nodes, throughout the infection. In addition, it details the number of larvae needed for infection, depending on the cell type and organ of interest. This protocol aims to assist in the standardization of assays to save time and resources by offering the opportunity to focus on the specific cells, organs, and disease stages of interest in the N. brasiliensis infection model.

A Strategy for the Study of IL-9-Producing Lymphoid Cells in the Nippostrongylus brasiliensis Infection Model

IL-9-expressing T and ILC2 cells are induced during N. brasiliensis infection, yet their characterization has been largely overlooked in the infected intestine due to their low frequency and differential kinetics. This protocol describes the isolation of these cells from different target organs and confirmation of their identity via flow cytometry at different infection stages.

ニッポストロンギルス・ブラジリエンシス感染モデルにおけるIL-9産生リンパ系細胞研究戦略

IL-9 is a pleiotropic cytokine associated with various processes, including antitumor immunity, induction of allergic pathologies, and the immune response ...

から卵を使用して、

要約

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ネズミ鞭虫感染症：腸内のタイプ2免疫と炎症のモデル

セルカリア変換と in vitroで栽培マンソン住血吸虫* Schistosomules*

質量分離と人間住血吸虫マンソン住血吸虫の Intramolluscan の段階の体外培養

自然送信時に結核マラリア重複感染を研究する実験モデル結核菌とマラリアベルゲイ

浮袋注入による幼虫ゼブラフィッシュにおける粘膜カンジダ症のモデル化

微生物群集を学びます

磁気共鳴映像法を用いた実験的大脳マラリアモデルにおける浮腫発生と微小血管病変のin vivo追跡

In Vivo 光シート顕微鏡観察に基づくアレルギー性炎症の実験的肺ホーミングヒトリンパ球のイメージング高度な

微胞子虫感染症のカエノラブディティス・エレガンスモデルにおける遺伝性免疫の研究

ニッポストロンギルス・ブラジリエンシス感染モデルにおけるIL-9産生リンパ系細胞研究戦略

から卵を使用して、

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セルカリア変換と in vitroで栽培マンソン住血吸虫 Schistosomules

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自然送信時に結核マラリア重複感染を研究する実験モデル結核菌とマラリアベルゲイ

浮袋注入による幼虫ゼブラフィッシュにおける粘膜カンジダ症のモデル化

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磁気共鳴映像法を用いた実験的大脳マラリアモデルにおける浮腫発生と微小血管病変のin vivo追跡

In Vivo 光シート顕微鏡観察に基づくアレルギー性炎症の実験的肺ホーミング ヒトリンパ球のイメージング高度な

微胞子虫感染症の カエノラブディティス・エレガンス モデルにおける遺伝性免疫の研究

ニッポストロンギルス・ブラジリエンシス感染モデルにおけるIL-9産生リンパ系細胞研究戦略

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In Vivo 光シート顕微鏡観察に基づくアレルギー性炎症の実験的肺ホーミングヒトリンパ球のイメージング高度な

微胞子虫感染症のカエノラブディティス・エレガンスモデルにおける遺伝性免疫の研究