L'analisi del liquido sinoviale può rivelare il grado di infiammazione e la presenza di cristalli patogeni durante la valutazione iniziale del paziente con sintomi muscoloscheletrici e versamenti articolari. Il principale vantaggio di questa tecnica è la sua semplicità e affidabilità. In pochi passaggi, il clinico può ottenere importanti informazioni diagnostiche sulla malattia del paziente.
L'identificazione di cristalli specifici è vitale per la diagnosi e il trattamento. I cristalli di urato indicano la gotta, mentre il pirofosfato di calcio e altri cristalli di calcio indicano artropatie legate al calcio o una forma più grave di osteoartrite. Per iniziare, prelevare il campione di liquido sinoviale raccolto durante l'artrocentesi delle articolazioni gonfie dei pazienti.
Annotare il volume del campione in millilitri e trasferirlo separatamente in una provetta contenente EDTA anticoagulante e un'altra provetta senza alcun additivo. Nei casi sospetti di infezione, trasferire asetticamente alcuni millilitri del campione di liquido sinoviale in una bottiglia di coltura per test microbiologici. Per esaminare il campione macroscopicamente, prendere un tubo contenente il campione e definire il colore del campione, che può variare dal giallo pallido al giallo scuro.
Registrare la presenza di sangue, se presente. Definire il grado di chiarezza del campione osservandolo in controluce e determinando la facilità di lettura di una pagina stampata attraverso il tubo contenente il campione. Quindi valutare la viscosità del campione gocciolandolo da una pipetta usa e getta.
Mentre l'aspetto di una lunga stringa di liquido indica alta viscosità, la formazione di gocce è indicativa di bassa viscosità. Osservare il campione attraverso il tubo con la luce sullo sfondo per la presenza di qualsiasi materiale particolato inclusi frammenti di tessuto o fibrina. Per determinare la conta totale dei globuli bianchi, prelevare 0,5 microlitri del campione dalla provetta contenente EDTAA utilizzando una pipetta Malassez-Potain.
Utilizzare la stessa pipetta per aspirare 9,5 microlitri di soluzione di blu di metilene allo 0,1%. Mescolare il campione e la soluzione di blu di metilene nella pipetta mediante inversione delicata. Scartare le prime gocce prima di versare la miscela nella camera di conteggio di un emocitometro.
Ora conta le celle in due quadrati consecutivi su nove e moltiplica il numero ottenuto per 100. Esprimere il numero totale di globuli bianchi come il numero di leucociti per millimetro cubo. Utilizzare il campione di liquido sinoviale dalla provetta senza alcun additivo per determinare la conta differenziale dei globuli bianchi dei campioni di liquido sinoviale.
Per determinare la conta differenziale delle cellule utilizzando la colorazione sopravitale, prendere un vetrino pronto all'uso pre-rivestito con viola cristallino e blu di metilene e posizionare una piccola goccia di campione al centro del vetrino. Quindi, coprire la goccia del campione con un coprivetrino e posizionare una goccia di olio per immersione per microscopio sul vetrino. Per utilizzare la colorazione tradizionale per stimare il conteggio differenziale delle cellule, iniziare mettendo una piccola goccia del campione alla fine di un vetrino pulito.
Ora usa una seconda diapositiva o una copertina per distribuire la goccia lungo la diapositiva con un movimento in avanti. Lascia asciugare la macchia nell'aria. Esaminare il vetrino contenente lo striscio essiccato all'aria sotto l'obiettivo di immersione in olio 1.000X.
Stimare il conteggio differenziale delle cellule contando 100 cellule consecutive distinguendo le cellule polimorfonucleate, i monociti e i linfociti l'uno dall'altro. Pulire un vetrino con carta ottica o morbida imbevuta di etanolo. Applicare una piccola goccia del campione non miscelato con alcun additivo sul vetrino e coprirlo con un vetrino prima di posizionare il vetrino al microscopio.
Focalizzare il vetrino sotto il microscopio utilizzando un obiettivo di ingrandimento a bassa potenza ed esaminarlo attentamente sotto un campo luminoso con un obiettivo 40X. Guarda dentro e fuori le cellule per identificare i cristalli in base alle loro dimensioni e forma, che possono essere romboidali, a forma di ago o a forma di bastoncello. Quindi inserire il filtro polarizzatore tra la sorgente luminosa e il campione.
Per creare uno sfondo scuro, ruotare il polarizzatore fino a quando il suo asse ottico è perpendicolare all'analizzatore. Una volta identificato un cristallo birifrangente, inserire il compensatore tra il polarizzatore e il campione e spostarlo parallelamente o perpendicolarmente all'asse ottico del cristallo. Osserva il colore rivelato dal cristallo.
Per la colorazione di Alizarin Red, mescolare una goccia del campione di liquido sinoviale con un volume uguale di soluzione di Alizarin Red precedentemente preparata su un vetrino pulito. Coprire il vetrino con un coprivetrino ed esaminare al microscopio con un ingrandimento 400X per identificare i cristalli. Le caratteristiche macroscopiche dei campioni di liquido sinoviale indicavano il grado di infiammazione.
Un campione con colore giallo pallido e maggiore chiarezza è generalmente associato a condizioni non infiammatorie come l'osteoartrite. D'altra parte, un campione di colore giallo scuro e un aspetto torbido indica la presenza di cellule, detriti, acido ialuronico e frammenti di fibrina associati a versamenti infiammatori. I leucociti osservati nei campioni di liquido sinoviale di pazienti con osteoartrite erano per lo più monociti e altre cellule mononucleate come i sinoviociti.
Cristalli di pirofosfato di calcio sono stati rilevati in campioni di liquido sinoviale che indicano livelli relativamente più elevati di citochine infiammatorie. Inoltre, una colorazione positiva di Alizarin Red ha rivelato la presenza di cristalli basici di fosfato di calcio nei campioni. È molto importante esaminare attentamente il vetrino sotto la luce ordinaria durante la ricerca di cristalli.
Ricorda che i cristalli di pirofosfato sono spesso debolmente birifrangenti e possono essere persi sotto la luce polarizzata. La presenza di cristalli di calcio nel liquido sinoviale e la loro associazione con forme più gravi di malattia hanno portato i ricercatori a esplorare nuovi meccanismi nella patogenesi e nella progressione dell'osteoartrite.
