Quando un'azienda chimica vuole mettere sul mercato una nuova sostanza chimica o un altro materiale, deve fornire i dati di una serie di test di ecotossicità. Il test algale è uno dei tre test obbligatori che devono essere eseguiti. Il test delle alghe soffre del fatto che è piuttosto impegnativo da eseguire.
Per questo motivo, abbiamo sviluppato la piattaforma di test LEVITATT. LeVITATT utilizza la luce a LED per evitare problemi con un'eccessiva generazione di calore. Inoltre, garantisce un campo luminoso uniforme.
Ha una dimensione compatta, il che significa che non hai bisogno di molto spazio per eseguire il test delle alghe, ma allo stesso tempo, consente di utilizzare abbastanza volume del campione per eseguire analisi chimiche e caratterizzazione prima, durante e dopo il test. Questo è particolarmente importante quando si testano i nanomateriali. Questo video dimostrerà l'uso di LEVITATT per test di tossicità delle alghe di nanomateriali e altre sostanze difficili.
La dimostrazione consiste nei quattro passaggi seguenti. In primo luogo, descrivere i componenti del LEVITATT. Il secondo passo è preparare la soluzione per i mezzi di crescita delle alghe.
E il terzo passo è dare una panoramica della procedura su come eseguire un test di tossicità delle alghe. Il passo finale è misurare l'aumento della biomassa algale con il fluorometro. Il LEVITATT può essere collocato nell'armadio della stanza a temperatura controllata.
Ciò consente una temperatura stabile durante l'esposizione. La configurazione viene posizionata su uno shaker orbitale per consentire la rotazione dei campioni durante la prova. Il test viene condotto in flaconcini a scintillazione da 20 millilitri contenenti quattro millilitri di esposizione.
Un tappo a vite con foro forato consente lo scambio di CO2 con aria durante l'esposizione. La sorgente LED è inserita tra due fogli di plastica e situata al centro di ogni involucro. Il posizionamento crea un campo luminoso omogeneo e riduce al minimo l'ombreggiatura tra i campioni.
Ogni involucro è montato con morsetti e può contenere fino a cinque campioni. La dimensione compatta riduce al minimo lo spazio necessario per eseguire l'esperimento. Per preparare le soluzioni stock, pesare la quantità appropriata di ogni composto.
La soluzione stock è costituita da vari sali vitali per la crescita delle alghe. Quando la quantità appropriata di sali è stata pesata, vengono diluiti con acqua ultra pura. Le soluzioni stock vengono sterilizzate mediante filtrazione o autoclave.
Dopo la sterilizzazione, le soluzioni stock possono essere conservate al buio a quattro gradi Celsius. Preparare una serie di concentrazioni di esposizione. Il fattore tra le concentrazioni di esposizione non deve superare 3,2.
Il volume appropriato di alghe in crescita esponenziale viene aggiunto a ogni concentrazione di prova. La densità cellulare finale dovrebbe essere di circa 10.000 cellule algali per millilitro. È fondamentale che la precoltura sia in crescita esponenziale per soddisfare i criteri di validità del test.
Le fiale di misura sono mescolate per consentire una distribuzione omogenea di alghe e composti prima del campionamento. I campioni vengono versati nei becher e quattro millilitri vengono pipettati in flaconcini a scintillazione da 20 millilitri. Le fiale scintillanti sono ora limitati.
Pipetta 0,4 millilitro per ogni concentrazione. Aggiungere 1,6 millilitro acetone per interrompere la parete cellulare e rilasciare la clorofilla nella fase liquida. Ogni flaconcino di vetro è ora strettamente vicino per evitare l'evaporazione dell'acetone durante lo stoccaggio.
Le fiale a scintillazione limitata sono ora distribuite casualmente nel LEVITATT e incubate per 72 ore. Misurare l'intensità della luce e la temperatura all'inizio e alla fine dell'incubazione per garantire il rispetto delle linee guida desiderate. Il sotto-campionamento viene effettuato a intervalli di 24 ore pipettando 0,4 millilitri da ogni flaconcini di scintillazione in flaconcini di vetro.
Aggiungere 1,6 milioni di acetone per interrompere la parete cellulare e rilasciare la clorofilla nella fase liquida. Dopo l'aggiunta di acetone, avvitare saldamente i coperchi e lasciare i campioni al buio fino all'analisi. Utilizzare un fluorometro per quantificare la biomassa nel campione acquisito durante il periodo di prova.
Le impostazioni sul fluorometro dovrebbero essere di 420 nanometri come lunghezza d'onda di eccitazione e una lunghezza d'onda di emissione di 671 nanometri. Ogni singolo campione viene misurato tre volte e vengono annotate i valori relativi. I valori relativi del fluorometro vengono utilizzati per calcolare il tasso di crescita che verrà utilizzato per un ulteriore trattamento dei dati.
Utilizzare un software statistico per adattare una curva di regressione non lineare ai dati calcolati sul tasso di crescita. Un esempio di curva di regressione non lineare potrebbe essere un log-logistico di funzione praticabile. L'intervallo di confidenza associato al 95% viene visualizzato insieme all'adattamento del modello.
Per segnalare il risultato di un test di ecotossicità vengono utilizzati valori di concentrazione regolarmente efficaci come 10, 20 e 50% inefficienti. In conclusione, leVITATT fornisce una piattaforma compatta per i test di tossicità delle alghe di sostanze chimiche regolari conformi alle linee guida standardizzate internazionali. Inoltre, la configurazione fornisce una solida piattaforma per il test di sostanze difficili che interferiscono con il passaggio della luce verso l'alghe, come nanomateriali o sostanze colorate.
