Il Morris Water Maze, o esperimento MWM, è diventato l'esperimento comportamentale più utilizzato e classico per valutare l'apprendimento spaziale e la capacità di memoria degli animali. Sebbene ci siano molti articoli su MWM, in pratica, i ricercatori si sentono ancora confusi. Pertanto, questo video intuitivo e rigoroso del processo operativo è particolarmente importante.
In precedenza abbiamo eseguito uno studio basato su MWM, abbiamo suggerito che l'agopuntura può alleviare i sintomi dei topi modello AD. Nel presente documento, introduciamo il protocollo operativo di MWM utilizzato nei nostri recenti studi per fornire un metodo semplice e visibile per i ricercatori per valutare l'apprendimento spaziale e la memoria degli animali modello AD. MWM è una tecnica potente per valutare la funzione cognitiva ed è ampiamente utilizzata negli studi.
Tuttavia, non esistono parametri definiti o standard per eseguire l'attività, ad esempio le dimensioni del pool e della piattaforma. Quindi, la vera dimostrazione del metodo è fondamentale. Inizia con l'impostazione per il test Morris Water Maze o MWM secondo le indicazioni del manoscritto.
Il dispositivo MWM e il sistema di acquisizione ed elaborazione del segnale devono trovarsi in una sala esperimenti progettata per mantenere l'isolamento acustico. Un serbatoio bianco circolare circondato da un panno opaco deve essere posizionato al centro del dispositivo MWM. Una videocamera deve essere fissata al soffitto del dispositivo e collegata a un videoregistratore con un sistema di tracciamento automatico.
Dividi il serbatoio del labirinto d'acqua in quattro regioni uguali usando linee etichettate nord, sud, est e ovest, che divideranno concettualmente l'area della piscina in quattro quadranti. Quindi, posiziona un segnale visivo unico sulla parete di ogni quadrante alla vista del mouse. Riempire il serbatoio circolare con acqua per una profondità di 30 centimetri e aggiungere 150 grammi di latte in polvere all'acqua per renderlo opaco.
Per eseguire la prova visible platform, posizionare una piattaforma circolare di plastica un centimetro sopra la superficie dell'acqua in qualsiasi quadrante a caso e posizionare una bandiera nera su di essa. Rilasciare delicatamente ogni mouse in acqua da una delle quattro posizioni di partenza rivolte verso la parete del serbatoio. Attivare il programma di tracciamento del computer non appena il mouse viene rilasciato in acqua e dare a ciascun mouse 60 secondi per raggiungere la piattaforma.
Alla fine di ogni prova, posiziona il mouse sulla piattaforma e lascialo rimanere lì per 10-30 secondi. Osserva le traiettorie di nuoto dei topi sul computer. Registra il tempo impiegato dal mouse per trovare la piattaforma come latenza di fuga e analizza la velocità di nuoto del mouse.
Quindi, asciugare il mouse con gli asciugamani e scaldarlo con un riscaldatore elettrico. Spostare la piattaforma ed eseguire quattro prove per mouse, avviando un mouse in quadrante diverso. Consentire al mouse di recuperare per 15-20 minuti tra ogni prova.
Per eseguire la prova della piattaforma nascosta, posizionare la stessa piattaforma senza una bandiera nel quadrante sud-est. Quindi, posiziona il mouse casualmente in uno dei quattro quadranti e dagli 60 secondi per trovare la piattaforma nascosta. Se il mouse non riesce a trovare la piattaforma in 60 secondi, guidala verso la piattaforma e lasciala rimanere lì per 10-30 secondi.
Registrare la latenza di escape di ogni prova. Asciugare il mouse con gli asciugamani e tenerlo caldo con un riscaldatore elettrico. Esegui quattro prove per mouse con da 15 a 20 minuti tra ogni prova, avviando il mouse in un quadrante diverso ogni volta.
Ripeti le prove per cinque giorni consecutivi con la piattaforma e i segnali visivi in posizioni costanti. Per eseguire la prova probe, rimuovere la piattaforma e posizionare il mouse nell'acqua rivolta verso la parete del serbatoio nel quadrante nord-ovest. Registra la sua distanza di nuoto, la velocità e il numero di crossover della piattaforma.
Al termine, asciugare il mouse e tenerlo caldo. Per eseguire la prova inversa, posizionare la piattaforma nel quadrante nord-ovest e ripetere la prova della piattaforma nascosta. Questo protocollo è stato utilizzato per indagare gli effetti dell'agopuntura manuale o MA sull'apprendimento e la memoria dei topi con malattia di Alzheimer.
Per il gruppo MA, il trattamento è iniziato 15 giorni prima dei test MWM ed è continuato per 11 giorni di test. Durante il test della piattaforma visibile il primo giorno di MWM, non sono state osservate differenze statistiche nella latenza di fuga o nella velocità di nuoto tra i gruppi. Durante la piattaforma nascosta e lo studio di inversione, la latenza di fuga del morbo di Alzheimer o gruppo AD è rimasta alta, mentre la latenza degli altri tre gruppi è gradualmente diminuita.
È importante sottolineare che la latenza di escape del gruppo MA era più breve di quella del gruppo AD. Durante lo studio Probe, il numero di topi crossover della piattaforma nel gruppo MA era inferiore a quello del gruppo di controllo, ma significativamente superiore a quello del gruppo AD. Inoltre, la percentuale di tempo che i topi MA trascorrevano nel quadrante in cui si trovava in precedenza la piattaforma era simile al gruppo di farmaci, che era inferiore al controllo, ma maggiore di AD. È importante ricordare che se il mouse non riesce a trovare la piattaforma in 60 secondi, il ricercatore dovrebbe guidarla alla piattaforma e consentirgli di rimanere lì per 10-30 secondi.
Non ci sono standard specifici per le dimensioni della piscina e le dimensioni della piattaforma. Questi parametri devono essere ottimizzati in esperimenti preliminari in base alle esigenze sperimentali e alle condizioni degli animali da esperimento. La maggior parte degli studi deve essere condotta su esperimenti di base come MWM.
Attualmente, la flessibilità di MWM come strumento sperimentale risiede solo nella capacità di scegliere i protocolli di base in base allo studio proposto è, e quindi questo test può essere applicato per valutare la funzione cognitiva in modo più approfondito.
