Il modello di topo del trapianto di milza offre una grande opportunità per scoprire il ruolo delle cellule di milza nella regolazione delle risposte immunitarie locali e sistemiche nelle malattie infiammatorie. Il principale vantaggio di questo protocollo è che utilizzando topi congenici, il trapianto di milza consente di controllare il destino, la longevità e la funzione delle cellule di milza. Prima di iniziare la procedura, posizionare un drappo monouso sterile sulla piattaforma chirurgica e confermare la mancanza di risposta al dito del piedi nel topo donatore anestetizzato.
Radere i capelli da tutta l'area addominale e posizionare il mouse su una piattaforma chirurgica sterile sotto un microscopio operativo con un ingrandimento da 6 a 10X. Sterilizzare la pelle esposta con un tampone di preparazione alcolica e fissare gli arti con nastro chirurgico. Entra nell'addome tramite un'incisione verticale della pelle della linea mediana da tre a quattro centimetri dal pube al processo xifoide.
Cauterizzare i vasi cutanei ed estendere l'incisione all'addome laterale su entrambi i lati per ottenere una migliore esposizione. Utilizzando un batuffolo di cotone sterile, spostare l'intestino sul fianco destro dell'addome per esporre la milza e utilizzare un cautery sterile a bassa temperatura per cauterizzare la vena gastrica corta attaccata alla milza. Posizionare un pezzo di garza sterile imbevuto di 37 gradi Celsius salina sopra la milza per mantenerlo umido e separato e mobilitare la vena porta dal tessuto pancreatico.
Ligate i rami della vena portale come dimostrato. Posizionare una sutura intorno alla vena porta distale dalla vena splenica e capovolgere la milza sul lato destro per esporre l'aorta e l'arteria splenica sul tronco celiaco. Sezionare e mobilitare le arterie spleniche celiache aortiche e posizionare una sutura intorno all'aorta prossimale all'arteria celiaca.
Iniettare 100 unità internazionali di eparina nella vena cava inferiore o nell'IVC per eparinare tutto il corpo. Dopo tre minuti, legare le arterie epatiche e gastriche nell'aorta prossimale all'arteria celiaca. Trasezionare la vena porta e perfondire tutto il corpo con 10 millilitri di quattro gradi Celsius eparinato salina dall'aorta addominale distale al tronco celiaco.
Raccogliere l'innesto di milza e bloccare con il segmento splenico celiaco aortico associato nella vena porta insieme al segmento della vena splenica e una piccola porzione di tessuto pancreatico. Quindi conservare l'innesto in cinque millilitri di quattro gradi Celsius salina. Entra nell'addome ricevente tramite incisione della linea mediana dopo che l'area chirurgica è preparata come lo è per il donatore e rimuovi la milza nativa ricevente legando la vena e l'arteria splenica.
Coprire i tessuti dell'intestino con una garza imbevuta di 37 gradi Celsius e spostare attentamente l'intestino sul lato sinistro. Sezionare e ligare i rami lombari dell'aorta infrarenale nell'IVC e bloccare l'aorta infrarenale nell'IVC con due morsetti microvascolari a quattro millilitri. Posizionare una sutura di nylon 11-0 attraverso l'aorta infrarenale e ritrarre il vaso per consentire la creazione di un'aortotomia ellittica con microscissori.
Utilizzare un ago calibro 30 per perforare l'IVC per creare una velenotomia ellittica ed estendere l'apertura alla lunghezza della vena portale del donatore. Sciacquare l'aorta e l'IVC con 500 microlitri di soluzione salina eparinizzata per cancellare il sangue intraluminale o i coaguli di sangue dai vasi e posizionare l'innesto di milza del donatore nel fianco destro dell'addome ricevente. Identificare attentamente il polsino aortico del donatore e la vena porta.
Dopo aver confermato che i vasi non sono attorcigliati, coprire l'innesto di milza con garza salina a quattro gradi Celsius imbevuta. Utilizzando due suture di permanenza 11-0, collegare il polsino aortico donatore all'apice prossimale e distale dell'aortotomia ricevente e fare un'anastomosi con due o tre morsi di suture di nylon continue 11-0 tra il polsino aortico del donatore e la parete anteriore dell'aortotomia ricevente. Ruotare l'innesto di milza sul lato sinistro del ricevente e fare l'anastomosi tra il polsino aortico del donatore e la parete posteriore dell'aortotomia ricevente.
Eseguire l'anastomosi venosa tra la vena portale del donatore e l'IVC ricevente con da quattro a cinque morsi di suture continue su ciascun lato. Suturare prima la parete posteriore all'interno del lume del vaso e poi chiudere la parete anteriore usando la stessa sutura. Completare l'anastomosi con un nodo posto nell'angolo inferiore all'esterno dell'IVC.
Ora rilasciare i morsetti del recipiente e utilizzare un batuffolo di cotone sterile per tamponare il sanguinamento fino a quando il colore della milza non viene recuperato. Chiudere l'addome con una sutura Vicryl sintetica assorbibile 5-0 in un motivo continuo e chiudere lo strato cutaneo con una sutura di nylon 5-0 in un motivo interrotto. Quindi iniettare 250 microlitri di soluzione salina calda sottocutaneamente in quattro posizioni separate e riscaldare il mouse in un incubatore a temperatura controllata di 30 gradi Celsius per le prime ore dopo l'operazione con monitoraggio fino a quando l'animale non ha ripreso sufficiente coscienza per il trasferimento nella gabbia domestica.
L'ematossilina e l'eosina degli isografti di milza giorni uno e sette dopo il trapianto rivelano che l'architettura degli isografti di milza rimane intatta durante la prima settimana post operatoria. L'analisi citometrica del flusso per indagare la migrazione delle cellule di milza del donatore dopo il trapianto dimostra che circa il 50% delle cellule di milza sono derivate da donatori un giorno dopo il trapianto e circa il 46% è derivato dal ricevente. Sette giorni dopo il trapianto, i leucociti derivati dal donatore rappresentano circa il 32% delle cellule di milza totale, mentre le cellule derivate dal ricevente sono aumentate fino a circa il 53% I leucociti splenici donatori migrati anche nei linfonodi, nel sangue e nel midollo osseo già dal primo giorno e vengono mantenuti ad almeno il settimo giorno generando una Chimera unica preziosa per la ricerca sul traffico di splenociti.
L'uso di topi knock-in geneticamente modificati come donatori di milza consentirà di investigare il ruolo dei mediatori derivati dalle cellule di milza o delle principali vie di segnalazione nei processi di malattia. Questo modello potrebbe essere un potente strumento per esplorare i meccanismi delle popolazioni di cellule di milza in risposta a agenti patogeni, lesioni, infiammazioni o rigetto del trapianto.
