Il nostro esclusivo sistema di somministrazione di farmaci, che utilizza particelle d'oro di 20 nanometri in due peptidi corti specifici, può stabilizzare le nanoparticelle d'oro in soluzione fisiologica e migliorare il suo assorbimento cellulare e quindi fornire efficacemente farmaci a base di peptidi o altri farmaci nelle cellule. Il nostro ibrido peptidico PNL è facile da sintetizzare e stabile. Usando l'ibrido peptidico della nanoparticella d'oro come portatori di farmaci, possiamo trasferire i farmaci peptidici nelle cellule in modo efficace e in abbondanza.
Abbiamo trattato la lesione da ischemia-riperfusione nei polmoni con il nostro ibrido PNL/PKCi. Il PNL porta peptidi inibitori della PKC nel citoplasma. Questo metodo di consegna è stato in grado di ridurre lesioni polmonari più gravi utilizzando un dosaggio inferiore di PKCi rispetto ad altri metodi di consegna.
Per iniziare questa procedura, recuperare i peptidi da un congelatore a meno 20 gradi Celsius e scongelarli a temperatura ambiente. Utilizzare una micro bilancia per pesare 0,01 grammi di ogni peptide scongelato e trasferire ogni peptide in un tubo conico separato da 50 millilitri. Aggiungere 18,74 millilitri di acqua deionizzata al tubo P2 e 16,93 millilitri di acqua deionizzata al tubo P4.
Aggiungere 8,21 millilitri di acetonitrile al 50% diluito in acqua deionizzata al tubo inibitore del delta PKC. Vortice le soluzioni peptidiche brevemente. Quindi posizionare i tubi in un sonicatore a 40 megahertz per cinque minuti.
Successivamente, trasferire le soluzioni in un armadio di biosicurezza. È fondamentale mettere il tubo conico da 50 ml in un sonicatore per cinque minuti. Se questo passaggio viene ignorato, il PNL/PKCi formerà aggregazioni.
Trasferire un millilitro di ogni soluzione peptidica nel proprio nuovo tubo conico da 50 millilitri. Aggiungere 19 millilitri di acqua deionizzata ai tubi contenenti P2 e P4. E aggiungere 19 millilitri del 50% di acetonitrile al tubo contenente l'inibitore del delta PKC. Aggiungere 475 millilitri della soluzione P2, 25 microlitri della soluzione P4, 500 microlitri della soluzione di inibitore del delta PKC a un tubo da 15 millilitri.
Quindi aggiungere nove millilitri di una soluzione PNL di 20 nanometri allo stesso tubo. Rimuovere la soluzione combinata dall'armadio di biosicurezza e avvolgere il tubo in un foglio di alluminio. Posizionare il tubo su uno shaker durante la notte.
Il giorno dopo, restituisci i campioni all'armadietto della biosicurezza. Trasferire un aliquote millilitro della soluzione PNL/PKCi in micro tubi da 1,5 millilitri. Centrifugare i micro tubi a una micro centrifuga a 15294 volte g e a quattro gradi Celsius per 30 minuti.
Trasferire di nuovo i microtubi nell'armadio di biosicurezza e rimuovere il supernatente da ogni tubo, garantendo nel contempo che il pellet PNL non sia disturbato. Resuspend ogni pellet nel solvente desiderato in base alla concentrazione richiesta. Per valutare la solubilità ibrida PNL/PKCi, versare 0,5 millilitri della soluzione PNL/PKCi in una cuvette per competenza.
Posizionare la cuvetta su uno spettrofotometro UV-Vis e testare l'assorbimento del picco. In questo studio, l'inibitore della protein chinasi C-delta è coniugato con nanoparticelle d'oro per formare un ibrido GNP/PKCi. Bisogna fare attenzione a valutare le proprietà biofisiche dell'ibrido, poiché le nanoparticelle d'oro tendono ad aggregarsi in un solvente.
Quando le nanoparticelle si aggregano, il colore della soluzione cambierà dal rosa al viola. I campioni vengono analizzati con uno spettrofotometro UV-Vis in grado di rilevare con un alto grado di sensibilità. Se l'ibrido non è aggregato, il picco di assorbimento dovrebbe essere di 525 nanometri.
Se il PNL è aggregato, il picco di assorbimento sarà spostato a destra. Come si può vedere, quando si sono formati aggregati, la densità ottica delta diminuisce. Quando si formulano gli ibridi peptidici PNL, è importante ricordare che il rapporto tra peptidi e soluzione PNL dovrebbe essere da uno a nove.
Questa formula PNL/PKCi può essere utilizzata per lesioni da ischemia-riperfusione in sistemi di organi diversi dal polmone. Tutti i peptidi possono attaccarsi al PNL se questi peptidi hanno un residuo di cisteina all'N-terminale. Ciò significa che l'ibrido peptidico PNL può essere utilizzato per trasportare altri farmaci peptidici nella cellula.
I peptidi progettati razionalmente sono una nuova tecnologia che può portare una specifica interazione proteina-proteina all'interno di quelle cellule. Questa tecnica, sviluppata qui, può essere utilizzata per la consegna di nuovi farmaci peptidici o per versioni modificate di farmaci esistenti.
