Questo metodo può fornire importanti informazioni relative all'ecologia della pupa dei bruchi delle foglie di tè, Ectropis grisescens, come i loro comportamenti di pupa e la sopravvissuta alle pupe in risposta a diversi fattori ambientali. Il principale vantaggio di questa tecnica, ti consente di utilizzare un metodo semplice come misurare la preferenza di pupa e il successo di emergenza di Ectropis grisescens. Per iniziare, tagliare germogli freschi dalle piante da tè.
Quindi riempire un pallone triangolare da 250 millilitri con acqua del rubinetto e posizionare i germogli nel pallone. Trasferire da tre a quattro contenitori in un bacino di plastica. Quindi, rilascia da 1.000 a 2.000 larve da una colonia di laboratorio di E.grisescens sulle foglie dei germogli di tè.
Mantenere le larve in condizioni di laboratorio controllate. Ottieni le larve mature dell'ultimo instar che cadono dalle foglie dei germogli e vagano attivamente lungo il fondo del bacino. Sterilizzare il terreno e la sabbia in un essiccatore da forno di 80 gradi Celsius per tre giorni.
Quindi asciugare sia il terreno che la sabbia a 50 gradi Celsius per diverse settimane. I campioni di substrato sono sufficientemente asciugati quando il peso non cambia nel tempo. Utilizzare un pestello di legno e malta per macinare il terreno essiccato.
Quindi setacciare la sabbia e il terreno attraverso un setaccio di tre millimetri. Aggiungere la quantità richiesta di acqua distillata ai sacchetti sigillati contenenti i substrati e mescolare accuratamente. Successivamente, utilizzare fogli di PVC per dividere i contenitori in polipropilene in sei camere uguali.
Fissare i fogli di PVC e sigillare le fessure con colla a caldo. Quindi, riempire le sei camere con lo stesso tipo di substrato con diversi contenuti di umidità. Utilizzare piccoli pezzi di nastro adesivo per incollare da quattro a sei pezzi di foglie fresche sulla superficie interna del coperchio del contenitore in polipropilene.
Quindi, rilasciare 30 larve mature last-instar sulle foglie incollate al coperchio del contenitore camerato. Capovolta con cura il coperchio e copri il contenitore. Mantenere l'arena di bioassay in una camera ambientale con un fotoperiodo chiaro / scuro da 14 a 10 a 26 gradi Celsius.
Il quinto giorno, contare il numero di pupe sulla superficie del substrato in ogni camera. Smontare il saggio biologico e contare il numero di pupe. In primo luogo, utilizzare fogli di PVC per dividere i contenitori in polipropilene in quattro camere.
Quindi, fissare e sigillare i fogli di PVC con colla a caldo. Riempire le camere del contenitore con quattro tipi di substrato con lo stesso contenuto di umidità e ordini assegnati casualmente. Quindi, utilizzare il nastro adesivo per incollare foglie di tè fresco sul coperchio prima di capovolgerlo sul contenitore.
Successivamente, trasferire le larve alle foglie e registrare e analizzare i dati come delineato nel protocollo di testo. Dopo aver preparato i 12 trattamenti del contenuto di umidità del substrato, aggiungere il substrato ai contenitori di plastica. Quindi rilascia 15 larve mature dell'ultimo instar nel substrato di ogni arena.
Mantenere ciascuna delle arene di bioassay in una camera ambientale con un fotoperiodo chiaro / scuro da 14 a 10 a 26 gradi Celsius. Il terzo giorno, conta il numero di pupe e eventuali larve morte sulla superficie del substrato di ogni arena. Infine, registra il numero di adulti emergenti ogni giorno fino a quando non emergono nuovi adulti per 15 giorni.
In questo protocollo, i biosatti di scelta dell'umidità e del substrato sono stati utilizzati per studiare la preferenza di pupa di E.grisescens. I test sulla scelta dell'umidità hanno mostrato che più individui si sono impanati sulla sabbia idratata del 5% o all'interno del 5% e del 35% rispetto alla sabbia idratata dell'80%. Tuttavia, molti più individui hanno preferito impuparsi sul terreno o all'interno di esso con contenuto intermedio di umidità.
I biosatti di scelta del substrato hanno rivelato che la sabbia era più preferita da E.grisescens in condizioni di umidità del 20% e in condizioni di umidità dell'80%. Tuttavia, non è stata trovata alcuna preferenza di pupa tra i quattro substrati in condizioni di umidità del 50%. Dopo lo sviluppo, questa tecnica ha spianato la strada ai ricercatori nel campo dell'entomologia per esplorare l'ecologia della pupa di molti insetti cucciolati di suolo.
