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Genetics

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Nanyang Technological University

Biotina-based Pulldown Assay Validate mRNA Mirna obiettivi del cellulare

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•

11:00 min

•

June 12th, 2018

DOI :

10.3791/57786-v

June 12th, 2018

•

Sabyasachi Dash¹^,²^,³, Muthukumar Balasubramaniam², Chandravanu Dash², Jui Pandhare²

¹School of Biotechnology, Kalinga Institute of Industrial Technology University, ²1. Center for AIDS Health Disparities Research Department of Biochemistry and Cancer Biology, Meharry Medical College, ³Kalinga Institute of Industrial Technology University

Riepilogo

Questo rapporto descrive un metodo veloce e affidabile per la convalida di mRNA bersaglio di Mirna cellulari. Il metodo utilizza biotinilati sintetici basati su Locked Nucleic Acid LNA miRNA imita per catturare destinazione mRNA. Successivamente, biglie magnetiche rivestite con streptavidina sono impiegati per pulldown il bersaglio mRNA per quantificazione da reazione a catena della polimerasi qPCR.

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Capitoli in questo video

0:04

Title

1:34

Preparation of Streptavidin Coated Magnetic Beads — I

3:52

Preparation of Cell Lysate

5:36

Preparation of Streptavidin Magnetic Beads — II

6:34

Pull-down of Target mRNA-miRNA Complexes

7:35

Total RNA Extracted, cDNA Synthesis, and qPCR

8:57

Results: Use of MicroRNAs to Capture the Target mRNA

9:55

Conclusion

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