המעבדה שלנו משתמשת בזבוב הפירות כאורגניזם מודל כדי לחקור כיצד מידע על טעם מעובד באמצעות מעגלים עצביים, החל מזיהוי כימיקלים ועד להשפעה על התנהגות. אנו משתמשים בפרוטוקול הדמיה זה כדי לזהות תאי טעם המגיבים לחומצות אמינו, ולקבוע אם מצבים פנימיים שונים מווסתים את האופן שבו תאי הטעם מגיבים לחומרי מזון חיוניים אלה. היתרון של גישת הדמיית סידן זו הוא שהיא מאפשרת להקליט תגובות עצביות הנגרמות על ידי טעם מתאים ספציפיים בבעלי חיים ערים שבהם המצבים הפנימיים נשארים שלמים.
כעת אנו יכולים לזהות מעגלי טעם משוערים בקונקטום המוח השלם החדש של דרוזופילה ולאמת דינמיקה עצבית תפקודית in vivo באמצעות גישת הדמיית סידן זו. כדי להתחיל, הנח את הזבוב המורדם מתחת למיקרוסקופ דיסקציה. בעזרת מספריים לדיסקציה, הסר את הרגליים האמצעיות והאחוריות במפרק השוק של עצם הירך ואת ארבע הרגליים בטרוכנטר.
הרם את הזבוב בכנפיים באמצעות מלקחיים קהים כדי למקם אותו עם הראש מעל חריץ צוואר הרחם הממוקד של תא ההדמיה תוך שמירה על הגוף מתחת. בעזרת הצד הקהה של המספריים והמלקחיים הקהים, דחף בעדינות את הראש ובית החזה בו זמנית לתוך החריץ. לאחר שהזבוב נמצא היטב בתוך החריץ, דחף אותו לאחור ומקם אותו בעדינות כך שיפנה לקדמת החדר.
אספו טיפה קטנה של לק על קצה הקיסם ומרחו שכבה דקה כדי להדק את ראש הזבוב לתא ההדמיה. הרם את השעווה ביד אחת ואסוף טיפת שעווה קטנה בקצה. בעזרת מלקחיים חדים למחצה, לעומת זאת, תפוס מישוש מקסילרי אחד ומשוך בעדינות החוצה והחזק את הפרובוסקיס בהארכה מלאה.
גע בקצה השעווה בתא ליד בסיס הפרובוסקיס עד שהשעווה מתחילה לזרום. זז כדי ליצור מגע עם בסיס הפרובוסקיס והשעווה באמצע הפיר, הימנע ממגע עם הרגישות התוויות. לאחר מכן הארך את הפרובוסקיס במלואו ישר ככל האפשר.
כעת הכניסו את הזבובים המותקנים לתא לחות למשך 60 דקות כדי להתאושש. הסר את הזבובים מתא הלחות. בעזרת מלקחיים חדים מאוד, צבטו את שתי האנטנות, צבטו את הציפורן כדי ליצור חור והכניסו צד אחד של המלקחיים החדים.
העבירו את המלקחיים מתחת לציפורן כדי להסיר אותה מהאזור המכסה את אזור העניין במוח. כדי לשטוף את המוח החשוף, הוסיפו כ-100 מיקרוליטר של תמיסת המולימפה מלאכותית, או AHL, לראש. לאחר הכביסה, הסירו את ה-AHL והשאירו שכבה דקה כדי למנוע מהמוח להתייבש.
בעזרת מלקחיים חדים, הסר שקי אוויר וכל פסולת גדולה המכסה את המוח. כדי לדמות באופן ספציפי את האזור התת-וושט, או SEZ, חתכו את הוושט בבסיס ליד הפרובוסקיס ובנקודה שבה הוא עובר דרך המוח, באמצעות מלקחיים חדים מאוד. הסר את החלק הזה כדי לחשוף את ה-SEZ.
מתחת למיקרוסקופ הדיסקציה, מקם את החלקת הכיסוי בגודל 10 על 20 מילימטר לתוך החריץ הזוויתי של תא ההדמיה. טען כשני מיקרוליטר מים, או בקרה שלילית אחרת, לתוך צינור הנימים. אתר את הזבוב המנותח והתמקד בתווית באמצעות מטרת שדה בהיר של טבילה באוויר פי 10.
יישר את הנימים עם התווית תחת 10x view. השאר את מצב הנימים ישירות מול התווית וודא שהוא קרוב אך לא נוגע. הזיזו את הבמה כדי למרכז את אזור העניין במוח.
עבור ליעד טבילה במים בהגדלה גבוהה יותר כגון יעד 40x. הוסף כ-200 מיקרוליטר של AHL על גבי המוח כדי להבטיח מגע עם מטרת הטבילה. עבור לעוצמת לייזר של 488 ננומטר כדי לאתר ביטוי GCaMP באזור העניין.
לאחר איסוף לפחות חמש שניות של פלואורסצנטיות בסיסית, הזז ידנית את הממריץ כך שהנימים יכסו את התווית למשך חמש שניות. הסר את הגירוי והמשך לצלם כל עוד תרצה. לאחר מכן, הסר את ה-AHL וחזור לשדה בהיר פי 10 כדי לאשר שהחלקת הכיסוי, הממריץ והתווית נשארים במיקום הנכון.
לאחר מכן הסר את תא ההדמיה והשתמש במגבון נטול מוך כדי להסיר את התמיסה הראשונה מהנימים. שטפו את הפיפטה במים, והכניסו כשני מיקרוליטר מהטסטנט הבא לתוך הצינור הנימים. השינוי הקרינה היחסי בזבובי Gr64f GCaMP היה גבוה משמעותית לגירוי סוכרוז בהשוואה למים, מה שמדגים תגובה חזקה ומתמשכת של נוירונים של קולטני טעם מתוקים.
שיא הקרינה היחסי לגירוי סוכרוז היה גדול משמעותית מזה של מים. השינוי הקרינה בזבובי Gr66a GCaMP היה גבוה משמעותית לגירוי קפאין מאשר למים, והראה תגובה להופעת קפאין והסרתו. דפוס ההקרנה של מסופי האקסון בזבובי Gr66a היה שונה מזה של Gr64f, והדגים את ההפרדה האנטומית של נוירונים קולטני טעם מרים וסוכר.
