In Vivo גישת אוסטאו-אורגנואיד לקצירת תאי גזע/אב המטופויטיים טיפוליים

מזה זמן רב אנו עוסקים במחקר של ביו-חומרים, ומציגים את הרעיון החלוצי של ביולוגים של חומרים בפיתוח וירוסים, חומרים לתיקון עצם פעילה, והטכנולוגים לגורם גדילה, הכנה והפעלה. פיתחנו גישת In Vivo Osteo-Organoid תוך שימוש בחומרים ביו-אקטיביים כדי להשיג ייצור לפי דרישה של גושים אוטומטיים, רקמות ותאים לטיפול במחלות. הטכנולוגיה המסורתית של התרחבות אינדיבידואלית של תאי גזע עומדת בפני מגבלות בשמירה על התפקודים הפיזיולוגיים של תאי הגזע.

הפרוטוקול שלנו בונה מיקרו-סביבה של תרביות בודדות כדי להבטיח כמות שופעת של תאי גזע תוך שמירה על הגירוי שלהם. כדי להתחיל, הניחו את תמיסת הציר האנושי הרקומביננטי וספוג הג'לטין שלא נפתח על ספסל סטרילי ונקי. השתמשו במספריים מעוקרים כדי לחתוך את ספוג הג'לטין ל-48 חתיכות בגודל אחיד ולהעביר אותן לצלחת של 48 בארות.

פיפטה תמיסת המניות האנושית הרקומביננטית מספר פעמים כדי לערבב אותה ביסודיות. שאפו 30 מיקרוליטר של התמיסה והוסיפו אותה טיפה לספוג הג'לטין. לאחר מכן, לאטום את צלחת 48 באר עם שכבה של parafilm.

מוציאים את הצלחת מהספסל הנקי ומניחים אותה בטמפרטורה של מינוס 20 מעלות צלזיוס. כדי להתחיל, להעביר את העכבר המרדים לאזור הניתוח, ולמקם אותו במצב שכיבה צדדית ימנית להשתלה קלה של הפיגום הביו-אקטיבי ברגל שמאל. באמצעות מכונת גילוח, לגלח את שיער רגל שמאל ולחטא את האזור המגולח באמצעות סיבובים לסירוגין של כלורהקסידין ואלכוהול, שלוש פעמים כל אחד.

לאחר ביצוע החתך, הכנס מספריים אופתלמיים לשריר השקית לכיוון השוקה כדי לספק מקום להשתלת החומר הבאה. כעת, קחו את הפיגום הביו-אקטיבי המוכן עמוס בבני אדם רקומביננטיים ובעזרת מלקחיים אופתלמיים, צבטו אותו לצורה גלילית. השתילו את הפיגום בכיס השריר לאורך החריץ שנוצר קודם לכן.

לאחר 12 שבועות של השתלה, להרדים את העכבר בזהירות להפריד את הגפה האחורית מן תא המטען. בעזרת מספריים מיניאטוריים, מסירים בקפידה את רקמת השריר מהאוסטאו-אורגנואידים. סלק רקמות רכות מחוברות באמצעות גזה כדי להבטיח דגימת אוסטאו-אורגנואיד נקייה.

תקן חלק של אוסטאו-אורגנואידים בתמיסת 4% Paraformaldehyde למשך 24 שעות בטמפרטורת החדר לניתוח היסטולוגי. בתור התחלה, קצרו אוסטאו-אורגנואידים מעכברים שהושתלו בהם פיגום המכיל רקומביננטי אנושי, הכניסו אוסטאו-אורגנואידים למכתש, והוסיפו מיליליטר אחד של HBSS, ללא יוני סידן ומגנזיום. השתמש מספריים כירורגיים כדי לקצוץ את הדגימות ולאחר מכן בעדינות למחוץ אותם במכתש ו pestle.

העבירו את התוצאה בתרחיף תאים דרך מסננת תאים של 40 מיקרומטר. לאחר מכן, צנטריפוגו אותו ב 300 גרם במשך חמש דקות בארבע מעלות צלזיוס. לאחר מכן, השליכו את הסופרנטנט.

יש להשהות מחדש את כדורי התא ב-300 מיקרוליטר HBSS ולערבב היטב כדי להשיג תרחיף תאים אחיד. הניחו את העכבר המוקרן תת-קטלני על כרית חימום בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס. לאחר הבטחת הרדמה מלאה, מקם את העכבר בשכיבה צידית שמאלית כשראשו מופנה ימינה.

באמצעות מזרק של מיליליטר עם מחט של 25 מד, שואפים 200 מיקרוליטר של השעיית התא המוכן. כדי לחשוף את העין לקראת ההליך, הניחו אצבע על החלק העליון של הראש ולאורך קו הלסת, ומשכו בעדינות את העור אחורה ולמטה. הכנס בזהירות את המחט כאשר השיקוע פונה כלפי מטה לתוך הקנטוס המדיאלי של העין בזווית משוערת של 30 מעלות.

בעדינות, בצע את קווי המתאר של גלגל העין עם המחט עד שהוא מגיע לבסיס העין. הזריקו את מתלה התא בצורה חלקה ולאט לאזור המיועד. לאחר השלמת ההזרקה, החזירו את העכבר לכלוב שלו כדי לאפשר התאוששות.