זריקות Waterjet של רכיבים פעילים, כגון נוזלים, ננו-חלקיקים, מיקרו-חלקיקים, תרופות עטופות, או אפילו תאים חיים, יכולות להיות מיושמות בצורה מדויקת הרבה יותר בהשוואה לזריקות מחט ברקמות שונות הממוקדות. גישות זעיר פולשניות דורשות לוקליזציה מדויקת של התרופה בשכבות קבועות מראש של הרקמה הממוקדת על ידי בחירה מראש של לחצי הזרקה. המיקוד הנוכחי שלנו הוא הטיפול התאי לבריחת שתן.
עם זאת, טכניקה זו כבר הורחבה להתחדשות של רקמת שריר נגועה לאחר התקפי לב חמורים. נכון לעכשיו, הטכניקה יכולה להיות מיושמת רק על ידי חוקרים מנוסים או רופאים מורשים במחקרים פרה-קליניים. הוא אינו מיועד לשמש בהליכי מעבדה שגרתיים שכן הוא פותח למטרות קליניות עתידיות.
כדי להתחיל, הניחו את השופכה עם שלפוחית השתן המחברת המנותקת מנקבת חזירה בוגרת על ספוג המחקה את האלסטיות של רצפת האגן התחתונה. לאחר מכן באמצעות שלפוחית השתן, לקבוע את הכיוון של השופכה. זה אפשרי בשל לוקליזציה של השופכן ואת שלוש הרצועות, אשר לתקן את שלפוחית השתן בחלל הבטן והאגן.
לאחר הכוונה נכונה של השופכה, חותכים אותה פתוחה לאורך בצד הגבי בעזרת קטטר. לאחר התאמת צפיפות התאים של התאים הסטרומיים שמקורם ברקמת השומן החזירי ל-2.4 פעמים 10 לתאים השישיים למיליליטר, סמן את התאים בכתם תאים חיים חדירים של קרום פלואורסצנטי ירוק, ואז שאף את תרחיף התא עם המזרק ומיישם את מחט ההזרקה הציטוטוסקופית של ויליאמס. לאחר מכן, או להחזיק את המחט זמן קצר מעל שני מיליליטרים של מדיית גדילה בצינור צנטריפוגה של 15 מיליליטר או להחדיר את המחט לתוך רקמת השופכה הפתוחה.
בשני המקרים, להזריק ידנית 250 microliters של מתלה התא. תאים שהוזרקו לשופכה הקדבורית מכיפת הזרקה. אסוף את התאים המוזרקים לתקשורת ישירות על ידי צנטריפוגה.
עבור תאים המוזרקים לשופכה הקדבורית, שאפו אותם מתוך כיפת ההזרקה עם מחט של 18 מדים המופעלת על מזרק. מעבירים את התאים השואפים לתוך צינור צנטריפוגה ומטילים אותם על ידי צנטריפוגה. החייאת שני כדורי התאים בארבעה מיליליטרים של מדיית גדילה.
כדי לקבוע את תפוקת התאים ואת הכדאיות שלהם, יש לערבב 20 מהתרחיפים של התא ביסודיות עם 20 מיקרוליטרים של טריפאן כחול. לאחר מכן מלאו 10 מיקרוליטרים של תערובת זו בכל תא של ההמוציטומטר. תחת מיקרוסקופ סופרים את התאים בכל ארבעת הריבועים הפינתיים.
ספרו את התאים הלבנים שאינם מוכתמים כתאים בני קיימא ואת התאים המוכתמים בכחול כתאים מתים, ואז חישבו את מספר התא למיליליטר. עבור זריקות דרך הזרקת המים, התאימו את צפיפות התאים הסטרומיים שמקורם ברקמת השומן החזירי לשישה פעמים 10 עד שישית לכל מיליליטר. תייג אותם כפי שהוכח קודם לכן ומלא את תרחיף התא ביחידת המינון של מכשיר הזרקת המים ללא מחט.
לאחר מכן או להחזיק את זרבובית ההזרקה מעט מעל שני מיליליטרים של מדיית גדילה בצינור צנטריפוגה של 15 מיליליטר או מעט מעל רקמת השופכה הפתוחה. בשני המקרים, להזריק 100 microliters של תרחיף התא. השתמש בלחץ גבוה לחדירת רקמות ואחריו שלב לחץ נמוך להזרקות תאים.
תאים המוזרקים לשופכה הקדבורית יוצרים כיפת הזרקה. לאסוף תאים שהוזרקו לתוך המדיה ישירות על ידי צנטריפוגה. עבור תאים המוזרקים לשופכה הקדבורית, שאפו אותם אל מחוץ לכיפת ההזרקה.
מעבירים את התאים השואפים לתוך צינור צנטריפוגה, ומפעילים אותם באמצעות צנטריפוגה כפי שהודגם קודם לכן. לאחר צנטריפוגה, החייאת שני הכדורים בארבעה מיליליטרים של מדיית גדילה. זרעים את התאים שנשלפו לאחר הזרקות במנות תרבית רקמה בצפיפות של חמישה כפול 10 עד התאים החמישית לכל מנה.
לאחר דגירה של שלוש שעות ב-37 מעלות צלזיוס, וממש לפני מדידת ה-AFM, החליפו את מדיית הגדילה בשלושה מיליליטרים של מדיית L-15 של ליבוביץ' ללא L-גלוטמין. כדי למדוד את הגמישות של תאים בודדים, זהה באופן חזותי תא אחד והתמקד בו. לאחר מכן הניחו את עכבר המחשב במרכז התא וכדי לשפר את דיוק המדידות, מקם את קצה ה-AFM ישירות מעל גרעין התא.
לאחר מכן, התמקדו בפחית והזיזו אותה על עכבר המחשב. לאחר מכן התחל את המדידה עם הפעלה ומדוד לפחות 50 תאים. נעשה שימוש בפרמטר הנקודה שנקבעה על ידי כיול הקנטילבר ותא אחד נמדד שלוש פעמים.
הכדאיות של תאים שהועברו דרך מחט וויליאמס הייתה גבוהה יותר מהזרקות על ידי סילון המים באמצעות הגדרות E60-10. הערכה ביומכנית של זריקות בנוזל הלכידה גילתה כי זריקות המחט של ויליאמס לא הראו הבדל משמעותי במודולי האלסטי בהשוואה לבקרות, בעוד שזריקות הזרקת המים הפחיתו באופן משמעותי את המודולי האלסטי התאי ב-40 עד 50% באופן דומה, בדגימות רקמת השופכה הקדבורית, זריקות המחט של וויליאמס לא הניבו הבדל משמעותי במודולי אלסטי תאי בהשוואה לבקרות. עם זאת, נצפתה ירידה משמעותית של 51% לאחר זריקות הזרקת מים.
צריך רק לוודא שזריקות המחט לא חודרות במלואן לרקמה שגורמת לפציעה. עם waterjet, יש למקם את המכשיר רק במיקום הנכון באזור ההזרקה בעוד השאר נעשה באופן אוטומטי על ידי המכשיר עצמו. מכיוון שמכשיר waterjet פותח כדי להתאים ולהתאים למכשירים אנדוסקופיים, אתה יכול להשתמש ביישומי waterjet עבור כל אתר בגוף אשר ניתן להגיע אליו על ידי טכנולוגיות ציסטוסקופיות או אנדוסקופיות אלה כדי לחדש רקמות ולבצע את עבודת התיקון.
