כל השיטות המתוארות כאן אושרו על ידי הרשות וטרינרי ממשלתי (לדנציג Landesamt Landwirtschaft, Lebensmittelsicherheit und Fischerei מקלנבורג-מערב פומרניה, (LALLF M-V)).
1. לפני הניתוח טיפול והכנה של החיה
<ol><li>עם ההגעה במתקן של בעלי חיים, חלק חיות (C57Bl/6) לקבוצות גודל דומה, לכלוא כל קבוצה ביחד ולשמור קבוצות קבועה לאורך כל הניסויים. הערה: השתמש חיות מאותו המין. הממצאים המתוארים התקבלו עם עכברים זכרים. הערה: אם זכר בעלי חיים משמשים, קבוצות כלוב יחד מתחיל כאשר הם בגיל 7 שבועות, כך ניתן ליצור היררכיה, ובכך למזער את הסיכון של התנהגות אגרסיבית במהלך הניסויים.</li>
	<li>לפחות שבוע לפני הניתוח, לעבור אנרגיה גבוהה (> 14 MJ/kg) וחלבון גבוהה (> 20%) להאכיל המכיל את כל יסודות קורט חיוניים וויטמינים (לפרטים, ראה רשימת חומרים). הערה: מבטיח כל העכברים שוקלים לפחות 25 g כאשר הניתוח מבוצע.</li>
	<li>זירוז אלחוש, שיכוך כאבים באמצעות הזרקת בקרום הבטן של קטאמין (i.p. 87 מ"ג/ק"ג), חריגות השירותים הווטרינריים הידרוכלוריד (i.p. 13 מ"ג/ק"ג). המתן עד העכבר סובלנית גירוי מכני, למשל הבוהן זפת, ללא תגובה מוטורית.</li>
	<li>אבטח את העכבר narcotized עם קלטות במצב פרקדן על אנדרליי חום מוצב השולחן מבצע, המבטיח של אובדן חום גוף מהמם מיצוב במהלך מבצע והימנעות יציב. הערה: אנדרליי חום צריך טמפרטורת פני שטח של 36 ° C עד 40 מעלות צלזיוס; טמפרטורת הפעלה החדר צריך להיות 21 ° C.</li>
</ol>2. מבצע דיסטלי למעי הגס
<ol><li>לגלח את השיער בבטן. לפני תחילת הניתוח, לחטא את השדה מבצע שלוש פעמים באמצעות אלכוהול 70% של iodophor. לעטוף את שדה הפעולה כדי להבטיח תנאים אספטי.</li>
	<li>לבצע פתיחת בטן החציוני של 15 מ מ על-ידי אם את שרירי הבטן ואת של הצפק לאורך לינאה אלבה, ובכך למזער את אובדן דם.</li>
	<li>להשתמש מלקחיים atraumatic דה-בייקי שני, משוך בזהירות את המעי האטום, ileum מסוף, עולה ואת המעי הגס של חלל הצפק. הערה: הקפד להגביל באופן מכני מניפולציה של המעי כדי למנוע פגיעה במבנים מצע המעי העליון.</li>
	<li>לזהות את הקוטב cecal, עולה המעי הגס ו המעי הדק (דמויות 1a ו 1b). הערה: זיהוי נכון של הגס עולה הוא מהותי עבור מיקום נכון של למעי הגס. במקרים בהם האנטומיה של האזור ileocecal רב-משמעי, הנוכחות של טלאים של פייה מזהה המעי הדק, הנוכחות של צואה בנוי המאפיינת את המעי הגס.</li>
	<li>להשתמש בסרגל כדי לקבוע את המיקום של למעי הגס בעתיד. זה צריך להיות ממוקם 20 מ מ דיסטלי לשסתום ileocecal עבור למעי הגס דיסטלי.</li>
	<li>עושים חתך 3 מ מ השני בקיר הבטן ברבע העליון נכון. משוך על קטע המעי הגס שזוהה קודם לכן דרך החתך כדי ליצור לולאה, נזהר שלא לעוות את הלולאה.</li>
	<li>להעביר בזהירות קליבר 22 גמיש הזרקה דרך לפדר האחורי. . שמור על עצמך שלא יגרמו נזק למבנים וסקולרית מצע המעי העליון.</li>
	<li>לחזור המעי חלל הצפק.</li>
	<li>לתקן את שני הקצוות של הצינור הגמיש על העור באמצעות תפרים פשוטים, בתפר resorbable (למשל, polyglactin 910 או polyfil 4-0 1/2 c).</li>
	<li>לפני סגירת את פתיחת בטן, לבצע החייאה נוזלים באמצעות זריקה בקרום הבטן של 0.5 מ ל 0.9% תמיסת מלח.</li>
	<li>סגור של הצפק, השכבה שריר בתפר רצוף באמצעות בתפר resorbable (למשל, polyglactin 910 או polyfil 4-0 1/2 c). סגור את העור בתפר רצוף באמצעות בתפר resorbable (למשל, polyglactin 910 או polyfil 4-0 1 / 2c).</li>
	<li>פתח את לולאת המעי הגס יהיו exteriorized על ידי ביצוע של חיתוך של סכומי ביניים באמצעות מספריים משובחים. למנוע כל פגיעה מצע המעי. לא transect המעי הגס לחלוטין.</li>
	<li>לתקן כל הפתיחה למעי הגס באמצעות שלושה תפרים מלא-עובי יחיד הצפק, העור באמצעות a monofil, תפר שנספג (למשל, polydioxanone או monofil, 6-0 3/שמיניות). הלולאה מביא, שהוא הקצה פונקציונלי-למעי הגס, ואת הלולאה efferent, אשר פיסטולה ריריות, מופרדים באופן ברור בנקודה זו (איור 1 c). הערה: זמן הפעולה צריכה להיות פחות מ-20 דקות כדי להגביל הפסדים תרמיים של נוזלים.</li>
	<li>לאחר סיום הניתוח, לחיטוי מכשירים באמצעות פתרון נטולת אלדהיד לחיטוי באמבט אולטראסוני לפי ההוראות של היצרן.</li>
</ol>3. המזויפים מבצע (Colotomy)
<ol><li>בצע שלבים 1.1. דרך 2.4.</li>
	<li>להשתמש בסרגל כדי לקבוע את מיקום colotomy בעתיד. Colotomy שנמצאת באותו המרחק מן השסתום ileocecal כמו למעי הגס ב קבוצת הניסוי.</li>
	<li>פתח את המעי הגס לפחות שני שלישים והיקפו באמצעות מספריים משובחים.</li>
	<li>סגור colotomy עם שכבה אחת, מלא-עובי קטע התפר באמצעות a monofil, שנספג תפר (למשל, polydioxanone, monofil, 6-0 3/שמיניות). הערה: זמן הפעולה צריך להיות פחות מ-20 דקות בשביל מנתח experimented, הגבלת הפסדים תרמיים של נוזלים.</li>
	<li>בצע שלבים 2.10. , 2.11. 2.14.</li>
</ol>4. לאחר הניתוח טיפול
<ol><li>לחזור חיות הכלובים. מספקים אווירה היטב מחוסמת של 37 ° C (למשל, עם מנורת אינפרא-אדום) עד עכברים ער לגמרי. לאחר מכן, לשמור על עכברים בסביבת טמפרטורה, לחות-מוסדר (21 ° C; 30% ± 10% לחות יחסית). לאפשר גישה חופשית מזון ומים לשתיה. כדי להקל על ספיגת נוזלים, לספק הזנה בבעלי חיים ספוגי מים נוספים.</li>
	<li>מתחילים כאבים לאחר הניתוח על ידי הזרקת 0.1 מ"ג/ק"ג גוף במשקל הבופרנורפין ספורטינג כאשר בעלי חיים מראים תגובת גירוי מכני. להיות זהירים כדי למנוע דיכאון בדרכי הנשימה.</li>
	<li>תוספת שתייה עם 1 מ"ג/מ"ל טרמדול עבור המשך כאבים במהלך השבוע לאחר הניתוח הראשון.</li>
	<li>כדי לפצות על צריכת הנוזלים ירד עקב צמצום הניידות, לספק משטח מוצק לשתות בכלוב בשבוע הראשון לאחר הניתוח.</li>
	<li>שוקל החיות והתנהגות בעלי חיים ציון מדי יום במהלך השבוע הראשון, בכל יום שני במהלך שארית החודש הראשון, בכל יום שלישי במהלך החודש השני באמצעות התוצאה חומרת המחלה המתוארים Kleinwort. et al. 6.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Glotzer, D. J., Glick, M. E., Goldman, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proctitis+and+colitis+following+diversion+of+the+fecal+stream.">Proctitis and colitis following diversion of the fecal stream.</a> Gastroenterology. 80, 438-441 (1981).</li><li>Morson, B., Dawson, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Gastrointestinal Pathology. , (1972).</li><li>Whelan, R. L., Abramson, D., Kim, D. S., Hashmi, H. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diversion+colitis.+A+prospective+study.">Diversion colitis. A prospective study.</a> Surg Endosc. 8, 19-24 (1994).</li><li>Haas, P. A., Fox, T. A., Szilagy, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endoscopic+examination+of+the+colon+and+rectum+distal+to+a+colostomy.">Endoscopic examination of the colon and rectum distal to a colostomy.</a> Am J Gastroenterol. 85, 850-854 (1990).</li><li>Valatas, V., Bamias, G., Kolios, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+colitis+models:+Insights+into+the+pathogenesis+of+inflammatory+bowel+disease+and+translational+issues.">Experimental colitis models: Insights into the pathogenesis of inflammatory bowel disease and translational issues.</a> Eur J Pharmacol. 759, 253-264 (2015).</li><li>Kleinwort, A., D&#246;ring, P., Hackbarth, C., Heidecke, C. D., Schulze, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deviation+of+the+Fecal+Stream+in+Colonic+Bowel+Segments+Results+in+Increased+Numbers+of+Isolated+Lymphoid+Follicles+in+the+Submucosal+Compartment+in+a+Novel+Murine+Model+of+Diversion+Colitis.">Deviation of the Fecal Stream in Colonic Bowel Segments Results in Increased Numbers of Isolated Lymphoid Follicles in the Submucosal Compartment in a Novel Murine Model of Diversion Colitis.</a> Biomed Res Int. 2017, 13 (2017).</li><li>Tangjarukij, C., Navasumrit, P., Zelikoff, J. T., Ruchirawat, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effects+of+pyridoxine+deficiency+and+supplementation+on+hematological+profiles,+lymphocyte+function,+and+hepatic+cytochrome+P450+in+B6C3F1+mice.">The effects of pyridoxine deficiency and supplementation on hematological profiles, lymphocyte function, and hepatic cytochrome P450 in B6C3F1 mice.</a> J Immunotoxicol. 6, 147-160 (2009).</li><li>Soave, O., Brand, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coprophagy+in+animals:+a+review.">Coprophagy in animals: a review.</a> Cornell Vet. 81, 357-364 (1991).</li><li>Ebino, K. Y., Yoshinaga, K., Suwa, T., Kuwabara, Y., Takahashi, K. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+prevention+of+coprophagy+on+pregnant+mice--is+coprophagy+beneficial+on+a+balanced+diet.">Effects of prevention of coprophagy on pregnant mice--is coprophagy beneficial on a balanced diet.</a> Jikken Dobutsu. 38, 245-252 (1989).</li><li>Babickova, J., Tothova, L., Lengyelova, E., Bartonova, A., Hodosy, J., Gardlik, R., Celec, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sex+Differences+in+Experimentally+Induced+Colitis+in+Mice:+a+Role+for+Estrogens.">Sex Differences in Experimentally Induced Colitis in Mice: a Role for Estrogens.</a> Inflammation. 38, 1996-2006 (2015).</li><li>Lee, S. M., Kim, N., Son, H. J., Park, J. H., Nam, R. H., Ham, M. H., Choi, D., Sohn, S. H., Shin, E., Hwang, Y. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Effect+of+Sex+on+the+Azoxymethane/Dextran+Sulfate+Sodium-treated+Mice+Model+of+Colon+Cancer.">The Effect of Sex on the Azoxymethane/Dextran Sulfate Sodium-treated Mice Model of Colon Cancer.</a> J Cancer Prev. 21, 271-278 (2016).</li><li>Angele, M. K., Pratschke, S., Hubbard, W. J., Chaudry, I. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gender+differences+in+sepsis:+cardiovascular+and+immunological+aspects.">Gender differences in sepsis: cardiovascular and immunological aspects.</a> Virulence. 5, 12-19 (2013).</li><li>Brown, R. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Social+Behaviour,+reproduction,+and+population+changes+in+the+house+mouse+(Mus+musculus+L).">Social Behaviour, reproduction, and population changes in the house mouse (Mus musculus L).</a> Eccological Monographs. 23, 788-795 (1953).</li><li>Poole, T. B., Morgan, H. D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differences+in+aggressive+behaviour+betweeen+male+mice+(Mus+musculus+L.)+in+colonies+of+different+sizes.">Differences in aggressive behaviour betweeen male mice (Mus musculus L.) in colonies of different sizes.</a> Animal Behaviour. 21, 788-795 (1973).</li><li>Pasquarelli, N., Voehringer, P., Henke, J., Ferger, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+a+change+in+housing+conditions+on+body+weight,+behavior+and+brain+neurotransmitters+in+male+C57BL/6J+mice.">Effect of a change in housing conditions on body weight, behavior and brain neurotransmitters in male C57BL/6J mice.</a> Behav Brain Res. 333, 35-42 (2017).</li><li>Langgartner, D., Foertsch, S., Fuchsl, A. M., Reber, S. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Light+and+water+are+not+simple+conditions:+fine+tuning+of+animal+housing+in+male+C57BL/6+mice.">Light and water are not simple conditions: fine tuning of animal housing in male C57BL/6 mice.</a> Stress. 20, 10-18 (2017).</li><li>Nicholson, A., Malcolm, R. D., Russ, P. L., Cough, K., Touma, C., Palme, R., Wiles, M. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+response+of+C57BL/6J+and+BALB/cJ+mice+to+increased+housing+density.">The response of C57BL/6J and BALB/cJ mice to increased housing density.</a> J Am Assoc Lab Anim Sci. 48, 740-753 (2009).</li><li>Buchler, G., Wos-Oxley, M. L., Smoczek, A., Zschemisch, N. H., Neumann, D., Pieper, D. H., Hedrich, H. J., Bleich, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Strain-specific+colitis+susceptibility+in+IL10-deficient+mice+depends+on+complex+gut+microbiota-host+interactions.">Strain-specific colitis susceptibility in IL10-deficient mice depends on complex gut microbiota-host interactions.</a> Inflamm Bowel Dis. 18, 943-954 (2012).</li><li>Nakanishi, M., Tazawa, H., Tsuchiya, N., Sugimura, T., Tanaka, T., Nakagama, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+strain+differences+in+inflammatory+responses+of+colonic+mucosa+induced+by+dextran+sulfate+sodium+cause+differential+susceptibility+to+PhIP-induced+large+bowel+carcinogenesis.">Mouse strain differences in inflammatory responses of colonic mucosa induced by dextran sulfate sodium cause differential susceptibility to PhIP-induced large bowel carcinogenesis.</a> Cancer Sci. 98, 1157-1163 (2007).</li><li>Mahler, M., Bristol, I. J., Leiter, E. H., Workman, A. E., Birkenmeier, E. H., Elson, C. O., Sundberg, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+susceptibility+of+inbred+mouse+strains+to+dextran+sulfate+sodium-induced+colitis.">Differential susceptibility of inbred mouse strains to dextran sulfate sodium-induced colitis.</a> Am J Physiol. 274, 544-551 (1998).</li><li>Mekada, K., Abe, K., Murakami, A., Nakamura, S., Nakata, H., Moriwaki, K., Obata, Y., Yoshiki, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+differences+among+C57BL/6+substrains.">Genetic differences among C57BL/6 substrains.</a> Exp Anim. 58, 141-149 (2009).</li><li>Sellers, R. S., Clifford, C. B., Treuting, P. M., Brayton, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunological+variation+between+inbred+laboratory+mouse+strains:+points+to+consider+in+phenotyping+genetically+immunomodified+mice.">Immunological variation between inbred laboratory mouse strains: points to consider in phenotyping genetically immunomodified mice.</a> Vet Pathol. 49, 32-43 (2012).</li><li>Mills, C. D., Kincaid, K., Alt, J. M., Heilman, M. J., Hill, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=M-1/M-2+macrophages+and+the+Th1/Th2+paradigm.">M-1/M-2 macrophages and the Th1/Th2 paradigm.</a> J Immunol. 164, 6166-6173 (2000).</li></ol>

כל המחברים מצהירים כי יש להם אין אינטרסים מתחרים.

המודל מאתר של DC הוצג פרוטוקול זה אמין מתרבה התכונות histopathological של האדם DC (למשל, פיתוח דה נובו של זקיקי הלימפה submucosa של מקטעי מעי מודלק, קריפטה קיצור הפחתות מספרי הטלפון הנייד גביע). מלבד יתרון זה, מודל זה הנגרמת על ידי גורם מפעילה דומה מאוד, מציג עם קורס קליני של בינוני עד סיכון מתון כמו במקרה של בני אדם המושפע ביותר.
כדי להשיג תוצאות לשחזור, מקובל perioperative קטלני, הכרחי להתאמן בטכניקות מיקרוכירורגיות בא לידי ביטוי. עם זאת, ניתן לבצע הפעולה למעי הגס והן דמה (colotomy) עם perioperative נמוך מאוד בהירושימה (< 10%). כמה צעדים מבצעית בעלות חשיבות גדולה: 1) מעי הגס ומסוף לזהות באופן חיובי. במקרים בו האנטומיה של האזור ileocecal לא ברור, המעי הגס יכול להיות מזוהה על ידי הנוכחות של צואה בנוי ואת ileum מסוף על ידי הנוכחות של המדבקות של פייה. 2) כאשר exteriorizing הלולאה למעי הגס, מבטיח שמצע המעי לא הוא העווה, וכך להימנע איסכמיה מצע המעי העליון ועל מכניים ileus. 3) כאשר ניקב את מצע המעי עם הצינור הגמיש, מבטיח שבמגזר נטולת כלי נבחר, ובכך למנוע דימומים וסיבוכים מצע המעי העליון איסכמיה. 4) בעת יצירת חתך קטן בדופן הבטן, בדוק אם יש מספיק hemostasis. אם יש צורך, להשתמש התרמו-קרישה כדי לעצור דימום מכלי שריר. 5) מבטיח המעי הגס לולאה פתוחה לפחות-שני שליש והיקפו, כי הקיר האחורי הוא מספיק אוזני, ומבטיח חסימה מלאה של מעבר צואה המקטעים המעי הדיסטלי. 6) מבטיח כי בשני הקצוות למעי הגס קבועים היטב על העור כדי למנוע מעבר פתוח אל חלל הצפק וכתוצאה סיכוני זיהום גבוה יותר או ileus מכני כי הזרם צואה יכול לצאת. בדרך כלל, כל הניתוחים יכול להתבצע ללא זכוכית מגדלת או מיקרוסקופ כירורגי. באופן כללי, ניצול של התקנים אלה דורש הכשרה נוספת.
אפילו כאשר המורכבות של הניתוחים הוא רק בינוני, ישנם נושאים מהותיים רבים פעיל ו- perioperative כדי להיחשב לסיים בהצלחה את הניסוי עם תוצאות לשחזור.
זה חיוני להישרדות לטווח ארוך עם למעי הגס קבע שיש עכברים של המעי האטום ללא פגע. קבוצת הניסוי עם צמוד לשסתום ileocecal הפרוקסימלית שנזקקו להחלפת בגדים הראו שיעור תמותה של 100% בשבוע הראשון לאחר הניתוח בגלל אובדן משקל בלתי הפיך (נתונים לא מוצג). לכן, הוא בעל חשיבות עליונה לבחירה באתר למעי הגס לפחות 20 מ מ דיסטלי שסתום של Bauhin. התבוננות זו יכול להיות בגלל הפיזיולוגיה של מערכת העיכול מכרסמים. התחבורה רטרוגרדית מן המעי הגס הפרוקסימלית. המעי מתרחשת אצל המינים הללו. המעי הוא היכן הסינתזה של חומרים מזינים ידי occurs8 microflora חיידקי. ערכי MCV נורמלי ו MCH במהלך לטווח ארוך מציינים כי בעלי חיים דיסטלי שנזקקו להחלפת בגדים אינם סובלים בויטמינים משמעותית. יתר על כן, coprophagy הוא חלק חיוני של ההתנהגות התזונתית של מכרסמים בסביבות הטבעי שלהם. בעת יצירת המודל, היינו מאוד מודאגים כי perturbing את coprophagy בשל הנוכחות של למעי הגס קבוע יכול לגרום חוסרים תזונתיים, (למשל, ויטמין B). עם זאת, אמנם זה בעיה בתנאים שבו גישה חומרים מזינים היא מוגבלת, בעבר הוכח ש-coprophagy זה מאבד מערכו התזונתי בתנאים ניסיוני עם עודף ללא מים ומזון מאוזן תזונתית9 . בתנאים ניסיוני שלנו, זה חיוני כדי למטב את התנאים של צריכת תזונה לאחר הניתוח. השתמשנו תזונת בעלי חיים היה תוכן חלבון גבוהה, אופטימיזציה חלבון איכותי, גדלה צפיפות אנרגיה. בעלי חיים היו התאקלם דיאטה זו לפחות שבועיים לפני הניתוח. במשככי, הזנה ספוגי מים הוצע ad libidum faciliate מזון, צריכת הנוזלים.
חשוב לנצל את עכברים מאותו המין בשתי הקבוצות ניסיוני, העמדת פנים. סקס הוכח להשפיע באופן משמעותי את הקורס לא רק של דלקת מערכתית, אלא גם של דלקת מעיים שונות קוליטיס בהשפעת כימיקלים מודלים10,11,12. באופן כללי, חיות זכר יפתחו מחלה מובהק יותר עם דלקת רבתי, נזק קריפטה יותר, פחות התחדשות, רמות גבוהות יותר של ציטוקינים פרו-דלקתיים, החלמה איטית של אובדן משקל10. יתרון נוסף של שימוש חיות זכר הוא טוב יותר משקולות גיל מתאימים הגוף לפני הניתוח, שמוביל פיצויים טוב יותר של תקופת אובדן משקל לאחר הניתוח הראשוני. למרות זאת, עכברים הנשי ניתן להשתמש בפרוטוקול אם ספציפי שאלות (למשל, השפעתה של סקס יש לטפל ההורמונים על הביטוי של DC. שימוש בעכברים זכרים דורש יותר מאמץ בשמירה על תנאי מגורים יציב. עכברים זכרים נוטים יותר אגרסיבי אינטראקציות שמוביל לפציעה ומוות. עכברים זכרים חיים הירארכיות הוקמה עם זכר דומיננטי אחד. לאחר ההירארכיה בקבוצה הוא הוקם, המשך הלחימה הוא פחות נפוץ13,14. מסיבה זו, אנו הקימו את הקבוצות ניסיוני עם ההגעה של העכברים במתקן שלנו בעלי חיים לפחות שבועיים לפני הניתוח, שמר על קבוצות אלה עד הניסויים הסתיים. באופן כללי, קבוצות ניסיוני של 5 עד 7 חיות הוחזקו בכלוב אחד. תחזוקה של חברתי יציב, מתנאי הדיור היה בעל חשיבות עליונה לא רק כדי לצמצם התנהגויות אגרסיביות של חיות ניסוי. תנאי דיור הוכחו להשפיע על עלייה במשקל, כמו גם פרמטרים אימונולוגי15,16,17.
הרגישות קוליטיס בהשפעת כימיקלים, מהונדס גנטית מודלים משתנה במידה ניכרת בין עכבר זנים18,19,20. בפרוטוקול הנוכחי הוקם בשנת C57Bl/6 עכברים, זן עכבר עם רקע גנטי מוגדר היטב, של המערכת החיסונית מאופיין היטב21,22,23 המציג ביניים חזק דלקתיות התגובה לתוספי חומצה גופרתית קוליטיס נתרן-induced דגם20 ונחשב זן Th1 ומופת23. השימוש של זנים אחרים העכבר יכול להיחשב כאשר נדרשת פעילות המחלה חמורה יותר או סביבת Th2.
לסיכום, פרוטוקול שלנו מהווה כלי חשוב להערכת את התפקיד של סוגים שונים של תאים חיסוניים, ציטוקינים, נוגדנים אחרים מולקולות האיתות בפתוגנזה של DC. מספר רב של מודלים מהונדס גנטית עכברים הינם זמינים עם רקע C57BL/6, יכול להיות משולב עם המודל שלנו (למשל, עכברים לקוי של IL-17, IL-10, כימוקין CXCL13, כימוקין-קולטנים CXCR5 CCR7 ו sphingosine-1-פוספט קולטן 4). הזמינות של זנים העכבר congenic על רקע C57BL/6 בעיקר להקל על העברת הניסויים להקים את התפקיד של סוגי תאים נפרדים מעורב האטיולוגיה של DC. בסופו של דבר, המודל מציע את ההזדמנות כדי להעריך את השפעת התערבויות מקומיים (למשל, שינוי של microbiome מקומיים, טיפול אנטי דלקתי מקומי) על חסינות הרירית בקטעים המעי הנגוע, שאינן מושפעות ועל מערכתית הומאוסטזיס המערכת החיסונית.

בשנים האחרונות, מספר ניכר של קוליטיס שאינן זיהומיות ישויות שונות ממחלות מעי דלקתיות קלאסית (IBDs; כלומר-, או קוליטיס ulcerosa קרוהן) יש כבר קליניות, histopathologically מאופיין אצל בני אדם. המנגנונים הקשורים pathophysiological המובילים להתפתחות של צורות אלה קוליטיס אינם לגמרי מובנים חלקית כי המתאים מודלים בעלי חיים נדירים. קוליטיס הסחה הוא אחד הישויות הללו תיאר לאחרונה. למרות שהמונח הוטבע בשנת 1980 על ידי Glotzer1, התיאור הראשוני של הפנוטיפ דומה ניתנה בשנת 1972 על-ידי Morson2. המחלה מתפתחת ב 50 91% מהחולים עם הטיית enterostomy, בעוצמתה קליני משתנה3,4. לאור השכיחות שנתי של 120,000 חולי למעי הגס ב ארצות הברית של אמריקה, ישות מחלה זו מהווה בעיה בריאות חשובה.
המטרה הכוללת של פיתוח פרוטוקול זה היה לספק מודל DC מאתר זה מסתמכת על גורם קוליטיס דומה כי ראיתי בוושינגטון האנושית ואת זה מתרבה התכונות histopathological של המחלה האנושית. לעומת דגמים אחרים מאתר קוליטיס, קוליטיס אינדוקציה במודל שלנו אינה דורשת מהונדסים בעלי חיים (למשל, העכברים הטרנסגניים IL-7, N-קדהרין עכברים שלילי דומיננטי או עכברים TGFβ- / - ), היישום של כימית מעצבן חומרים (למשל, לתוספי סולפט נתרן (DSS) - קוליטיס המושרה, או חומצה sulfonic trinitrobenzene (TNBS) - induced קוליטיס) או ההעברה של אוכלוסיות תאים מסוים בעכברים לקוי מערכת החיסון (כמו העברתגבוהה CD45RB מודל של קוליטיס) (לסקירה, ראה5). לעומת דגמים אחרים, המערכת החיסונית שלם של מודל DC שלנו מאפשרת הערכה של מנגנון אימונולוגי מעורב בפיתוח DC. המגבלה של דלקת הרירית את פלח המעי נשלל מאפשר הערכה של השלכה שלה על חסינות הרירית בחלקים אחרים מערכת העיכול, על הומאוסטזיס החיסון בתאים חיסוניים אחרים של מערכת העיכול (למשל , Mesenteriale הלימפה ותיקונים של פייה), וביום של הומאוסטזיס המערכת החיסונית של האורגניזם כולו. בסופו של דבר, המודל שלנו מהווה כלי המתאים עבור חוקרים את מנגנוני שליטה גירויים דלקתיות מקומיים שמקורם שינויים בסביבת המקומי הרגיל הן microbiome המקומי כמו גם אנטיגנים מסולקים.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:637px;" width="637">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Operation material</td>
			<td style="width:136px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">heat underlay, 6 watt</td>
			<td style="width:136px;">ThermoLux, Witte + Sutor GmbH</td>
			<td style="width:119px;">461265</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Ethanol 70% (with methylethylketon)</td>
			<td style="width:136px;">Pharmacie of the University Hospital Greifswald</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Wooden applicators, small cotton head onesided, wooden stick, 150 mm length</td>
			<td style="width:136px;">Centramed GmbH, Germany</td>
			<td style="width:119px;">8308370</td>
			<td style="width:167px;">for disinfection of operation field</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Scissor</td>
			<td style="width:136px;">Aesculap (BRAUN)</td>
			<td style="width:119px;">BC064R</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Atraumatic DeBakey forceps</td>
			<td style="width:136px;">Aesculap (BRAUN)</td>
			<td style="width:119px;">OC021R</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Needle holder</td>
			<td style="width:136px;">Aesculap (BRAUN)</td>
			<td style="width:119px;">BM012R</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Vasofix Safety i.v. cannula 22G</td>
			<td style="width:136px;">Braun Melsungen AG, Germany</td>
			<td style="width:119px;">4268091S-01</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">VICRYL Plus 4-0 violet braided; V-5 17 m 1/2c; 70 cm</td>
			<td style="width:136px;">ETHICON, Inc.</td>
			<td style="width:119px;">VCP994H</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">PDS II 6-0 monofil; V-18 13 mm 3/8c; 70 cm</td>
			<td style="width:136px;">ETHICON, Inc.</td>
			<td style="width:119px;">Z991H</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">BD Plastipak 1 mL (Syringes with needle with sterile interior)</td>
			<td style="width:136px;">BD Medical</td>
			<td style="width:119px;">305501</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Triacid-N (N-Dodecylpropan-1,3-diamin)</td>
			<td style="width:136px;">ANTISEPTICA, Germany</td>
			<td style="width:119px;">18824-01</td>
			<td style="width:167px;">disinfection of surgical instruments in ultrasonic bath</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Medications</td>
			<td style="width:136px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">ketamine 10%, 100 mg/mL (ketamine hydrochloride)</td>
			<td style="width:136px;">selectavet, Dr. Otto Fischer GmbH</td>
			<td style="width:119px;">9089.01.00</td>
			<td style="width:167px;">87 mg/kg i.p.</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Xylasel, 20 mg/mL (xylazine hydrochloride)</td>
			<td style="width:136px;">selectavet, Dr. Otto Fischer GmbH</td>
			<td style="width:119px;">400300.00.00</td>
			<td style="width:167px;">13 mg/kg i.p.</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">NaCl 0.9%</td>
			<td style="width:136px;">Braun Melsungen AG, Germany</td>
			<td style="width:119px;">6697366.00.00</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Buprenovet 0.3 mg/mL (buprenorphine)</td>
			<td style="width:136px;">Bayer, Germany</td>
			<td style="width:119px;">PZN: 01498870</td>
			<td style="width:167px;">0.1 mg/kg s.c.</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Tramal Drops, 100 mg/mL (tramadol hydrochloride)</td>
			<td style="width:136px;">Gr&#252;nenthal GmbH, Germany</td>
			<td style="width:119px;">10116838</td>
			<td style="width:167px;">1 mg/mL drinking water</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Ceftriaxon-saar 2 g (ceftriaxone)&#160;</td>
			<td style="width:136px;">Cephasaar GmbH, Germany</td>
			<td style="width:119px;">PZN: 08844252</td>
			<td style="width:167px;">25 mg/kg body weight i.p.</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">metronidazole 5 mg/mL</td>
			<td style="width:136px;">Braun Melsungen AG, Germany</td>
			<td style="width:119px;">PZN: 05543515</td>
			<td style="width:167px;">12.5 mg/kg body weight i.p.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Food</td>
			<td style="width:136px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">ssniff M-Z Ereich</td>
			<td style="width:136px;">ssniff, Germany</td>
			<td style="width:119px;">&#160;V1184-3</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Solid Drink Dehyprev Vit BIO, pouches</td>
			<td style="width:136px;">TripleATrading, the Netherlands</td>
			<td style="width:119px;">SDSHPV-75</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Equipment</td>
			<td style="width:136px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Nikon Eclipse Ci-L</td>
			<td style="width:136px;">Nikon Instruments Europe BV, Germany</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>light microscopy</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">VetScan HM 5&#160;</td>
			<td style="width:136px;">Abaxis, USA</td>
			<td style="width:119px;">770-9000</td>
			<td style="width:167px;">Veterinary hematology analyzer of 50 &#181;l venous EDTA-blood</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Bandelin SONOREX (Ultrasonic bath)</td>
			<td style="width:136px;">Bandelin electronics, Germany</td>
			<td style="width:119px;">RK 100 H</td>
			<td style="width:167px;">disinfection of surgical instruments</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Software</td>
			<td style="width:136px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;">NIS-Element BR4 software</td>
			<td style="width:136px;">Nikon Instruments Europe BV, Germany</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">GraphPad Prism Version 6</td>
			<td style="width:136px;">GraphPad Software, Inc.</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

murine distal colostomy, a novel model of diversion colitis in c57bl/6 mice

הסחה קוליטיס (DC) הוא מצב קליני תכופים המתרחשים אצל חולים עם קטעי המעי נכללו הנחל צואה כתוצאה enterostomy להסיט. האטיולוגיה של המחלה נשאר מעורפל אבל נראה שונים של מחלות מעי דלקתיות קלאסית כמו קוליטיס ומחלת קרוהן. במחקרי לפענח את המנגנונים הקשורים pathophysiological המובילים להתפתחות של מחלה זו יש כבר את מימושן היעדרה של מודל מאתר המתאים. פרוטוקול זה יוצר מודל מאתר של DC המקל על הלימוד התפקיד של מערכת החיסון ביחסיו עם microbiome בפיתוח של DC. במודל זה באמצעות בעלי חיים C57BL/6, דיסטלי חלקי המעי הגס אינם נכללים הנחל צואה על-ידי יצירת למעי הגס הדיסטלי, מפעילה את התפתחות קל עד בינוני דלקת מקטעי מעי שלא נכללו מתרבה נגעים סימן ההיכר של האדם DC עם תגובה דלקתית מערכתית מתונה. בניגוד לדגם עכברוש, מספר רב של מודלים מאתר מהונדס גנטית על רקע C57BL/6 הינם זמינים. השילוב של בעלי חיים אלה עם המודל שלנו מאפשר את התפקידים פוטנציאלי של ציטוקינים בודדים, נוגדנים או קולטנים של מולקולות ביו (למשל, אינטרלויקין (IL)-17; IL-10, כימוקין CXCL13, כימוקין רצפטורים CXCR5, CCR7 ו sphingosine-1-פוספט הקולטן 4) לפנות לבדיקה בפתוגנזה של DC. הזמינות של זנים העכבר congenic על רקע C57BL/6 במידה רבה מקלה על העברת הניסויים להקים את התפקידים של סוגי תאים נפרדים מעורב האטיולוגיה של DC. בסופו של דבר, המודל מציע את ההזדמנות כדי להעריך את ההשפעות של התערבויות מקומיים (למשל, שינוי של microbiome המקומי או טיפול אנטי דלקתי מקומי) על חסינות הרירית בקטעים המעי הנגוע, שאינן מושפעות ו- הומאוסטזיס המערכת החיסונית מערכתית.

הניתוח הוא נסבל היטב הן את ניסיוני (למעי הגס) והקבוצות דמה (colotomy). התמותה Perioperative לא יעלה על 10% בעת ניתוח וניהול perioperative מבוצע כהלכה. בשבוע שלאחר הניתוח הראשון, הרזיה משמעותית נתפסת בשתי הקבוצות ניסיוני, שאם. חיות של קבוצת המזויפים להשיג שלהם נאדיר משקל בדרך כלל לקראת היום הרביעי לאחר הניתוח, אך היא מתרחשת יום אחד מאוחר יותר קבוצת הניסוי. ירידה במשקל מודגש יותר בקבוצה ניסיוני, להגיע 21.7% ממשקל הגוף הראשונית. לעומת זאת, בעלי החיים המזויפים לאבד 10.8% של הגוף הראשונית שלהם, משקל (איור 2)6. לאחר נקודת השפל משקל בשבוע הראשון לאחר הניתוח, משקל הגוף עולה באופן רציף בשתי הקבוצות ניסיוני, אבל עם מדרון לאט יותר בקבוצת הניסוי. הסימנים והתסמינים של דלקת מעיים חמורה (קרי, הפרשות דם או המעיים נוזלית להתרחש גם את ניסיוני ולא דמה קבוצה6). התמותה הכולל במהלך 60 הימים הראשונים במשככי הוא בסביבות 40% בקבוצה למעי הגס על 10% בקבוצה colotomy. רוב מקרי מוות מתרחשים במהלך השבוע שלאחר הניתוח הראשון (61% בקבוצה ניסיוני, 66% בקבוצה דמה). הסיבות העיקריות למוות מוצגים באיור3.
דיסטלי למעי הגס בעכברים תוצאות בפיתוח של קוליטיס בעיקר לימפוציטית מתרבה התכונות היסטולוגית סימן ההיכר של DC אנושי. שינויים אלה להגדיל עם המשך של הדרה מעיים. קריפטה אורך מתקצר משמעותית בקטעים שלא נכללו המעי. קיצור זה מגיע מובהקות סטטיסטית אחרי 14 ימי הסחה צואה (איור 3 א). אורך קריפטה בגביע תא מניבי פוחת לאחר 30 ימים בקטעים שלא נכללו המעי (איור 3b). מספרי הטלפון הנייד גביע מוחלטת מופחתים משמעותי גם באולמות קטע המעי נשלל לאחר 14 ימים לאחר הניתוח (איור 3 c). הנגע סימן ההיכר של DC, הפיתוח של זקיקי הלימפה רירית, נדרש משך זמן ארוך יותר של צואה סטייה. למרות עלייה במספר זקיקי הלימפה יכול להיות שנצפו מוקדם ככל שבועיים, ההבדלים להיות משמעותי לאחר חודשיים (דמויות 5a-c). כל השינויים histopathological תיאר לפני מודגשת יותר ב דיסטלי יותר באזורים הפרוקסימלית של הקטעים שלא נכללו המעי. לחדור neutrophilic טיפוסי סימן לדלקת חריפה היא בדרך כלל לא נצפו (דמויות 5 d-e).
סימן השלכה מערכתית של דלקת מעיים מקומית, ספירת נויטרופילים הם משמעותי מוגברת בבעלי חיים למעי הגס מוקדם ככל 14 ימים לאחר הניתוח. הבדל זה נשמר עד לסוף תקופת תצפית (60 יום). ספירת טסיות הינם מעט מוגברת אצל בעלי חיים עם הסחה שטיפת המעי הגס לאחר 60 ימים (איור 6). רמת ההמוגלובין, המטוקריט מופחתים 14 ימים לאחר הפעולה בקבוצה למעי הגס לעומת הקבוצה המזויפים.
הוכח כי מחסור בויטמינים ב מכרסמים גורמים מופחת נפח corpuscular רשע (MCH) ואני מתכוון ערכי המוגלובין corpuscular (MCV)7. המודל שלנו, אנו רואים עליות הראשונית בשני פרמטרים אלה לאחר 14 ו 30 ימים. MCV והן MCH לחזור לערכים נורמליים אחרי מעקב ארוך יותר (איור 7). זה מראה שאת למעי הגס דיסטלי לא תגרום בויטמינים משמעותיים קלינית במהלך לטווח ארוך.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57616/57616fig1.jpg"> איור 1: אנטומיה של אזור cecal, הליך כירורגי. (א) ייצוג גרפי של האנטומיה לאחר הניתוח. (ב) טופוגרפיה של פול פוט cecal וציוני אנטומיים. (ג) Graphical ייצוג הפתחים למעי הגס. איור 1a שונתה Kleinwort et al.6. <a href="/files/ftp_upload/57616/57616fig1large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57616/57616fig2.jpg"> איור 2: גוף פיתוח משקל. משקל הגוף מוצג כאחוז של משקל הגוף לפני הניתוח. הגוף משקל עקומות של למעי הגס, שאם לחשוף בעלי חיים (colotomy), כי הירידה במשקל לאחר הניתוח הראשוני היה גבוה באופן משמעותי בקבוצה למעי הגס לעומת הקבוצה דמה (p < 0.001). ערכים הם אמצעי ± לשגיאות תקן של הממוצע לאורך 21-26 חיות לכל קבוצה (חיות 21 התקבל colostomies; 26 בעלי החיים היו בקבוצה דמה). איור זה השתנה Kleinwort et al.6. <a href="/files/ftp_upload/57616/57616fig2large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57616/57616fig3.jpg"> איור 3: גורם המוות. סיבוכים מיוצגים כמו אחוזי התמותה כל סיבה, מומחשים בתרשים עוגה (קבוצה למעי הגס (א), (ב) שאם קבוצה). סיבוכים לאחר הניתוח נקבעו על ידי necropsy. תסמונת לבזבז הוגדר מתמדת במשקל גדול מ- 33% של משקל הגוף הראשונית, אין ממצאים אחרים ב- necropsy. Ileus ודליפה anastomotic אובחנו ב- necropsy. פיונית סיבוכים הוגדרו אבצס peristomal והפרדות mucocutaneous בלוטת. סיבוכים אחרים מורכבת הפצע התבקעות של פתיחת בטן, איסכמיה של המעי, מקרים לא ברור בשלב זה necropsy. הבדלים משמעותיים בתחום ההפצה של סיבוכים לאחר הניתוח נראו בין קבוצות (p = 0.021, נותחה באמצעות הבדיקה המדויקת פישר לניתוח דו צדדי של עד 6 × 6 מגירה טבלאות). היו חיות 39 בקבוצה למעי הגס 29 בקבוצה המזויפים. איור זה השתנה Kleinwort et al.6. <a href="/files/ftp_upload/57616/57616fig3large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57616/57616fig4.jpg"> איור 4: האוכלוסייה אורך ותא בגביע הקריפטה. אורך קריפטה ומספרי תא בגביע היו נחושים באמצעות פרפין מקטעים של פי הטבעת לאחר צביעת המחזורית חומצה-שיף. (א) קריפטה אורך היה ירד באופן משמעותי בתוך פי הטבעת של בעלי חיים הסחה קוליטיס (DC). (ב) האורך של אזור תא בגביע מניבי התת-קרקעי נמדד ולהגדיר כיחס באורך מלא הקריפטה. 30 ו 60 ימים במשככי, האחוז של תאי גביע קריפטה-אורך-מיסב היה ירד בקבוצה DC. (ג) וגביע תא מספרים הצטמצמו באופן משמעותי אצל בעלי חיים DC לעומת הקבוצה המזויפים. גרפים ב (א) עד (ג) מציגים אמצעי, תקן שגיאות לאורך 5 עד 9 חיות לכל קבוצה (למעי הגס 14 ו- 30 ימים, שאם 14 ימים: n = 8; למעי הגס 60 ימים: n = 5; שאם 30 ו 60 ימים: n = 9); ∗p < 0.05; ∗∗p < 0.01. איור זה השתנה Kleinwort et al.6. <a href="/files/ftp_upload/57616/57616fig4large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57616/57616fig5.jpg"> איור 5: זקיקי הלימפה, תסנין דלקתי. (א) זקיקי הלימפה של נקודתיים מוטה ובעלי המזויפים נספרו במקטעי פרפין של החלחולת מוכתם hematoxylin ואאוזין. הגרף מציג את תקן שגיאות ואמצעים מעבר בעלי חיים 5 עד 9 לכל קבוצה (למעי הגס 14 ו- 30 ימים, שאם 14 ימים: n = 8; למעי הגס 60 ימים: n = 5; לשלוט 30 ו 60 ימים: n = 9), ∗p < 0.05; ∗∗p < 0.01. (ב), (ג) נציג דוגמאות סעיפים של הרקטום למעי הגס (b) ובעלי דמה (ג) 60 יום במשככי מוכתם hematoxylin ואאוזין. זקיק הלימפה הבולטים (∗) היה נוכח רירית של עכבר למעי הגס. סולם העמודות מייצגות 100 מיקרומטר. (ד) ו- (e) צביעת עם chloroacetate התגובה esterase במקטעי פרפין בוצע לזהות גרנולוציטים נויטרופילים. על חתכי רוחב של החלחולת מוסחת, לחדור neutrophilic דלקתית חריפה נצפתה בקבוצה למעי הגס (d) וגם בבעלי דמה (e) עד 60 יום במשככי. סולם העמודות מייצגות 100 מיקרומטר. איור זה השתנה Kleinwort et al.6. <a href="/files/ftp_upload/57616/57616fig5large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57616/57616fig6.jpg"> איור 6: ספירת נויטרופילים, טסיות. ספירת דם של דגימות דם ורידי נקבעו על ידי מנתח המטולוגיה וטרינרי. (א) ספירת נויטרופילים היו גדל באופן משמעותי בקבוצה למעי הגס בהשוואה לבעלי שאם עד 60 יום במשככי. (ב) ספירת טסיות דם היו מעט גבוהות בקבוצה למעי הגס 60 יום במשככי. הגרף מציג את תקן שגיאות ואמצעים מעבר בעלי חיים 5 עד 9 לכל קבוצה (למעי הגס 14 ו- 30 ימים, שאם 14 ימים: n = 8; למעי הגס 60 ימים: n = 5; שאם 30 ו 60 ימים: n = 9), ∗p < 0.05; ∗∗p < 0.01. <a href="/files/ftp_upload/57616/57616fig6large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.</a>
<img alt="Figure 7" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57616/57616fig7.jpg"> איור 7: פרמטרים של תאי הדם האדומים. ספירת דם של דגימות דם ורידי נקבעו על ידי מנתח המטולוגיה וטרינרי. (א) המוגלובין ו- (ב) המטוקריט ירדו באופן משמעותי בקבוצה למעי הגס בהשוואה לקבוצת המזויפים. (ג) אבל corpuscular נפח (MCH) היה גבוה באופן משמעותי 14 ו 30 יום במשככי בקבוצה למעי הגס לעומת הקבוצה המזויפים חזר להיות תקין לאחר 60 ימים. (ד) אומר ערכי המוגלובין corpuscular (MCV) היו גבוהות לאחר 30 ימים, אבל כבר לא לאחר 60 יום במשככי בקבוצה למעי הגס בהשוואה שאם בעלי חיים. הגרף מציג את תקן שגיאות ואמצעים מעבר בעלי חיים 5 עד 9 לכל קבוצה (למעי הגס 14 ו- 30 ימים, שאם 14 ימים: n = 8; למעי הגס 60 ימים: n = 5; שאם 30 ו 60 ימים: n = 9), ∗p < 0.05; ∗∗p < 0.01. <a href="/files/ftp_upload/57616/57616fig7large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Murine Distal Colostomy, A Novel Model of Diversion Colitis in C57BL/6 Mice at JoVE.com

Murine Distal Colostomy, A Novel Model of Diversion Colitis in C57BL/6 Mice

מאתר למעי הגס הדיסטלי, מודל הרומן של הסחה קוליטיס בעכברים C57BL/6

מאתר למעי הגס דיסטלי מספק מודל מאתר הסחה האנושי קוליטיס, קוליטיס בעיקר לימפוציטית קטע המעי הגס נכללו הנחל צואה.

Diversion colitis (DC) is a frequent clinical condition occurring in patients with bowel segments excluded from the fecal stream as a result of a ...

murine-distal-colostomy-novel-model-diversion-colitis-c57bl6

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Medicine

12.8K Views.  Universitätsmedizin Greifswald. מאתר למעי הגס דיסטלי מספק מודל מאתר הסחה האנושי קוליטיס, קוליטיס בעיקר לימפוציטית קטע המעי הגס נכללו הנחל צואה.

Video: Murine Distal Colostomy, A Novel Model of Diversion Colitis in C57BL/6 Mice

Murine Model of Wound Healing

Wound healing and repair are the most complex biological processes that occur in human life. After injury, multiple biological pathways become activated. Impaired wound healing, which occurs in diabetic patients for example, can lead to severe unfavorable outcomes such as amputation. There is, therefore, an increasing impetus to develop novel agents that promote wound repair. The testing of these has been limited to large animal models such as swine, which are often impractical. Mice represent the ideal preclinical model, as they are economical and amenable to genetic manipulation, which allows for mechanistic investigation. However, wound healing in a mouse is fundamentally different to that of humans as it primarily occurs via contraction. Our murine model overcomes this by incorporating a splint around the wound. By splinting the wound, the repair process is then dependent on epithelialization, cellular proliferation and angiogenesis, which closely mirror the biological processes of human wound healing. Whilst requiring consistency and care, this murine model does not involve complicated surgical techniques and allows for the robust testing of promising agents that may, for example, promote angiogenesis or inhibit inflammation. Furthermore, each mouse acts as its own control as two wounds are prepared, enabling the application of both the test compound and the vehicle control on the same animal. In conclusion, we demonstrate a practical, easy-to-learn, and robust model of wound healing, which is comparable to that of humans.

A murine model of cutaneous wound healing that can be used to assess therapeutic compounds in physiological and pathophysiological settings.

מודל עכברי של ריפוי פצע

Wound healing and repair are the most complex biological processes that occur in human life. After injury, multiple biological pathways become activated. ...

Flexible Colonoscopy in Mice to Evaluate the Severity of Colitis and Colorectal Tumors Using a Validated Endoscopic Scoring System

The use of modern endoscopy for research purposes has greatly facilitated our understanding of gastrointestinal pathologies. In particular, experimental endoscopy has been highly useful for studies that require repeated assessments in a single laboratory animal, such as those evaluating mechanisms of chronic inflammatory bowel disease and the progression of colorectal cancer. However, the methods used across studies are highly variable. At least three endoscopic scoring systems have been published for murine colitis and published protocols for the assessment of colorectal tumors fail to address the presence of concomitant colonic inflammation. This study develops and validates a reproducible endoscopic scoring system that integrates evaluation of both inflammation and tumors simultaneously. This novel scoring system has three major components: 1) assessment of the extent and severity of colorectal inflammation (based on perianal findings, transparency of the wall, mucosal bleeding, and focal lesions), 2) quantitative recording of tumor lesions (grid map and bar graph), and 3) numerical sorting of clinical cases by their pathological and research relevance based on decimal units with assigned categories of observed lesions and endoscopic complications (decimal identifiers). The video and manuscript presented herein were prepared, following IACUC-approved protocols, to allow investigators to score their own experimental mice using a well-validated and highly reproducible endoscopic methodology, with the system option to differentiate distal from proximal endoscopic colitis (D-PECS).

Over the past few years, new generation endoscopes have emerged as important diagnostic research aids for evaluating murine colitis and colorectal tumors. We present herein a detailed protocol for endoscopic assessment of inflammation and colorectal tumors in mice, as well as a novel scoring system that uses decimal identifiers to document the endoscopic severity of colitis and colorectal tumors.

קולונוסקופיה גמישה בעכברים כדי להעריך את חומרת קוליטיס ומעי הגס גידולים באמצעות מערכת Validated אנדוסקופי ניקוד

The use of modern endoscopy for research purposes has greatly facilitated our understanding of gastrointestinal pathologies. In particular, experimental ...

A Murine Model of Subarachnoid Hemorrhage

In this video publication a standardized mouse model of subarachnoid hemorrhage (SAH) is presented. Bleeding is induced by endovascular Circle of Willis perforation (CWp) and proven by intracranial pressure (ICP) monitoring. Thereby a homogenous blood distribution in subarachnoid spaces surrounding the arterial circulation and cerebellar fissures is achieved. Animal physiology is maintained by intubation, mechanical ventilation, and continuous on-line monitoring of various physiological and cardiovascular parameters: body temperature, systemic blood pressure, heart rate, and hemoglobin saturation. Thereby the cerebral perfusion pressure can be tightly monitored resulting in a less variable volume of extravasated blood. This allows a better standardization of endovascular filament perforation in mice and makes the whole model highly reproducible. Thus it is readily available for pharmacological and pathophysiological studies in wild type and genetically altered mice.

A standardized mouse model of subarachnoid hemorrhage by intraluminal Circle of Willis perforation is described. Vessel perforation and subarachnoid bleeding are monitored by intracranial pressure monitoring. In addition various vital parameters are recorded and controlled to maintain physiologic conditions.

מודל Murine של תת עכבישי דימום

In this video publication a standardized mouse model of subarachnoid  hemorrhage (SAH) is presented. Bleeding is induced by endovascular Circle of  Willis ...

Modeling Stroke in Mice: Permanent Coagulation of the Distal Middle Cerebral Artery

Stroke is the third most common cause of death and a main cause of acquired adult disability in developed countries. Only very limited therapeutical options are available for a small proportion of stroke patients in the acute phase. Current research is intensively searching for novel therapeutic strategies and is increasingly focusing on the sub-acute and chronic phase after stroke because more patients might be eligible for therapeutic interventions in a prolonged time window. These delayed mechanisms include important pathophysiological pathways such as post-stroke inflammation, angiogenesis, neuronal plasticity and regeneration. In order to analyze these mechanisms and to subsequently evaluate novel drug targets, experimental stroke models with clinical relevance, low mortality and high reproducibility are sought after. Moreover, mice are the smallest mammals in which a focal stroke lesion can be induced and for which a broad spectrum of transgenic models are available. Therefore, we describe here the mouse model of transcranial, permanent coagulation of the middle cerebral artery via electrocoagulation distal of the lenticulostriatal arteries, the so-called &#8220;coagulation model&#8221;. The resulting infarct in this model is located mainly in the cortex; the relative infarct volume in relation to brain size corresponds to the majority of human strokes. Moreover, the model fulfills the above-mentioned criteria of reproducibility and low mortality. In this video we demonstrate the surgical methods of stroke induction in the &#8220;coagulation model&#8221; and report histological and functional analysis tools.

Various murine models of middle cerebral artery occlusion (MCAO) are widely used in experimental brain research. Here, we demonstrate the model of transcranial permanent distal MCAO which produces consistent cortical infarction of a size corresponding to damage imposed by the majority of human ischemic strokes.

דוגמנות שבץ בעכברים: קרישה קבועה של עורקי דיסטלי התיכון מוחין

Stroke is the third most common cause of death and a main cause of acquired adult disability in developed countries. Only very limited therapeutical ...

Carotid Artery Infusions for Pharmacokinetic and Pharmacodynamic Analysis of Taxanes in Mice

When proposing the use of a drug, drug combination, or drug delivery into a novel system, one must assess the pharmacokinetics of the drug in the study model. As the use of mouse models are often a vital step in preclinical drug discovery and drug development1-8, it is necessary to design a system to introduce drugs into mice in a uniform, reproducible manner. Ideally, the system should permit the collection of blood samples at regular intervals over a set time course. The ability to measure drug concentrations by mass-spectrometry, has allowed investigators to follow the changes in plasma drug levels over time in individual mice1, 9, 10. In this study, paclitaxel was introduced into transgenic mice as a continuous arterial infusion over three hours, while blood samples were simultaneously taken by retro-orbital bleeds at set time points. Carotid artery infusions are a potential alternative to jugular vein infusions, when factors such as mammary tumors or other obstructions make jugular infusions impractical. Using this technique, paclitaxel concentrations in plasma and tissue achieved similar levels as compared to jugular infusion. In this tutorial, we will demonstrate how to successfully catheterize the carotid artery by preparing an optimized catheter for the individual mouse model, then show how to insert and secure the catheter into the mouse carotid artery, thread the end of the catheter out through the back of the mouse&#8217;s neck, and hook the mouse to a pump to deliver a controlled rate of drug influx. Multiple low volume retro-orbital bleeds allow for analysis of plasma drug concentrations over time.

This method was developed with the goal of delivering a steady drug solution via the carotid artery, to assess the pharmacokinetics of novel drugs in mouse models.

חליטות עורק הראשי לpharmacokinetic וpharmacodynamic ניתוח של taxanes בעכברים

When proposing the use of a drug, drug combination, or drug delivery into a novel system, one must assess the pharmacokinetics of the drug in the study ...

A Simple Critical-sized Femoral Defect Model in Mice

While bone has a remarkable capacity for regeneration, serious bone trauma often results in damage that does not properly heal. In fact, one tenth of all limb bone fractures fail to heal completely due to the extent of the trauma, disease, or age of the patient. Our ability to improve bone regenerative strategies is critically dependent on the ability to mimic serious bone trauma in test animals, but the generation and stabilization of large bone lesions is technically challenging. In most cases, serious long bone trauma is mimicked experimentally by establishing a defect that will not naturally heal. This is achieved by complete removal of a bone segment that is larger than 1.5 times the diameter of the bone cross-section. The bone is then stabilized with a metal implant to maintain proper orientation of the fracture edges and allow for mobility. 
Due to their small size and the fragility of their long bones, establishment of such lesions in mice are beyond the capabilities of most research groups. As such, long bone defect models are confined to rats and larger animals. Nevertheless, mice afford significant research advantages in that they can be genetically modified and bred as immune-compromised strains that do not reject human cells and tissue.
Herein, we demonstrate a technique that facilitates the generation of a segmental defect in mouse femora using standard laboratory and veterinary equipment. With practice, fabrication of the fixation device and surgical implantation is feasible for the majority of trained veterinarians and animal research personnel. Using example data, we also provide methodologies for the quantitative analysis of bone healing for the model.

Animal models are frequently employed to mimic serious bone injury in biomedical research. Due to their small size, establishment of stabilized bone lesions in mice are beyond the capabilities of most research groups. Herein, we describe a simple method for establishing and analyzing experimental femoral defects in mice.

דגם פגם עצם הירך קריטית בגודל פשוט בעכברים

While bone has a remarkable capacity for regeneration, serious bone trauma often results in damage that does not properly heal. In fact, one tenth of all ...

A Novel Murine Model of Arteriovenous Fistula Failure: The Surgical Procedure in Detail

The arteriovenous fistula (AVF) still suffers from a high number of failures caused by insufficient remodeling and intimal hyperplasia from which the exact pathophysiology remains unknown. In order to unravel the pathophysiology a murine model of AVF-failure was developed in which the configuration of the anastomosis resembles the preferred situation in the clinical setting. A model was described in which an AVF is created by connecting the venous end of the branch of the external jugular vein to the side of the common carotid artery using interrupted sutures. At a histological level, we observed progressive stenotic intimal lesions in the venous outflow tract that is also seen in failed human AVFs. Although this procedure can be technically challenging due to the small dimensions of the animal, we were able to achieve a surgical success rate of 97% after sufficient training. The key advantage of a murine model is the availability of transgenic animals. In view of the different proposed mechanisms that are responsible for AVF failure, disabling genes that might play a role in vascular remodeling can help us to unravel the complex pathophysiology of AVF failure.

Here we present a murine model of arteriovenous fistula (AVF) failure in which a clinically relevant anastomotic configuration is incorporated. This model can be used to study the pathophysiology and to test possible therapeutic interventions.

מודל Murine רומן של אי מורסה arteriovenous: ההליך הכירורגי בהרחבה

The arteriovenous fistula (AVF) still suffers from a high number of failures caused by insufficient remodeling and intimal hyperplasia from which the ...

The bm12 Inducible Model of Systemic Lupus Erythematosus (SLE) in C57BL/6 Mice

Systemic lupus erythematosus (SLE) is an autoimmune disease with diverse clinical and immunological manifestations. Several spontaneous and inducible animal models mirror common components of human disease, including the bm12 transfer model. Upon transfer of bm12 splenocytes or purified CD4 T cells, C57BL/6 mice rapidly develop large frequencies of T follicular helper cells (Tfh), germinal center (GC) B cells, and plasma cells followed by high levels of circulating anti-nuclear antibodies. Since this model utilizes mice on a pure C57BL/6 background, researchers can quickly and easily study disease progression in transgenic or knockout mouse strains in a relatively short period of time. Here we describe protocols for the induction of the model and the quantitation Tfh, GC B cells, and plasma cells by multi-color flow cytometry. Importantly, these protocols can also be used to characterize disease in most mouse models of SLE and identify Tfh, GC B cells, and plasma cells in other disease models.

The bm12 Inducible Model of Systemic Lupus Erythematosus SLE in C57BL/6 Mice

The transfer of bm12 lymphocytes into a C57BL/6 recipient is an established model of systemic lupus erythematosus. Here we describe how to initiate disease using this model and how to characterize T follicular helper cells, germinal center B cells and plasma cells by flow cytometry.

דגם bm12 העין מתנהל של זאבת אדמנתית המערכתית (לופוס) בC57BL עכברים / 6

Systemic lupus erythematosus (SLE) is an autoimmune disease with diverse clinical and immunological manifestations. Several spontaneous and inducible ...

A Novel Microsurgical Model for Heterotopic, En Bloc Chest Wall, Thymus, and Heart Transplantation in Mice

Exploration of novel strategies in organ transplantation to prolong allograft survival and minimizing the need for long-term maintenance immunosuppression must be pursued. Employing vascularized bone marrow transplantation and co-transplantation of the thymus have shown promise in this regard in various animal models.1-11 Vascularized bone marrow transplantation allows for the uninterrupted transfer of donor bone marrow cells within the preserved donor microenvironment, and the incorporation of thymus tissue with vascularized bone marrow transplantation has shown to increase T-cell chimerism ultimately playing a supportive role in the induction of immune regulation. The combination of solid organ and vascularized composite allotransplantation can uniquely combine these strategies in the form of a novel transplant model. Murine models serve as an excellent paradigm to explore the mechanisms of acute and chronic rejection, chimerism, and tolerance induction, thus providing the foundation to propagate superior allograft survival strategies for larger animal models and future clinical application. Herein, we developed a novel heterotopic en bloc chest wall, thymus, and heart transplant model in mice using a cervical non-suture cuff technique. The experience in syngeneic and allogeneic transplant settings is described for future broader immunological investigations via an instructional manuscript and video supplement.

To study combined solid organ and vascularized composite allotransplantation, we describe a novel heterotopic en bloc chest wall, thymus, and heart transplant model in mice using a cervical non-suture cuff technique.

Microsurgical דגם חדשני לHeterotopic, כמקשה אחת בחזה קיר, קורנית, ולב השתלה בעכברים

Exploration of novel strategies in organ transplantation to prolong allograft survival and minimizing the need for long-term maintenance immunosuppression ...

Induction of Accelerated Atherosclerosis in Mice: The "Wire-Injury" Model

Atherosclerosis is a proliferative fibro-inflammatory disease developing in the arterial wall, inducing a deficient blood flow or a lack of blood flow. Moreover, by rupture of the defective vascular wall, atherosclerosis induces occlusive thrombus formation, which represents the main cause of myocardial infarction or stroke and the most frequent cause of death. Despite the advances in the cardiovascular field, many questions remain unanswered, and additional basic research is essential to improve our understanding of the molecular mechanisms during atherosclerosis and its effects. Due to limited clinical studies, there is a need for representative animal models recreating atherosclerotic conditions such as neointima formation after stent implantation, balloon angioplasty, or endarterectomy. Since the mouse presents many advantages and is the most frequently used model for studying molecular processes, the current study proposes an invasive procedure of endothelial denudation, also known as the wire-injury model, which is representative of the human condition of neointima formation in arteries after revascularization procedures.

This study describes an invasive procedure for the induction of accelerated atherosclerosis in mice. In comparison to other methods using electric- or cryo-induced injury, mechanical-induced injury mimics the human condition of restenosis after revascularization therapies and is ideal for the study of the molecular mechanisms involved.

אינדוקציה של טרשת עורקים מואצת בעכברים: מודל "פגיעת חוט"

Atherosclerosis is a proliferative fibro-inflammatory disease developing in the arterial wall, inducing a deficient blood flow or a lack of blood flow. ...