Najie Zhu ו Liqun Bai תרמו באופן שווה על עבודה זו. עבודה זו נתמכה כלכלית על ידי הקרן המיוחדת עבור יערנות מחקר מדעי ברווחת הציבור (201204501) ואת הקרן הלאומית למדע הטבעי של סין (31170604, 31270688, ו 31,570,638). אנו מודים לד&quot;ר Holighaus חריט וד&quot;ר דניאל Hickford עבור הצעות מועילות שלהם על הכתיבה באנגלית.

1. רכישת נמטודות למבוגרים בתולים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לבודד נמטודות פיינווד ותנאי תרבות הערה: ב xylophilus לבודד Nxy61 הופק במקור מתוך massoniana Pinus חולה באזור Ningbo במחוז Zhejiang בסין. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן תפוחי אדמה דקסטרוז אגר (PDA, ראו טבלה של חומרים) צלחות לגידול בוטריטיס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לקבלת חיסון, אגרוף פיסת מחצלת פטרייתי עם קוטר של 10 מ&quot;מ מן מחצלת cinerea ב והכניס אותו באמצע צלחת מחשב כף יד חדש. תרבות cinerea B. במשך 5 ד 25 מעלות צלזיוס בחושך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תרבות נמטודות עץ האורן בצלחת פטרי המוכנה המכילה cinerea ב 25 מעלות צלזיוס בחושך. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> רכישה ב xylophilus ביצים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניח צינור גומי מהדק מתחת משפך והחזק את המשפך המוכן במעמד להרכיב אתמנגנון משפך Baermann. מניחים שתי שכבות של נייר סינון במקום גזה בפה של המשפך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מעביר את התרבויות פטרייתי להגדרות המשפך ומוסיף מים עד מחצלת פטרייתי היא שקועה. חכה 2 h, נמטודות ייצאה המתרבות פטרייתי, לחצות את נייר הסינון, ולהשתקע בחלק הנמוך ביותר של משפך Baermann. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אסוף את הזוג הראשון של טיפות מים מתחתית הצינור לתוך צינור 15 מ&quot;ל ולאסוף נמטודות על ידי שחרור מהדק לאט על הצינור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צנטריפוגה האוספים מעל 3,000 XG במשך 2 דקות ב RT. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את השכבה העליונה של מים עם טפטפת resuspend אותו עם 1 מ&quot;ל של (dd) מזוקקים פעמיים סטרילי H 2 O. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עם טפטפת, להעביר את resuspension מעל לצלחת חדש זכוכית פטרי (6 ס&quot;מ קוטר). הוסף 3 מ&quot;ל של dd סטרילי H 2 O כדי בצלחת פטרי כדי להבטיח כי נמטודות מסוגלים לשחות בחופשיות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שמור את נמטודות של גלאסזה צלחת פטרי במשך 10 דקות ב 25 ° C בחושך. ביצים תונח על ידי נשים בהריון. בגלל משטח גליקופרוטאין שלהם, הביצים ידבק לתחתית צלחת זכוכית פטרי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את המים ותולעים בזהירות, מבלי להפריע את הביצים. הוסף 3 מ&quot;ל של dd סטרילי H 2 O כדי בצלחת זכוכית פטרי מיד כדי למנוע את הביצים מהתייבשות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור על שלב 1.2.8 3x להסיר את כל הזחלים ומבוגרים, ולקבל את הביצים הטהורות. הוסף 2 מ&quot;ל תוספת (5 מ&quot;ל בסך הכל) של H dd סטרילי 2 O כדי בצלחת פטרי. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> רכישת הקטינים הרביעי שלבית (זחלי J4) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> האץ את הביצים שנאספו במשך 24 שעות בחושך ב 25 ° C כדי להשיג זחלי J2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מעבירים את הזחלים J2 עם טפטפת לתוך צינור 15 מ&quot;ל, צנטריפוגות ב 3,000 XG למשך 2 דקות, ולהסיר את שכבת המים העליונה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Resuspend הזחלים J2 עם 200 μL של dd סטרילי H 2 O, ולאחר מכן להעביר אותםצלחת PDA המכילה cinerea ב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תרבות זחלי J2 עבור 52 שעות ב 25 ° C בחושך. בנקודה זו בזמן, רוב זחלי J2 יהיו התפתחו בשלב המוקדם של זחלי J4. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> רכישת נמטודות מבוגרת בתולה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכין מחט עבור להרים נמטודות על ידי ציור זכוכית נימים לאחר חימום זה מעל מבער אלכוהול. הערה: קצה מחט נימים זה בדרך כלל צריך להיות 50 מיקרומטר קוטר, בערך רוחב הגוף של נמטודות מבוגרת, כך שהוא יכול לשמש ככלי להרים נמטודות יחיד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרכיב משפך Baermann ולחלץ נמטודות מן התרבויות פטרייתי עבור 2 שעות, כמתואר בשלבים 1.2.1 - 1.2.3. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מעביר את J4 עם מים לתוך צלחת פטרי נקיה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שים את נמטודות תחת סטראו ולהבחין בין זכרים ונקבות ידי המורפולוגיה של איברי המין, כפי שתואר על ידי ממיה ו Kiyohara 8 (איור 1 </strong&gt;). תרים נמטודות מהמין הרצוי עם מחט נימים המוכנה ולהעביר אותו לצלחת פטרייתי-התרבות המתאימה לגברים או לנשים. הערה: יש יותר נשים מאשר גברים, עם אחוז נקבות ב 60 - 70%. הפות הנשית היא ללא ספק שונה spicule זכר. בהשוואה המבוגרת, spicule או הפות ב J4 בשלב מוקדם הוא קטן יותר, אבל הם עדיין ניתן לראות בקלות ומכובדת. נמטודות תמיד נעות בתוך המים, שלפעמים מגביר את הקושי להבחין זכרים ונקבות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תרבות זחלי J4 במשך 24 שעות אחרות במהירות של 25 ° C בחושך. הערה: כל נמטודות צריך להתפתח מבוגרים, אבל מאז הם בךזוג, הם נחשבים כמבוגרים בתולה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרכיב שני Baermann משפכים ולחלץ מבוגרי הבתולה מן התרבויות פטרייתי עבור 2 שעות, כמתואר בשלבי 1.2.1 - 1.2.3, ולהעביר את הזכרים בוגרים בתולה ונקבות לשתי מנות נפרדות, נקיות פטרי. </li></ol&gt; </li></ol> תצפית 2. הקלטת וידאו של התנהגות חיזור <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן כמה שקופיות קעורות ולהוסיף 200 μL של H dd סטרילי 2 O לכל אחד הבארות שלהם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תרים את זכר בוגר בתולה המוכן או ונקבה עם מחט נימים ולשים רק נמטודות אחד לתוך המים של כל שקופית קעורה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שמור על מבוגרי הבתולה בתוך הבאר 1 h לתת להם להסתגל לסביבה מהימית החדשה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> זוג זכר ונקבה בתולה ידי העברת אחד מהם מאחד היטב למשנהו בעזרת פיפטה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שים את התנהגות החיזור של שילוב 1♀ + 1♂ בשקופית הקעורה תחת סטראו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי לנתח את יעילות ההזדווגות של מבוגרי בתולה, לחשב את שיעור הצלחת ההזדווגות שלהם (R) ולהשוות אותו עם זה של זוגות מבוגרים שנבחרו באופן אקראי. חישוב R כאחוז משכפל שבו הזדווגות נצפתה בהשוואה למספר הכולל של משכפל למד. </li><li&gt; כדי לחקור בחירת הזדווגות ותחרות intrasexual, קבוצה ולבחון נמטודות בתולת שני שילובים שונים: 1♀ + 3♂ ו 3♀ + 1♂. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> על מנת לאסוף נתונים לניתוח איכותי וכמותי, לצלם את התנהגות החיזור באמצעות מיקרוסקופ וידאו. בדרך כלל, תהליך ההזדווגות כולו, מהרגע כאשר נמטודות ממוקמים הבאר של השקופית הקעורה אל הרגע שבו הם מתרחקים לאחר הזדווגות, יושלם בתוך 2 שעות. לכן, להקליט את תהליך ההזדווגות ברציפות במשך לפחות 2 שעות כפי לשכפל אחד. שלם לפחות 30 משכפל בסך הכל לכל צירוף. הערה: הוסף dd סטרילי יותר H 2 O (בדרך כלל 50 μL) כל 0.5 שעות אל הבאר כדי לפצות על אידוי במהלך תהליך הצריבה. </li></ol> 3. איסוף נתונים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הצג את כל הסרטונים בקפידה על מסך מחשב ולאפיין את ההתנהגויות תת איכותי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מדוד את המשך באמצעות הזדווגות המסגרת לפי מסגרת דואר פונקציה של מקליט וידאו. ידני להפחית את הזמן החל לנקודת הסיום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עבור שילוב 1♀ + 1♂, לנתח כל הקלטת וידאו ולמדוד את משך אחד מהאירועים הבאים: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מדדו את משך חיפוש (כלומר, הזמן וממתי הנשית והגברית מוכנסים היטב של השקופית קעורה אל הרגע הם נתקלים קשר אחד לשני). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מדוד את משך פנייה (כלומר, הזמן מהמגע הראשון ועד לרגע שבו הזכר עומד בדיוק על הפות של הנקבה עבור ההזדווגות הראשונה). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מדוד את משך מזדווגים (כלומר, זמן וממתי הזכר עומד בדיוק על הפות של הנקבה עד שהוא מחליק למטה מהגוף של הנקבה לאחר שפיכה). הערה: חלק נמטודות יכול להזדווג כמה פעמים ב 2 h. במקרים כאלה, למדוד את משך ההזדווגות מן ההזדווגות הראשונה סוף last אחד, כולל הזמן שביניהם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מדדו את משך וקידוח (כלומר, בתקופה שלאחר ההזדווגות עד לשחות זכר ונקבה אחד מהשני והם מופרדים על ידי מרחק של יותר מאורך הגוף &#39;נמטודות (בדרך כלל 1 מ&quot;מ)). </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ספירת תדירות ההזדווגות ומשך כל הזדווגות ומשך חיים ממוצע של כל הזדווגויות ב 2 h עבור כל אחד מהשילובים שונים (כלומר, 1♀ + 1♂, 3♀ + 1♂, ו 1♀ + 3♂). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חשב את שיעור ההצלחה ההזדווגות של איש הקשר הראשון (P) עבור שילובים שונים כמו שיעור ההצלחה של הזדווגות לאחר המגע הראשון, אשר מתבצע באופן מיידי וללא כל הפסקה. בשלב הפנייה, אנשי קשר כמה עלולים להיות שנצפו לפני ההזדווגות בפועל. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כאשר המרחק בין שני אנשים הוא יותר מאורך הגוף, שקול קשר אחד ייגמר. ראשית לשכפל, להקליט P 100% כשאני הזדווגותהים נצפה מייד לאחר המגע הראשון, ללא הפסקה, או 0.00% אם לא הזדווגות נצפתה או אם יש הזדווגות אבל אחרי שניים או יותר אנשי קשר. הערה: היו 30 משכפל עבור כל שילוב המתואר כאן. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Tokushige, Y., Kiyohara, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bursaphelenchus+sp.+in+the+wood+of+dead+pine+trees%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Jap.+For.+Soc%22%5BJournal%5D)">Bursaphelenchus sp. in the wood of dead pine trees.</a> J. Jap. For. Soc. 51, 193-195 (1969).</li>
<li>Sun, Y. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bursaphelenchus+xylophilus+was+discovered+in+Sun+Yet-sen%27s+mausoleum+in+Nanjing%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Jiangsu+Fore.+Sci.+Tech.+%28in+Chinese%29%22%5BJournal%5D)">Bursaphelenchus xylophilus was discovered in Sun Yet-sen's mausoleum in Nanjing.</a> J. Jiangsu Fore. Sci. Tech. (in Chinese). 4, 47(1982).</li>
<li>Mota, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((First+report+of+Bursaphelenchus+xylophilus+in+Portugal+and+in+Europe%5BTitle%5D)+AND+%22Nematology%22%5BJournal%5D)">First report of Bursaphelenchus xylophilus in Portugal and in Europe.</a> Nematology. 1, 727-734 (1999).</li>
<li>Robertson, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Incidence+of+the+pine+wood+nematode+Bursaphelenchus+xylophlius+Steiner+%26+Buhrer%2C+1934+%28Nickle%2C+1970%29+in+Spain%5BTitle%5D)+AND+%22Nematology%22%5BJournal%5D)">Incidence of the pine wood nematode Bursaphelenchus xylophlius Steiner & Buhrer, 1934 (Nickle, 1970) in Spain.</a> Nematology. 13, 755-757 (2011).</li>
<li>Vicente, C., Espada, M., Vieira, P., Mota, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pine+wilt+disease%3A+a+threat+to+European+forestry%5BTitle%5D)+AND+%22Euro.+J.+Plant+Path%22%5BJournal%5D)">Pine wilt disease: a threat to European forestry.</a> Euro. J. Plant Path. 133, 89-99 (2012).</li>
<li>Jones, J. T., Moens, M., Mota, M., Li, H., Kikuchi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bursaphelenchus+xylophilus%3A+opportunities+in+comparative+genomics+and+molecular+host-parasite+interactions%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Plant.+Path%22%5BJournal%5D)">Bursaphelenchus xylophilus: opportunities in comparative genomics and molecular host-parasite interactions.</a> Mol. Plant. Path. 9, 357-368 (2008).</li>
<li>Mamiya, Y., Furukawa, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fecundity+and+reproduction+of+Bursaphelenchus+lignicolus%5BTitle%5D)+AND+%22Jap.+J.+Nemat%22%5BJournal%5D)">Fecundity and reproduction of Bursaphelenchus lignicolus.</a> Jap. J. Nemat. 7, 6-9 (1977).</li>
<li>Mamiya, Y., Kiyohara, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Description+of+Bursaphelenchus+lignicolus.+n.+sp.+%28Nematoda%3A+Aphelenchoididae%29+from+pine+wood+and+histophathology+of+nematode-infested+trees%5BTitle%5D)+AND+%22Nematologica%22%5BJournal%5D)">Description of Bursaphelenchus lignicolus. n. sp. (Nematoda: Aphelenchoididae) from pine wood and histophathology of nematode-infested trees.</a> Nematologica. 18, 120-124 (1972).</li>
<li>Liu, B. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioural+features+of+Bursaphelenchus+xylophilus+in+the+mating+process%5BTitle%5D)+AND+%22Nematology%22%5BJournal%5D)">Behavioural features of Bursaphelenchus xylophilus in the mating process.</a> Nematology. 16, 895-902 (2014).</li>
<li>Simon, J. M., Sternberg, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence+of+a+mate+finding+cue+in+the+hermaphrodite+nematode+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+USA%22%5BJournal%5D)">Evidence of a mate finding cue in the hermaphrodite nematode Caenorhabditis elegans.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 99, 1598-1603 (2002).</li>
<li>Barr, M. M., Garcia, L. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Male+mating+behaviour%5BTitle%5D)+AND+%22The+C.+elegans+Research+Community+Wormbook%22%5BJournal%5D)">Male mating behaviour.</a> The C. elegans Research Community Wormbook. , (2006).</li>
<li>Shinya, R., Chen, A., Sternberg, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sex+attraction+and+mating+in+Bursaphelenchus+okinawaensis+and+B.+xylophilus%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Nematol%22%5BJournal%5D)">Sex attraction and mating in Bursaphelenchus okinawaensis and B. xylophilus.</a> J. Nematol. 47 (3), 176-183 (2015).</li>
</ol>

The authors have nothing to disclose.

בדיקות התנהגות הן היבט בסיסי של אקולוגיה כימית, נוירוביולוגיה, ביולוגיה מולקולרית, גנטיקה. נמטודות, ובמיוחד סי אלגנס, נמצאים בשימוש נרחב עבור מחקרים בתחומים אלה. התנהגות החיזור של C. elegans נחקרה בעבר 10-11. עם זאת, ב xylophilus הוא gonochoristic ושונה אלגנס hermaphroditic, ותהליך החיזור שלה יש תכונות התנהגותיות שונות 9. לאחרונה, התנהגות החיזור של Bursaphelenchus okinawaensis, מין אחות hermaphroditic של xylophilus ב &#39;, נמסרה 12. למרות שיטות ניסיוניות שונות שמשו, מיני hermaphroditic זה הראה משיכת מין דומה ב xylophilus, ומשיכה בין המינים ביניהם נצפתה. מיני אחות hermaphroditic זה עשויים לשמש כמודל לנהל חקירה נוספת על הביולוגיה של Bursaphelenchus. פרוטוקול זה מספק קו מנחה כיצד להתבונן ולחקור את תכונות התנהגותיות של B. xylophilus בעת ההזדווגות. הממצאים שלנו הראו ששימוש נמטודות מבוגר בתולה הוא קריטי להגדלת הסיכוי לצפות בתהליך ההזדווגות בהצלחה (איור 1). קבלת J4 זחלים והבחנת המינים שלהם בדיוק הם שני שלבים בסיסיים חשובים לרכישת מבוגרי בתולה. תחת תנאי הניסוי שלנו (כלומר, ב 25 ° C בחושך), התקופה של 52 שעות זה הזמן הנכון כדי לקבל J4 הזחלים J2. עם זאת, תוך הבחנה סקס בשלב מוקדם J4 בעיקר תלוי ניסיון אישי. כדי להגיע לרמת דיוק, יש צורך עבור אנשים שונים לשוב ולבדוק הקצאת המין. המאפיינים ההתנהגותיים של B. xylophilus במהלך תהליך ההזדווגות ניתן לתאר באופן איכותי ונותחו כמותית על ידי הקלטת המשכים מהארבעה שונהשלבי אף אוזן גרון, אחוז ההצלחה ההזדווגות לאחר המגע הראשון, תדירות ההזדווגות, ואת משך ההזדווגות של שילובים שונים. מעניין לציין, כי בפעם הראשונה, צפינו בחירת הזדווגות ידי נקבות ותחרות פן-מינית חזקה בשני זכרים ונקבות. אין הפקרות נצפתה; עם זאת, זה יכול להיות בגלל המספר המוגבל של נמטודות בשימוש חקירתנו. פרוטוקול זה לא יכול לשמש רק על חקירת התנהגות החיזור של B. xylophilus, אבל זה גם יכול להיות שימושי ובעל ערך כהפנית נמטודות אחרות.

The pinewood nematode, Bursaphelenchus xylophilus (Steiner and Buhrer) Nickle, is one of the most destructive invasive species, causing the wilting and eventual death of pine trees. This pathogenic nematode is believed to be native to the USA, but it was transported to several countries, including China, Japan, South Korea, and Portugal. Recently, it has also been reported in Spain, killing millions of pine trees at huge economic losses and threatening forest production and ecological stability1-5.
Once a host pine tree is infected by pinewood nematodes, thousands of millions of offspring are propagated rapidly within the trunk. This causes xylem dysfunction, resulting in wilting and eventually in the death of the host tree6. However, there is currently no efficient way to control this disease. Mating behavior might play an important role in the high fecundity of this nematode7. We therefore investigated the mating behavior of B. xylophilus in the laboratory, trying to find an effective way of disturbing its mating and decreasing its fecundity. 
This protocol is intended to introduce the detailed methods of how to obtain the virgin adults of B. xylophilus and how to observe and analyze the mating behavior using a video recorder and a stereomicroscope. This protocol can also be used as a reference for behavioral studies of other nematodes.

<table><tbody><tr><td>&lt;em&gt;B. xylophilus&lt;/em&gt; isolate &lt;em&gt;Nxy61&lt;/em&gt;</td><td></td><td></td><td>Extracted from &lt;em&gt;Pinus massoniana&lt;/em&gt; in Ningbo area of China</td></tr><tr><td>Grey mold strain</td><td></td><td></td><td>Obtained from Forestry Academy of China</td></tr><tr><td>Baermann funnels</td><td>Sengong</td><td></td><td></td></tr><tr><td>falcon tubes</td><td>Sengong</td><td></td><td></td></tr><tr><td>centrifuge</td><td>Sengong</td><td></td><td></td></tr><tr><td>pipette</td><td>Sengong</td><td></td><td></td></tr><tr><td>sterile dd H&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;O</td><td></td><td></td><td>Sterilized by high pressure of steam at 121 &amp;deg;C for 30 min.</td></tr><tr><td>Petri dishes</td><td>Sengong</td><td></td><td></td></tr><tr><td>PDA medium</td><td>Huankai Bio.</td><td>021050</td><td></td></tr><tr><td>incubator</td><td>Sengong</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Laminar flow</td><td>Sengong</td><td></td><td></td></tr><tr><td>glass capillary</td><td>Sengong</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Stereoscope</td><td>Leica</td><td>LED5000 RL</td><td></td></tr><tr><td>inverted stereo microscope</td><td>Zeiss</td><td>A1</td><td></td></tr><tr><td>concave slides</td><td>Sengong</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

observation and quantification of mating behavior in the pinewood nematode, bursaphelenchus xylophilus

שיטת התבוננות וכימות התנהגות החיזור של נמטודות עץ האורן, xylophilus Bursaphelenchus, הוקמה תחת סטראו. כדי לשפר את היעילות של ההזדווגות ב Xylophilus וכדי להגדיל את הסיכוי של התבוננות הזדווגות, מבוגרי בתולה היו בתרבית והשתמשו לחקירה. ביצים התקבלו על ידי שמירה על נמטודות במים המאפשרים הנקבות להטיל ביצים במשך 10 דקות. לנערים השלב השני (J2) סונכרנו ידי דוגרים על הביצים למשך 24 שעות ב 25 ° C בחושך, ואת מוקדם J4 התקבלו על ידי culturing J2 עם עובש אפור, בוטריטיס, עבור 52 אחר h. בנקודה זו בזמן, רוב נמטודות J4 יכול להבחין בבירור כמו להיות זכר או נקבה באמצעות מורפולוגיה גניטלי שלהם. הזכר והנקבה J4 נאספו ותרבותי בנפרד בשתי מנות שונות פטרי במשך 24 שעות כדי לקבל נמטודות מבוגר בתולה. גבר בתול ונקבה בתולה היו לזווג בטיפת וואטאה בבאר של שקופית קעורה. התנהגות החיזור שצולמה באמצעות מצלמת וידאו תחת סטראו. התקופה כולה של תהליך ההזדווגות היה 82.8 ± 3.91 דקות (ממוצע SE ±) ויכול להיות מחולק ל 4 שלבים שונים: חיפושים, פנייה, מזדווגים, ומשתהה. הפרוטוקולים הממוצעים של משך היו 21.8 ± 2.0, 28.0 ± 1.9, 25.8 ± 0.7 ו -7.2 ± 0.5, בהתאמה. תת התנהגויות Eleven תוארו: שיוט, מתקרב, נתקלים, נגיעה, הופ דאנס, איתור, מצרף, לפלוט זרע, להפרדה, קפאון, נדידה. מעניין לציין, כי תחרות תוך-מינית ברורה נצפתה כאשר ונקבה אחת הייתה מקובצים עם 3 זכרים או זכר אחד עם 3 נקבות. פרוטוקול זה שימושי ובעל ערך, לא רק חוקר את התנהגות החיזור של xylophilus ב &#39;, אלא גם מתנהג כמו הפניה ללימודים האתולוגי של נמטודות אחרות.

שיעור ההצלחה ההזדווגות (R) של מבוגרים בתולה היה 86.67% בממוצע, שהיה גבוה משמעותית מזה של המבוגרים שנבחרו באקראי: 13.33 ± 4.65% (F = 1301.71, df = 1, P = 0.0001) (איור 2). ממצא זה מצביע על כך שהוא קל יותר לבחון את התנהגות החיזור של B. xylophilus עם מבוגרים בתולה מאשר עם מבוגרים שנבחרו באופן אקראי. כאשר חולה אחד זכה זיווג עם נקבה אחת, תהליך ההזדווגות כולו נמשך 82.8 דקות בממוצע. התהליך כולו יכול להיות מתואר על ידי ארבעה שלבים שונים: חיפוש, פנייה, מזדווגים, ומשתהה. המשך עבור ארבעת השלבים הללו היו 21.8 ± 2.0 דקות, 28.0 ± 1.9 דקות, 25.8 ± 0.7 דקות, ו -7.2 ± 0.5 דקות, בהתאמה (איור 3). בפרסום אחרון תארנו 11-ההתנהגויות תת כמו שיוט, מתקרבים, encountering, נוגע ללב, הופ דאנס, איתור, מצרף, לפלוט זרע, להפרדה, קפאון, נדידה 9. כאשר זכר אחד פגש שתיים או יותר נקבות בו זמנית, הזכר נראה להזדווג באופן אקראי עם אחד מהם, ללא כל בחירה. עם זאת, בחירת הזדווגות ברורה נצפתה xylophilus ב נקבה. כאשר נקבו קשר זכר, הנקבה נטתה לגעת בראשו של הזכר, גוף, זנב, ובאזור איברי המין בעדינות כשראשה ועשתה כאילו שאני הערכת השותף הפוטנציאלי שלה. אם הנקבה לא קבלה את הזכר, הנקבה עזבה אותו במהירות ושח זכר אחר עבור ההערכה הבאה. אחד הזכרים נבחר ואז על ידי הנקבה לזיווג. זיווג הצלחה שיעורי לאחר המגע הראשון (P) של 1♀ + 1♂, 3♀ + 1♂, ו 1♀ + 3♂ שילובים היו 46.7 ± 9.3%, 80.0 ± 7.4%, ו -23.4 ± 7.4%, בהתאמה, ואת ההבדלים ביניהם werדואר משמעותי (F = 8.21, df = 2, P = 0.0124) (איור 4). תחרות Intrasexual נצפתה בשני זכרים ונקבות. כאשר נקבת בתולה אחת עורבבה עם 3 זכרי בתולה, הזכרים ניסו להתקרב וליצור קשר עם הנקבה ככל האפשר כדי לקבל את הסיכוי של הזדווגות איתה. כאשר הפות נכבשה על ידי זכר אחד, הזכרים האחרים ניסו להפריע זכר ההזדווגות באמצעות נדנדות גוף אלימות או הגרירה להפריד ביניהם. תחרות intrasexual נקבה נתפסה להיות פחות או יותר דומה לתחרות intrasexual זכר. הצלחה זיווג היתה תלויה בעיקר הנקבה. כאשר נקבה קבלה זכר, הזכר נע לאט יותר מסולסל או אפילו יצר חישוק, והנקבה התקדמה באופן פעיל כדי להקל על הזכר לאתר הערווה וכדי למנוע הפרעה מצד זכרים אחרים. אם נקבה לא קיבל זכר,הנקבה ניסתה להתנער ממנו, גם אם הזכר היה רכוב ממקם את עצמו לצד ערוותה. בגלל התחרות intrasexual, תדרים הזדווגות של 1♀ + 1♂, 3♀ + 1♂, ו 1♀ + 3♂ שילובים היו 1.43 ± 0.091, 1.17 ± 0.074 ו 1.83 ± 0.074, בהתאמה, ואת ההבדלים ביניהם היו משמעותי (F = 14.50, df = 2, P = 0.0001) (איור 5). בחקירתו שלנו, משך ההזדווגות מגוון מאוד, עם מינימום של 20 שניות ועד למקסימום של 42 דק &#39;. על פי הנתונים שלנו, משך ההזדווגות יכול להיות מובחן ברור לשתי קבוצות: הזדווגות לטווח קצר, שנמשך פחות מ -5 דקות, ומשגלים לטווח ארוך, שנמשך יותר מ 10 דקות. הבדלים ברורים נצפו בין הקבוצות השונות עבור מח&quot;מ הזדווגות לטווח קצר (F = 3.81, df = 2, P </em&gt; = 0.0296), הזדווגות לטווח ארוך (F = 179.52, df = 2, P = 0.0001), וכל הזדווגויות (F = 2.93, df = 2, P = 0.0367) (איור 6). <img alt="איור 1" src="/files/ftp_upload/54842/54842fig1.jpg" /> איור 1: איברי מין של זכר ונקבה ב Xylophilus. (א) spicule של גברים (חץ כחול). (ב) פות של נקבה (חץ אדום). <a href="https://ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/54842/54842fig1large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> <img alt="איור 2" src="/files/ftp_upload/54842/54842fig2.jpg" /> איור 2: זיווג אחוז ההצלחה של זוגות מבוגרי בתולה וזוגות מבוגרים שנבחרו באופן אקראי של xylophilus ב. הערכים הממוצעים מחושבים הם מ 30 חזרות. מופע הקו האנכיזה סטיית התקן. האותיות הקטנות השונות מעידות על הבדלים משמעותיים ב- P &lt;0.05 בהשוואה ידי המבחן של Tukey. <a href="https://ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/54842/54842fig2large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> <img alt="איור 3" src="/files/ftp_upload/54842/54842fig3.jpg" /> איור 3: משך 4 השלבים בתהליך ההזדווגות של B. xylophilus. הערכים הממוצעים מחושבים הם מ 30 חזרות. הבר אנכי מציג את סטיית התקן. האותיות הקטנות השונות מעידות על הבדלים משמעותיים ב- P &lt;0.05 בהשוואה ידי המבחן של Tukey. מח&quot;מ של השלב המזדווג הוא 25.80 ± 0.71 דקות, המהווה 31.17% של תהליך ההזדווגות כולו. <a href="https://ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/54842/54842fig3large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של תאנה זו</a>יור. <img alt="איור 4" src="/files/ftp_upload/54842/54842fig4.jpg" /> איור 4: זיווג הצלחה עבור לתקשר קודם ב xylophilus. הערכים הממוצעים מחושבים הם בין 30 משכפל ± SE. אמצעי עם אותה האות קטנה בתוך כל עמודה אינו שונה באופן מהותי ב- P &lt;0.05 בהשוואה ידי מבחן ההבדל משמעותי הישר של Tukey. <a href="https://ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/54842/54842fig4large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> <img alt="איור 5" src="/files/ftp_upload/54842/54842fig5.jpg" /> איור 5: תדר הזדווגות של B. xylophilus בקבוצות שונות. הערכים הממוצעים מחושבים הם בין 30 משכפל ± SE. אמצעי עם אותה האות הקטנה אינם שונים באופן מהותי ב- P &lt;0.05 כאשר compared ידי מבחן ההבדל משמעותי הישר של Tukey. <a href="https://ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/54842/54842fig5large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> <img alt="איור 6" src="/files/ftp_upload/54842/54842fig6.jpg" /> איור 6: משך הזדווגות של B. xylophilus. אמצעי עם אותה האות קטנה בתוך כל קבוצה של עמודות אינם שונה באופן משמעותי ב- P &lt;0.05 בהשוואה ידי מבחן ההבדל משמעותי הישר של Tukey. <a href="https://ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/54842/54842fig6large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Observation and Quantification of Mating Behavior in the Pinewood Nematode, Bursaphelenchus xylophilus at JoVE.com

Observation and Quantification of Mating Behavior in the Pinewood Nematode, Bursaphelenchus xylophilus

A protocol for investigating the mating behavior of the pinewood nematode, Bursaphelenchus xylophilus, is presented. Behavioral features of B. xylophilus are described in the mating process.

תצפית כימות התנהגות החיזור של נמטודות פיינווד,<em&gt; Bursaphelenchus xylophilus</em

A method for observing and quantifying the mating behavior of the pinewood nematode, Bursaphelenchus xylophilus, was established under a stereomicroscope. ...

observation-quantification-mating-behavior-pinewood-nematode

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Biology

Observation and Quantification of Mating Behavior in the Pinewood Nematode, Bursaphelenchus xylophilus

9.4K Views.  Zhejiang Agricultural & Forestry University. A protocol for investigating the mating behavior of the pinewood nematode, Bursaphelenchus xylophilus, is presented. Behavioral features of B. xylophilus are described in the mating process.

Video: Observation and Quantification of Mating Behavior in the Pinewood Nematode, Bursaphelenchus xylophilus

Technique for Studying Arthropod and Microbial Communities within Tree Tissues

Phloem tissues of pine are habitats for many thousands of organisms. Arthropods and microbes use phloem and cambium tissues to seek mates, lay eggs, rear young, feed, or hide from natural enemies or harsh environmental conditions outside of the tree. Organisms that persist within the phloem habitat are difficult to observe given their location under bark. We provide a technique to preserve intact phloem and prepare it for experimentation with invertebrates and microorganisms. The apparatus is called a &#8216;phloem sandwich&#8217; and allows for the introduction and observation of arthropods, microbes, and other organisms. This technique has resulted in a better understanding of the feeding behaviors, life-history traits, reproduction, development, and interactions of organisms within tree phloem. The strengths of this technique include the use of inexpensive materials, variability in sandwich size, flexibility to re-open the sandwich or introduce multiple organisms through drilled holes, and the preservation and maintenance of phloem integrity. The phloem sandwich is an excellent educational tool for scientific discovery in both K-12 science courses and university research laboratories.

We provide a technique to preserve intact tree phloem and prepare it for observation. We create an apparatus called a phloem sandwich that allows for the introduction and observation of arthropods, microbes, and other organisms that inhabit phloem tissues.

טכניקת לימוד של פרוקים-רגליים וקהילות חיידקים בתוך רקמות עץ

Phloem tissues of pine are habitats for many thousands of organisms.  Arthropods and microbes use phloem and cambium tissues to seek mates, lay eggs, rear ...

Environment

Assaying Predatory Feeding Behaviors in Pristionchus and Other Nematodes

This protocol provides multiple methods for the analysis and quantification of predatory feeding behaviors in nematodes. Many nematode species including Pristionchus pacificus display complex behaviors, the most striking of which is the predation of other nematode larvae. However, as these behaviors are absent in the model organism Caenorhabditis elegans, they have thus far only recently been described in detail along with the development of reliable behavioral assays 1. These predatory behaviors are dependent upon phenotypically plastic but fixed mouth morphs making the correct identification and categorization of these animals essential. In P. pacificus there are two mouth types, the stenostomatous and eurystomatous morphs 2, with only the wide mouthed eurystomatous containing an extra tooth and being capable of killing other nematode larvae. Through the isolation of an abundance of size matched prey larvae and subsequent exposure to predatory nematodes, assays including both "corpse assays" and "bite assays" on correctly identified mouth morph nematodes are possible. These assays provide a means to rapidly quantify predation success rates and provide a detailed behavioral analysis of individual nematodes engaged in predatory feeding activities. In addition, with the use of a high-speed camera, visualization of changes in pharyngeal activity including tooth and pumping dynamics are also possible.

Assaying Predatory Feeding Behaviors in Pristionchus and Other Nematodes

Behavioral assays provide powerful tools for understanding neuronal function. Here we present several protocols for quantifying predatory feeding behavior found in the model nematode Pristionchus pacificus and its relatives. Additionally, we provide methods for analyzing predatory feeding adaptations including mouth structures and teeth.

Assaying הרגלי התזונה הם טורפים ב<em&gt; Pristionchus</em&gt; נמטודות אחרים

This protocol provides multiple methods for the analysis and quantification of predatory feeding behaviors in nematodes. Many nematode species including ...

Induction and Evaluation of Inbreeding Crosses Using the Ant, Vollenhovia Emeryi

The genetic and molecular components of the sex-determination cascade have been extensively studied in the honeybee, Apis mellifera, a hymenopteran model organism. However, little is known about the sex-determination mechanisms found in other non-model hymenopteran taxa, such as ants. Because of the complex nature of the life cycles that have evolved in hymenopteran species, it is difficult to maintain and conduct experimental crosses between these organisms in the laboratory. Here, we describe the methods for conducting inbreeding crosses and for evaluating the success of those crosses in ant Vollenhovia emeryi. Inducing inbreeding in the laboratory using V. emeryi, is relatively simple because of the unique biology of the species. Specifically, this species produces androgenetic males, and female reproductives exhibit wing polymorphism, which simplifies identification of the phenotypes in genetic crosses. In addition, evaluating the success of inbreeding is straightforward as males can be produced continuously by inbreeding crosses, while normal males only appear during a well-defined reproductive season in the field. Our protocol allow for using V. emeryi as a model to investigate the genetic and molecular basis of the sex determination system in ant species.

Induction and Evaluation of Inbreeding Crosses Using the Ant, Vollenhovia Emeryi

In this protocol, methods for conducting inbreeding crosses, and for evaluating the success of those crosses, are described for the ant Vollenhovia emeryi. These protocols are important for experiments aimed at understanding the genetic basis of sex determination systems in Hymenoptera.

אינדוקציה והערכה של נישואי קרובים צלבים באמצעות הנמלים, Vollenhovia Emeryi

The genetic and molecular components of the sex-determination cascade have been extensively studied in the honeybee, Apis mellifera, a hymenopteran model ...

Genetics

A Method to Test the Effect of Environmental Cues on Mating Behavior in Drosophila melanogaster

An individual's sexual drive is influenced by genotype, experience and environmental conditions. How these factors interact to modulate sexual behaviors remains poorly understood. In Drosophila melanogaster, environmental cues, such as food availability, affect mating activity offering a tractable system to investigate the mechanisms modulating sexual behavior. In D. melanogaster, environmental cues are often sensed via the chemosensory gustatory and olfactory systems. Here, we present a method to test the effect of environmental chemical cues on mating behavior. The assay consists of a small mating arena containing food medium and a mating couple. The mating frequency for each couple is continuously monitored for 24 h. Here we present the applicability of this assay to test environmental compounds from an external source through a pressurized air system as well as manipulation of the environmental components directly in the mating arena. The use of a pressurized air system is especially useful to test the effect of very volatile compounds, while manipulating components directly in the mating arena can be of value to ascertain a compound's presence. This assay can be adapted to answer questions about the influence of genetic and environmental cues on mating behavior and fecundity as well as other male and female reproductive behaviors.

A Method to Test the Effect of Environmental Cues on Mating Behavior in Drosophila melanogaster

We demonstrate an assay to analyze the environmental and genetic cues that influence mating behavior in the fruit fly Drosophila melanogaster.

שיטה לבחינת ההשפעה של רמזים סביבתיים על התנהגות ההזדווגות ב<em&gt; תסיסנית מלנוגאסטר</em

An individual's sexual drive is influenced by genotype, experience and environmental conditions. How these factors interact to modulate sexual behaviors ...

Behavior

Individual Culturing of Tigriopus Copepods and Quantitative Analysis of Their Mate-guarding Behavior

Copepods of the genus Tigriopus, which are common zooplankton in rocky tide pools, show precopulatory mate-guarding behavior where a male clasps a potential mate to form a pair. While this phenomenon has attracted interest of researchers, methods for its analysis have not been well described. Here we describe procedures for: 1) individual culturing and staging of Tigriopus juveniles and adults, and 2) video-based analysis of their mate-guarding behavior. The culturing method enables experimental control of paring experience of animals as well as the ability to track their development before behavioral tests. The analysis method allows quantitative evaluation of several aspects of the mate-guarding behavior, including capturing attempts by males and swimming trajectory of mate-guarding pairs. Although these methods were originally established for ethological studies on Tigriopus, with proper modifications they can also be applied to studies of other zooplankton in different research fields, such as physiology, toxicology, and ecological genetics.

Individual Culturing of Tigriopus Copepods and Quantitative Analysis of Their Mate-guarding Behavior

Mate-guarding behavior plays an important role in reproduction of intertidal copepods of the genus Tigriopus. However, methods for studying this behavior have not been well described. Here we describe methods for: 1) individual culture of virgin Tigriopus animals, and 2) quantitative analysis of their mate-guarding behavior.

Culturing בודדים של Tigriopus משטרגליים וניתוח כמותי של התנהגותם שומרים על חבר

Copepods of the genus Tigriopus, which are common zooplankton in rocky tide pools, show precopulatory mate-guarding behavior where a male clasps a ...

Rapid Isolation of Wild Nematodes by Baermann Funnel

Beyond being robust experimental model organisms, Caenorhabditis elegans and its relatives are also real animals that live in nature. Studies of wild nematodes in their natural environments are valuable for understanding many aspects of biology, including the selective regimes in which distinctive genomic and phenotypic characters evolve, the genetic basis for complex trait variation, and the natural genetic diversity fundamental to all animal populations. This manuscript describes a simple and efficient method for extracting nematodes from their natural substrates, including rotting fruits, flowers, fungi, leaf litter, and soil. The Baermann funnel method, a classical nematology technique, selectively isolates active nematodes from their substrates. Because it recovers nearly all active worms from the sample, the Baermann funnel technique allows for the recovery of rare and slow-growing genotypes that co-occur with abundant and fast-growing genotypes, which might be missed in extraction methods that involve multiple generations of reproduction. The technique is also well suited to addressing metagenetic, population-genetic, and ecological questions. It captures the entire population in a sample simultaneously, allowing an unbiased view of the natural distribution of ages, sexes, and genotypes. The protocol allows for deployment at scale in the field, rapidly converting substrates into worm plates, and the authors have validated it through fieldwork on multiple continents.

This protocol outlines a method for efficiently extracting live nematodes from natural substrates in the field.

בידוד מהיר של נמטודות פראיות על ידי משפך ברמן

Beyond being robust experimental model organisms, Caenorhabditis elegans and its relatives are also real animals that live in nature. Studies of wild ...

<meta charset="utf8"></head><body>מיצוי וכימות של תגובות פרומון מין נדיפות ב- C. elegans

Volatile Sex Pheromone Extraction and Chemoattraction Assay in Caenorhabditis elegans

Chemical communication is vital in organismal health, reproduction, and overall well-being. Understanding the molecular pathways, neural processes, and computations governing these signals remains an active area of research. The nematode Caenorhabditis elegans provides a powerful model for studying these processes as it produces a volatile sex pheromone. This pheromone is synthesized by virgin females or sperm-depleted hermaphrodites and serves as an attractant for males.
This protocol describes a detailed method for isolating the volatile sex pheromone from several C. elegans strains (WT strain N2, daf-22, and fog-2) and C. remanei. We also provide a protocol for quantifying the male chemotaxis response to the volatile sex pheromone. Our analysis utilizes measurements such as chemotaxis index (C.I.), arrival time (A.T.), and a trajectory plot to compare male responses under various conditions accurately. This method allows for robust comparisons between males of different genetic backgrounds or developmental stages. Furthermore, the experimental setup outlined here is adaptable to investigating other chemoattraction chemicals.

<meta charset="utf8"></head><body>מחבר זרקור: בחינת השפעת פרומון המין הנדיף על התנהגות גברי C. elegans

This protocol establishes methods for extracting and quantifying responses to the volatile sex pheromone in C. elegans, providing tools to study chemical communication and navigation trajectory.

מיצוי פרומון מין נדיף ובדיקת כימותרפיה ב- Caenorhabditis elegans

Chemical communication is vital in organismal health, reproduction, and overall well-being. Understanding the molecular pathways, neural processes, and ...

Measuring and Altering Mating Drive in Male Drosophila melanogaster

Despite decades of investigation, the neuronal and molecular bases of motivational states remain mysterious. We have recently developed a novel, reductionist, and scalable system for in-depth investigation of motivation using the mating drive of male Drosophila&#160;melanogaster (Drosophila), the methods for which we detail here. The behavioral paradigm centers on the finding that male mating drive decreases alongside fertility over the course of repeated copulations and recovers over ~3 d. In this system, the powerful neurogenetic tools available in the fly converge with the genetic accessibility and putative wiring diagram available for sexual behavior. This convergence allows rapid isolation and interrogation of small neuronal populations with specific motivational functions. Here we detail the design and execution of the satiety assay that is used to measure and alter courtship motivation in the male fly. Using this assay, we also demonstrate that low male mating drive can be overcome by stimulating dopaminergic neurons. The satiety assay is simple, affordable, and robust to influences of genetic background. We expect the satiety assay to generate many new insights into the neurobiology of motivational states.

Measuring and Altering Mating Drive in Male Drosophila melanogaster

This article describes a behavioral assay that uses male mating drive in Drosophila melanogaster to study motivation. Using this method, researchers can utilize advanced fly neurogenetic techniques to uncover the genetic, molecular, and cellular mechanisms that underlie this motivation.

תצפית כימות התנהגות החיזור של נמטודות פיינווד,

Summary

Explore More Videos

טכניקת לימוד של פרוקים-רגליים וקהילות חיידקים בתוך רקמות עץ

Assaying הרגלי התזונה הם טורפים ב

אינדוקציה והערכה של נישואי קרובים צלבים באמצעות הנמלים, Vollenhovia Emeryi

שיטה לבחינת ההשפעה של רמזים סביבתיים על התנהגות ההזדווגות ב

Culturing בודדים של Tigriopus משטרגליים וניתוח כמותי של התנהגותם שומרים על חבר

בידוד מהיר של נמטודות פראיות על ידי משפך ברמן

מיצוי פרומון מין נדיף ובדיקת כימותרפיה ב- Caenorhabditis elegans

מיצוי פרומון מין נדיף ובדיקת כימותרפיה ב- Caenorhabditis elegans

מיצוי פרומון מין נדיף ובדיקת כימותרפיה ב- Caenorhabditis elegans

מדידת כונן מזווג סירוס ועיקור במאלה