המחברים מבקשים להודות רנה Bizios עבור ההערות המועילות שלה על כתב היד.

משפט ואתיקה: העכברים השתמשו במחקר הנוכחי טופלו בהתאם להנחיות שפרסם הוועדה האירופית &quot;לטיפול ושימוש בחיות מעבדה&quot; (הדירקטיבה 2010/63 / האיחוד האירופי ואת האירופי אמנת ETS 123). פרוטוקול הניסוי אושר על ידי ועדת האתיקה של הפקולטה לרפואה Lariboisière סן לואי (CEEA LV / 2010/01/04). 1. בעלי חיים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> משתמשים בעכברים athymic (10 שבועות). השתמש במספר מינימלי של 6 עכברים עם פגם נשאר ריק כקבוצת ביקורת שלילית. </li></ol> 2. הכנת פיגומים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Syngenic הכנת שתל <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש עצם isograft למלא את הפגם לספק לקבוצת ביקורת עם מספר מינימאלי של 6 בעלי חיים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השג isografts עצם על ידי קצירת נכרת עצם ירך מהעכבר שייך או &quot;ליקויים נשאר ריק או&quot; ליקויים מלאי קבוצות פיגום אלמוגים &quot;(ההוא ימנע את השימוש בבעלי חיים נוספים כדי לאסוף isograft עצם) 11. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שטוף את עצם כריתה עם בופר פוספט (PBS) ולשמור אותו סטרילי באמצעות תחבושות לחות. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אלמוג פיגום כנה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש פיגום עשויים אלמוגים טבעיים: Acropora sp. קוביות שלד אלמוגים, 3 x 3 x 3 מ&quot;מ כממלא עצם פוטנציאלי עם מינימום של 6 בעלי חיים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סלול ביד כל קוביה אלמוגים לצורת גליל (3.5 גובה; 2 מ&quot;מ קוטר). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעקר כל פיגום על ידי מעוקר (121 מעלות צלזיוס במשך 20 דקות), לשטוף אותו עם PBS סטרילי, וטבל אותו בינוני תרבות שלמה (α-MEM) למשך 24 שעות לפני ההשתלה בעכברים. </li></ol></li></ol> 3. נהלים הרדמה שיכוך כאבים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לספק שיכוך כאבים מנע, 15 דקות לפני ההרדמה, על ידי הזרקה תת עורית של עצירות (0.1 מ&quot;ג / משקל גוף חית קילו). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החל משחה בתוך החיהעיניים כדי למנוע יובש כל 30 דקות תוך החיות נמצאות תחת הרדמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את העכברים על כרית חימום כדי למנוע היפותרמיה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הרדמה שיכוך כאבים במהלך ההליך הכירורגי <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להזריק intraperitoneally xylazine המכיל פתרון (8 מ&quot;ג / ק&quot;ג) ו קטמין (100 מ&quot;ג / ק&quot;ג). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לספק חמצן באמצעות זרימה-ידי (50 mL / min). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אשר עומק נאות של הרדמה על ידי הנוכחות של הרפיית שרירים טובה וחוסר תגובת חיה לגירוי מזיק (למשל., קמצוץ בוהן משרד). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להזריק מתחת לעור מנה בודדת של Enrofloxacin (0.05 מ&quot;ג / ק&quot;ג) כטיפול מונע חיידקים. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שיכוך כאבים לאחר ניתוח <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לספק שיכוך כאבים לאחר הניתוח על ידי הזרקה תת עורית של עצירות (0.1 מ&quot;ג / ק&quot;ג) כל 12 שעות במשך 3 ימים רצופים. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הרדמה במהלך הליכי אבחון הדמיה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את העכברים בתוך anesthetizing-box, ולאחר מכן להשרות ולשמור הרדמה באמצעות כ 4% ו -2% isoflurane חמצן, בהתאמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אשר עומק נאות של הרדמה על ידי הרפיית שרירי חיה טוב וחוסר התנועה. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תנאי פיצוי <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שמור על עכברים על כרית חימום עד להחלמה מלאה </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אל תשאירו חיה ללא השגחה עד שהוא שב להכרתו מספיק כדי לשמור שכיבה sternal לאחר הניתוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אל תחזרו בעל חיים אשר עבר ניתוח לחברה של בעלי חיים אחרים עד התאושש לחלוטין. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תנאי שלאחר הניתוח <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תארח את העכברים בנפרד במהלך 3 הימים הראשונים מארח את העכברים על ידי 4 בכלובים אחרי יום 3. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ספק כרצונך מזון מים ומותאם. אפשר העכברים-דוב משקל, ללא כל הגבלה פעילות לאורך כל התקופה שלאחר הניתוח. </li></ol></li></ol> 4. הליך כירורגי:עצם הירך המגזרי פגם דגם 11,12 <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר הרדמה, למקם כל עכבר שכיבה גחון עם הגפיים אחוריים שמאל הרחבה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שפשף את האיבר לניתוח aseptic באמצעות 10% יוד povidone למשך 5 דקות ולאחר מכן למקם וילון סטרילי תחת האיבר כדי ליצור משטח סטרילי (וילון שקוף סטרילי משמש כדי להיות מסוגל לעקוב אחר תנועת נשימה במהלך ההליך). הטיפול נלקח לשמור על סטריליות של שדה כירורגי במהלך ההליך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ערוך 15 - חתך בעור אורך 17 מ&quot;מ על היבט anterolateral של עצם הירך, המשתרע מפרק הירך למפרק להחניק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחתוך את fascia לאטה, לפצל את vastus lateralis השריר ואת שריר הירך הדו-ראשי לחשוף לכל אורכו של diaphysis הירך. זהירות יש לנקוט כדי לשמר את גיד הנשה caudally ואת הקפסולה במפרק distally (איור 1). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי לשפר אקספו diaphysis הירךבטוח, transect השריר שרירי gluteal femoris מן trochanter 3 rd. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בצע לנתיחה עגולה של עצם הירך ב באמצע diaphysis. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החל צלחת מיקרו-נעילה טיטניום 6 גומות (10 מ&quot;מ אורך; 1.5 מ&quot;מ רוחב, משקל: 30 מ&quot;ג) בצד הירך הקדמי. הערה: החורים של הצלחת, אשר שקוע conically עם חלק גלילי, להכיל טיטניום עצמית קשה ברגי נעילה (2 מ&quot;מ אורך, 0.47 מ&quot;מ קוטר חיצוני, משקל: 5 מ&quot;ג, עם משטח תחתי של הברגים בראש הליכים כדי לאפשר נעילה בתוך חור הצלחת) המחוברים גבעול, אשר מסובב את כשהמכשיר נעול. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מקדחה החור הפרוקסימלי ביותר של הצלחת באמצעות קצת 0.3 מ&quot;מ מקדחה ואו כוח המנוע ייעודי או כוח המנוע הלא ייעודי המופעל על 2,500 סל&quot;ד בכ 500 mW 12). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנס את הבורג הראשון בעזרת מברג ייעודי ואז לנעול אותו (איור 2). הערה: מאז יישור של tהוא הצלחת נקבעה על ידי יישום של בורג הראשון זה, חשוב למקם את ההקבלה הצליחה אל הירך כאשר החדרת הבורג. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מקדחת החור הדיסטלי ביותר של הצלחת באופן דומה, הכנס ולנעול את הבורג (איור 3). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנס, אבל לעשות שום מנעול, את שני ברגים חיצוניים אחרים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניח את החוט של 0.22 המ&quot;מ ג&#39;יגלי רואה מקרוב סביב העצם בכיוון מדים-צדדי ולאחר מכן להכניס אותו בתוך החריצים של לנענע (איור 4). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנס את לנענע הייעודי על הגזע של שני הברגים האחרונים ולהחיל אותו מעל הצלחת (איור 5). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בצע ostectomy הירך באמצע diaphyseal 3.5 מ&quot;מ ארוך באמצעות ג&#39;יגלי ראה תחת השקיה (באמצעות סליין איזוטוני סטרילי) כדי למנוע נמק תרמית. האם עוזרו של המנתח לקחת את לנענע. יש המנתח להחיל מתח יציב מתמיד. היזהר שלא לסבך את החוט המסור להשתמש בשני השלישים באמצע החוט. הימנע לשעברתנועת סס על מנת לקבל חתך עצם ישר (איור 6). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר ostectomy, להסיר את ג&#39;יגלי רואה. כדי למנוע נזק של רקמות רכות, לחתוך את קרוב חוט המסור העצם בצד אחד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את לנענע וכלא שני הברגים האחרונים (איור 7). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השאר את פגם סגמנטלי ריק או בניתוח למלא אותו על ידי הצבת חומרים להיבדק בתוך הפגם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בשפע לשטוף את שדה הניתוח עם סליין איזוטוני סטרילי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניח את שריר lateralis vastus ברפיון מעל הצלחת. סגור את fascia ומטוסים תת עורית באמצעות דפוס תפר מתמשך פשוט 5.0 glycomer 631 תפר; לסגור את העור עם דפוס תפר קטע פשוט באמצעות 4.0 glycomer 631 תפר. לחלופין, אפשר גם לסגור את העור באמצעות דבק עור. </li></ol> 5. בהערכות Vivo של התחדשות העצם <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עם עכברים בהרדמה, לבצע רדיוגרפיערכות באופן אורך הוא באמצעות צילומי רנטגן קונבנציונלי (26 ק, 10 שניות; הגדלת 2X; 20 שורות / מ&quot;מ ברזולוציה מרחבית) וטומוגרפיה מיקרו שחושב ברזולוציה גבוהה (μCT). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לקבלת ניתוח μCT, לרכוש תמונות ברזולוציה של 36 מיקרומטר (50 kV ו 478 mA, ב 40 זמן חשיפה msec, באמצעות מסנן אלומיניום 0.5 מ&quot;מ, צעד סיבוב של 0.7 º, וסיבוב טומוגרפית של 180 º). לנתח את התמונות באמצעות תוכנת התושב. </li></ol> 6. הערכות גופיים של התחדשות העצם <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עשרה שבועות לאחר הניתוח, להשרות הרדמה באמצעות isoflurane חמצן, ולאחר מכן להקריב את העכברים בזריקה intraperitoneal של מנת יתר של ברביטורטים (1 מ&quot;ל של pentobarbital). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ובלו עצמות הירך, להסיר שכיסה רקמת שריר, ולתקן את דגימות עצם paraformaldehyde 4% (pH 7.4) במשך ארבעה ימים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את הצלחת וברגים מכל דגימת עצם ניכרת לאחר paraformaldehyde fixation. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Ex Vivo מיקרון ניתוח CT <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניח כל עצם ניכר ומותק צינורות פוליאתילן מלא 75% אלכוהול ולנתח אותו באמצעות לשעבר vivo μCT. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לרכוש תמונות ב 80 kV ו 100 מיקרו-אמפר (זמן החשיפה של 1,000 מילי-שניות, אלומיניום 0.5 מסנן, וגודל פיקסל מצלמה 4 מיקרומטר (2,400 x 4,000 עם גודל voxel של 7 מיקרומטר), ארבע מסגרות הממוצע עבור כל תוספת סיבוב של 0.9 º. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשחזר תמונות 3-ממדי (גודל voxel ממוצע של 13 מיקרומטר) באמצעות מסוננים-המינג גב הקרנה עם תוכנת התושב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ניתוח כמותי של היווצרות עצם, להשתמש בתוכנת התושב להשיג את נפח רקמת mineralized (סף אפור נמוך של 45 המדדים בגווני אפור סף אפור העליון של 240 מדדים בגוונים אפורים) באזור נחוש ועקבי של הריבית המתאימה הפגם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בצע ניתוחים באותו אופן עבור כל עכבר עם אותו regיון של עניין. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש בבדיקת הניתוח חד סטרית (רווח בר סמך - ב 95% והרמה המשמעותית על p &lt;0.05) כדי להשוות את שיעור איחוד עצם ואת נפח רקמת mineralized באזור עניינים בין קבוצות. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ניתוח היסטולוגית <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שבץ כל נכרת וקבוע עצם הירך שרף methacrylate מתיל לעבד אותו עבור היסטולוגיה undecalcified. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חותך כל דגימת עצם לאורכו סעיף עבה (200 מיקרומטר) בעזרת מסור יהלום מקורר מים עגול. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> טוחן כל מקטע עצם דגימה עד עובי של 100 מיקרומטר, ללטש אותו, ואת להכתים אותו באמצעות כתמי picrofuchsin הכחול Stevenel וואן Gieson. הערה: לאחר מכתים, תאים יופיעו בכחול, עצם בוורוד, ועל אלמוגים חומים תחת מיקרוסקופ אור. </li></ol></li></ol>

<ol>
	<li>Auer, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Refining+animal+models+in+fracture+research:+seeking+consensus+in+optimising+both+animal+welfare+and+scientific+validity+for+appropriate+biomedical+use.">Refining animal models in fracture research: seeking consensus in optimising both animal welfare and scientific validity for appropriate biomedical use.</a> BMC Musculoskelet Disord. 8 (72), (2007).</li><li>Histing, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Small+animal+bone+healing+models:+standards,+tips,+and+pitfalls+results+of+a+consensus+meeting.">Small animal bone healing models: standards, tips, and pitfalls results of a consensus meeting.</a> Bone. 49 (4), 591-599 (2011).</li><li>Horner, E. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long+bone+defect+models+for+tissue+engineering+applications:+criteria+for+choice.">Long bone defect models for tissue engineering applications: criteria for choice.</a> Tissue Eng. Part B Rev. 16 (2), 263-271 (2010).</li><li>Srouji, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+model+for+tissue+engineering+applications:+femoral+critical+size+defect+in+immunodeficient+mice.">A model for tissue engineering applications: femoral critical size defect in immunodeficient mice.</a> Tissue Eng. Part C Methods. 17 (5), 597-606 (2011).</li><li>Thompson, Z., Miclau, T., Hu, D., Helms, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+model+for+intramembranous+ossification+during+fracture+healing.">A model for intramembranous ossification during fracture healing.</a> J Orthop Res. 20 (5), 1091-1098 (2002).</li><li>Harris, J. S., Bemenderfer, T. B., Wessel, A. R., Kacena, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+review+of+mouse+critical+size+defect+models+in+weight+bearing+bones.">A review of mouse critical size defect models in weight bearing bones.</a> Bone. 55 (1), 241-247 (2013).</li><li>Garcia, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+LockingMouseNail--a+new+implant+for+standardized+stable+osteosynthesis+in+mice.">The LockingMouseNail--a new implant for standardized stable osteosynthesis in mice.</a> J. Surg. Res. 169 (2), 220-226 (2011).</li><li>Garcia, P., Histing, T., Holstein, J. H., Pohlemann, T., Menger, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Femoral+non-union+models+in+the+mouse.">Femoral non-union models in the mouse.</a> Injury. 41 (10), 1093-1094 (2010).</li><li>Garcia, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+reliable+non-union+model+in+mice.">Development of a reliable non-union model in mice.</a> J. Surg. Res. 147 (1), 84-91 (2008).</li><li>Viateau, V., Logeart-Avramoglou, D., Guillemin, G., Petite, H., Conn, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+Models+for+bone+tisue+enginering+purposes.">Animal Models for bone tisue enginering purposes.</a> Sourcebook of models for biomedical research. , 725-738 (2008).</li><li>Manassero, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+murine+femoral+segmental+critical-sized+defect+model+stabilized+by+plate+osteosynthesis+for+bone+tissue+engineering+purposes.">A novel murine femoral segmental critical-sized defect model stabilized by plate osteosynthesis for bone tissue engineering purposes.</a> Tissue Eng. Part C Methods. 19 (4), 271-280 (2013).</li><li>Matthys, R., Perren, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Internal+fixator+for+use+in+the+mouse.">Internal fixator for use in the mouse.</a> Injury. 40 Suppl 4, S103-S109 (2009).</li><li>Becquart, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ischemia+is+the+prime+but+not+the+only+cause+of+human+multipotent+stromal+cell+death+in+tissue-engineered+constructs+in+vivo.">Ischemia is the prime but not the only cause of human multipotent stromal cell death in tissue-engineered constructs in vivo.</a> Tissue Eng. Part A. 18 (19-20), 2084-2094 (2012).</li><li>Deschepper, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proangiogenic+and+prosurvival+functions+of+glucose+in+human+mesenchymal+stem+cells+upon+transplantation.">Proangiogenic and prosurvival functions of glucose in human mesenchymal stem cells upon transplantation.</a> Stem Cells. 31 (3), 526-535 (2013).</li><li>Oetgen, M. E., Merrell, G. A., Troiano, N. W., Horowitz, M. C., Kacena, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+femoral+non-union+model+in+the+mouse.">Development of a femoral non-union model in the mouse.</a> Injury. 39 (10), 1119-1126 (2008).</li><li>Liu, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+murine+femoral+segmental+defect+model+for+bone+tissue+engineering+using+a+novel+rigid+internal+fixation+system.">A murine femoral segmental defect model for bone tissue engineering using a novel rigid internal fixation system.</a> J Surg Res. 183 (2), 493-502 (2013).</li><li>Zwingenberger, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+a+femoral+critical-size+bone+defect+model+in+immunodeficient+mice.">Establishment of a femoral critical-size bone defect model in immunodeficient mice.</a> J Surg Res. 181 (1), e7-e14 (2013).</li><li>Cheung, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+externally+fixed+femoral+fracture+model+for+mice.">An externally fixed femoral fracture model for mice.</a> J. Orthop Res. 21 (4), 685-690 (2003).</li><li>Claes, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hyperhomocysteinemia+is+associated+with+impaired+fracture+healing+in+mice.">Hyperhomocysteinemia is associated with impaired fracture healing in mice.</a> Calcif. Tissue Int. 85 (1), 17-21 (2009).</li><li>Drosse, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Validation+of+a+femoral+critical+size+defect+model+for+orthotopic+evaluation+of+bone+healing:+a+biomechanical,+veterinary+and+trauma+surgical+perspective.">Validation of a femoral critical size defect model for orthotopic evaluation of bone healing: a biomechanical, veterinary and trauma surgical perspective.</a> Tissue Eng. Part C Methods. 14 (1), 79-88 (2008).</li><li>Holstein, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advances+in+the+establishment+of+defined+mouse+models+for+the+study+of+fracture+healing+and+bone+regeneration.">Advances in the establishment of defined mouse models for the study of fracture healing and bone regeneration.</a> J. Orthop. Trauma. 23 (5 Suppl), S31-S38 (2009).</li><li>Johnson, K. D., August, A., Sciadini, M. F., Smith, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+ground+cortical+autograft+as+a+bone+graft+material+in+a+new+canine+bilateral+segmental+long+bone+defect+model.">Evaluation of ground cortical autograft as a bone graft material in a new canine bilateral segmental long bone defect model.</a> J. Orthop. Trauma. 10 (1), 28-36 (1996).</li><li>Meinig, R. P., Buesing, C. M., Helm, J., Gogolewski, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regeneration+of+diaphyseal+bone+defects+using+resorbable+poly(L/DL-lactide)+and+poly(D-lactide)+membranes+in+the+Yucatan+pig+model.">Regeneration of diaphyseal bone defects using resorbable poly(L/DL-lactide) and poly(D-lactide) membranes in the Yucatan pig model.</a> J. Orthop. Trauma. 11 (8), 551-558 (1997).</li><li>Wu, J. J., Shyr, H. S., Chao, E. Y., Kelly, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+osteotomy+healing+under+external+fixation+devices+with+different+stiffness+characteristics.">Comparison of osteotomy healing under external fixation devices with different stiffness characteristics.</a> J. Bone Joint Surg. Am. 66 (8), 1258-1264 (1984).</li><li>Xing, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+a+bilateral+femoral+large+segmental+bone+defect+mouse+model+potentially+applicable+to+basic+research+in+bone+tissue+engineering.">Establishment of a bilateral femoral large segmental bone defect mouse model potentially applicable to basic research in bone tissue engineering.</a> J. Surg. Res. 192 (2), 454-463 (2014).</li><li>Manassero, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+Survival+and+Osteogenic+Ability+of+Human+Mesenchymal+Stem+Cells+in+Orthotopic+and+Ectopic+Sites+in+Mice.">Comparison of Survival and Osteogenic Ability of Human Mesenchymal Stem Cells in Orthotopic and Ectopic Sites in Mice.</a> Tissue Eng. Part A. 22 (5-6), 534-544 (2016).</li><li>Bos, R. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Degradation+of+and+tissue+reaction+to+biodegradable+poly(L-lactide)+for+use+as+internal+fixation+of+fractures:+a+study+in+rats.">Degradation of and tissue reaction to biodegradable poly(L-lactide) for use as internal fixation of fractures: a study in rats.</a> Biomaterials. 12 (1), 32-36 (1991).</li><li>Oest, M. E., Dupont, K. M., Kong, H. J., Mooney, D. J., Guldberg, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+assessment+of+scaffold+and+growth+factor-mediated+repair+of+critically+sized+bone+defects.">Quantitative assessment of scaffold and growth factor-mediated repair of critically sized bone defects.</a> J.Orthop. Res. 25 (7), 941-950 (2007).</li><li>Pihlajamaki, H., Bostman, O., Tynninen, O., Laitinen, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+tissue+response+to+bioabsorbable+poly-L-lactide+and+metallic+screws:+an+experimental+study.">Long-term tissue response to bioabsorbable poly-L-lactide and metallic screws: an experimental study.</a> Bone. 39 (4), 932-937 (2006).</li><li>Rai, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combination+of+platelet-rich+plasma+with+polycaprolactone-tricalcium+phosphate+scaffolds+for+segmental+bone+defect+repair.">Combination of platelet-rich plasma with polycaprolactone-tricalcium phosphate scaffolds for segmental bone defect repair.</a> J. Biomed. Mater Res. A. 81 (4), 888-899 (2007).</li><li>Komlev, V. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kinetics+of+in+vivo+bone+deposition+by+bone+marrow+stromal+cells+into+porous+calcium+phosphate+scaffolds:+an+X-ray+computed+microtomography+study.">Kinetics of in vivo bone deposition by bone marrow stromal cells into porous calcium phosphate scaffolds: an X-ray computed microtomography study.</a> Tissue Eng. 12 (12), 3449-3458 (2006).</li></ol>

החוקרים מצהירים כי אין להם אינטרסים כלכליים מתחרים.

השתלת חוץ רחמים של חומרי אורתופדיות קשורים מכשיר בעכברים מבוצעת בדרך כלל כדי להעריך את העצם להרכיב יכולות של פיגומים שונים 13,14. הבדלים חשובים אולם קיימים בין מודלים מחוץ לרחם ו orthotopic, כולל גורמי איתות osteogenic יליד ואינטראקציות paracrine עם תאי יוצרי עצם מארח. המחקר הנוכחי קובע מגזרי גדולה בעכברים לשחזור, פגם ירך קריטי בגודל (3.5 מ&quot;מ, כ 20-25% של אורך עצם הירך). בהתחשב בגודל של פגם כזה ואת היציבות שמספקת osteosynthesis הצלחת כתוצאה, המודל הזה מחק את עצם אטרופית הקליני-נתקל שאינו Union. פרק הזמן שלאחר הניתוח שנבחר במחקר הנוכחי, עולה בקנה אחד עם עכברי דגמים שאינם איגוד שתוארו לעיל, מראה חוסר של ריפוי נאות לאחר 8 עד 12 שבועות 4,9,15,16. והחשוב מכל, reproduosteosynthesis cible והיציב, כמו גם היציבות של תחליפי העצם המושתלים התקבל ללא תחלואה משמעותית ותמותה 1,2 עם השימוש בשני צלחת הנעילה לנענע לבצע את ostectomy. תוצאה זו מנוגדת גם התוצאות המדווחות כאשר בין כאדם, קיבוע חיצוני או מסמר intramedullary שמש 4,5,17-24. עבור תופסנים החיצוניים חסרונות פוטנציאליים כוללים: השתנות קשיחות, זיהומים של דרכי סיכות, התרופפות של הסיכות, פוטנציאל פציעות עקב הסיכות ומשקל החומרים (4 עד 20% ממשקל גוף העכבר). עבור מסמר intramedullary חסרונות פוטנציאליים כוללים: מילוי של חלל מדולרי עם הציפורן ונזק iatrogenic של משטחים במפרק. סגמנטלי בעכברים אחרים, פגמים הירך בגודל קריטי על מנת לייצב את osteosynthesis צלחת תוארו עם פגם עצם נוצר על ידי לצלצול ולא הנעים בין 1.5 ל אורך 2 מ&quot;מ 16,25. בשנת הה &#39;מציג מודל, השימוש של ג&#39;יג חוט מסור מותר ostectomy 3.5 מ&quot;מ-ארוך ומדויק ללא טראומה לשרירים משמעותיים. עם זאת, כדי להצליח ביצוע ההליך אחד צריך לקחת על עצמו בחשבון מספר נקודות מפתח: אל תשתמשו עכברים קטנים (עכברי עירום עם או משקל נמוך מ -25 גרם או גיל מתחת לגיל 8 שבועות) אחרת הצלחת צריכה להיות ארוכה מדי. כאשר מתקרבים לעצם הירך, דואגים לשמר הן את גיד הנשה caudally ואת הקפסולה במפרק distally. החל את הצלחת בצד הקדמי של עצם הירך ומאז יישור של הצלחת נקבע על ידי יישום של בורג הראשון זה, לדאוג למצב ההקבלה הצליחה אל הירך בעת הכנסת בורג ראשון זה. לפני ביצוע ostectomy, לטפל לבצע דיסקציה עגול של עצם הירך ב באמצע diaphysis כדי למנוע טראומה שרירית. בעת ביצוע ostectomy, עוזרו של המנתח חייב להחזיק את המדריך בחוזקה ואת surהגאון חייב להיות זהיר (i) לא להסתבך החוט המסור, (ii) להשתמש בשני השלישים באמצע החוט תוך החלת מתח יציב מתמיד, וכן (iii) כדי למנוע תנועה עודפת להשיג חתך עצם ישר. ריפוי עצם אפשרי במודל הנוכחי ספק שתל עצם משמש. יתר על כן, מודל זה מאפשר מחקרים נוספים של המנגנונים המעורבים אסטרטגיות החלפת עצם וכשאחד שתלי אדם ממוצא או תאים משמשים פגם היטב סטנדרטי, גדול, ענפי, עצם. בנוסף, בתור המגמות הנוכחיות הדורשים עידון הקטנת השימוש בבעלי חיים למחקר הקשורות אורתופדיה, מודל זה יכול לשמש בשילוב עם טכניקות ההדמיה vivo כגון פליטת אור. כזה טכניקות פולשני לאפשר ניטור הוא הישרדות תא מושתלת וריפוי רקמות ללא צורך להקריב בעלי חי 26. המגבלות העיקריות של המודל הנוכחי הם גםתנאי עומס נושא את עוצמת הקול של פגם העצם נוצר כי הם לא לחקות אותם במלואם נתקלו קליני בבני אדם. מגבלות אחרות של המודל הנן (i) את אטימות הרדיו של הצלחת אשר עשוי לדרוש הסרת הצלחת לפני ניתוח vivo לשעבר μCT ועלול לסבך פרשנות לתוצאות הבחינה רדיוגרפי האורכות, (ii) חוסר היכולת לווסת נוקשות צלחת אשר עשוי להיות פרמטר מכנה מפתח עצם היווצרות 27-30. צריך לזכור גם, כאשר באף אחת העצם isograft או פיגומים אחרים המכילים מרכיב מינרלי (סידן פחמתי במיוחד), כי להטיה מסוימת הם הציגו בתהליך פילוח ניתוח מיקרו-CT, בגלל צפיפות העצם חדשה שתוקם חלקית בחפיפה גם צפיפות צפיפות או פיגום isograft. מסיבה זו נפח העצם להשיג על ידי ניתוח מיקרו-CT בעיקר לשקף את נפח הרקמה mineralized (עצם חדשה שתוקם פלוסעצם תחליף) 11,26,31.

פגמי עצם diaphyseal מסיביים הם אתגר גדול האורתופד. החלפת עצם עם שתל עצם אוטולוגית, נחשבת כיום לטיפול תקן הזהב, היא בהיצע מוגבל והיא קשורה עם תחלואה הקשורה קציר. מסיבות אלה, בונה עצם רקמות מהונדסות שילוב בתאי גזע mesenchymal מח עצם עם פיגומים osteoconductive נחקרו כחלופה autografts בכירורגיה אורטופדית. נכון להיום, רוב המחקרים בוצעו במודלים של בעלי חיים קליניים רלוונטיים כגון כלבים, חזירים וכבשי 1-3, אבל הערכה ראשונית בין שני המושגים הללו ב orthotopic, ענפי, פגמי עצם קריטי בגודל מודלים קטנים-חיים (כמו עכברים) יכולים להיות כמה יתרונות: (i) הוצאות נמוכות, (ii) מספר גדול של בעלי חיים יכול להיות מופעלת; (Iii) בניגוד במודלים של בעלי חיים גדולים, ההומוגניות של זני העכבר מגביל להבדלים אינדיבידואליים בתוך ספיגת פיגוםnd עצם היווצרות; (Iv) והכי חשוב, זמינות של נוגדנים ספציפיים וחיות במיקוד גן לאפשר ההערכה של התהליך הביולוגי המעורבים בריפוי עצם. ואחרון חביב, שימוש זני immunodeficient של עכברים גם מאפשר לימודים או באמצעות שתלי או תאים ממקור אנושי ללא תגובות חיסוניות לוואים בעכברים. למרות היתרונות הנ&quot;ל, מודלים פגם עצם מסיבי diaphyseal בעכברים הם דלילים. רוב הדגמים כגון להשתמש קיבוע העצם עם סיכת intramedullary שממלא את חלל מח עצם (ובכך להגביל את היקף החומר להיבדק) וגם מעכבת שחזור משום שלא סיפקה יציבות הסיבוב צירית 2,4-7. מטרות המחקר הנוכחי (i) מחק מצב קליני עצם איחוד הלא, לתאר מודל פגם לשחזור, קריטי בגודל פלח, ירך בעכברים, אשר הוא התייצב על ידי osteosynth נעילה-צלחת המדויקת לשחזורesis המספק סביבה ביומכנית מאוד יציבה 8-10; (Ii) כדי להמחיש את המודל הנוכחי עם שני תחליפי עצם פוטנציאליים ולתאר היווצרות עצם מנתחת שיכול לשמש.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="811">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:335px;">&#945;-MEM , Minimum Essential Medium Eagle</td>
			<td style="width:191px;">Sigma-Aldrich, France</td>
			<td style="width:119px;">M4526</td>
			<td style="width:167px;">500 ml&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Acropora sp. coral exoskeleton cubes, Biocoral&#174;</td>
			<td>Biocoral&#174;, Inoteb, France</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>3x3x3 mm cubes, autoclaving (121&#176;C for 20 min) sterilization</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Buprenorphine, Buprecare&#174;</td>
			<td>Axience, Pantin, France</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>0.3 mg/ml</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Xylazine, Rompun&#174; 2%</td>
			<td colspan="2">Bayer HealthCare, Puteaux, France</td>
			<td>20 mg/ml</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Ketamine, Ketamine 500&#174;</td>
			<td>Virbac, Carros, France</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>50 mg/ml</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Isoflurane, For&#232;ne&#174;</td>
			<td>Abbott, Arcueil, France</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Enrofloxacine, Baytril&#174; 5%</td>
			<td colspan="2">Bayer HealthCare, Puteaux, France</td>
			<td>50 mg/ml</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Pentobarbital, Dolethal&#174;&#160;</td>
			<td>V&#233;toquinol, Lure, France</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>182,2 mg/ml</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Anesthetizing box</td>
			<td>Ugo Basile, Gemonio, Italy</td>
			<td style="width:119px;">7900/10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Plastic transparent sterile drape, BusterOpCover 30*45cm</td>
			<td>Buster, Coveto, Montagu, France</td>
			<td style="width:119px;">613867</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">10% povidone iodine, V&#233;t&#233;dine&#174; Solution</td>
			<td style="width:191px;">V&#233;toquinol, Lure, France</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>100 mg/ml</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Titanium micro- locking plate, MouseFix Plate XL</td>
			<td>RISystem AG, Davos, Switzerland, http://www.risystem.com/</td>
			<td style="width:119px;">RIS.401.120</td>
			<td>6 holes, 10 mm long and 1.5 mm wide, autoclaving (121&#176;C for 20 min) sterilization or cold sterilzation (ethylene oxide)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">0.3 mm drill bit, Drill Bit 0.30 mm</td>
			<td>RISystem AG, Davos, Switzerland, http://www.risystem.com/</td>
			<td style="width:119px;">RIS.592.200</td>
			<td>autoclaving (121&#176;C for 20 min) sterilization or cold sterilzation (ethylene oxide)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Engine power</td>
			<td>RISystem AG, Davos, Switzerland, http://www.risystem.com/</td>
			<td style="width:119px;">AccuPen</td>
			<td>Cold sterilzation (ethylene oxide)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Screw driver, Handrill</td>
			<td>RISystem AG, Davos, Switzerland, http://www.risystem.com/</td>
			<td style="width:119px;">RIS.390.130</td>
			<td>autoclaving (121&#176;C for 20 min) sterilization or cold sterilzation (ethylene oxide)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Self-tapping locking screws, MouseFix Screw 2 mm</td>
			<td>RISystem AG, Davos, Switzerland, http://www.risystem.com/</td>
			<td style="width:119px;">RIS.401.100</td>
			<td>2 mm long, 0.47 mm outer diameter and 0.34 mm core diameter, autoclaving (121&#176;C for 20 min) sterilization or cold sterilzation (ethylene oxide)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:335px;">Jig,MouseFix XL Drill and Saw Guide</td>
			<td>RISystem AG, Davos, Switzerland, http://www.risystem.com/</td>
			<td style="width:119px;">RIS.301.103</td>
			<td>3.5 mm between the slots, autoclaving (121&#176;C for 20 min) sterilization or cold sterilzation (ethylene oxide)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">0.22-mm Gigli saws (0.22 mm Saws)</td>
			<td colspan="2">RISystem AG, Davos, Switzerland</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">5.0 glycomer 631, Biosyn</td>
			<td style="width:191px;">Covidien, V&#233;toquinol, Lure, France</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Tapper-cut needle</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">4.0 glycomer 631, Biosyn</td>
			<td style="width:191px;">Covidien, V&#233;toquinol, Lure, France</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Tapper-cut needle</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:335px;">Xray, MX20</td>
			<td colspan="3">Faxitron X-ray Corp, Edimex, Le Plessis Grammorie</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:335px;">in vivo high-resolution microcomputed tomography, Skyscan 1176</td>
			<td colspan="2">Skyscan, Aartselaar, Belgium</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:335px;">Ex vivo high-resolution microcomputed tomography, Skyscan 1172</td>
			<td colspan="2">Skyscan, Aartselaar, Belgium</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:335px;">Resident software: Nrecon(v1.6.9)/Ctan(v.1.14.4)</td>
			<td colspan="2">Skyscan, Aartselaar, Belgium</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

establishment of a segmental femoral critical-size defect model in mice stabilized by plate osteosynthesis

The use of tissue-engineered bone constructs is an appealing strategy to overcome drawbacks of autografts for the treatment of massive bone defects. As a model organism, the mouse has already been widely used in bone-related research. Large diaphyseal bone defect models in mice, however, are sparse and often use bone fixation which fills the bone marrow cavity and does not provide optimal mechanical stability. The objectives of the current study were to develop a critical-size, segmental, femoral defect in nude mice. A 3.5-mm mid-diaphyseal femoral ostectomy (approximately 25% of the femur length) was performed using a dedicated jig, and was stabilized with an anterior located locking plate and 4 locking screws. The bone defect was subsequently either left empty or filled with a bone substitute (syngenic bone graft or coralline scaffold). Bone healing was monitored noninvasively using radiography and in vivo micro-computed-tomography and was subsequently assessed by ex vivo micro-computed-tomography and undecalcified histology after animal sacrifice, 10 weeks postoperatively. The recovery of all mice was excellent, a full-weight-bearing was observed within one day following the surgical procedure. Furthermore, stable bone fixation and consistent fixation of the implanted materials were achieved in all animals tested throughout the study. When the bone defects were left empty, non-union was consistently obtained. In contrast, when the bone defects were filled with syngenic bone grafts, bone union was always observed. When the bone defects were filled with coralline scaffolds, newly-formed bone was observed in the interface between bone resection edges and the scaffold, as well as within a short distance within the scaffold. 
The present model describes a reproducible critical-size femoral defect stabilized by plate osteosynthesis with low morbidity in mice. The new load-bearing segmental bone defect model could be useful for studying the underlying mechanisms in bone regeneration pertinent to orthopaedic applications.

הניתוחים הנ&quot;ל נמשך בין 45 60 דקות. Ostectomy ו osteosynthesis היו קלים לבצע בעזרת עוזרו של מנתח אבל ללא שימוש בכל מערכת מגדלת. לא דווח על סיבוכים במהלך הניתוח התרחש. במחקר ראשוני על 18 עכברים 11, צילומי רנטגן לאחר הניתוח ספקו ראיות כי אורך פגם עצם (3.43 ± 0.12 מ&quot;מ) ואת מיקום הצלחת (המרחק בין החלל המשותף וחונקי החלק הדיסטלי של צלחת = 2.65 ± 0.56 מ&quot;מ) היה לשחזור. שיעור התמותה הקשורים הרדמה עמד על כ -5%. התאוששות תפקודית של האיבר המופעל הייתה מעולה בכל חי נושאת משקל מלאה נצפה תוך יום לאחר ניתוח (אנימצית איור 1). משקלו של ה- osteosynthesis (צלחת וברגים) המשמשים pמחקר להתרעם היה כ -0.1% ממשקל גוף עכבר. לא דווח על סיבוכים לאחר ניתוח (למשל, זיהום פצע, כשל שתל, גירת השתלת עצם, וכו &#39;) התרחשו. אין פגיעה עצמית או פגיעות שנגרמו על ידי cagemates התרחש. כאשר פגמי העצם בניתוח המושרים נותרו ריקים, אין היווצרות עצם משמעותית עם שאינו Union עצם עקבי. לעומת זאת, כאשר הפגמים היו מלאים גם של isograft או פיגום אלמוגים, שזה עתה קם עצם משתרעת הפרוקסימלי וקצות עצם דיסטלי נצפתה. בנוסף, היווצרות עצם ואילו מותר מחדש הקמת המשכיות עצם ברוב הפגמים שטופלו isografts (איור 8), היא נצפתה רק בתוך פיגום אלמוגי פגמים מלאים בחומר הזה. למעשה, שום עצם נצפה במרחק גדול מ -1 מ&quot;מימ מהקצים הגרמיים. העדר סחוס בכל היסטולוגית מנתח התוצאות סיפקו עדותהיציבות של osteosynthesis מושגת (איור 9, איור 10). צילומי רנטגן ו microCT ניתוחי סיפקו הוכחות לכך איחוד העצם לא התרחשה כל חיה של הקבוצה פגם-שמאל-ריקה, 10 שבועות לפרסם ההשתלה. את נפח הרקמה mineralized הוערך על ידי ניתוחים microCT היה 0.8 ± 0.3 מ&quot;מ 3 והיה נציג של העצם החדש שנוצר. בקבוצות פיגום isograft ואלמוגים, איחוד העצם הושג בחיות 4 ו -4 בהתאמה. את נפח הרקמה mineralized הוערך על ידי ניתוחים microCT היה 4.4 ± 0.9 מ&quot;מ 3 ו 8.9 ± 0.7 מ&quot;מ 3. בקבוצות אלה, עם זאת, כי הן isograft ואת פיגום אלמוגי כילת אוצרות טבע, היווצרות עצם חדשה לא יכולה להיות מכובדת באמת מהחומר המושתל הנותרים (isograft או פיגום אלמוגים). הן שיעור איחוד בון ואת נפח רקמת mineralized המתקבל קבוצת isograft ומקבוצת פיגום האלמוגים היו באופן משמעותי (p &lt;0.001) גבוה יותר מזו שמתקבלת מקבוצת הפגם-שמאל-ריקה. <img alt="איור 1" src="/files/ftp_upload/52940/52940fig1.jpg" /> איור 1:. חשיפה כירורגי עבור יצירה של הפגם המגזרי עצם הירך 15 - 17 מ&quot;מ חתך בעור אורך, המשתרע מפרק הירך למפרק להחניק, נעשה על היבט anterolateral של עצם הירך. את fascia לאטה היה חרות; vastus lateralis השריר ואת שריר הירך הדו-ראשי פוצלו לחשוף לכל אורכו של diaphysis הירך. <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/52940/52940fig1large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> <img alt="איור 2" src="/files/ftp_upload/52940/52940fig2.jpg" /> איור 2: פלייטמיצוב הפרוקסימלי בורג מיקום. הצלחת יושמה בצד הירך הקדמי. החור הפרוקסימלי ביותר של הצלחת נקדח; את הבורג הראשון הוכנס ו, ואז, נעול. <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/52940/52940fig2large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> <img alt="איור 3" src="/files/ftp_upload/52940/52940fig3.jpg" /> איור 3:. מיקום בורג דיסטלי החור הדיסטלי ביותר של הצלחת נקדח ואת הבורג הוכנס ונעל. (הודפס מחדש באישור מרקמות Eng חלק ג, 2013, 19 (4), 271-280) <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/52940/52940fig3large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> <img alt="איור 4" src="/files/ftp_upload/52940/52940fig4.jpg" /> איור 4: </strong&gt; ג&#39;יגלי מסור מיצוב. את שני ברגים חיצוניים אחרים הוכנסו אך לא נעולים ואת החוט של מסורי 0.22 מ&quot;מ ג&#39;יגלי היה קשור באופן הדוק סביב העצם בכיוון מדים-צדדי. <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/52940/52940fig4large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> <img alt="איור 5" src="/files/ftp_upload/52940/52940fig5.jpg" /> איור 5: לנענע מיצוב לנענע הוכנס על הגזע של שני הברגים האחרונים ויישומים מעל הצלחת ואת החוט של המסור הוכנס אז בחריצים של לנענע.. (הודפס מחדש באישור מרקמות Eng חלק ג, 2013, 19 (4), 271-280) <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/52940/52940fig5large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> <img alt= &quot;איור 6&quot; src = &quot;/ files / ftp_upload / 52,940 / 52940fig6.jpg&quot; /&gt; איור 6:. Ostectomy Ostectomy בוצעה המסור ג&#39;יגלי בוטל. (הודפס מחדש באישור מרקמות Eng חלק ג, 2013, 19 (4), 271-280) <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/52940/52940fig6large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> <img alt="איור 7" src="/files/ftp_upload/52940/52940fig7.jpg" /> איור 7:. ברגי Inner נעילת לנענע הוסר ואת שני הברגים האחרונים נעולים. הליקויים המגזריים היו אז יצאתי לדרכן ריקות או מלא עם החומרים שנבדקו. (הודפס מחדש באישור מרקמות Eng חלק ג, 2013, 19 (4), 271-280) <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/52940/52940fig7large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> <img al<html> t = &quot;איור 8&quot; src = &quot;/ files / ftp_upload / 52,940 / 52940fig8.jpg&quot; /&gt; איור 8: נציג לאחר הניתוח צילומי רנטגן ו sagittal μCT שחזור של עצם הירך של עכברים עצם הירך עם פגם בהתאמה או שמאלה ריק (AE), או מלא שתל עצם syngenic מסיבי (FJ), או מלא פיגומים אלמוגים Acropora מסיבי (KO. ); מיד לאחר הניתוח (A, F, K), 4 שבועות לאחר הניתוח (B, G, L), 6 שבועות לאחר הניתוח (C, H, M), ו -10 שבועות לאחר הניתוח (D, E, I, J, N , O) (צלחת אורך = 10 מ&quot;מ). (הודפס מחדש באישור מרקמות Eng חלק ג, 2013, 19 (4), 271-280) <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/52940/52940fig8large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> קבצים / ftp_upload / 52,940 / 52940fig9.jpg &quot;/&gt; . איור 9: הנציג רנטגן, μCT לשיקום היסטולוגיה של פגם מלא עם אלמוג הפיגום נבדק במחקר הנוכחי כמות גדולה של עצם חדש שנוצר נצפה-בין הקצוות הגרמיים שמסביב פיגום האלמוגים; לעומת זאת, העצם קטן נכח בתוך הפיגום. כתמים: כחול Stevenel ופון Gieson picrofuchsin. בתנאים אלה, עצם, תאי, ואלמוגים מוכתמים אדומים, כחולים, חום, בהתאמה. סרגל קנה מידה = 500 מיקרומטר. ACS = Acropora פיגום אלמוגים; BN = עצם. (הודפס מחדש באישור מרקמות Eng חלק ג, 2013, 19 (4), 271-280) <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/52940/52940fig9large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> <img alt="איור 10" src="/files/ftp_upload/52940/52940fig10.jpg" /> איור 10: repre<html> sentative היסטולוגיה של שמאל פגם ריק (א) ממולאה Massive Syngenic עצם השתל (B), ומלא אלמוג פיגום (C). בשנת הפגם נשאר ריקה, עיגול של גרמי קצוות עם מילוי תעלה מדולרי ו רקמה סיבית בשפע עמוקה לתוך הפגם נצפו. בשנת הפגם מלא שתל עצם syngenic מסיבי, משכיות עצם נצפו בין השתל ואת הקצוות הגרמיים שמסביב; מח עצם נכח לאורך כל החלל המקורי. בשנת הפגם מלא פיגום אלמוגים, עצם שהוקם זה עתה נצפה בין הקצוות הגרמיים שמסביב פיגום האלמוגים, אבל העצם קטן נכח בתוך הפיגום. כתמים: כחול Stevenel ופון Gieson picrofuchsin. בתנאים אלה, עצם, תאי, ואלמוגים מוכתמים אדומים, כחולים, חום, בהתאמה. סרגל קנה מידה = 500 מ&quot;מ. ACS, פיגום אלמוגים; BN, עצם; בע&quot;מ, מח עצם; FT, רקמה סיבית. (הודפס מחדש באישור מרקמות Eng חלק ג, 2013, 19 (4), 271-280)oad / 52,940 / 52940fig10large.jpg &quot;target =&quot; _ blank &quot;&gt; לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו. <img alt="אנימציה איור 11" src="/files/ftp_upload/52940/52940animfig1.jpg" /> אנימציה / וידאו איור 1: וידאו נציג של בהילוך של בתר-ניתוחי יום שמאלי. נושאת משקל מלא נצפתה. <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/52940/Animated_Figure1.MOV" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בסרטון זה.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Establishment of a Segmental Femoral Critical-size Defect Model in Mice Stabilized by Plate Osteosynthesis at JoVE.com

Establishment of a Segmental Femoral Critical-size Defect Model in Mice Stabilized by Plate Osteosynthesis

Although mouse models are invaluable tools for bone tissue engineering, models of long bone defects are sparse. This need motivated development of the present protocol which uses a locking plate with four screws and a dedicated jig to perform and stabilize a reproducible, femoral, critical-size defect with low morbidity.

הקמת דגם פגם קריטי בגודל הירך מגזרית עכברים מיוצב על ידי פלייט Osteosynthesis

The use of tissue-engineered bone constructs is an appealing strategy to overcome drawbacks of autografts for the treatment of massive bone defects. As a ...

establishment-segmental-femoral-critical-size-defect-model-mice

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Medicine

10.0K Views.  Université Paris Diderot. Although mouse models are invaluable tools for bone tissue engineering, models of long bone defects are sparse. This need motivated development of the present protocol which uses a locking plate with four screws and a dedicated jig to perform and stabilize a reproducible, femoral, critical-size defect with low morbidity.

Video: Establishment of a Segmental Femoral Critical-size Defect Model in Mice Stabilized by Plate Osteosynthesis

Establishment and Propagation of Human Retinoblastoma Tumors in Immune Deficient Mice

Culturing retinoblastoma tumor cells in defined stem cell media gives rise to primary tumorspheres that can be grown and maintained for only a limited time. These cultured tumorspheres may exhibit markedly different cellular phenotypes when compared to the original tumors. Demonstration that cultured cells have the capability of forming new tumors is important to ensure that cultured cells model the biology of the original tumor. 
Here we present a protocol for propagating human retinoblastoma tumors in vivo using Rag2-/- immune deficient mice. Cultured human retinoblastoma tumorspheres of low passage or cells obtained from freshly harvested human retinoblastoma tumors injected directly into the vitreous cavity of murine eyes form tumors within 2-4 weeks. These tumors can be harvested and either further passaged into murine eyes in vivo or grown as tumorspheres in vitro. Propagation has been successfully carried out for at least three passages thus establishing a continuing source of human retinoblastoma tissue for further experimentation. 
Wesley S. Bond and Lalita Wadhwa are co-first authors.

A method is described to propagate human retinoblastoma tumors in mice. Tumor cells are directly injected into the eyes of immune deficient mice. Secondary tumors have been successfully established using both cells directly harvested from human tumors and cultured tumorspheres.

הקמה התפשטות של גידולים רטינובלסטומה האדם עכברים החיסון לקויה

Culturing retinoblastoma tumor cells in defined stem cell media gives rise to primary tumorspheres that can be grown and maintained for only a limited ...

Adjustable Stiffness, External Fixator for the Rat Femur Osteotomy and Segmental Bone Defect Models

The mechanical environment around the healing of broken bone is very important as it determines the way the fracture will heal. Over the past decade there has been great clinical interest in improving bone healing by altering the mechanical environment through the fixation stability around the lesion. One constraint of preclinical animal research in this area is the lack of experimental control over the local mechanical environment within a large segmental defect as well as osteotomies as they heal. In this paper we report on the design and use of an external fixator to study the healing of large segmental bone defects or osteotomies. This device not only allows for controlled axial stiffness on the bone lesion as it heals, but it also enables the change of stiffness during the healing process in vivo. The conducted experiments have shown that the fixators were able to maintain a 5 mm femoral defect gap in rats in vivo during unrestricted cage activity for at least 8 weeks. Likewise, we observed no distortion or infections, including pin infections during the entire healing period. These results demonstrate that our newly developed external fixator was able to achieve reproducible and standardized stabilization, and the alteration of the mechanical environment of in vivo rat large bone defects and various size osteotomies. This confirms that the external fixation device is well suited for preclinical research investigations using a rat model in the field of bone regeneration and repair.

One constraint of preclinical research in the field of bone repair is the lack of experimental control over the local mechanical environment within a healing bone lesion. We report the design and use of an external fixator for bone repair with the ability to change fixator stiffness in vivo.

נוקשות מתכוונן, תופסנים חיצוניים למודלים של עכברי ירך osteotomy ומגזרי עצם הפגם

The mechanical environment around the healing of broken bone is very important as it determines the way the fracture will heal. Over the past decade there ...

Femoral Bone Marrow Aspiration in Live Mice

Serial sampling of the cellular composition of bone marrow (BM) is a routine procedure critical to clinical hematology. This protocol describes a detailed step-by-step technical procedure for an analogous procedure in live mice which allows for serial characterization of cells present in the BM. This procedure facilitates studies aimed to detect the presence of exogenously administered cells within the BM of mice as would be done in xenograft studies for instance. Moreover, this procedure allows for the retrieval and characterization of cells enriched in the BM such as hematopoietic stem and progenitor cells (HSPCs) without sacrifice of mice. Given that the cellular composition of peripheral blood is not necessarily reflective of proportions and types of stem and progenitor cells present in the marrow, procedures which provide access to this compartment without requiring termination of the mice are very helpful. The use of femoral bone marrow aspiration is illustrated here for cytological analysis of marrow cells, flow cytometric characterization of the hematopoietic stem/progenitor compartment, and culture of sorted HSPCs obtained by femoral BM aspiration compared with conventional marrow harvest.

This protocol describes a procedure for serial sampling of femoral bone marrow (BM) without requiring the sacrifice of mice. This procedure facilitates longitudinal studies of the BM composition of mice over time and provides serial access to cells within the BM for ex vivo and transplantation studies.

הירך מח עצם שאיפה בעכברים חיים

Serial sampling of the cellular composition of bone marrow (BM) is a routine procedure critical to clinical hematology. This protocol describes a detailed ...

A Simple Critical-sized Femoral Defect Model in Mice

While bone has a remarkable capacity for regeneration, serious bone trauma often results in damage that does not properly heal. In fact, one tenth of all limb bone fractures fail to heal completely due to the extent of the trauma, disease, or age of the patient. Our ability to improve bone regenerative strategies is critically dependent on the ability to mimic serious bone trauma in test animals, but the generation and stabilization of large bone lesions is technically challenging. In most cases, serious long bone trauma is mimicked experimentally by establishing a defect that will not naturally heal. This is achieved by complete removal of a bone segment that is larger than 1.5 times the diameter of the bone cross-section. The bone is then stabilized with a metal implant to maintain proper orientation of the fracture edges and allow for mobility. 
Due to their small size and the fragility of their long bones, establishment of such lesions in mice are beyond the capabilities of most research groups. As such, long bone defect models are confined to rats and larger animals. Nevertheless, mice afford significant research advantages in that they can be genetically modified and bred as immune-compromised strains that do not reject human cells and tissue.
Herein, we demonstrate a technique that facilitates the generation of a segmental defect in mouse femora using standard laboratory and veterinary equipment. With practice, fabrication of the fixation device and surgical implantation is feasible for the majority of trained veterinarians and animal research personnel. Using example data, we also provide methodologies for the quantitative analysis of bone healing for the model.

Animal models are frequently employed to mimic serious bone injury in biomedical research. Due to their small size, establishment of stabilized bone lesions in mice are beyond the capabilities of most research groups. Herein, we describe a simple method for establishing and analyzing experimental femoral defects in mice.

דגם פגם עצם הירך קריטית בגודל פשוט בעכברים

While bone has a remarkable capacity for regeneration, serious bone trauma often results in damage that does not properly heal. In fact, one tenth of all ...

A Murine Model of Arterial Restenosis: Technical Aspects of Femoral Wire Injury

Cardiovascular disease caused by atherosclerosis is the leading cause of death in the developed world. Narrowing of the vessel lumen, due to atherosclerotic plaque development or the rupturing of established plaques, interrupts normal blood flow leading to various morbidities such as myocardial infarction and stroke. In the clinic endovascular procedures such as angioplasty are commonly performed to reopen the lumen. However, these treatments inevitably damage the vessel wall as well as the vascular endothelium, triggering an excessive healing response and the development of a neointimal plaque that extends into the lumen causing vessel restenosis (re-narrowing). Restenosis remains a major cause of failure of endovascular treatments for atherosclerosis. Thus, preclinical animal models of restenosis are vitally important for investigating the pathophysiological mechanisms as well as translational approaches to vascular interventions. Among several murine experimental models, femoral artery wire injury is widely accepted as the most suitable for studies of post-angioplasty restenosis because it closely resembles the angioplasty procedure that injures both endothelium and vessel wall. However, many researchers have difficulty utilizing this model due to its high degree of technical difficulty. This is primarily because a metal wire needs to be inserted into the femoral artery, which is approximately three times thinner than the wire, to generate sufficient injury to induce prominent neointima. Here, we describe the essential surgical details to effectively overcome the major technical difficulties of this model. By following the presented procedures, performing the mouse femoral artery wire injury becomes easier. Once familiarized, the whole procedure can be completed within 20 min.

The mouse femoral artery wire injury model of restenosis is technically challenging. In this protocol we show the key technical details essential for successfully performing wire injury to induce consistent&#160;neointima for studies of restenosis.

דגם Murine של עורקי היצרות: היבטים טכניים של עצם הירך חוט פגיעה

Cardiovascular disease caused by atherosclerosis is the leading cause of death in the developed world. Narrowing of the vessel lumen, due to ...

A Rat Tibial Growth Plate Injury Model to Characterize Repair Mechanisms and Evaluate Growth Plate Regeneration Strategies

A third of all pediatric fractures involve the growth plate and can result in impaired bone growth. The growth plate (or physis) is cartilage tissue found at the end of all long bones in children that is responsible for longitudinal bone growth. Once damaged, cartilage tissue within the growth plate can undergo premature ossification and lead to unwanted bony repair tissue, which forms a "bony bar." In some cases, this bony bar can result in bone growth deformities, such as angular deformities, or it can completely halt longitudinal bone growth. There is currently no clinical treatment that can fully repair an injured growth plate. Using an animal model of growth plate injury to better understand the mechanisms underlying bony bar formation and to identify ways to inhibit it is a great opportunity to develop better treatments for growth plate injuries. This protocol describes how to disrupt the rat proximal tibial growth plate using a drill-hole defect. This small animal model reliably produces a bony bar and can result in growth deformities similar to those seen in children. This model allows for investigation into the molecular mechanisms of bony bar formation and serves as a means to test potential treatment options for growth plate injuries.

The growth plate is a cartilaginous region in children's long bones where longitudinal growth occurs. When injured, bony tissue can form and impair growth. We describe a rat model of growth plate injury that leads to bony repair tissue, allowing the study of repair mechanisms and growth plate regeneration strategies.

חולדה גדילה לוח צמיחת דגם אפיון מנגנוני תיקון ולהעריך צמיחה צלחת רגנרציה אסטרטגיות

A third of all pediatric fractures involve the growth plate and can result in impaired bone growth. The growth plate (or physis) is cartilage tissue found ...

The Generation of Closed Femoral Fractures in Mice: A Model to Study Bone Healing

Bone fractures impose a tremendous socio-economic burden on patients, in addition to significantly affecting their quality of life. Therapeutic strategies that promote efficient bone healing are non-existent and in high demand. Effective and reproducible animal models of fractures healing are needed to understand the complex biological processes associated with bone regeneration. Many animal models of fracture healing have been generated over the years; however, murine fracture models have recently emerged as powerful tools to study bone healing. A variety of open and closed models have been developed, but the closed femoral fracture model stands out as a simple method for generating rapid and reproducible results in a physiologically relevant manner. The goal of this surgical protocol is to generate unilateral closed femoral fractures in mice and facilitate a post-fracture stabilization of the femur by inserting an intramedullary steel rod. Although devices such as a nail or a screw offer greater axial and rotational stability, the use of an intramedullary rod provides a sufficient stabilization for consistent healing outcomes without producing new defects in the bone tissue or damaging nearby soft tissue. Radiographic imaging is used to monitor the progression of callus formation, bony union, and subsequent remodeling of the bony callus. Bone healing outcomes are typically associated with the strength of the healed bone and measured with torsional testing. Still, understanding the early cellular and molecular events associated with fracture repair is critical in the study of bone tissue regeneration. The closed femoral fracture model in mice with intramedullary fixation serves as an attractive platform to study bone fracture healing and evaluate therapeutic strategies to accelerate healing.

The murine closed femoral fracture model is a powerful platform to study fracture healing and novel therapeutic strategies to accelerate bone regeneration. The goal of this surgical protocol is to generate unilateral closed femoral fractures in mice using an intramedullary steel rod to stabilize the femur.

הדור של שברי הירך סגור בעכברים: מודל ללמוד ריפוי עצם

Bone fractures impose a tremendous socio-economic burden on patients, in addition to significantly affecting their quality of life. Therapeutic strategies ...

A Model of Glaucoma Induced by Circumlimbal Suture in Rats and Mice

The circumlimbal suture is a technique for inducing experimental glaucoma in rodents by chronically elevating intraocular pressure (IOP), a well-known risk factor for glaucoma. This protocol demonstrates a step-by-step guide on this technique in Long Evans rats and C57BL/6 mice. Under general anesthesia, a "purse-string" suture is applied on the conjunctiva, around the equator and behind the limbus of the eye. The fellow eye serves as an untreated control. Over the duration of our study, which was a period of 8 weeks for rats and 12 weeks for mice, IOP remained elevated, as measured regularly by rebound tonometry in conscious animals without topical anesthesia. In both species, the sutured eyes showed electroretinogram features consistent with preferential inner retinal dysfunction. Optical coherence tomography showed selective thinning of the retinal nerve fiber layer. Histology of the rat retina in cross-section found reduced cell density in the ganglion cell layer, but no change in other cellular layers. Staining of flat-mounted mouse retinae with a ganglion cell specific marker (RBPMS) confirmed ganglion cell loss. The circumlimbal suture is a simple, minimally invasive and cost-effective way to induce ocular hypertension that leads to ganglion cell injury in both rats and mice.

Chronic ocular hypertension is induced by applying a circumlimbal suture in rats and mice, leading to functional and structural deterioration of the retinal ganglion cells consistent with glaucoma.

דגם של גלאוקומה המושרה על ידי תפרים Circumlimbal אצל חולדות ועכברים

The circumlimbal suture is a technique for inducing experimental glaucoma in rodents by chronically elevating intraocular pressure (IOP), a well-known ...

Establishment of a Severe Dry Eye Model Using Complete Dacryoadenectomy in Rabbits

Dry eye disease (DED) is a complex disease with multiple etiologies and variable symptoms, having ocular surface inflammation as its key pathophysiologic step. Despite advances in our understanding of DED, significant knowledge gaps remain. Advances are limited in part due to the lack of informative animal models. The authors recently reported on a method of DED induced by injecting all orbital lacrimal gland (LG) tissues with the lectin concanavalin A. Here, we report a novel model of aqueous-deficient DED based on the surgical resection of all orbital LG (dacryoadenectomy) tissues. Both methods use rabbits because of their similarity to human eyes in terms of the size and structure of the ocular surface. One week after removal of the nictitating membrane, the orbital superior LG was surgically removed under anesthesia, followed by removal of the palpebral superior LG, and finally removal of the inferior LG. Dacryoadenectomy induced severe DED, evidenced by a marked reduction in the tear break up time test and the Schirmer&#39;s tear test, and significantly increased tear osmolarity and rose bengal staining. Dacryoadenectomy-induced DED lasted at least eight weeks. There were no complications and animals tolerated the procedure well. The technique can be mastered relatively easily by those with adequate surgical experience and appreciation of the relevant rabbit anatomy. Since this model recapitulates the features of human aqueous-deficient DED, it is suitable for studies of ocular surface homeostasis, DED, and candidate therapeutics.

A novel approach is presented to induce chronic dry eye disease in rabbits by surgically removing all orbital lacrimal glands. This method, distinct from those previously reported, produces a stable, reproducible model of aqueous deficient dry eye well suited to study tear physiology and pathophysiology and ocular therapeutics.

הקמת מודל העין יבש קשה באמצעות השלמת דקרייוקטומיה בארנבונים

Dry eye disease (DED) is a complex disease with multiple etiologies and variable symptoms, having ocular surface inflammation as its key pathophysiologic ...

A Rat Carotid Artery Pressure-Controlled Segmental Balloon Injury with Periadventitial Therapeutic Application

Cardiovascular disease remains the leading cause of death and disability worldwide, in part due to atherosclerosis. Atherosclerotic plaque narrows the luminal surface area in arteries thereby reducing adequate blood flow to organs and distal tissues. Clinically, revascularization procedures such as balloon angioplasty with or without stent placement aim to restore blood flow. Although these procedures reestablish blood flow by reducing plaque burden, they damage the vessel wall, which initiates the arterial healing response. The prolonged healing response causes arterial restenosis, or re-narrowing, ultimately limiting the long-term success of these revascularization procedures. Therefore, preclinical animal models are integral for analyzing the pathophysiological mechanisms driving restenosis, and provide the opportunity to test novel therapeutic strategies. Murine models are cheaper and easier to operate on than large animal models. Balloon or wire injury are the two commonly accepted injury modalities used in murine models. Balloon injury models in particular mimic the clinical angioplasty procedure and cause adequate damage to the artery for the development of restenosis. Herein we describe the surgical details for performing and histologically analyzing the modified, pressure-controlled rat carotid artery balloon injury model. Additionally, this protocol highlights how local periadventitial application of therapeutics can be used to inhibit neointimal hyperplasia. Lastly, we present light sheet fluorescence microscopy as a novel approach for imaging and visualizing the arterial injury in three-dimensions.

The rat carotid artery balloon injury mimics the clinical angioplasty procedure performed to restore blood flow in atherosclerotic vessels. This model induces the arterial injury response by distending the arterial wall, and denuding the intimal layer of endothelial cells, ultimately causing remodeling and an intimal hyperplastic response.

עכברוש עורק הראש מבוקר לחץ על פגיעה בבלון מגזרי עם יישום טיפולי Periadventitial

Cardiovascular disease remains the leading cause of death and disability worldwide, in part due to atherosclerosis. Atherosclerotic plaque narrows the ...