מקור: קיי סטיוארט, RVT, RLATG, CMAR; ואלרי א. שרודר, אר.די.ג'י, אר-אל-ג'י. אוניברסיטת נוטרדאם, IN
בשנת 1959 הוצגו ה-3 R's על ידי ו.M ב ראסל ור.ל. ברץ' בספרם "עקרונות הטכניקה הניסיונית ההומנית". 3 R של הם תחליף, הפחתה, ועידון של השימוש בבעלי חיים במחקר. 1 השימוש בקווי תאים ובתרביות רקמות שמקורן בחיות מחקר הוא טכניקה חלופית, שכן הוא מאפשר ניסויים רבים להתבצע במבחנה. קצירת רקמות ואיברים לשימוש בתרביות תאים ורקמות דורשת טכניקה אספטית כדי למנוע זיהום של הרקמות. קציר סטרילי נחוץ גם לניתוח חלבון ורנ"א ופרופיל מטבולי של רקמות. כתב יד זה ידון בתהליך של קציר איברים סטרילי בחולדות ועכברים.
טכניקה אספטית יש לעקוב כדי להבטיח את הסטריליות של הרקמות. הקציר מבוצע במכסה המנוע לזרם למינאר שחוטא באלכוהול. כל החומרים המשמשים חייבים להיות מעוקרים. הטכנאי המבצע את הקציר חייב לתרום ציוד מגן אישי, כולל מסכה, גוף, שמלת כירורגית סטרילית וכפפות כירורגיות סטריליות. השמלה חייבת לכסות את פרקי כף היד כדי למנוע שפיכת תאי עור לתוך חלל הגוף הפתוח, צלחות פטרי, או מדיום סטרילי. כדי לשמור על סטריליות של הטכנאי, הליך זה דורש כי טכנאי שני, nonsterile לסייע לטכנאי סטרילי עם המתת חסד של בעלי החיים.
בניסויים הדורשים פרופילים מטבוליים של רקמות, השיטה של קציר רקמות יש השפעה רבה על איכות הנתונים שנאספו. 2 הן הליך המתת החסד והן משך הזמן שהקציר לוקח יכולים להשפיע על שלמות הרקמות. היפוקסיה, תוצאה של המתת חסד עם פחמן דו חמצני, הוכח שיש השפעה עמוקה על מטבוליטים ברקמות. דימום של כלי השיט ברקמת הריאה נגרם גם על ידי שימוש בפחמן דו חמצני להמתת חסד. סדר הסרת הרקמות כאשר ניתוח רציף של רקמות ממוקדות מבוצע יכול לגרום לשינויים מטבוליים, כמו הרקמות להתחיל להזדקן או לדעוק במהלך הקציר.
בעוד שרוב היבול הסטרילי מכוון לאיבר אחד, ייתכנו זמנים שבהם יש צורך ביותר מאיבר אחד. במהלך ניתוח רציף, הרקמות הנדרשות יכתיבו את הסדר שבו יש להסירן. 2 רקמות כי להשפיל במהירות חייב להיות נקטף מהר ככל האפשר לאחר המתת חסד. כדי לשמור על סטריליות של המכשירים, איברים שנקטפו מחלל הבטן מוסרים בסדר הבא: טחול, כבד, כליות, בלוטות יותרת הכליה, השחלות או האשכים, איברי מין אביזר (הערמונית, שלפוחיות הזרע, הרחם, החצוצרות), רקמת הלבלב, בלוטות הלימפה, שלפוחית השתן, ודרכי המעי (הקיבה, המעי הדק והמעי הגס). הסדר של קציר האיברים מחלל בית החזה הוא להסיר תחילה את הלב והריאות ואחריו את האוסף של תימוס, בלוטות הלימפה והוושט. 3 כפפות חדשות נדרשות עבור כל עכבר.
ייתכן שיהיה צורך לשמר חלק מהאיברים הסטריליים שנקטפו. שימור הרקמות מתבצע על ידי הקפאת הבזק עם חנקן נוזלי (LN2)או עם שילוב של LN 2 ו 2-מתילבוטן. עבור LN2 בלבד, הרקמות נשטפות מלוחות סטריליות, מוכתמות על מטלית סופגת סטרילית כדי לרוקן לחות עודפת, ממוקמת בריבועי רדיד אלומיניום סטריליים, ומיד שקועה לתוך LN2. 2 עבור דגימות אימונולוגיות, מתווסף 2-מתילבוטן. הרקמה למעשה שקועה לתוך 2-מתילבוטן כי כבר התקרר על ידי LN2. כאשר הרקמות הפכו לבנות, הן מוסרות מן 2-מתילבוטן, להציב בחבילות סטריליות, ולאחר מכן להציב ישירות לתוך LN2.
1. הכנה
2. קצירת רקמות
למרות שרבים מההליכים לקציר איברים סטריליים דומים לנמק סטנדרטי, השימוש בטכניקה סטרילית הוא הכרחי עבור רקמות להיות בעל ערך עבור הליכים ניסיוניים, הכוללים קצירת תאים מן הרקמות המובאות. יצירת פרופיל או איסוף RNA מרקמות עלולים להיפגע אם הסטריליות אינה נשמרת.
Skip to...
Videos from this collection:
Now Playing
Lab Animal Research
34.7K Views
Lab Animal Research
173.2K Views
Lab Animal Research
27.6K Views
Lab Animal Research
35.5K Views
Lab Animal Research
54.4K Views
Lab Animal Research
25.5K Views
Lab Animal Research
99.9K Views
Lab Animal Research
34.6K Views
Lab Animal Research
31.2K Views
Lab Animal Research
51.2K Views
Lab Animal Research
170.7K Views
Lab Animal Research
72.7K Views
Lab Animal Research
50.0K Views
Lab Animal Research
22.3K Views
Lab Animal Research
57.8K Views
Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved