Purification d’affinité d’une protéine marquée 6X-His à l’aide d’un système de chromatographie liquide à protéines rapides

Dans cette étude, nous visons à purifier l’endonucléase 1 ou FEN1, une protéine de réplication de l’ADN cruciale, à l’aide de la chromatographie d’affinité. Cela nous permettra d’étudier la fonction de FEN1 dans la réplication et la réparation de l’ADN dans un environnement in vitro contrôlé, ce qui nous permettra de mieux comprendre ses fonctions et ses rôles biologiques. Différents types de chromatographie sont utilisés pour purifier les protéines de liaison à l’ADN, le plus courant étant la chromatographie d’affinité.

Dans la chromatographie d’affinité, la chromatographie d’affinité métallique immobilisée est l’un des outils les plus puissants pour purifier les protéines marquées His. Depuis l’interaction entre l’histomarqué et l’ion métallique, généralement le nickel ou le cobalt est très forte. Deux facteurs cruciaux pour un processus de purification des protéines réussi sont le rendement et la pureté des protéines.

Selon l’utilisation prévue de la protéine, le rendement ou la pureté peuvent être préférés à l’autre. Nos résultats montrent que la sélection de la résine appropriée pour la purification des protéines marquées par His pourrait donner des résultats souhaitables pour les applications en aval de la protéine.