Auparavant, la principale méthode pour examiner l’effet des produits chimiques sur la contractilité artérielle était la myographie ex vivo dans les bains d’organes. L’importance de cette technique est que les effets des produits chimiques et de la manipulation génétique sur le segment d’un vaisseau in vivo peuvent être examinés. Le principal avantage de cette technique est qu’il est possible de réaliser une exposition chronique et une évaluation à long terme de l’effet des médicaments sur la contractilité artérielle et le flux sanguin.
Cela n’est pas possible dans les récipients isolés des bains d’orgue. Pour commencer à extérioriser le fœtus, assurez-vous d’une profondeur d’anesthésie adéquate chez la brebis. Effectuez une incision de laparotomie standard de 10 centimètres à l’aide d’une lame de scalpel numéro 20 sur l’alba linéaire de l’ombilic à la partie crânienne du pis.
Faites ensuite une petite incision à travers la ligne médiane de la paroi corporelle sous l’incision cutanée et ouvrez la cavité abdominale à l’aide de ciseaux Metzenbaum. Extérioriser l’utérus contenant le fœtus à travers la paroi abdominale, tout en plaçant des serviettes chirurgicales stériles en dessous entre l’abdomen maternel et l’utérus. Palper ensuite l’utérus pour déterminer la position fœtale et les entrées caudales.
À l’aide d’un cautérisme, faites une incision de 10 centimètres à travers la paroi utérine avec une grande courbure sur le dos de la tête, en évitant les vaisseaux sanguins et les placentomies visibles. Ensuite, avec quatre pinces de Babcock, fixez les membranes utérines et placentaires et tirez les pinces de Babcock aux quatre coins opposés pour rendre la tête du fœtus visible. Extériorisez la moitié crânienne du fœtus par cette incision et couvrez la tête avec un gant stérile sans latex rempli de solution saline stérile chaude à une température de 37 degrés Celsius pour empêcher l’initiation de la respiration.
Pour effectuer l’instrumentation du cathéter périvasculaire de l’artère carotide, avec le col du fœtus exposé, faites une incision cutanée oblique de trois à 3,5 centimètres le long du bord antérieur du muscle sternocléido-mastoïdien ou SCM d’un côté du cou dans la région médiane. Séparez ensuite le fascia avec une pince à moustiques. Divisez le platysma et disséquez le long du bord médial du muscle SCM de son tendon vers le haut et jusqu’au niveau du muscle omohyoïdien vers le bas.
Rétractez la peau avec des pinces Babcock. Effectuez une dissection contondante pour libérer l’artère carotide du tissu environnant et de la feuille carotidienne. Ensuite, prenez une sonde de débit de trois millimètres dans l’emballage stérile, dévissez la plaque de support et faites-la glisser pour exposer le support en L.
À l’aide d’une pince, fermez le support de la sonde de débit en faisant glisser doucement la plaque de support en position fermée. Fixez ensuite le support de la sonde de débit en serrant la vis de support de la sonde de débit. Placez un cathéter périvasculaire prérincé près de l’artère carotide proximale à la sonde d’écoulement avec une suture en soie non résorbable 3.0.
Fixez les longueurs proximale et distale du système périvasculaire et de la sonde d’écoulement au tissu interstitiel voisin. À l’aide d’un point de suture continu, fermez le site d’incision et la peau du fœtus avec une suture non résorbable 3.0. Fixez les cathéters à la peau en enroulant la suture autour du cathéter trois fois.
Après avoir retiré le gant, replacez la tête du fœtus dans l’utérus. Pour effectuer un cathétérisme des membres fœtaux, extériorisez la patte arrière du fœtus, tenez la jambe et tournez-la sur le côté pour visualiser la zone interne de la cuisse. Après avoir nettoyé la zone avec de la gaze stérile, effectuez une incision de deux centimètres et exposez l’artère fémorale.
Placez et fixez la sonde de débit comme démontré précédemment pour la carotide, et fermez l’incision. Ensuite, faites une incision de deux centimètres le long de la face médiale du tibia, à environ 0,5 centimètre distal du genou. Exposez l’artère tibiale postérieure à paroi épaisse et la veine saphène à paroi mince.
Pour insérer des cathéters en polyvinyle, en utilisant une technique de coupe standard, libérez le vaisseau d’intérêt avec une dissection émoussée. Ligaturez ensuite la partie distale du vaisseau avec une suture en soie 3.0, et sans aiguille, en utilisant un nœud carré à trois jets. Placez une deuxième attache sans soie à la face proximale du vaisseau, mais laissez la ligature dénouée.
À l’aide de ciseaux Castroviejo, faites une petite coupe transversale dans le vaisseau à deux millimètres à proximité de la ligature distale. Limitez le flux sanguin des vaisseaux en tirant doucement sur la suture proximale non liée. Remplissez ensuite le cathéter avec une solution saline héparinée stérile.
Insérez l’extrémité biseautée du cathéter et avancez l’extrémité de 20 centimètres dans le vaisseau fœtal. Maintenez le cathéter en place avec une pince pendant qu’un assistant attache la suture proximale sans soie pour fixer le vaisseau au cathéter. Lissez complètement le vaisseau autour du cathéter inséré en utilisant des nœuds carrés à deux millimètres du site d’insertion avec trois lancers.
Attachez ensuite la ligature distale proximale à la liaison proximale, fixant le vaisseau au cathéter. Fermez l’incision cutanée à l’aide d’une suture non résorbable 3.0, en utilisant un motif continu. Assurez-vous que les sutures sont attachées autour des cathéters pour éviter de restreindre le flux sanguin si vous les tirez.
Placez un cathéter pré-rincé dans l’utérus et fixez-le au fœtus par une suture à l’aide d’une suture non résorbable 3.0. Remettez le fœtus dans l’utérus. Suturez les membranes fœtales à l’aide de sutures non résorbables 3.0 avec un schéma de verrouillage continu, puis fermez la couche musculaire utérine à l’aide d’une suture non résorbable 3.0.
Insérez une tige chirurgicale en acier inoxydable de 18 pouces par voie sous-cutanée le long de la paroi abdominale jusqu’à la région paracostale. Fixez les cathéters à l’extrémité distale de la tige chirurgicale, en demandant à un assistant d’alimenter les cathéters et le câble de la sonde à travers le site de sortie paracostale en poussant complètement la tige à travers l’ouverture paracostale. Ensuite, fixez tous les cathéters et les câbles de la sonde de débit au site d’incision paracostale.
Après avoir placé le ruban imperméable, suturez les cathéters sur la peau de la brebis. Suturez une poche en filet en plastique à l’extérieur de la brebis sur les cathéters et sondez pour ranger les cathéters. À l’aide d’un matériau de suture synthétique résorbable monofilament 1,0, fixez la linea alba avec un motif continu et fixez la couche cutanée avec des agrafes chirurgicales.
Pour mesurer le flux sanguin, connectez les sondes de débit insérées dans le fœtus avec le module de flux périvasculaire à PowerLab et à un ordinateur connecté. Fixez les cathéters artériels et amniotiques à l’amplificateur de pont relié à un convertisseur analogique-numérique. Administrer un bolus d’un millilitre de 10 micromolaires de phényléphrine au fœtus par voie intraveineuse et mesurer le débit carotidien et fémoral pendant 15 minutes.
Attendez ensuite 30 minutes ou jusqu’à ce que le flux sanguin revienne à la normale. Ensuite, perfuser un millilitre de phényléphrine micromolaire dans le cathéter périvasculaire et mesurer le débit sanguin pendant 15 minutes. Lavez la phényléphrine en administrant cinq millilitres de solution saline chaude par le cathéter périvasculaire.
Attendez ensuite 30 minutes ou jusqu’à ce que le flux sanguin revienne à la normale. Cette étude a examiné les effets localisés de la manipulation du flux sanguin chez les fœtus à court terme et prématurés et les moutons. Lors de l’administration d’un millilitre de 10 micromolaires de phényléphrine, un agoniste alpha-1 de l’AR, dans l’espace périvasculaire de l’artère carotide, une réduction significative du flux sanguin carotidien a été observée chez les moutons fœtaux à court terme et le fœtus prématuré sans aucun effet sur la pression artérielle systémique.
À l’inverse, l’administration de phényléphrine par voie intraveineuse a provoqué une augmentation significative du flux sanguin systémique chez les ovins fœtaux à court terme et le fœtus prématuré sans affecter le flux sanguin carotidien. Les résultats ont révélé que les fœtus prématurés ne répondent pas à la régulation du flux sanguin carotidien médiée par la phényléphrine, mais que la réponse est mature chez les fœtus à court terme. Notamment, l’administration intraveineuse de phényléphrine n’a augmenté le flux sanguin carotidien que chez les fœtus prématurés, sans effet significatif chez les fœtus à court terme.
Cependant, l’administration intraveineuse de phényléphrine a augmenté la pression artérielle systémique chez les fœtus prématurés et à court terme. Les résultats démontrent également que l’installation périvasculaire de la phényléphrine n’a pas affecté la pression artérielle systémique. La plus grande prudence doit être prise lors de la dissection contondante pour identifier les vaisseaux et les entailler pour insérer l’extrémité biseautée du cathéter.
L’entaille doit être petite et éviter de couper tout le vaisseau. Cette méthode peut mesurer la contractilité des vaisseaux et le débit sanguin de n’importe quel vaisseau. Il peut également être utilisé pour délivrer des produits chimiques et des vecteurs à proximité de l’organe ou du tissu à cibler.
Cette technique peut être utilisée pour déterminer les changements dans l’autorégulation du flux sanguin cérébral in utero chez un fœtus en développement et cibler n’importe quel gène pour réguler à la hausse ou faire taire la transcription.
