L’article a rapporté l’identification de chimioattractifs de rhizobactéries dans les exsudats racinaires à l’aide d’un test de chimiotaxie amélioré. Les actionnements racinaires implantaires de chimiotaxie sont importants pour la colonisation des racines pour la croissance des plantes, favorisant les bactéries rhizobiques et fournissant les factions utiles des interactions plantes-microbes. De nombreuses méthodes ont été utilisées pour analyser la chimiotaxie bactérienne.
Par exemple, la méthode de la plaque de natation, la méthode de type Cappilaire, le dispositif de glissement microfluidique. Le cycle d’expérience de la méthode de la plaque de natation était long. L’erreur expérimentale de la méthode Cappilary a été lancée, le dispositif de puce à glissement microfluidique est coûteux à expérimenter.
Nous avons établi une méthode simple pour identifier rapidement le chimioattractif qui pourrait induire le mouvement chimiotactique des bactéries favorisant la croissance de la rhizosphère en utilisant des lames de verre stériles sans étapes compliquées. La méthode a réduit l’erreur de comptage des plaques et raccourci le cycle d’expérience. En ce qui concerne l’identification d’une substance chimioattractante, la nouvelle méthode pourrait permettre de gagner 2 à 3 jours et de réduire le coût des matériaux expérimentaux.
Distribuer au hasard les graines de riz dans la culture de la chambre de culture se produit pendant une semaine et ajouter de l’eau stérile deux fois. Sélectionnez les plants de riz de taille similaire et plantez dans un milieu liquide de 50 millilitres de Mme. Incuber pendant 48 heures à 22 degrés Celsius et dans des conditions septiques.
Les exsudats de racine de riz seront libérés dans le milieu Ms. L’analyse par spectrométrie de masse par chromatographie liquide a été réalisée à l’aide du système UHPLC. Préparez une solution aqueuse chimioattractante pour vous assurer qu’elle est stérile.
Filtrer la solution chimioattractante avec un filtre bactérien de 0,22 micromètre. La solution aqueuse chimioattractante était la seule substance obtenue à partir des études LCMS dissoute dans l’eau. La solution d’acide Citrix a été utilisée comme exemple.
Toutes les actions doivent être effectuées sur le côté de la lampe. Marquez la position médiane de la glissière de verre à un intervalle de 1 centimètre. Assurez-vous que la lame de verre est stérilisée plusieurs fois sur la flamme.
À la solution de chimioattractif de 30 microlitres à gauche de la lame de verre, assurez-vous que les bactéries ont été cultivées au stade logarithmique. Ajouter la solution bactérienne de 30 microlitres à droite de la lame de verre. Stériliser la boucle d’inoculation plusieurs fois sur la flamme à l’aide de la boucle d’inoculation pour connecter la solution aqueuse chimioattractante à la solution bactérienne et la maintenir à température ambiante pendant 20 minutes sur un banc propre.
Après 20 minutes, déconnectez la ligne de connexion avec du papier filtre. Assurez-vous que le tube centrifugé de 1,5 millilitre est stérile. Recueillir la solution aqueuse chimioattractante à gauche de la lame de verre.
Transférer la solution dans le tube centrifuge stérile de 1,5 millilitre. Ajouter le volume approprié du colorant frontal de la cellule au tube centrifugé. Après 2 minutes, collectez les liquides manquants pour le comptage des bactéries et l’observation microscopique avec une chambre de comptage sanguin.
Déterminez le nombre de micro-organismes viables attirés à l’aide d’une équation suivante. Un RCI plus élevé indique une forte réaction au chimioattractif. Les résultats ont indiqué que l’acide citrique et l’acide caféique ont les indices de chimiotaxie les plus élevés.
Les résultats de la nouvelle méthode de dosage de la chimiotaxie ont écrit que la concentration bactérienne d’acide citrique, d’acide caféique et de galactose était significativement plus élevée que celle du groupe témoin et du témoin positif. L’acide citrique a écrit la chimiotaxie la plus forte. Les résultats expérimentaux étaient en accord avec les résultats des méthodes traditionnelles.
Ce protocole vidéo peut être présenté comme une ressource précieuse pour clarifier les interactions plantes-microbes.
