Name: stenosis of the inferior vena cava: a murine model of deep vein thrombosis
Uploaded: 2017-12-22T13:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 37 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Stenosis of the Inferior Vena Cava: A Murine Model of Deep Vein Thrombosis at JoVE.com

Ce travail a été soutenu par la Fondation britannique de cardiologie (PG/13/60/30406) et l’Université de Birmingham.

Toutes les procédures d’animaux ont été approuvés par l’organe d’examen éthique des bien-être Animal et le Home Office du Royaume-Uni (UK, projet licence 40/3745). Souris sur fond de C57BL/6, 8-12 semaines vieux, 19-25 g de poids corporel, des deux sexes sont utilisés.
1. animal anesthésie
<ol>
	<li>Placez une souris dans une chambre à induction et d’induire l’anesthésie par un mélange de 5 % isoflurane avec 100 % d’oxygène. Utiliser un débit de 0,5 L/min. Attendez que la souris complètement s’immobilise et sa fréquence de la respiration se fait rare.</li>
	<li>Retirer la souris de la chambre et raser l’abdomen avec une tondeuse électrique. Enlever les poils de l’abdomen aussi complètement que possible pour éviter la contamination de la cavité abdominale.</li>
	<li>Placer la souris en décubitus dorsal et nez de souris dans un cône lié au système de l’anesthésie. Diminuer le pourcentage d’isoflurane à 2-3 % (le pourcentage exact peut varier légèrement d’un animal à l’autre). Assurez-vous que l’animal dort avec sa fréquence respiratoire étant inférieure à l’habituel, mais en évitant le halètement. En cas de halètement, diminuer le pourcentage d’isoflurane de 0,5 %.
	<ol>
		<li>Vérifier le réflexe de pédale pour confirmer anesthetization bonne et marche chirurgie que si elle est négative. Pommade de vétérinaire sur les yeux pour prévenir le dessèchement.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Appliquer une solution anti-bactéricide (1 % Hibitane) sur l’abdomen de la souris et essuyer la zone à l’aide d’un coton stérile bourgeon de manière à l’exclusion de recontamination potentielle du site chirurgical (par exemple, l’intérieur vers l’extérieur de façon circulaire). Répéter 3 fois.</li>
</ol>
2. application de la sténose de l’IVC et le rétablissement de la souris
Remarque : Tous les instruments aussi bien comme matériaux (cotons-tiges, gaze, une solution saline etc.) entrer en contact avec la zone de chirurgie doit être stérile. L’opérateur doit frotter vers le haut avant la chirurgie et porter des gants stériles et une blouse au cours de la procédure. Poignées de microscope doivent être emballées dans une feuille stérile.
<ol>
	<li>Donne souris un traitement anti-douleur avant l’opération et Pendant toute la période expérimentale. Par exemple, utiliser la buprénorphine 0,1 mg/kg par voie sous-cutanée de 30 min avant la chirurgie et puis toutes les 12 heures jusqu'à ce que l’animal est euthanasié. Comme thrombose dans cette méthode se développe de la même façon à une inflammation stérile, évitez d’utiliser des anti-inflammatoires non stéroïdiens comme une prémédication.</li>
	<li>Couvrir la souris avec un drap stérile et faire un trou dans le drap pour exposer le site de la chirurgie. À l’aide de ciseaux, faire une incision le long de la ligne médiane abdominale, 1,5 cm vers le bas du sternum. En utilisant les cotons-tiges extérioriser les intestins sur le côté gauche de la souris et recouvrez-les avec de la gaze stérile imbibée d’une solution saline tiède (37 ° C) pour éviter le dessèchement.</li>
	<li>Identifier la VCI et ses branches latérales (il peut y avoir 0, 1 ou 2 d'entre eux) en direction caudale sur le site de la fusion de la VCI avec la veine rénale gauche. Ligaturer toutes les branches de côté visible avec sutures inertes prolène 7-0 comme à proximité de la VCI que possible.
	<ol>
		<li>Essayez de ne pas tenir les branches secondaires avec la pince directement, mais plutôt tirer eux tenant le tissu graisseux qui les entourent avec une pince dans une main et faire un tunnel sous la branche avec une pince dans l’autre main. Ne fermez pas les branches dos.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Tissus environnants en tenant avec une pince, tirez la IVC vers le haut et à gauche, produisant des tensions dans le petit secteur entre l’IVC et l’aorte exactement à l’angle entre la VCI et la veine rénale gauche. Tenir compte du fait qu’il est pratiquement impossible de séparer l’aorte de l’IVC même 2-3 mm ci-dessous (en direction caudale).</li>
	<li>En utilisant les mouvements divergents avec embouts de pinces dans votre main droite faire un trou entre l’aorte et la VCI. Gardez à l’esprit que les mouvements plus fait, plus les chances d’endommager le bateau. Idéalement, essayez de réduire au minimum le nombre de mouvements à 3-5.</li>
	<li>Préparer un morceau de suture de prolène inerte 7-0 d’environ 2 cm de long. Placez-le dans la cavité péritonéale de la souris sur le côté gauche de l’opérateur à proximité de la VCI.</li>
	<li>La VCI tirer vers le haut et à gauche à nouveau. Insérez vos conseils bonne pince dans le trou entre l’aorte et la VCI afin que les pointes apparaissent sur l’autre côté de la VCI. Prendre la suture et tirez de nouveau dans le trou (Figure 3A).</li>
	<li>Faire un noeud provisoire avec la suture mais ne le fermez pas. Placer l’aiguille 30G (« cales ») plié comme un crochet dans le noeud et le fermer maintenant (Figure 3B).</li>
	<li>Retirer l’entretoise (Figure 3C).</li>
	<li>Retourner les intestins vers la cavité péritonéale avec un coton IUN et répartissez-les également dedans.</li>
	<li>Péritoine étroite avec suture vicryl de 6-0 à l’aide de boucles continues. Fermer les boucles de la premières et la dernières sous un noeud.</li>
	<li>Peau de fermeture à l’aide d’agrafes métalliques.</li>
	<li>Injecter la souris avec 0,5 mL de tiède (37 ° C) physiologique de glucose par voie sous-cutanée pour rétablir l’équilibre liquide de l’organisme.</li>
	<li>Placez la souris dans une cage individuelle dans une chambre chaude (25 ° C) ou du local et mettre de la nourriture et gel de l’eau à l’intérieur de la cage. Observer jusqu'à ce que la souris est complètement rétablie (en général, environ 1 h).</li>
</ol>

<ol>
	<li>Heit, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+epidemiology+of+venous+thromboembolism+in+the+community.">The epidemiology of venous thromboembolism in the community.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 28 (3), 370-372 (2008).</li><li>Huang, W., Goldberg, R. J., Anderson, F. A., Kiefe, C. I., Spencer, F. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Secular+trends+in+occurrence+of+acute+venous+thromboembolism:+the+Worcester+VTE+study+(1985-2009).">Secular trends in occurrence of acute venous thromboembolism: the Worcester VTE study (1985-2009).</a> Am J Med. 127 (9), 829-839 (2014).</li><li>House of Commons Health Care Committee. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Prevention+of+Venous+Thromboembolism+in+Hospitalised+patients.">The Prevention of Venous Thromboembolism in Hospitalised patients.</a> The House of Commons. , (2005).</li><li>Kuipers, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Travel+and+venous+thrombosis:+a+systematic+review.">Travel and venous thrombosis: a systematic review.</a> J Intern Med. 262 (6), 615-634 (2007).</li><li>Lopez, J. A., Chen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathophysiology+of+venous+thrombosis.">Pathophysiology of venous thrombosis.</a> Thromb Res. 123, 30-34 (2009).</li><li>Brill, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=von+Willebrand+factor-mediated+platelet+adhesion+is+critical+for+deep+vein+thrombosis+in+mouse+models.">von Willebrand factor-mediated platelet adhesion is critical for deep vein thrombosis in mouse models.</a> Blood. 117 (4), 1400-1407 (2011).</li><li>Payne, H., Ponomaryov, T., Watson, S. P., Brill, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mice+with+a+deficiency+in+CLEC-2+are+protected+against+deep+vein+thrombosis.">Mice with a deficiency in CLEC-2 are protected against deep vein thrombosis.</a> Blood. 129 (14), 2013-2020 (2017).</li><li>Brill, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neutrophil+extracellular+traps+promote+deep+vein+thrombosis+in+mice.">Neutrophil extracellular traps promote deep vein thrombosis in mice.</a> J Thromb Haemost. 10 (1), 136-144 (2012).</li><li>von Bruhl, M. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monocytes,+neutrophils,+and+platelets+cooperate+to+initiate+and+propagate+venous+thrombosis+in+mice+in+vivo.">Monocytes, neutrophils, and platelets cooperate to initiate and propagate venous thrombosis in mice in vivo.</a> J Exp Med. 209 (4), 819-835 (2012).</li><li>Sevitt, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+structure+and+growth+of+valve-pocket+thrombi+in+femoral+veins.">The structure and growth of valve-pocket thrombi in femoral veins.</a> J Clin Pathol. 27 (7), 517-528 (1974).</li><li>Witsch, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+hollow+and+perforated+flexible+wire+allows+the+safe+and+effective+local+application+of+thrombolytic+therapy+in+a+mouse+model+of+deep+vein+thrombosis.">A novel hollow and perforated flexible wire allows the safe and effective local application of thrombolytic therapy in a mouse model of deep vein thrombosis.</a> J Thromb Thrombolysis. 37 (4), 450-454 (2014).</li><li>Shaya, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+the+effect+of+dabigatran+and+dalteparin+on+thrombus+stability+in+a+murine+model+of+venous+thromboembolism.">Comparison of the effect of dabigatran and dalteparin on thrombus stability in a murine model of venous thromboembolism.</a> J Thromb Haemost. 14 (1), 143-152 (2016).</li><li>Ni, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Persistence+of+platelet+thrombus+formation+in+arterioles+of+mice+lacking+both+von+Willebrand+factor+and+fibrinogen.">Persistence of platelet thrombus formation in arterioles of mice lacking both von Willebrand factor and fibrinogen.</a> J Clin Invest. 106 (3), 385-392 (2000).</li><li>Wrobleski, S. K., Farris, D. M., Diaz, J. A., Myers, D. D., Wakefield, T. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+complete+stasis+model+of+inferior+vena+cava+thrombosis.">Mouse complete stasis model of inferior vena cava thrombosis.</a> J Vis Exp. (52), (2011).</li><li>Diaz, J. A., Farris, D. M., Wrobleski, S. K., Myers, D. D., Wakefield, T. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inferior+vena+cava+branch+variations+in+C57BL/6+mice+have+an+impact+on+thrombus+size+in+an+IVC+ligation+(stasis)+model.">Inferior vena cava branch variations in C57BL/6 mice have an impact on thrombus size in an IVC ligation (stasis) model.</a> J Thromb Haemost. 13 (4), 660-664 (2015).</li><li>Siefert, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhanced+venous+thrombus+resolution+in+plasminogen+activator+inhibitor+type-2+deficient+mice.">Enhanced venous thrombus resolution in plasminogen activator inhibitor type-2 deficient mice.</a> J Thromb Haemost. 12 (10), 1706-1716 (2014).</li><li>Schulz, C., Engelmann, B., Massberg, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Crossroads+of+coagulation+and+innate+immunity:+the+case+of+deep+vein+thrombosis.">Crossroads of coagulation and innate immunity: the case of deep vein thrombosis.</a> J Thromb Haemost. 11, 233-241 (2013).</li><li>Day, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Macrovascular+thrombosis+is+driven+by+tissue+factor+derived+primarily+from+the+blood+vessel+wall.">Macrovascular thrombosis is driven by tissue factor derived primarily from the blood vessel wall.</a> Blood. 105 (1), 192-198 (2005).</li><li>Diaz, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impaired+fibrinolytic+system+in+ApoE+gene-deleted+mice+with+hyperlipidemia+augments+deep+vein+thrombosis.">Impaired fibrinolytic system in ApoE gene-deleted mice with hyperlipidemia augments deep vein thrombosis.</a> J Vasc Surg. 55 (3), 815-822 (2012).</li><li>Zhou, J., May, L., Liao, P., Gross, P. L., Weitz, J. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inferior+vena+cava+ligation+rapidly+induces+tissue+factor+expression+and+venous+thrombosis+in+rats.">Inferior vena cava ligation rapidly induces tissue factor expression and venous thrombosis in rats.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 29 (6), 863-869 (2009).</li><li>Diaz, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrolytic+inferior+vena+cava+model+(EIM)+of+venous+thrombosis.">Electrolytic inferior vena cava model (EIM) of venous thrombosis.</a> J Vis Exp. (53), e2737 (2011).</li><li>Diaz, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+electrolytic+inferior+vena+cava+model+(EIM)+to+study+thrombogenesis+and+thrombus+resolution+with+continuous+blood+flow+in+the+mouse.">The electrolytic inferior vena cava model (EIM) to study thrombogenesis and thrombus resolution with continuous blood flow in the mouse.</a> Thromb Haemost. 109 (6), 1158-1169 (2013).</li><li>Brill, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extrahepatic+high-density+lipoprotein+receptor+SR-BI+and+apoA-I+protect+against+deep+vein+thrombosis+in+mice.">Extrahepatic high-density lipoprotein receptor SR-BI and apoA-I protect against deep vein thrombosis in mice.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 32 (8), 1841-1847 (2012).</li><li>Diaz, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Critical+review+of+mouse+models+of+venous+thrombosis.">Critical review of mouse models of venous thrombosis.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 32 (3), 556-562 (2012).</li><li>Brandt, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deep+vein+thrombus+formation+induced+by+flow+reduction+in+mice+is+determined+by+venous+side+branches.">Deep vein thrombus formation induced by flow reduction in mice is determined by venous side branches.</a> Clin Hemorheol Microcirc. 56 (2), 145-152 (2014).</li><li>Geddings, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Strengths+and+weaknesses+of+a+new+mouse+model+of+thrombosis+induced+by+inferior+vena+cava+stenosis:+communication+from+the+SSC+of+the+ISTH.">Strengths and weaknesses of a new mouse model of thrombosis induced by inferior vena cava stenosis: communication from the SSC of the ISTH.</a> J Thromb Haemost. 12 (4), 571-573 (2014).</li><li>Alvarado, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Male+mice+have+increased+thrombotic+potential:+sex+differences+in+a+mouse+model+of+venous+thrombosis.">Male mice have increased thrombotic potential: sex differences in a mouse model of venous thrombosis.</a> Thromb Res. 127 (5), 478-486 (2011).</li></ol>

Les auteurs n’ont rien à divulguer.

Ici, un protocole de la sténose de l’IVC, qui imite la distorsion de flux de sang, un facteur majeur de déclenchement pour thrombose veineuse profonde, est présenté. Sténose de l’IVC induit le développement de thrombi dans 65 à 100 % des souris C57BL/6 sous 48 h et 25 à 50 % des souris au sein de 2 à 6 h6,8,23 (Brill A, données non publiées, 2016). Une limitation majeure de la méthode est la variabilité des thrombus taille24 (Figure 4), qui est observée une fois à court terme (6 h) et une sténose (48 h) IVC à long terme. Les raisons de cette variabilité (étant donné que les mêmes conditions, telles que l’entretoise, anesthésie, etc., sont utilisés) demeurent obscurs, mais on peut supposer qu’anatomique des variations entre les souris (par exemple, largeur de l’IVC, le nombre et la localisation de côté et arrière branches) sous-tendent ce phénomène. La variabilité de la taille du thrombus rend la prévalence (% des souris avec un thrombus) de thrombose le résultat principal. Prévalence de la thrombose peut être comparée à l’aide d’un tableau de contingence et le test exact de Fisher. Une des expériences était une exception lorsque le thrombus réduit la taille avec la même fréquence de thrombose après que injection d’anticorps inhibant la podoplanin a été observée à 7.
Cette méthode est particulièrement utile lors de l’initiation de la thrombose veineuse est étudiée. Il permet d’enquêter sur les événements précoces dans la paroi des vaisseaux, tels que le recrutement des cellules, menant finalement à la thrombose. Pro - ou anti - thrombotic les effets des médicaments peuvent être évaluées à l’aide de ce modèle avec une prévalence de thrombose étant un affichage primaire. Sténose pendant 48 h est applicable pour révéler un phénotype anti-thrombotiques, alors que la sténose 6 h peut être utilisée si un phénotype prothrombotique est attendu. L’analyse histologique du thrombus et mur d’enceinte IVC peut également être effectuée.
La question de savoir si côté branches doit être ligaturé ou laissé brevet reste ouverte. Un groupe a montré que la ligature des branches latérales n’augmente pas la taille du thrombus et emplacement d’une branche latérale moins de 1,5 mm sur le site de ligature IVC altère considérablement thrombus développement25. Fermeture de branches latérales peut induire des lésions endothéliales dedans et aussi augmenter le temps de la chirurgie,26. Dans nos mains, absence de fermeture de succursales de côté diminue substantiellement la prévalence de thrombose (jusqu'à 10 à 30 % après une sténose 48 h ; Brill, inédit) et par conséquent nous ligaturer toutes les branches de côté visible.
Idéalement, les témoins de la même portée doivent être utilisés comme souris, même sur le fond même, mais provenant de différentes sources peuvent avoir prévalence légèrement différente de la thrombose. Si on étudie l’effet des TVP elle-même sur tous les paramètres (par exemple, biochimique), les animaux opérés doivent être utilisés. Opérés souris subissent la même procédure mais la constriction de la VCI est fermée sans serrer et laissée là sans produire une sténose.
L’erreur plus fréquente (une étape critique) dans le présent protocole est un effort pour séparer l’aorte et la VCI pas précisément à l’angle entre les navires mais légèrement plus faible, qui se traduit généralement par des saignements. Lorsqu’une hémorragie massive se produit, belle remontée de la souris devient improbable et il est recommandé d’arrêter l’expérience et euthanasier l’animal. Normalement, les souris récupèrent bien, se déplacent à l’intérieur de la cage et ne perdent pas beaucoup de poids. Nous vous recommandons d’utiliser la souris au-dessus de 20 g pour les mâles et les femelles et de garder des animaux (surtout les mâles) dans des cages individuelles après la chirurgie jusqu'à la fin de l’expérience afin d’éviter des combats et des blessures. Il a été signalé dans un autre modèle (électrolytique) de thrombose veineuse profonde que les souris mâles produisent des thrombus plus grands que les femelles27. Analyse de nos données n’a pas révélé une différence substantielle dans la prévalence de la thrombose entre des souris mâles et femelles (Brill, inédit). Par conséquent, les chercheurs sont encouragés à effectuer des expériences en utilisant le modèle de sténose IVC sur des souris des deux sexes.
Détricotage des sutures ou des agrafes ne peut pas être exclue des expériences longues en particulier (une semaine et plus). Ainsi, la souris doivent être vérifiées au moins deux fois par jour spécialement pour l’intégrité de la suture et une attention particulière devrait être portée à l’apparition de traces de sang sur la litière de la cage.
Il est à noter que, comme tous les autres modèles animaux, sténose de l’IVC a ses limites en termes de traduction dans les humains. Par exemple, murins IVCs n’ont pas de valves, tandis que DVT humaine se développe à l’intérieur des valves veineuses. En outre, les humains ont orientation verticale de la colonne vertébrale avec la pompe musculaire étant une accélération du flux sanguin dans les veines mécanisme important. En revanche, les souris ont une orientation horizontale et la colonne vertébrale avec aucun rôle de la pompe musculaire pour soutenir le retour au cœur de sang. Ces limites devraient considérer lors de la conversion des données de souris de la maladie humaine.

Thrombose veineuse profonde (TVP) est le développement du thrombus dans les veines profondes, habituellement (mais pas seulement) dans les jambes. En conjonctions avec embolie pulmonaire (PE ; désignées ensemble en tant que maladie thromboembolique veineuse, TEV) il se développe à environ 900 000 Américains chaque année et représente un grave problème de santé et un problème économique1,2. PE, une complication de la TVP, se produit quand un thrombus est détaché de son emplacement initial et atteint les poumons, ce qui peuvent causer la mort et une insuffisance respiratoire. Le nombre de morts de VTE dépasse la mortalité due au sida, accidents de breast cancer et trafic, combiné3.
Le principal facteur causant DVT outre connu des raisons, comme le cancer ou un traumatisme, est le manque de mobilité 4,5. Cela peut résulter de la chirurgie (orthopédique en particulier), de paralysie, de vols longs-courriers ou d’autres raisons. La circulation sanguine dans les veines dépend de la pompe musculaire et donc résultats d’immobilisation du membre dans le sang stagnant coulent dans les valvules veineuses, qui mène à la thrombose. La méthode décrite ici vise à récapituler ces sang débit distorsion6,7. Restriction de flux partiel dans la veine cave inférieure (VCI) imite les conditions créées dans les valvules veineuses humaines et conduit à la formation d’un thrombus une structure semblable à des thrombi humaine6. Une partie importante d’un thrombus est rouge et se compose d’incorporation de plaquettes, de fibrine et de globules rouges. Thrombus ont un petit « cadre blanc » enrichi en plaquettes (Figure 1), qui ressemblent à des « lignes de Zahn », décrits dans le thrombus veineux humains. Les deux parties du thrombus contiennent aussi des neutrophiles8, qui sont parmi les premières cellules à recruter sur le site de thrombus future6,9. Neutrophiles dans la partie rouge expulseront pièges extracellulaires neutrophiles (filets), alors que les neutrophiles dans la partie blanche semblent être dépourvus de filets8. De même à la thrombose veineuse profonde, thrombose chez la souris est accompagnée de niveaux de D-dimères plasmatiques élevées (Figure 2). Héparine de bas poids moléculaire (énoxaparine), utilisé pour la prophylaxie de la thrombose veineuse profonde chez les patients, empêche également la thrombose chez la souris. Un avantage important de cette méthode est absence de dénudation endothéliale9, qui est caractéristique de l’humain DVT10. Cette caractéristique rend la sténose IVC un modèle plus cliniquement pertinent de thrombose veineuse profonde que, par exemple, l’induction de la thrombose par le chlorure ferrique, qui induit une dénudation endothéliale et dans lequel des thrombi se composent principalement de plaquettes11, 12,,13. Un modèle de stase complète dans la VCI est préféré par plusieurs équipes14,15,16. Contrairement à une sténose, dans lequel le débit résiduel est maintenue dans le vaisseau, application de stase s’arrête complètement la circulation et limitant ainsi l’accessibilité des substances administrées systématiquement sur le site de thrombose. En outre, il semble que les mécanismes qui sous-tendent la thrombose induite par la sténose et de stase sont différents : sténose entraîne le développement de l’inflammation locale (activation de l’endothélium, la libération du contenu de corps de Weibel-Palade, le recrutement des cellules immunitaires et plaquettes de la paroi des vaisseaux) causant des « immunothrombosis »6,9,17, alors que la stase semble plutôt thrombose issu, en particulier, facteur tissulaire et autre coagulation et les mécanismes axés sur la fibrinolyse18,19,20. Ainsi, les modèles de la sténose et stase reflètent légèrement différents aspects du développement de thrombus veineux, bien que leurs mécanismes peuvent certainement se chevaucher. Modèle IVC électrolytique (EIM) de thrombose veineuse profonde21,22 induit un thrombus obstruant partiellement la paroi des vaisseaux. Par conséquent, il est commode pour tester les effets de l’administration systémique de médicaments différents sur la croissance de thrombus. Ce modèle, suppose Toutefois, perturbation de l’intégrité de mur IVC (insertion d’une aiguille) et l’induction de la thrombose par courant électrique faisant la pertinence physiopathologique de ce mécanisme au moins contestable.

<table><tbody><tr><td>C57BL/6 mice</td><td>Charles River</td><td></td><td>8 - 10 weeks old, bothe genders</td></tr><tr><td>Scissors</td><td>WPI</td><td>15922</td><td></td></tr><tr><td>Scissors</td><td>WPI</td><td>14003</td><td></td></tr><tr><td>Dumont 5/45 forceps</td><td>FST</td><td>11251-35</td><td></td></tr><tr><td>7-0 Prolene suture</td><td>Ethicon</td><td>W8725</td><td></td></tr><tr><td>6-0 Vicryl suture</td><td>Ethicon</td><td>W9981</td><td></td></tr><tr><td>Cotton buds</td><td>Spar</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Millswabs sterile&amp;nbsp;</td><td>Millpledge veterinary&amp;nbsp;</td><td>611950</td><td></td></tr><tr><td>Drapes</td><td>Kruuse</td><td>141765</td><td></td></tr><tr><td>Glucose Saline-Aqupharm3</td><td>Animal Care</td><td>XVD589</td><td></td></tr><tr><td>Clear H&lt;span class=&quot;font6&quot;&gt;&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;&lt;/span&gt;&lt;span class=&quot;font5&quot;&gt;0 HydroGel 98% sterile water&amp;nbsp;&lt;/span&gt;</td><td>Clearh2o</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Buprenorphine</td><td>National Veterinary Supplies</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane vaporizer</td><td>General Anaesthetic Services</td><td></td><td></td></tr><tr><td>IsoFlo 100% W/W inhalation vapour, liquid</td><td>National Veterinary Supplies</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sterilizer Steri350</td><td>Inotech</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Microscope Olympus SZX10</td><td>Olympus</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

stenosis of the inferior vena cava: a murine model of deep vein thrombosis

Profonde veineuse thrombose (TVP) et sa complication dévastatrice, embolie pulmonaire, constituent un problème de santé grave avec une mortalité élevée. Mécanismes de formation de thrombus dans les veines restent obscures. Manque de mobilité (par exemple, après une intervention chirurgicale ou les vols longs-courriers) est l’un des principaux facteurs conduisant à la thrombose veineuse profonde. Les conséquences physiopathologiques de l’absence de mobilité sont la stagnation de flux sanguin dans les valvules veineuses. Un modèle est décrit ici, qui imite ces perturbations de flux comme un facteur de thrombose au volant. Dans ce modèle, la restriction de flux partiel (sténose) dans la veine cave inférieure (VCI) est créée. Fermeture d’environ 90 % de la lumière IVC pendant 48 h traduit par développement de thrombi structurellement semblables à ceux des humains. Les similitudes sont : i) la plupart du volume thrombus est rouge, c'est-à-dire, se compose de globules rouges et fibrine, ii) la présence d’une partie blanche (lignes de Zahn), monocouche endothéliale iii) non dénudées, iv) des D-dimères plasmatiques et v) possibilité de prévenir thrombose de l’héparine de faible poids moléculaire. Limitations incluent la taille variable des thrombus et le fait qu’un certain pourcentage de souris de type sauvage (0 - 35 %) ne peut pas produire un thrombus. Outre l’observation visuelle et la mesure, thrombus peuvent être visualisés par technologies non invasives, telles que l’échographie, qui permet de contrôler la dynamique de développement de thrombus. Aux périodes plus courtes (1 à 6 h), la microscopie intravitale peut s’appliquer pour observer directement les événements (par exemple, le recrutement des cellules de la paroi des vaisseaux) précédant la formation du thrombus. Utilisation de cette méthode par plusieurs équipes dans le monde entier a permis de découvrir les mécanismes de base de l’initiation de la thrombose veineuse profonde et d’identifier des cibles potentielles qui pourraient être bénéfiques pour sa prévention.

Ici, on décrit un modèle de thrombose veineuse profonde induite par la déformation du flux dans la VCI. Induction de la sténose dans la VCI lance distorsion et la stagnation de la circulation sanguine et après un certain temps (dans ce cas, 48 h) traduit par l’élaboration d’un thrombus, structurellement semblables aux humains DVT thrombus (Figure 1A). La présence d’un thrombus à l’intérieur de la VCI est facilement détectable visuellement (Figure 1B). Une similitude importante entre le modèle et la thrombose veineuse profonde humaine est niveaux de D-dimères plasmatiques élevées (Figure 2). D-dimères est un produit de dégradation de la fibrine et sa présence dans le sang indique qu’un processus thrombotique actif se passe.
Le modèle est présenté étape par étape dans la Figure 3A-C. La VCI est soigneusement exposée, fait un trou entre la VCI et l’aorte et une suture (prolène 7-0) est passée à travers le trou sous la VCI. Puis la VCI est ligaturée par la suture sur une entretoise (aiguille de 30G, Figure 3D), après lequel l’entretoise est enlevée. Cette procédure permet d’environ 90 % fermeture du lumen IVC laissant les 10 % restants de brevet. Cela garantit la stagnation de flux sanguin aboutissant à la thrombose.
La figure 4 montre l’inconvénient majeur du modèle, de taille variable de thrombus. Tous ces thrombus ont été obtenus dans la même expérience effectuée sur des souris mâles type sauvage du même origine, âge et poids similaires. Bien que toutes les souris produit thrombus (prévalence de thrombose de 100 %), leur taille varie nettement dans un large éventail.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56697/56697fig1.jpg"> 
Figure 1 : Représentant thrombus après 48 h restriction/sténose. (A) un thrombus typique après 48 h IVC sténose. Note rouge (enrichie en globules rouges) et les parties blanches (enrichi en plaquettes). (B) IVC avec (de gauche) ou sans (à droite) un thrombus. Barreaux de l’échelle = 2 mm. <a href="//ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56697/56697fig1large.jpg" target="_blank">s’il vous plaît cliquez ici pour visionner une version agrandie de cette figure.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56697/56697fig2.jpg"> 
Figure 2 : Élevée des D-dimères plasmatiques après application de sténose IVC. Souris ont été soumises à une sténose IVC. Sang a été prise à des points de l’heure indiquée, 1:9 stabilisé avec 3,8 % citrate de sodium, plasma a été préparé par centrifugation (2 300 x g, 5 min) et D-dimères ont été déterminées par un kit ELISA conformément aux instructions du fabricant. Cercles désignent souris opérés, croisements désignent une sténose IVC. <a href="//ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56697/56697fig2large.jpg" target="_blank">S’il vous plaît cliquez ici pour visionner une version agrandie de cette figure.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56697/56697fig3.jpg"> 
Figure 3 : Flow restriction/sténose dans le modèle de la veine cave inférieure (VCI) de thrombose veineuse profonde chez les souris. Les phases successives du modèle sont présentés. (A) un trou entre l’aorte et de la VCI est fait et une suture est tirée dedans autour de la VCI. (B), un noeud est fermé sur une entretoise (aiguille 30 G). (C) l’entretoise est supprimée : avis final que le chirurgien voit avant de fermer la souris. La ligne pointillée jaune délimite la VCI. LRV est synonyme de la veine rénale gauche. Barreaux de l’échelle = 0,2 mm ; D l’entretoise (aiguille 30 G). Barreaux de l’échelle = 2 mm. <a href="//ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56697/56697fig3large.jpg" target="_blank">s’il vous plaît cliquez ici pour visionner une version agrandie de cette figure.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56697/56697fig4.jpg"> 
Figure 4 . Variabilité de la taille du thrombus. Souris ont été soumises à une sténose IVC 48 h. Présentés sont des thrombi obtenus dans la même expérience. Barres d’échelle de 2 mm. <a href="//ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56697/56697fig4large.jpg" target="_blank">s’il vous plaît cliquez ici pour visionner une version agrandie de cette figure.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Stenosis of the Inferior Vena Cava: A Murine Model of Deep Vein Thrombosis at JoVE.com

Stenosis of the Inferior Vena Cava: A Murine Model of Deep Vein Thrombosis

Nous décrivons ici la sténose de la veine cave inférieure dans un modèle murin de la thrombose veineuse profonde. Ce modèle reprend la restriction du flux sanguin, un des principaux déclencheurs de thrombose veineuse profonde chez les humains.

Sténose de la veine cave inférieure : un modèle murin de la thrombose veineuse profonde

Deep vein thrombosis (DVT) and its devastating complication, pulmonary embolism, are a severe health problem with high mortality. Mechanisms of thrombus ...

stenosis-inferior-vena-cava-murine-model-deep-vein

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

23.9K vues.  University of Birmingham. Nous décrivons ici la sténose de la veine cave inférieure dans un modèle murin de la thrombose veineuse profonde. Ce modèle reprend la restriction du flux sanguin, un des principaux déclencheurs de thrombose veineuse profonde chez les humains.

Vidéo: Stenosis of the Inferior Vena Cava: A Murine Model of Deep Vein Thrombosis

Murine Model of CD40-activation of B cells

Research on B cells has shown that CD40 activation improves their antigen presentation capacity. When stimulated with interleukin-4 and CD40 ligand (CD40L), human B cells can be expanded without difficulties from small amounts of peripheral blood within 14 days to very large amounts of highly-pure CD40-B cells (&gt;109 cells per patient) from healthy donors as well as cancer patients1-4. CD40-B cells express important lymph node homing molecules and can attract T cells in vitro5. Furthermore they efficiently take up, process and present antigens to T cells6,7. CD40-B cells were shown to not only prime na&iacute;ve, but also expand memory T cells8,9. Therefore CD40-activated B cells (CD40-B cells) have been studied as an alternative source of immuno-stimulatory antigen-presenting cells (APC) for cell-based immunotherapy1,5,10. In order to further study whether CD40-B cells induce effective T cell responses in vivo and to study the underlying mechanism we established a cell culture system for the generation of murine CD40-activated B cells. Using splenocytes or purified B cells from C57BL/6 mice for CD40-activation, optimal conditions were identified as follows: Starting from splenocytes of C57BL/6 mice (haplotype H-2b) lymphocytes are purified by density gradient centrifugation and co-cultured with HeLa cells expressing recombinant murine CD40 ligand (tmuCD40L HeLa)11. Cells are recultured every 3-4 days and key components such as CD40L, interleukin-4, -Mercaptoethanol and cyclosporin A are replenished. In this protocol we demonstrate how to obtain fully activated murine CD40-B cells (mCD40B) with similar APC-phenotype to human CD40-B cells (Fig 1a,b). CD40-stimulation leads to a rapid outgrowth and expansion of highly pure (&gt;90%) CD19+ B cells within 14 days of cell culture (Fig 1c,d). To avoid contamination with non-transfected cells, expression of the murine CD40 ligand on the transfectants has to be controlled regularly (Fig 2). Murine CD40-activated B cells can be used to study B-cell activation and differentiation as well as to investigate their potential to function as APC in vitro and in vivo. Moreover, they represent a promising tool for establishing therapeutic or preventive vaccination against tumors and will help to answer questions regarding safety and immunogenicity of this approach12.

In this video, we demonstrate the procedure of CD40-activation and expansion of murine B cells from splenocytes of C57BL/6 mice, which can be used as a model antigen-presenting cell (APC) to study induction of immunity.

Modèle murin de CD40-activation des cellules B

Research on B cells has shown that CD40 activation improves their antigen presentation capacity. When stimulated with interleukin-4 and CD40 ligand ...

Recherche

Immunologie et infection

Electrolytic Inferior Vena Cava Model (EIM) of Venous Thrombosis

Animal models serve a vital role in deep venous thrombosis (DVT) research in order to study thrombus formation, thrombus resolution and to test potential therapeutic compounds (1). New compounds to be utilized in the treatment and prevention of DVT are currently being developed. The delivery of potential therapeutic antagonist compounds to an affected thrombosed vein has been problematic. In the context of therapeutic applications, a model that uses partial stasis and consistently generates thrombi within a major vein has been recently established. The Electrolytic Inferior vena cava Model (EIM) is mouse model of DVT that permits thrombus formation in the presence of continuous blood flow. This model allows therapeutic agents to be in contact with the thrombus in a dynamic fashion, and is more sensitive than other models of DVT (1). In addition, this thrombosis model closely simulates clinical situations of thrombus formation and is ideal to study venous endothelial cell activation, leukocyte migration, venous thrombogenesis, and to test therapeutic applications (1). The EIM model is technically simple, easily reproducible, creates consistent thrombi sizes and allows for a large sample (i.e. thrombus and vein wall) which is required for analytical purposes.

Electrolytic Inferior Vena Cava Model EIM of Venous Thrombosis

The electrolytic induction of endothelial activation to the internal surface of the Inferior Vena Cava results in venous type thrombus formation due to endothelial activation and partial blood stasis, two components of Virchow's triad.

Électrolytique veine cave inférieure Modèle (EIM) de la thrombose veineuse

Animal models serve a vital role in deep venous thrombosis (DVT) research in order to study thrombus formation, thrombus resolution and to test potential ...

Médecine

Mouse Complete Stasis Model of Inferior Vena Cava Thrombosis

Venous thromboembolism (VTE) includes both deep vein thrombosis (DVT) and pulmonary embolism (PE). In the United States (U.S.), the high morbidity and mortality rates make VTE a serious health concern 1-2. After heart disease and stroke, VTE is the third most common vascular disease 3. In the U.S. alone, there is an estimated 900,000 people affected each year, with 300,000 deaths occurring annually 3. A reliable in vivo animal model to study the mechanisms of this disease is necessary.
The advantages of using the mouse complete stasis model of inferior vena cava thrombosis are several. The mouse model allows for the administration of very small volumes of limited availability test agents, reducing costs dramatically. Most promising is the potential for mice with gene knockouts that allow specific inflammatory and coagulation factor functions to be delineated. Current molecular assays allow for the quantitation of vein wall, thrombus, whole blood, and plasma for assays. However, a major concern involving this model is the operative size constraints and the friability of the vessels. Also, due to the small IVC sample weight (mean 0.005 grams) it is necessary to increase animal numbers for accurate statistical analysis for tissue, thrombus, and blood assays such as real-time polymerase chain reaction (RT-PCR), western blot, enzyme-linked immunosorbent (ELISA), zymography, vein wall and thrombus cellular analysis, and whole blood and plasma assays 4-8.
The major disadvantage with the stasis model is that the lack of blood flow inhibits the maximal effect of administered systemic therapeutic agents on the thrombus and vein wall.

The mouse complete stasis model of inferior vena cava thrombosis yields quantifiable amounts of vein wall tissue and thrombus. It has proven useful for evaluating interactions between the vein wall and the occlusive thrombus and in assessing the progression from acute to chronic inflammation.

Modèle de souris complète stase de la veine cave inférieure thrombose

Venous thromboembolism (VTE) includes both deep vein thrombosis (DVT) and pulmonary embolism (PE).  In the United States (U.S.), the high morbidity and ...

Induction of Graft-versus-host Disease and In Vivo T Cell Monitoring Using an MHC-matched Murine Model

Graft-versus-host disease (GVHD) is the limiting barrier to the broad use of bone marrow transplant as a curative therapy for a variety of hematological deficiencies. GVHD is caused by mature alloreactive T cells present in the bone marrow graft that are infused into the recipient and cause damage to host organs. However, in mice, T cells must be added to the bone marrow inoculum to cause GVHD. Although extensive work has been done to characterize T cell responses post transplant, bioluminescent imaging technology is a non-invasive method to monitor T cell trafficking patterns in vivo. 
Following lethal irradiation, recipient mice are transplanted with bone marrow cells and splenocytes from donor mice. T cell subsets from L2G85.B6 (transgenic mice that constitutively express luciferase) are included in the transplant. By only transplanting certain T cell subsets, one is able to track specific T cell subsets in vivo, and based on their location, develop hypotheses regarding the role of specific T cell subsets in promoting GVHD at various time points. At predetermined intervals post transplant, recipient mice are imaged using a Xenogen IVIS CCD camera. Light intensity can be quantified using Living Image software to generate a pseudo-color image based on photon intensity (red = high intensity, violet = low intensity). 
Between 4-7 days post transplant, recipient mice begin to show clinical signs of GVHD. Cooke et al.1 developed a scoring system to quantitate disease progression based on the recipient mice fur texture, skin integrity, activity, weight loss, and posture. Mice are scored daily, and euthanized when they become moribund. Recipient mice generally become moribund 20-30 days post transplant. 
Murine models are valuable tools for studying the immunology of GVHD. Selectively transplanting particular T cell subsets allows for careful identification of the roles each subset plays. Non-invasively tracking T cell responses in vivo adds another layer of value to murine GVHD models.

Induction of Graft-versus-host Disease and In Vivo T Cell Monitoring Using an MHC-matched Murine Model

Murine bone marrow transplantation is a widely used technique to study immunological mechanisms governing graft-versus-host disease in humans. The ability to monitor T cell trafficking patterns in vivo allows for detailed analysis of the development and perpetuation of T cell responses during graft-versus-host disease.

L&#39;induction de la réaction du greffon contre l&#39;hôte et des maladies<em&gt; In Vivo</em&gt; Suivi des lymphocytes T utilisant un modèle murin MHC-apparié

Graft-versus-host disease (GVHD) is the limiting barrier to the broad use of bone marrow transplant as a curative therapy for a variety of hematological ...

Murine Model of Allergen Induced Asthma

Asthma is a major cause of morbidity and mortality, affecting some 300 million people throughout the world.1 More than 8% of the US population has asthma, with the prevalence increasing.2 As with other diseases, animal models of allergic airway disease greatly facilitate understanding of the underlying pathophysiology, help identify potential therapeutic targets, and allow preclinical testing of possible new therapies. Models of allergic airway disease have been developed in several animal species, but murine models are particularly attractive due to the low cost, ready availability, and well-characterized immune systems of these animals.3 Availability of a variety of transgenic strains further increases the attractiveness of these models.4 Here we describe two murine models of allergic airway disease, both employing ovalbumin as the antigen. Following initial sensitization by intraperitoneal injection, one model delivers the antigen challenge by nebulization, the other by intratracheal delivery. These two models offer complementary advantages, with each mimicking the major features of human asthma.5
The major features of acute asthma include an exaggerated airway response to stimuli such as methacholine (airway hyperresponsiveness; AHR) and eosinophil-rich airway inflammation. These are also prominent effects of allergen challenge in our murine models,5,6 and we describe techniques for measuring them and thus evaluating the effects of experimental manipulation. Specifically, we describe both invasive7 and non-invasive8 techniques for measuring airway hyperresponsiveness as well as methods for assessing infiltration of inflammatory cells into the airways and the lung. Airway inflammatory cells are collected by bronchoalveolar lavage while lung histopathology is used to assess markers of inflammation throughout the organ. These techniques provide powerful tools for studying asthma in ways that would not be possible in humans.

Experimental mouse models of allergic asthma offer new possibilities for studying disease pathogenesis and developing new therapeutics. These models are well suited to measuring factors governing the allergic immune response, airway inflammation, and pulmonary pathophysiology.

Modèle murin de l&#39;asthme induit par les allergènes

Asthma is a major cause of morbidity and mortality, affecting some 300 million people throughout the world.1 More than 8% of the US population has asthma, ...

Implantation of Inferior Vena Cava Interposition Graft in Mouse Model

Biodegradable scaffolds seeded with bone marrow mononuclear cells (BMCs) are often used for reconstructive surgery to treat congenital cardiac anomalies. The long-term clinical results showed excellent patency rates, however, with significant incidence of stenosis. To investigate the cellular and molecular mechanisms of vascular neotissue formation and prevent stenosis development in tissue engineered vascular grafts (TEVGs), we developed a mouse model of the graft with approximately 1 mm internal diameter. First, the TEVGs were assembled from biodegradable tubular scaffolds fabricated from a polyglycolic acid nonwoven felt mesh coated with &#949;-caprolactone and L-lactide copolymer. The scaffolds were then placed in a lyophilizer, vacuumed for 24 hr, and stored in a desiccator until cell seeding. Second, bone marrow was collected from donor mice and mononuclear cells were isolated by density gradient centrifugation. Third, approximately one million cells were seeded on a scaffold and incubated O/N. Finally, the seeded scaffolds were then implanted as infrarenal vena cava interposition grafts in C57BL/6 mice. The implanted grafts demonstrated excellent patency (&#62;90%) without evidence of thromboembolic complications or aneurysmal formation. This murine model will aid us in understanding and quantifying the cellular and molecular mechanisms of neotissue formation in the TEVG.

To improve our knowledge of cellular and molecular neotissue formation, a murine model of the TEVG was recently developed. The grafts were implanted as infrarenal vena cava interposition grafts in C57BL/6 mice. This model achieves similar results to those achieved in our clinical investigation, but over a far shortened time-course.

Implantation de veine cave inférieure interposition de greffe en modèle de souris

Biodegradable scaffolds seeded with bone marrow mononuclear cells (BMCs) are often used for reconstructive surgery to treat congenital cardiac anomalies. ...

Dosage optimisé de la thrombose veineuse dans un modèle de cancer de souris à l’aide de clips vasculaires

Venous Thrombosis Assay in a Mouse Model of Cancer

This methodology paper highlights the surgical nuances of a rodent model of venous thrombosis, specifically in the context of cancer-associated thrombosis (CAT). Deep venous thrombosis is a common complication in cancer survivors and can be potentially fatal. The current murine venous thrombosis models typically involve a complete or partial mechanical occlusion of the inferior vena cava (IVC) using a suture. This procedure induces a total or partial stasis of blood and endothelial damage, triggering thrombogenesis. The current models have limitations such as higher variability in clot weights, significant mortality rate, and prolonged learning curve. This report introduces surgical refinements using vascular clips to address some of these limitations. Using a syngeneic colon cancer xenograft mouse model, we employed customized vascular clips to ligate the infrarenal vena cava. These clips allow residual lip space similar to a 5-0 polypropylene suture after IVC ligations. Mice with the suture method served as controls. The vascular clip method resulted in a consistent reproducible partial vascular occlusion and greater clot weights with less variability than the suture method. The larger clot weights, greater clot mass, and clot to the IVC luminal surface area were expected due to the higher pressure profile of the vascular clips compared to a 6-0 polypropylene suture. The approach was validated by gray scale ultrasonography, which revealed consistently greater clot mass in the infrarenal vena cava with vascular clips compared to the suture method. These observations were further substantiated with the immunofluorescence staining. This study offers an improved method to generate a venous thrombosis model in mice, which can be employed to deepen the mechanistic understanding of CAT and in translational research such as drug discovery.

Pleins feux sur l’auteur : Faire progresser la recherche sur la thrombose associée au cancer dans des modèles de rongeurs 

This article aims to present an optimized method for assessing venous thrombosis in a mouse cancer model, using vascular clips to achieve venous ligation. Optimization minimizes variability in thrombosis-related measurements and enhances relevance to human cancer-associated venous thrombosis.

Essai de thrombose veineuse dans un modèle murin de cancer

This methodology paper highlights the surgical nuances of a rodent model of venous thrombosis, specifically in the context of cancer-associated thrombosis ...

Recherche en cancérologie

Deep Vein Thrombosis Induced by Stasis in Mice Monitored by High Frequency Ultrasonography

Venous thrombosis is a common condition affecting 1 - 2% of the population, with an annual incidence of 1 in 500. Venous thrombosis can lead to death through pulmonary embolism or results in the post-thrombotic syndrome, characterized by chronic leg pain, swelling, and ulceration, or in chronic pulmonary hypertension resulting in significant chronic respiratory compromise. This is the most common cardiovascular disease after myocardial infarction and ischemic stroke and is a clinical challenge for all medical disciplines, as it can complicate the course of other disorders such as cancer, systemic disease, surgery, and major trauma.
Experimental models are necessary to study these mechanisms. The stasis model induces consistent thrombus size and a quantifiable amount of thrombus. However, it is necessary to systematically ligate side branches of the inferior vena cava to avoid variability in thrombus sizes and any erroneous data interpretation. We have developed a non-invasive technique to measure thrombus size using ultrasonography. Using this technique, we can assess thrombus development and resolution over time in the same animal. This approach limits the number of mice required for quantification of venous thrombosis consistent with the principle of replacement, reduction, and refinement of animals in research. We have demonstrated that thrombus weight and histological analysis of thrombus size correlate with measurement obtained with ultrasonography. Therefore, the current study describes how to induce deep vein thrombosis in mice using the inferior vena cava stasis model and how to monitor it using high frequency ultrasound.

The present protocol describes the steps to obtain venous thrombosis using a stasis model. In addition, we are using a non-invasive method to measure thrombus formation and resolution over time.

Thrombose veineuse profonde induite par stase chez les souris surveillé par échographie de haute fréquence

Venous thrombosis is a common condition affecting 1 - 2% of the population, with an annual incidence of 1 in 500. Venous thrombosis can lead to death ...

Sténose de la veine cave inférieure : un modèle murin de la thrombose veineuse profonde

Résumé

Explorer plus de vidéos

Chapitres dans cette vidéo

Modèle murin de CD40-activation des cellules B

Électrolytique veine cave inférieure Modèle (EIM) de la thrombose veineuse

Modèle de souris complète stase de la veine cave inférieure thrombose

L'induction de la réaction du greffon contre l'hôte et des maladies

Modèle murin de l'asthme induit par les allergènes

Implantation de veine cave inférieure interposition de greffe en modèle de souris

Essai de thrombose veineuse dans un modèle murin de cancer

Essai de thrombose veineuse dans un modèle murin de cancer

Essai de thrombose veineuse dans un modèle murin de cancer

Thrombose veineuse profonde induite par stase chez les souris surveillé par échographie de haute fréquence